细胞实验复习
一、细胞内蛋白质及核酸成分的测定
1.细胞组织化学法
在保持细胞结构的基础上，利用某些化学试剂与细胞内的一些物质发生化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀。再通过显微镜对细胞内的化学成分进行定位定性的检测方法。
2.三氯醋酸的作用：抽提DNA、RNA，使蛋白质与DNA、RNA分开
3.固定：将细胞杀死，使其仍然保持原来的结构和形态
4.甲基绿-哌罗宁染色原理
核酸是强性酸，甲基绿-哌罗宁是碱性染料，具有亲和力。这两种碱性染料有选择地特异染色。甲基绿把DNA染成绿色，哌罗宁把RNA染成红色。
二、观察细胞的生理活动
1.淀粉肉汤：刺激腹腔聚集大量巨噬细胞，台酚蓝起标记巨噬细胞的作用
2.渗透现象原理
原生质层具有选择透过性，原生质层内外的溶液存在着浓度差，水分子就可以从溶液浓度低的一侧通过原生质层扩散到溶液浓度高的一侧。溶液渗透压的高低与溶液中溶质分子的物质的量的多少有关，溶液中溶质分子物质的量越多，渗透压越高，反之则越低。
3.质壁分离原理
质壁分离是植物细胞失水造成的细胞壁与细胞质的分离。细胞壁主要由纤维素分子组成，是水和溶质都可以通过的透性膜，而细胞质膜是半透性膜，有选择性和流动性。由于质膜对水的可透性，水会从低溶质浓度一侧（高水浓度）向高溶质浓度一侧（低水浓度）运动，即渗透作用。当植物细胞内的溶液浓度低于外界浓度时，细胞会失水，细胞壁形状不变，而细胞质膜皱缩，使得原生质体与细胞壁分离。
4.血涂片方法
①取末捎血一滴置于玻片的一端，左手持载玻片，右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前
方后移接触血滴，血滴即沿推片散开。然后便推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动，载片上保留下一薄层血膜。
②使血膜迅速干燥,以免血细胞皱缩.
③用蜡笔在血膜两侧划线,以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。加瑞氏染液2-3
滴，使覆盖整个血膜，固定0.5-1min。滴加等量或稍多蒸馏水，与染料混匀染色5-10min。
④用清水冲去染液，待自然干燥后或用吸水纸吸干,即可置血涂片于显微镜下进行镜检。
三、同种细胞融合
1.细胞融合：自然条件下或人工将两个或两个以上细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。
2.PEG的作用原理
PEG具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质的作用，高浓度聚乙二醇会破坏相互接触的细胞膜的磷脂双分子层，改变细胞膜的结构和表面电荷特性。在不同种类的动物细胞混合液中加入聚乙二醇，膜脂分子排列发生改变，细胞发生凝集；在稀释和除去聚乙二醇时，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中即可诱导相接触的细胞发生融合。
3.融合率的计算公式：融合率=融合细胞的全部核数/全部细胞核数×100%
四、细胞组分的分级分离
1.实验方法：匀浆、差速离心
2.匀浆：在低温条件下，在等渗介质中，破碎细胞，制成各种细胞器和细胞内含物的混合液。
3.差速离心：在均一介质中由低速到高速逐级离心，使被离心物按比重大小逐渐沉降下来。
五、细胞的活体染色
1.活体染色定义
能使生活的细胞或组织特异性着色，但对活样品又没有毒害作用的一种染色方法。其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动，也不产生任何物理、化学变化，不会引起细胞死亡。
2.詹纳斯绿和中性红染色原理
·詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超活染色，是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使詹纳斯绿B染料始终保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而线粒体周围的细胞质中詹纳斯绿B被还原成无色的化合物。
·中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
六、微丝的染色与观察实验原理
微丝普遍存在于多种细胞中，功能是维持细胞的形态，参与细胞的移动和细胞质流动。细胞中的微丝可通过考马斯亮蓝染色得到观察。当在细胞培养过程中加入细胞松弛素B时，优于细胞松弛素B可与微丝中的肌动蛋白相结合，破坏了微丝的结构，使微丝断裂，细胞形态发生改变。
七、观察细胞的有丝分裂
1.植物细胞与动物细胞有丝分裂的区别
植物细胞有细胞壁，不可见中心粒。动物细胞没有细胞壁，可见中心粒。
2.有丝分裂各期的特点
①前期：染色质凝集成染色体；核仁、核膜消失；分裂极确定和纺锤体形成。
②中期：染色体排列在细胞的赤道面上。
③后期：姐妹染色单体分开，向细胞两极迁移，同时发生细胞两极的远离运动。
④末期：染色体解螺旋；核膜出现；核仁形成；纺锤体消失；胞质分裂。
八、精子细胞学分析
1.低渗膨胀实验原理
正常精子细胞在低渗环境中，小分子从外部渗透进入精子细胞内使精子细胞尾部发生膨胀。精子尾部肿胀率（%）=（尾部肿胀精子数/计数精子数）×100%
2.精子存活率检测原理
精子细胞死亡后，细胞膜通透性改变，染料可以通过受损的细胞膜进入细胞内，使细胞着色，而正常存活的精子不着色。存活率（%）=（活精子数/计数精子数）×100%
九、补充
1.为什么使用饥饿小鼠
线粒体正常情况下一般呈圆形，饥饿时缺乏功能营养物质，线粒体会数目减少，大量的嵴会消失，使线粒体形状变得细长，易于观察。
2.为什么使用肝细胞
线粒体含量较多，长度适合观察；肝脏较软，易于破碎，并且适于快速提取，从而利于保持线粒体活性。
3.细胞沉淀顺序：细胞核、线粒体、溶酶体和其它微体、核糖体和大分子
1.核糖体的分类
根据存在的生物类型分为：真核、原核
根据存在部位分为：细胞质核糖体、线粒体核糖体、叶绿体核糖体
2.多聚核糖体
·定义：合成蛋白质时，多个甚至几十个核糖体串联附着在一条mRNA分子上，形成似念珠状的结构
·意义：①同一条mRNA被多个核糖体同时翻译成蛋白质，提高了蛋白质合成的速率。
②减轻了细胞核的负荷，减少了基因的拷贝数
③减轻了细胞核进行基因转录和加工的压力
④对mRNA的利用及对其浓度的调控更为经济和有效。
3.蛋白质的合成
（1）肽链合成起始
指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核蛋白体结合形成翻译起始复合物的过程。
①蛋白质合成的起始涉及到mRNA、起始tRNA和核糖体小亚基之间的相互作用，最后
装配成完整的核糖体，起始过程分三步完成。
②起始过程涉及多步反应，在原核生物中需要三个起始因子，在真核生物中涉及多个起
始因子
③参与的因子包括起始因子1-3，以及mRNA，转运tRNA等。
（2）肽链的延伸
指根据mRNA密码序列的指导，依次添加氨基酸，从N端向C端延伸肽链，直到合成终止的过程。延伸涉及四个重复的步骤：进位、成肽、移位、脱氨酰tRNA释放。四步循环使肽链不断延长。在整个过程中需要GTP和一些延长因子的参与。
（3）肽链合成的终止
蛋白质合成的终止是指核糖体沿着mRNA移动，如果进入A位的是终止密码子，由于没有与之匹配的反密码子，则终止蛋白质的合成，导致多肽链从核糖体释放出来。（终止密码子：UAA、UAG、UGA）原核细胞使用几种不同的释放因子与终止密码子作用，而真核细胞中只有一种释放因子与终止密码子作用。
信号肽假说的主要内容*
该假说认为新生肽链具有一段独特的序列，可引导核糖体和多肽链附着在内质网膜上。这段序列常存在于所合成肽链的N端，一般由15-30个氨基酸组成，被称为信号肽。
☆主要过程：①信号肽的识别②肽链进入内质网腔
