木聚糖酶的基因克隆及表达

Mar .200838　生物加工过程Chinese Journal of B iop r ocess Enginee ring第6卷第2期2008年3月宇佐美曲霉木聚糖酶基因xyn Ⅱ在不同毕赤酵母中的分泌表达周晨妍1,邬敏辰2,李东峰1,王　瑾1,王　武13(1.江南大学　工业生物技术教育部重点实验室,无锡214122;2.江南大学　医药学院,无锡214122)摘　要:将宇佐美曲霉E001的内切21,42木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pP I C9K 中,得到重组质粒pPXY 2N II,将其经Sa l Ⅰ线性化后分别转化2株毕赤酵母GS115和K M 71,xyn Ⅱ基因通过同源重组被整合到毕赤酵母染色体上,并处于酵母α因子的下游,经筛选获得阳性重组菌PXG L98(M ut +)和PXK L29(M ut s)。

该木聚糖酶基因在2株毕赤酵母中均实现了分泌表达。

同时对工程菌的发酵条件进行了优化,在甲醇诱导下,PXG L98与PXK L29培养物上清液中的酶活力分别可达1156192U /mL 和1646103U /mL 。

关键词:宇佐美曲霉,内切21,42木聚糖酶基因,毕赤酵母,分泌表达中图分类号:Q786 文献标识码:A 文章编号:1672-3678(2008)02-0038-05Secr eted expr e ssi on of A sperg illu s usam ii xyl ana se gene i n d i ffer en tP ich ia pas torisZHOU Chen 2yan 1,WU M in 2chen1,2,L IDong 2feng 1,WAN G J in 1,WANG W u1(1.The Key Lab oratory of I ndustrial B i otechnol ogy of the M i n istry of Educati on,Jiangnan Univ e rsity,W uxi 214122,Chi na;2.School of Medicine,J iangnan Univ e rsit y,W uxi 214122,Chi na )Abstra ct:The endo 21,42xylanase gene fr om Asperg illus usam ii E001wa s cloned int o the P ich ia pastoris expression vect or,pP I C9K,the recom binant p las m id was na m ed pPXY N II .The reco m binant pla s m id pPXY N II was linearized with Sa l Ⅰand then transfor m ed into P ic h ia pas toris GS115and K M71,res pec 2tively .The xyn Ⅱgene wa s in fr a m e integr a ted into the P ich ia genome thr ough ho mologous recom bination .The recom binant P ichia pastoris GS115(PXG L98)and K M71(PXK L29)secreted functional endo 21,42xylanase,and the enzy m atic activitie s reached 1156192U /mL and 1646103U /mL ,r e s pec tively .Key wor ds:Asperg illus usam ii ;endo 21,42xylanase gene;P ich ia pastoris ;secrected expressi on 植物纤维是自然界中最主要的可再生有机资源,在世界能源日益短缺的情况下,这些能源正越来越受到重视。

一种来源于Bispora betulina的酸性木聚糖酶基因克隆及其酶学性质研究魁红;罗会颖;董守良;姚斌【期刊名称】《中国农业科技导报》【年(卷),期】2010()5【摘要】利用简并PCR和TAIL-PCR技术从嗜酸性真菌Bispora betulina中克隆得到一个酸性木聚糖酶基因xyn11BB。

该基因全长1 207 bp,含有三段内含子、一段外显子和一个终止密码子,编码由297个氨基酸组成的蛋白质,推测蛋白质含有一个CBM1结构域。

将不带原基因信号肽编码序列的cDNA基因以正确阅读框架克隆到表达载体pPIC9上,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中诱导表达,其表达活性达121.15 U/mL。

重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱纯化后达到电泳纯。

对其酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH为4.5,在酸性条件下具有良好的活性和稳定性,可作为饲料用酶的备选。

【总页数】7页(P109-115)【关键词】Bispora;betulina;酸性木聚糖酶;毕赤酵母;酶活与稳定性【作者】魁红;罗会颖;董守良;姚斌【作者单位】兰州大学生命科学学院生物化学与分子生物学研究所,兰州730000;中国农业科学院饲料研究所,农业部饲料生物技术重点开放实验室,北京100081【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.一种新颖的毕赤酵母酸性蛋白酶基因的克隆和异源表达以及酶学性质研究 [J], 马纳纳;徐冬冬;黄伟谦;游子娟;罗晓春2.来源于盐惰菌属Halopiger xanaduensis的木聚糖酶基因在毕赤酵母中诱导表达及其酶学性质的研究 [J], 于成野;韩红娟;付晓燕;游双红;孙淼;朱恒文;彭日荷;姚泉洪3.来源于Laceyella sp.的α-淀粉酶基因克隆、重组表达及酶学性质研究 [J], 赵海燕;宋晨斌;刘正亚;马兴荣;尚会会;李安华;关现军;王建设4.来源于瓶霉Phialophora sp. G5的酸性木聚糖酶基因的克隆及性质的研究 [J], 张帆;石鹏君;缪礼鸿;姚斌5.一种来源于Paenibacillus sp. A1的中性β-甘露聚糖酶基因克隆及其酶学性质研究 [J], 刘小丹;杨培龙;刘永超;许修宏;孟昆;姚斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。