正交设计优化冬虫夏草多糖的提取工艺

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蛹虫草培养基残余体综合利用的研究进展

生态效益。因此，近年来虫草培养基残余体的综合利用研究
备受关注。笔者从虫草培养基残余体的虫草素、虫草多糖的提取纯化，在保健食品和饲料中的应用及作为杀虫真菌制剂或用于培养其它微生物等方面综述了虫草培养基残余体综合利用的研究进展。
间１２０ｍｉｎ，料液比（Ｗ／Ｖ）１：２０的条件下，测得多糖含量
为１．１２ｍｇ／ｍＬ。梁晨通过对水浴法、超声波法和微波三种
提取方法的提取工艺进行研究，得到最佳的蛹虫草培养基多
比、提取次数。在最佳工艺提取温度８０％，提取２次，提取时
蛹虫草【Ｃｏｒｄｙｃ￣ｓｍｉｌｉｔａｒｉｓ（Ｌ．）Ｌｉｎｋ］又名北冬虫夏草、北虫草，与冬虫夏草同属异种。由于其主要药用成分虫草素含量比冬虫夏草高得多，大约为后者３５倍甚至ｌ０倍一，且蛹虫草更容易人工栽培，因此蛹虫草目前被选为冬虫夏草的最佳
摘
要从虫草培养基残余体的虫草素、虫草多糖的提取纯
一
般采用水、５０％乙醇、乙醇和甲醇等溶剂。提取方法主要
化，在保健食品和饲料中的应用，作为杀虫真菌制剂和用于培

冬虫夏草虫草素的提取及提取量的测定

冬虫夏草虫草素的提取及提取量的测定刘栓栓;孙庆元;宫宏琨【摘要】研究了冬虫夏草虫草素的提取和测定方法,确定了提取冬虫夏草菌株qsun-1菌丝体与甲醇料液比、虫草素的溶剂、超声波细胞破碎的功率和时间.依据单因素和正交试验提出了提取虫草素的最佳工艺:在菌丝体与甲醇料液比(g/mL)为1∶100、超声波功率为300 W条件下,超声波细胞破碎提取30 min,虫草素提取量可达9.275 mg/g.这些因素对提取虫草素的影响重要性排序为料液比＞溶剂＞超声波功率＞提取时间.717强碱性阴离子交换树脂纯化虫草素提取液,虫草素得率高达80％以上,纯度可达到14.200 mg/L.【期刊名称】《大连工业大学学报》【年(卷),期】2013(032)005【总页数】5页(P320-324)【关键词】虫草素;超声波提取;紫外分光光度法【作者】刘栓栓;孙庆元;宫宏琨【作者单位】大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034【正文语种】中文【中图分类】TS218;Q939.930 引言冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)寄生在蝙蝠蛾科昆虫蝙蝠蛾(Hepialus armoricanus Oberthur)越冬幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。

虫草素(cordycepin)是冬虫夏草菌中的活性成分。

虫草素的结构与腺苷非常相似,所以又称为3′-脱氧腺苷,也是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素[1-2],具有抗肿瘤[3]、抗菌抗病毒[4]、免疫调节、清除自由基[5]等多种药理作用。

最早由Cunningham[6]等于1951年在Cordycepsmilitaris Link原浆液中分离获得,该物质被证实为我国中药冬虫夏草的有效成分,是虫草特有的功能成分。

