《生物化学实验Ⅰ》总复习思考题
1. 请掌握下列生物化学实验常用仪器的正确操作使用方法，并能回答以下问题：
（1）离心机使用时为什么要平衡？普通离心机与高速离心机在平衡时有什么不同要求？
（2）为什么用高速组织捣碎机进行动、植物组织捣碎时，需采用间歇式方式进行操作？
（3）用真空泵进行减压抽滤时，为什么要连接缓冲瓶？
2. 为什么肝糖元只能从刚宰杀的动物肝脏中获取？在提取肝糖元过程中，三氯乙酸、95%乙醇各起什么作用？糖元水解产物中如果存在提取中残留蛋白质时，在用班氏试剂检测水解产物，有什么影响！
3. 请阐述分光光度仪的主要部件及其功能；阐述紫外与可见光的光波长范围；在紫外与可见光范围内测定物质吸光度时，对光源与吸收池有何要求？光电管的功能是什么？为什么说光电管是分光光度仪最脆弱和最易损的部件？
4. 请阐述Beer-Lamber定律，并用该定律阐述分光光度仪工作原理？用分光光度仪定制某物质标准曲线时，需将OD值测定范围确定在0.2～0.8区域内，为什么？
5. 可以用来进行分析测定用的标准品应具备哪些特性？
6. 请阐述移液管与比色皿的正确清洗方法和放置方法；阐述移液管取样与比色皿加样的正确操作方式和操作注意事项。
7. 请阐述“黑体”与“参比”在分光光度仪校正中的作用，以及正确的校正操作方法；（以7200型可见光分光光度仪，用DNS法测定还原糖为例，说明如何进行“黑体”与“参比”的校正操作？）
8．请阐述用分光光度法测定物质含量的基本操作步骤；并请阐述“两表一图”的含义。
9. 用分光光度仪定制标准曲线时，需用一对比色皿，一只用于盛参比液，另一只用于盛不同浓度的标准溶液，在使用时，这两只比色皿之间需要进行校正吗？为什么？如何校正？
10. 什么叫物质的特征吸收波长？用分光光度法定制实测物质标准曲线时，如何确定被测物质的特征吸收波长？
11. 用微机绘制标准曲线，确定回归方程、判断线性关系好坏时，需用到三个统计学函数。请写出这三个函数的完整表达式。
12. 标准曲线的绘制有哪几大要素？（曲线名称、纵横坐标轴的名称及单位、正方型网格线、图例、标准曲线与实验各散点的平滑连线）
13. 需借助显色反应来进行标准曲线定制时，显色反应试剂与标准品用量上应注意什么关系？
14. 通过测定样品待测液OD值，由标准曲线对应的回归方程计算待测液显色浓度时，样品待测液OD 值测定的大小值应控制在什么范围内？
15. 正确理解样品待测液显色浓度、样品待测液浓度与样品实际浓度三个基本概念，理解三者之间的关系。以实验讲义中，Folin酚测定人体血清蛋白含量为例，说明人体血清蛋白显色浓度是如何测定的，它与血清蛋白待测液浓度以及血清蛋白实际浓度三者存在什么关系。
16. 在中性脂肪的皂化实验中，为什么用NaOH-C2H5OH液作皂化剂而不用NaOH-H2O溶液作皂化剂？
17. 请阐述中性脂肪水解反应有哪三个主要途径？其对应的生成物是什么？请阐述加酶洗衣粉的洗涤原理及洗涤时的水温要求。
18. 请阐述蛋白质双缩脲反应的原理，双缩脲反应的应用；为什么用尿素进行双缩脲反应必需用干燥试管才能得到正确的反应结果？
19. 请阐述茚三酮反应的反应原理及其应用。
20. 请阐述蛋白质“盐析”与“中性有机溶剂沉淀蛋白质”反应原理；这两类沉淀反应有何应用？
21. 在蛋白质不可逆沉淀反应实验中，多次涉及到蛋白质遇到沉淀剂后，沉淀不增加反而消失的现象，这一现象统称为“假溶”现象，蛋白质的“假溶”与“复溶”两者之间有什么本质上的不同？并请解释以下“假溶”现象：
（1）在重金属盐沉淀蛋白质实验中，加入过量的硫酸铜或过量的乙酸铅后，沉淀消失现象？
（2）在“海伦压环”试验中；请解释用浓硫酸与浓盐酸进行海伦压环试验振荡后，沉淀消失现象？
22. 请阐述用透析试验验证蛋白质“可逆”与“不可逆沉淀反应”的实验设计原理。
23. 请阐述酸、碱、盐的存在对加热变性蛋白质沉淀反应有何影响。要求能对加热变性沉淀蛋白质实验中涉及到的每个实验现象作出正确的理论解释。
24. 请阐述电泳基本概念，常用电泳方法的分类及其应用。
25. 请阐述全血，血浆与血清基本概念。
26. 请阐述人体血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳原理，通过人体血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳，可以将人体血清蛋白分为哪几类？分离测定各血清蛋白相对百分含量对于医学临床诊断疾病有何指导意义？
27. 为什么人体血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳适宜在pH=8.6的弱碱性缓冲液中进行电泳分离，而不适宜在弱酸性缓冲液中电泳？
28. 请阐述在电泳实验中，电场强度、电泳缓冲溶液pH、缓冲溶液的离子强度对被分离物质有何影响?
