1.发酵工程主要指生物体在一定生物反应器中，以一定发酵方式，生产目标产物的工程技术体系。
菌种选育利用菌种的突变（自然的或人工的），然后采用随机的方法和理性化的方法进行筛选，获得目的突变的过程。
2.自发突变及特点是微生物未经人工诱变剂处理或杂交等生物技术手段而自然发生的突变。特点：突变速度慢，时间长，突变频率低，一般为10-7~10-9
3.诱发突变及特点是人为用化学、物理诱变剂（紫外线、亚硝酸等）去处理微生物而引起的突变。特点：突变速度快，时间短，突变频率高，一般＞10-4
4.自然选种是利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理，通过分离、筛选排除衰退型菌株，从中选出维持或高出原有生产水平菌株的过程。又称自然分离。
5.诱变育种是利用物理或化学诱变剂处理均匀分散的微生物细胞群体，促使其突变率大幅度提高，然后采用简便、高效的筛选方法，从中选出少数具有优良性状的突变菌株。
6.培养基人工配制的、供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需的多种营养物质的混合物。
7.孢子制备是将休眠状态的孢子经过固体表面进行扩大繁殖再形成成熟孢子的过程。
8.种子制备是由保藏的菌种开始，经过不断的扩大培养，使菌体数量达到能满足发酵罐接种量的需要所涉及的生产过程。
9.分批发酵一次性投入料液，发酵过程中不补充，一直到放罐。
10.连续发酵是在特定的发酵设备中进行的，一边连续不断地输入新鲜无菌料液，同时在另一边连续不断地放出发酵液。分为罐式连续发酵和管道式连续发酵。
11.动物组织培养从体内取出组织，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能的方法。习惯上又泛指所有体外培养，即：器官培养、组织培养和细胞培养。
12.接触抑制细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触，不再增加。
13.细胞克隆即单细胞分离培养，把一个单细胞从一个群体中分离出来单独培养，使之重新繁衍成为一个新的细胞群体的培养技术。
14.克隆形成率细胞群中单个细胞形成的克隆百分数称为克隆形成率，用来表示细胞生活力和独立生长能力。
15.克隆接种率
16.植物组织培养在无菌条件下，利用人工培养基对植物组织的培养，包括原生质体、悬浮细胞和植物器官等的培养。
17.细胞全能性任何有完整的细胞核的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的遗传信息，理论上都能发育成为一颗植株。
18.外植体从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官。
19.愈伤组织在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
20.原生质体植物细胞除去细胞壁后剩下的球形细胞。
21.单克隆抗体单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗原分子。
22.抗体酶又称催化抗体，结合了酶与抗体的优点，既可以起酶促催化作用，又可以起抗体的选择性和专一性结合抗原作用。
简答
1.育种选育目的（生产方面）
a．提高发酵产量
b．改进菌种性能
c．产生新的发酵产物
d．去除多余组分
2.自然选育方法及一般过程
出发菌株——斜面培养——单孢子悬浮液——单菌落分离——初筛——复筛——高产菌株稳定性试验和菌种特性考察——放大生产——随时留种保藏，做好菌种保藏工作
3.诱变选育方法及一般过程
出发菌株——斜面培养——单孢子悬浮液——诱变处理——单菌落分离（使用分离培养基及理性化筛选模型等）——初筛——复筛——高产菌株稳定性和菌种特性考察——放大生产——随时留种保藏，做好育种保藏工作
4.突变株的三种类型
a．正变株＞110%
b．负变株＜90%
c．稳定株90-110%
5.诱变剂分类
a．物理诱变剂
b．化学诱变剂
c．生物诱变剂
6.诱变主要环节
a．出发菌株的选择
b．诱变处理
c．突变株筛选
d．筛选方法
7.培养基成分及举例
a．碳源糖类
b．氮源蛋白质