目前从蛹虫草中提取和纯化虫草素比较常见。

黄芪多糖的不同提取优化工艺

基金项目：国家自然科学基金项目（３１８６０１０２）；甘肃省自然科学基金项目（１８ＪＲ３ＲＡ１８５）；甘肃农业大学盛彤笙科技创新基金项目（ＧＳＡＵＳＴＳ２０３７）；甘肃农业大学人才引进专项（ＧＳＡＵＲＣＺＸ２０１７０４）作者简介：余萍（１９９５０５—），女，硕士研究生在读，研究方向：中药分析及质量评价，Ｅｍａｉｌ：ｓｈｉｎｉａｎｙｕｅ＠ｑｑｃｏｍ通信作者：李欠（１９８４０２—），女，博士，副教授，研究方向：中药分析及质量评价，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｑｉａｎ１９８４＠ｇｓａｕｅｄｕｃｎ
世界中医药２０２１年６月第１６卷第１２期
·１７８７·
研室陈垣教授鉴定为中药黄芪；Ｄ无水葡萄糖标准品、苯酚、浓硫酸均为分析纯。
ＨＨＳ２数显恒温水浴锅（江苏正基仪器有限公司）；离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）；电子天平（慈溪市天东衡器厂，型号：ＨＸ２０３Ｔ）；紫外可见分光光度计（岛津企业（中国）有限公司）；超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。１２方法１２１多糖提取方法黄芪饮片经干燥后粉碎，过４０目筛，取１０ｇ黄芪粉末并按设计液料比加纯水，按设计的相应提取温度和提取时间进行超声提取，经纱布或脱脂棉滤过后浓缩至２０ｍＬ，加入３倍体积无水乙醇静置数小时，置冰箱中过夜沉淀，然后于离心机离心最后干燥，得到粗多糖［８］。１２２标准曲线绘制把Ｄ无水葡萄糖标准品粉末在１０５℃下干燥至恒重，并置于分析天平上进行精密称定，最后于１００ｍＬ容量瓶中定容至１００ｍＬ，最终得到浓度为１００μｇ／ｍＬ的Ｄ无水葡萄糖标准溶液，作为对照品溶液，然后放置于４℃冰箱中保存备用。用移液管移取标准溶液０、０２、０４、０６、０８、１０ｍＬ浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准溶液，分别置于不同的试管之中，加蒸馏水至２０ｍＬ。再在试管中分别加入５％的苯酚溶液１０ｍＬ，然后迅速在试管中加入浓硫酸５０ｍＬ，摇匀后置于水浴锅中在４０℃下保温加热１５ｍｉｎ，取出后置于装有冷水的烧杯中冷却１０ｍｉｎ，然后在４９０ｎｍ处测定吸光度值并记录。浓度作为横坐标，吸光度值作为纵坐标，绘制标准曲线［９］，在００１００～０１０００ｍｇ／ｍＬ浓度范围内线性关系良好，求得出回归方程为：Ｙ＝００１２８Ｘ＋００２，Ｒ２＝０９９６。见表１。

蛹虫草多糖提取及纯化工艺研究

Ｅｔｃｏｒｃｓｉｇｏａｅ —ｓｌｂｅｐｌｓｅｈｒｄｎＣｒｙｅｓｍｉｔｒａｔｄｅｈｏｇｒｏｏａｘｅｍｅｔｎｄｔｅａ．ｘｒｔｎｐｏｅｓｎｆｗｔｒｏｕｌｏｙａａｉｅｉｏｄｃｌａｉｗｓｓｉｄｔｒｕｈｏｔｇｌｅｐｒｎ，ａｈａｉｃｐｉｓｕｈｎｉｎ
咳嗽、衰弱、产妇及老人贫血虚弱、遗精、阳痿、自汗盗汗、腰膝酸痛、经衰弱、后久虚、血吐血、性肾神病咳慢
炎等。
纯）高压灭菌锅、、恒温摇床、电子天平、量瓶。
１２实验方法．１２１菌种制作．．
１２１１液体培养基制作．．．
ｔｒｅｓｐｕｌａｉｅｏａｓｄｔｄｔｍｎｏｙａｃａｉｅｏｔｔｈｅｍｓ（ｏｒｐｒｉｅ）ｅｔｔｎｗｔｍｓｈｏ — ｕｈｒｃｍｔｄｗｓｅｅｒｉｅｌｃｈｒｎｎ．Ｔｒｅｔｅ３ｈｕｓｅｔｓｘｒｉｌｌ０ｔｅｎｌｅｄｈｕｏｅｐｓｄｃｅｉｍｃａｏｌｉ２
（．江苏省农科院农产品加工所，１江苏南京２０１；．山西省药品检验所，１０４２山西太原０００）３０１
摘
要：用以大米、采蚕蛹为主原料的培养基培养蛹虫草子实体。通过正交实验对蛹虫草水溶性多糖的提取工艺进行了
研究，利用蒽酮一硫酸法来测定多糖含量。￣Ｊｏ℃ 、Ｅ９加水２、３次提取、次３ｈ为最佳提取条件。同时考查了不同除０倍分每蛋白方法对虫草多糖的蛋白去除效果。