29. 在电泳中“虹吸现象”是如何发生的？“虹吸现象”对电泳有何影响？如何在电泳实验操作中尽量避免“虹吸现象”发生？
30. 列表详尽阐述在血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验操作中，下列试剂及器材的作用：
（1）三层滤纸；（2）厚型载玻片；（3）pH8.6的电泳缓冲液；（4）10B氨基黑染色液；（5）冰乙酸-乙醇漂洗液；（6）0.4moL/L的NaOH溶液？
31. 请阐述Folin酚法定制蛋白质标准曲线的原理；对比双缩脲定制蛋白质标准曲线原理和方法，列表从标准品的使用浓度，测定范围，反应灵敏度，标准品的用量，线性关系的好坏比较两种测定蛋白质方法的优、缺点。
32. 请阐述考马斯亮蓝G250染色法定制蛋白质标准曲线的原理；对比Folin酚定制蛋白质标准曲线原理和方法，列表从标准品的使用浓度，测定范围，反应灵敏度，标准品的用量，线性关系的好坏比较两种测定蛋白质方法的优、缺点。
33 请从检测方法的原理与应用范围着手分析，为什么分别采用Folin酚法和双缩脲法测定“蛋白胨”这种微生物培养基质中蛋白含量时，其测定出的蛋白含量检测结果会大相径庭，相差甚远？
34. 在考马斯亮蓝G250染色法定制蛋白质标准曲线实验准备中，考马斯亮蓝G250试剂配制中往往因试剂的酸度、试剂过滤的清澈度、试剂质量本身等诸多因素，影响试剂配制的准确性。从而直接影响其标准曲线定制的准确性，因此常常需要对配制好的试剂进行准确度测定，请你结合该方法的检测灵敏度，阐述验证试剂配制准确性的有效检测方法。（以实例进行阐述）
35. 测定食品中蛋白质含量的传统方法是什么？请阐述该方法的检测原理。三聚氰胺事件发生后，该检测方法暴露出了一个重大缺陷，请分析导致该缺陷的原因，并根据你所学知识，推荐一种测定食品中蛋白含量的准确方法，并说明其方法在实际应用中的优点。
36. 为什么在提取唾液淀粉酶前，必需将口中的残渣用清水漱尽后，才能满足实验需要，正确提取淀粉酶？否则会对酶的什么验证实验造成不利影响？
37. 请结合实验教学内容，阐述酶的专一性验证实验设计原理。
38. 为什么淀粉的水解进行程度可以通过碘滴反应加以确定。
39. 在进行酶的激活剂与抑制剂实验中，加入Na2SO4的目的与意义。
40. 请结合你所学的酶的相关知识，正确地分析在医学临床上，下列医学手段应用的理论基础是什么？
（1）对于实施大型手术的患者，往往在手术进行中，医生要对患者实施低温麻痹术，其作用是什么？
（2）对于“ICU”监护室中生命体征极弱患者，常常采用“冬眠疗法”进行救治，其依据是什么？
生物产业学院生物化学实验主讲教师：徐文俊
2009-12-20
