实验6 离体蛙心灌注
【目的】
学习离体蛙心灌流的方法；观察内环境理化因素的相对恒定对维持心脏正常节律性活动的重要作用；了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的调节意义。
【原理】
动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。
【器材与药品】
二道生理记录仪、肌张力换能器、蛙心陶罐、蛙心夹、常用蛙手术器械、铁架台、双凹夹、滴管、小烧杯、氯化钠溶液（1%NaCl）、氯化钙溶液（2%Ca Cl）、氯化钾溶液（1%KCl）、肾上腺素（1/10000Ad）、乙酰胆碱（1/100000Ach）、任氏液（Ri/lger’s solution新鲜配制）等。
【步骤】
（1）取一只蟾蜍或蛙，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。
（2）识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。
（3）插蛙心插管，制备离体蛙心。先在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。再在左主动脉下穿一线结扎。用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主动脉距分叉3mm处向心脏剪一斜口，右手将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入，先进入动脉圆锥，然后在心室收缩时，向前略向左推动蛙心插管，使之经主动脉瓣插入心室腔内（注意：为了使蛙心插管顺利插入心室，应使心室与动脉圆锥成一条直线）。进入心室的标志是随着心室搏动，均有血液喷入插管，插管的液面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，以防止标本滑脱。注意在蛙心插管插入心室后，用吸管及时吸出管内的血液，更换新鲜任氏液。
提起插管，剪断主动脉左、右侧分支，轻轻提起插管和心脏，在静脉窦下方绕一线，将左右肺静脉及前后腔静脉一起结扎（切勿损伤静脉窦），在结扎线下方剪去所有牵连的组织，将心脏摘出。用任氏液反复冲洗（10~25滴/min的速度缓慢点滴）任氏液。至插管内任氏液完全澄清无色为止。以后做实验注意每次换液时，插管内液面应保持相同的高度。
（4）仪器装置。用二道生理记录仪。
①用夹子将蛙心插管固定于铁架台上，肌张力换能器固定于蛙心插管下方，通过蛙心夹与线将离体蛙心与张力换能器香料（蛙心夹于心室舒张时夹住心尖）。
②开动二道生理记录仪。
（5）观察内容
①描记正常心搏曲线：
曲线疏密——代表心跳的频率;
曲线的规律性——代表心跳节律性；
曲线的幅度——代表心室收缩的强弱
曲线的顶点水平——代表心室收缩的程度；
曲线的基线——代表心室舒张的程度。
②加入2%Ca Cl溶液1~2滴，混匀，观察曲线变化。
③加入1%KCl溶液1~2滴，混匀，观察曲线变化。
④加入1/10000Ad溶液1~2滴，混匀，观察曲线变化，待效应明显后，将灌流液全部吸出，换入新鲜任氏液，使心跳恢复正常。
⑤加入1/100000Ach溶液1~2滴，混匀，观察曲线变化，待效应明显后，将灌流液全部吸出，换入新鲜任氏液（如果加入Ach后心跳已停止舒张状态，换液后，可用滴管插至插管底部，将灌流液剂入心室，反复数次，将心室内Ach 完全清洗出）。
【注意事项】
（1）每次换液时，液面均应保持一定的高度。
（2）每次换入灌流液或滴加试剂出现明显效应后，应立即吸出全部灌流液，并以新鲜任氏液换洗2~3次，待心跳恢复正常后，再进行下一步骤。
（3）每次加入试剂后，应立即用滴管轻轻搅匀，使之迅速发挥作用。
（4）加试剂时，每次不宜过多，先加1~2滴，如作用不明显时可再补加。
（5）随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润状态。
（6）固定张力换能器时，应稍向下倾斜，以免自心脏滴下的水流入张力换能器内。
【作业与思考题】
1、保证记录连续，及时在曲线上加以注释，分析各现象产生的原因。
2、分析有的蛙心标本套管内液面升降不明显的原因并提出相应的对策。
3、实验过程中套管内液面为什么每次都应保持一定的高度？