虫草多糖的基础及临床研究进展

多种药理活性，其治疗慢性肾炎、急慢性肾功能衰竭、肝损伤、
肿瘤、高血脂和高血糖等多种疾病的功用引起众多学者的关
注。
３１肾脏的保护．对３１１缓慢性肾衰．延．
提供了新的理论依据，并为利用中医药与细胞移植结合治疗终
末期肝病提供了一种新的思路。３－．３降低免疫损伤２方士英【等研究发现冬虫夏草多糖对小鼠免疫性肝损伤】有一定的保护作用，其机制可能与降低肿瘤坏死因子一（ＮＦ）Ｔ．、炎性细胞因子（Ｌ１Ｉ．）的含量、平衡细胞因子有关。
助。
言其 “ 味甘性平，秘精益气，专补命门” ，功效可归结为补肾
益肺、止血化痰，用于治疗阳萎遗精、腰膝酸痛、久咳虚喘、劳嗽痰血、病后体虚或自汗畏寒等症。据研】表明冬虫夏草内的化学成分复杂，而虫草多糖（ｏｄｃｐｏｙａｃａｉｅＣｒｙｅｓＰｌｓｃｈｒ，ｄＣ）是冬虫夏草中最为重要的活性物质，具有多种药理活性，Ｐ包括保护肝肾、抗肿瘤、降血糖以及免疫调节等【。本文通过总结近年来虫草多糖的相关文献，归纳了其药效研究及药理作
用的研究进展。
２提取工艺除分析虫草多糖的化学结构外，改善提取工艺以增加其药效比是另一基础研究焦点。高峰［１等通过实验提出了一系７０－】列方案：常温下使用超高压技术在溶剂４％乙醇、压力５
４０ａ０ＭＰ、料液比１３ｇｍ１、提取时间５ｎ的条件下可以：５（／）ｍｉ