c．磷源和硫源KH2PO4 K2HPO4Na2SO4MgSO4 d．无机离子P、S、Fe、Mg、Ca等
e．生长因子维生素、氨基酸
f．前体苯乙酸、苯氧乙酸
g．诱导剂L因子、B因子
h．促进剂和抑制剂促进剂巴比妥抑制剂溴化物i．水分
j．消沫剂动、植物油
8.培养基种类
（1）合成培养基和复合培养基
（2）固体培养基和液体培养基
（3）孢子培养基、种子培养基、发酵培养基和补料培养基
9.生产种子的制备那两个过程
a．菌种岗位的孢子制备
b．生产岗位的种子制备
10.菌种保藏原理
使微生物代谢于不活跃、生长繁殖受抑制的休眠状态，以减少菌种的变异。
11.菌种保藏基本方法
斜面低温保藏法（短期保藏）甘油保藏法（短、中期保藏）大（小）米保藏法（中期保藏）麸皮保藏法（中期保藏）孢子滤纸保藏法（中期保藏）砂土管保藏法（中期保藏）液体石蜡保藏法（中期保藏）真空冷冻干燥法（中、长期保藏）液氮超低温保藏法（中、长期保藏）
12.发酵类型（3种）
分批发酵补料分批发酵连续发酵
13.发酵过程控制参数分类（举例）
物理参数：温度、压力、搅拌转速、搅拌功率、空气流量
化学参数：pH、基质浓度、产物浓度、溶解氧浓度、废气中氧的含量、废气中CO2的含量
生物参数：菌体浓度、菌丝形态
14.影响孢子/种子质量的因素
孢子：培养基、培养温度和湿度、培养时间、冷藏时间、接种量、菌种保藏方法、定期纯化、选育菌种
种子：培养基、培养条件、种龄、接种量
15.细胞工程主要领域
动物组织培养、植物组织培养、细胞融合与单克隆抗体、细胞拆合与染色体工程、转基因生物、胚胎工程、细胞与基因治疗
16.细胞类型（四种贴壁/悬浮）
贴壁：上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞型、多形细胞型
悬浮：悬浮在溶液中
17.细胞培养中常用消毒方法
高压蒸汽消毒、干燥高温消毒、过滤除菌、化学方法、紫外线
18.天然动物细胞培养基（4种）
血清、血浆、组织浸出液、水解乳蛋白
19.常用四种细胞培养法
单盖玻片悬滴培养法、培养瓶原代培养、旋转管培养法、灌注小室培养法
20.提高细胞克隆形成率措施
使用适应性培养基、利用饲主细胞、牛胎血清、1-10国际单位/ml营养液的胰岛素、多用5%的浓度的CO2、底物特殊处理、适应性底物
21.抗癌药物细胞敏感性的实验方法
美蓝法、染料排斥法、集落形成试验法、噻唑盐（MTT）比色法、生长曲线测定法、放射性同位素的3H-TdR掺入法、抗癌药物的效能比（CFU-F）测定法
22.大规模动物细胞培养法
气升式深层培养系统、微载体培养系统、微囊培养系统、中空纤维培养系统
23.原生质体制备法（酶/机）
酶解法、机械法
24.植物细胞原生质体融合后杂种细胞筛选法（4）
遗传互补筛选法、抗体互补筛选法、利用物理特性筛选法、利用生长特性筛选法
25.动物细胞原生质体融合后杂种细胞筛选法（3）
利用抗药性筛选系统、营养互补筛选系统、温度敏感突变型杂种细胞的筛选
26.单克隆抗体大规模制备法
利用微载体、微囊、旋转瓶、中空纤维培养系统等进行培养。
27.基因工程（genetic engineering）就是把外源基因
通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制，转录，翻译表达的操作。
四大要素：目的基因，载体，受体细胞，工具酶
六步：分离，酶切，连接，转化，筛选，验证28.限制性核酸内切酶（restriction endonucleases，
RE）：凡是能识别和切割双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，简称限制性内切酶。
特性：切割特异性，在特定部位上水解双链DNA 中每一条链上的磷酸二酯键，从而造成双链缺口，切断DNA分子。
29.星号活力（star activity），又称第二活力（second
activity），指酶反应条件改变时，酶的识别特异性降低，使酶在DNA分子中的切点数增加。
造成星号活力的因素：a、甘油浓度过高，酶切反应的体积至少要比限制性内切酶本身体积大十倍；
b、酶单位数/DNA比值过高，超过10U/mgDNA；
c、低离子强度，小于25mmol/L；
d、高pH值（pH）
8.0）；e、有机溶剂的存在；f、二价离子的改变30.连接酶（ligase）：催化在2条DNA链之间形成磷