虫草素生产工艺

虫草素生产工艺虫草素是一种生物活性物质，具有广泛的药用价值。

虫草素的生产工艺是指将虫草子体中提取出的虫草素进行纯化、干燥等一系列加工步骤，最终得到高纯度的虫草素产品。

本文将介绍虫草素的生产工艺及其流程。

一、虫草素提取虫草素提取是虫草素生产的第一步，其目的是从虫草子体中提取出虫草素。

虫草子体宜采摘在菌丝生长至子实体成熟期。

提取虫草素的方法主要有以下几种：1. 溶剂提取法：将虫草子体粉碎后，用溶剂（如酒精、乙醚等）进行提取，得到虫草素溶液。

2. 超声波提取法：将虫草子体与溶剂混合后，经过超声波处理，加速虫草素的溶解和提取。

3. 离子液体提取法：使用离子液体作为提取剂，提高虫草素的提取效率和纯度。

二、虫草素纯化虫草素提取液中含有多种杂质，需要进行纯化处理，以得到高纯度的虫草素产品。

虫草素纯化的方法主要有以下几种：1. 柱层析法：将虫草素提取液通过柱层析分离，得到纯度较高的虫草素。

2. 薄层色谱法：将虫草素提取液涂抹在薄层色谱板上，通过不同的溶剂体系，将虫草素与其他成分分离，得到纯度较高的虫草素。

3. 液液萃取法：将虫草素提取液与其他溶剂相混合，使虫草素转移到其他溶剂层中，从而实现虫草素的纯化。

三、虫草素干燥虫草素纯化后需要进行干燥处理，使其成为稳定、易于储存的固体。

虫草素干燥的方法主要有以下几种：1. 自然干燥法：将虫草素溶液放置于通风处，自然挥发水分，得到干燥的虫草素。

2. 真空干燥法：将虫草素溶液在真空条件下进行干燥，加速水分的挥发，得到干燥的虫草素。

3. 热风干燥法：将虫草素溶液在热风条件下进行干燥，加速水分的挥发，得到干燥的虫草素。

四、虫草素产品包装虫草素干燥后，需要进行包装，以便于储存和使用。

虫草素产品包装的方法主要有以下几种：1. 瓶装：将虫草素产品装入玻璃瓶中，密封保存。

2. 袋装：将虫草素产品装入塑料袋中，密封保存。

3. 真空包装：将虫草素产品放入真空包装袋中，抽取空气，密封保存。

总结虫草素生产工艺是一个相对复杂的过程，需要经过虫草素提取、纯化、干燥和包装等多个步骤。

均匀设计优选虫草素微波辅助提取工艺的研究

５０
９％，ｉａ司；８Ｓｇ公ｍ人工培养蛹虫草子实体购于江苏徐州。
１２试验方法．
’ ４Ｏ
１２１高效液相色谱条件．．
色谱柱型号为ＥｌｓＸＢ— ｃｐｅＤｉ
３Ｏ
Ｃ８４６ｍ２０ｍ５ｍ）流动相为乙腈一（．％乙１（．ｍ× ５ｍ，；水０１
的结果。１材料与方法１１主要仪器、剂及原料．试
格兰仕Ｇ０３Ｓ８Ｗ２ＥＬ—Ｖ９微波炉，东格兰仕集，国安捷伦科技有限公司；Ｈ０美
Ｆ１４型电子分析天平，Ａ１０常州诺基仪器有限公司；乙腈为色
酸）进行梯度洗脱（１；速０８ｍ／ｎ检测波长２０，表）流．Ｌｍｉ；６
ｎ进样量２ｌ柱温２ｍ；０；５℃。在该色谱条件下，虫草素峰对称性好，并可以与其他组分达到基线分离。标准品及样品的
收稿日期：０８—０２２０９— ４
４５７１，０．４微波作用时间４５ｍｎ液料体积质量比３．２Ｌ，取１次。结果表明，波辅助提取对人工蛹虫草中虫草素的提取Ｗ．ｉ，９９４ｍ／提ｇ微率为１１％，传统提取的１１倍，结果与回归方程的拟合值吻合良好，明应用微波法提取人工蛹虫草中的虫草素是可行的。．７是．４试验说
江苏农业科学２００８年第６期
均匀设计优选虫草素微波辅助提取工艺的研究
曹庆穗，严俊文，褚芳，李超

正交试验优选玉女煎多糖提取工艺研究

正交试验优选玉女煎多糖提取工艺研究目的：探索玉女煎多糖提取的最佳方法。

方法：采用苯酚-硫酸显色测定玉女煎多糖的含量，采用L9（34）正交试验考察提取溶剂用量、提取时间和提取次数对玉女煎多糖提取的影响，并确定多糖最佳提取工艺。

结果：玉女煎最佳提取工艺为12倍量的蒸馏水回流提取3次，每次30min。

结论：该工艺稳定可行，可用于玉女煎多糖的提取。

标签：玉女煎；多糖；正交试验；苯酚-硫酸法玉女煎首载于《景岳全书》[1]：“生石膏三、五钱，熟地三、五钱或一两，麦冬二钱，知母、牛膝各钱半，水一锺半，煎七分，温服或冷服”，用于“治水亏火盛，六脉浮洪滑大，少阴不足，阳明有余，烦热干渴，头痛，牙疼，失血等症”。

玉女煎为滋阴润燥的代表方之一，临床常以其为基本方加减治疗糖尿病及并发症[2-7]，并取得良好效果。

药理研究[8-10]证实，玉女煎及其加减对多种糖尿病动物模型有降血糖的作用、方中熟地[11-12]、麦冬[13-16]、知母[17-18]和牛膝[19-23]药材均含多糖类成分，且具有降血糖作用。

实验采用正交实验设计优选了玉女煎多糖提取工艺，并采用硫酸-苯酚比色法测定其含量，以期为玉女煎多糖降血糖作用进一步研究提供依据。

1 仪器与材料1.1 仪器岛津1750紫外分光光度计（日本岛津公司）；HH-2K4型恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）；UP HW-IV-90T纯水机（四川优普超纯科技有限公司）；Ohaus Discovery十万分之一电子分析天平（奥豪斯仪器（上海）有限公司）。

1.2 材料熟地黄、石膏、麦冬、知母、牛膝均购于南充市便民大药房，经川北医学院附属医院李毅主任药师鉴定，均符合2010年版中国药典标准；水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 标准溶液的制备取干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，精密称定，加蒸馏水配制成浓度为0.2mg/ml的葡萄糖对照品储备溶液，4℃保存备用。

正交实验优化虎眼万年青多糖提取工艺及抗氧化活性评价

【作者】通讯陈瑞战（９７，男，教授，博士，事天然产物有效成分提取、分离及活性研究。１６一）从
・
７・５
实验原料为虎眼万年青（鳞茎）由中科院长春应用化学研究所化学生物学实验室提供。样品经吉林省，
药检所鉴定 Βιβλιοθήκη 确认为虎眼万年青的子实体。［关键词】虎眼万年青；多糖；正交实验；提取；氧化活性抗
【中图分类号】９６３Ｑ４．【文献标识码】Ａ【文章编号】Ｏ８１８（０２０ — ０５０ｌＯ — ７ｘ２１）３０７ — ６
多糖广泛存在于动物、植物和微生物体内，是生命的物质基础，具有可与核酸或蛋白质相比拟的信息
功能，参与细胞间的识别、机体免疫功能的调节、细胞间物质的运输、细胞的转化、凋亡等过程，且大多
数无毒。研究发现多糖具有抗肿瘤和：疫调节［抗菌、抗病毒［免１Ｊ、２１、抗氧化和抗衰老等多方面的药理活性，已成为理想的药物和天然抗氧化剂来源。近来研究发现中药多糖能够清除物理的、化学的及生物来源的多
对Ｐ３蛋白质合成前体的结合及核酸的合成有抑制作用，比常见抗癌药喜树碱、阿霉素、紫杉醇抗癌活性３８还高ｌ倍以上０；虎眼万年青中的水溶性多糖成分，含量很高，约占虎眼万年青干重的２％以上，具有很０
高的抗肿瘤活性ｌ。１０１本文在单因素试验的基础上，采用正交试验优化多糖最佳提取工艺，并采用ＤＰＰＨ、・・Ｈ自由基Ｏ一Ｏ、

虫草多糖研究综述

草发醉物压滤，将菌丝体与发醉液分开，菌丝体加５
瘤、抗辐射、诱生干扰素等作用，也相继报道（２５，２６１
倍体积的水，９０－－９５ ℃浸煮１０ｈ，浸煮液抽滩，浸煮４－５次，撼液合并，减压浓缩至一定体积，离心弃去滩渣，向上清液中加３倍体积９５％乙醉沉淀过夜，离心，收集沉淀，加丙酮、乙醚反复洗涤，然后置真空
接种最５％一１０％，风最１：０．２，搅拌速度２００ｒ／ｍｉｎ，发醉周期为７２ｈ，获得菌丝体收率为
本对虫草多精研究的最多，虫草多楷脂质体和虫草多糖的重要生理功能逐渐被医学界认可。马雄
等［１８，１９］在冬虫夏草多糖脂质体（ＣＰＬ）抗肝纤维化
５１０６４２）
摘要虫草是我国特有的名贵药用弃菌，其主要活性物质虫草多粉近年来受到科学工作者的普连关注并做了大
１ｆ实珍研究。主要从虫草多掩分子结构鉴定，深层发醉工艺，药理功能等几个方面对近些年来取得的成果作简妥
权逮。
关拍词虫草多粉；分子结构；深层发醉；药理功能
中圈分类号Ｑ９４９．３２７．６文欲标识码Ａ文童幼号１００５－７０２１（２００３）０１一００４３一０３
等［１６」对虫草菌丝体做了各种溶菌破壁实验，得出如下结论：采用高压均质和纤维素醉结合处理或者超
声波和纤维素阵结合处理可达到很好的破壁效果，菌丝明显断裂，利于有效物质的提取。储要指出的是，上述方法得到的仅是粗多糖，要得到纯化多糖甚至单组分多糖还必须有纯化步教，如活性炭脱色、流水透析、乙醉分级沉淀、ＤＧ－５２柱

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