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一种葡萄籽原花青素高效提取分离方法我折腾了好久一种葡萄籽原花青素高效提取分离方法，总算找到点门道。
最开始的时候我真的是瞎摸索。
我就想着把葡萄籽弄碎，然后就用那种很普通的溶剂泡着，觉得就能把原花青素提取出来了。
结果呢，提取出来的量特别少，而且纯度也不咋地。
我当时就知道，肯定是哪里有问题。
后来我看书上说，可能是葡萄籽破碎程度不够。
我就下狠手，把葡萄籽弄得特别碎，几乎成粉末了。
然后换了几种溶剂来试。
先用乙醇试，感觉比之前那次稍微好点了，但还是不符合我想要的高效的标准。
我就想啊，是不是加热会好点呢？就像煮豆子一样，加热能让东西更好地融合。
我就对泡着葡萄籽粉末的乙醇溶液加热。
但是加热的温度不好掌握啊。
有一次温度太高了，都把溶液煮冒烟儿了，结果原花青素可能给破坏掉了一部分。
那一次算是失败透顶了，提取出来的不但没多，还少了呢。
我就开始慢慢调整温度。
也不确定什么样的温度才是最适合的。
就一点点试，像摸着石头过河一样。
最后发现大概在多少多少度的时候，提取出来的量和纯度都有提高了。
但是这里边还有杂质呢。
我又想办法分离这个杂质。
我试过用那种过滤的方法，就像过滤茶叶末儿似的，但是不太好使。
后来我用了不知道哪个资料看到的离心法。
就是放到离心机里转啊转的。
转了不同的速度。
一开始速度不对的时候，根本就分离不干净。
就慢慢调整速度，当然这个过程也失败了好多次，有时候转完了发现还是很多杂质混在原花青素溶液里。
最后终于调到一个合适的速度，把大部分杂质都给甩出去了。
但我心里还是有点犯嘀咕，总觉得可能还不是最完美的。
可能还有别的更好的溶剂组合或者操作步骤能让这个提取分离更高效。
但我现在这个方法从我的实验来看，相对比之前用过的那些方法是好很多了。
如果谁要试的话，一定得在葡萄籽破碎、溶剂选择、加热温度还有离心速度上好好把控，不然很容易失败啊。
我这一路摸索过来，就感觉这是个特别细致的活儿，一点都不能马虎。
天津大学硕士学位论文葡萄籽中葡萄籽油和原花青素的提取分离工艺研究姓名：姚方耀申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：李淑芬20040101摘要葡萄籽中含有丰富的葡萄籽油和原花青素。
葡萄籽油富含对人体健康有益的不饱和脂肪酸，广泛的应用于食品、化妆品以及医药工业等领域；原花青素具有抗氧化等一系列多种生物活性，作为世界最受欢迎的十大植物药之一，已被广泛的用作药品、保健品和化妆品等。
因此，从酿酒过程中产生的废弃葡萄籽中提取葡萄籽油和原花青素具有重要的经济价值和社会效益。
本论文在课题组其他成员的研究基础上分别对超临界ｃＯ：萃取葡萄籽中葡萄籽油和原花青素的工艺进行了放大实验，并且对采用絮凝工艺进一步提高原花青素产品的质量进行了研究。
另外，对采用水提醇沉法从去油葡萄籽中提取原花青素也做了研究。
最后对采用人工神经网络模拟超临界ｃＯ。
萃取原花青素的研究进行了尝试。
实验首先采用２５Ｌ超临界ｃ０。
萃取设备对超临界ｃＯ：萃取葡萄籽油工艺进行了放大研究。
在萃取压力为３０ＭＰａ、萃取温度为５５。
Ｃ的条件下，葡萄籽油的收率为１３．８７％，和小试中１３．５１％的收率基本接近。
实验过程中，使用１Ｌ超临界ｃ０２萃取设备，对动态夹带剂超临界ｃＯ：萃取、静态夹带剂超临界ＣＯ。
萃取、动静结合夹带剂超临界ｃＯ。
萃取从葡萄籽中提取原花青素的三种工艺进行了探讨。
实验对静态夹带剂超临界ＣＯ，萃取原花青素的放大工艺进行了正交实验研究。
研究结果表明在３５ＭＰａ，萃取温度为６５℃时产品纯度达到９５％以上，达到了出口要求，收率达到８．３８％。
为了解决原花青素产品的水溶性问题，进一步提高产品质量，本文对原花青素租提物进行了絮凝工艺操作。
实验考察了药液浓度、絮凝温度、絮凝剂用量等对产品水中不溶物百分含量的影响，得出了合适的絮凝条件。
在该条件下，絮凝后的产品纯度保持在９５％以上，并且水中不溶物的百分含量为２．８１％，原花青素产品达到了水不溶物质小于５％的质量要求。
原花青素的分离纯化一、实验目的对上一步提取的原花青素进行分离纯化，熟悉实验相关仪器设备及过程二、仪器、材料及试剂原花青素提取液、原花青素标准品、大孔树脂、75%乙醇、60%乙醇（作解吸剂）、50%乙醇（作洗脱剂）、盐酸（磷酸或乙酸）、分析天平、带筛板的玻璃柱（可无筛板，但是要脱脂棉或者用酸式滴定管改装（尝试性），同样需要脱脂棉）、紫外分光光度计（286nm）（可用可见光分光光度计（536nm）代替）、真空干燥箱（用真空泵+密封的抽滤瓶（尝试）代替）、PH计、铁架台、漏斗（小号）、小试管若干（不少于5支）、试管架、烧杯若干（不少于3个）、玻璃棒、滴管、锥形瓶三、实验步骤大孔树脂的预处理：新购树脂含有未聚合单体、致孔剂、分散剂等残留的杂质成分，使用前必须加以处理。
将新购大孔树脂用乙醇浸泡24h，充分溶胀，取一定量湿法装柱，先用适当浓度的乙醇清洗至洗出液加等量蒸馏水无白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味且水液澄清，备用。
通过乙醇(或甲醇)与水交替反复洗脱，可除去树脂中的残留物，一般洗脱溶剂用量为树脂体积的2～3倍，交替洗脱2～3次，最终以水洗脱后即可使用。
大孔树脂动态饱和吸附曲线图的绘制：1、将试验中需要用到的50%乙醇、60%乙醇的PH用盐酸调至5，在波长为286nm（如果采用可见光分光光度计则为536nm）测定原花青素提取液的吸光值（以75%的乙醇溶液为对照）2、取一定量的大孔树脂于烧杯中缓慢倒入50%的乙醇溶液（同时搅拌），搅拌至可流动的糊状，取一支干净的带筛板的玻璃柱，将糊状大孔树脂加入玻璃柱，用手指轻轻敲打玻璃柱，使大孔树脂均匀铺在玻璃柱底部（用烧杯接住此时流出的液体），用50%的乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出液，直至与水混合不呈白色浑浊为止（乙醇：水一1：5）。
然后以大量蒸馏水洗去乙醇（必须洗净乙醇，否则将影响吸附效果），待用。
将样品液直接或拌入树脂中加到已处理好的大孔吸附树脂柱柱顶，拌样时样液和树脂的比例为1：（2～3）。
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%的执行标准主要包括以下内容：
1. 提取方法：采用超声波辅助萃取、回流萃取等方法，从葡萄籽中提取目标成分。
2. 成分含量：葡萄籽提取物原花青素的含量应达到95%以上。
3. 鉴定方法：应运用高效液相色谱（HPLC）或者紫外分光光度法等可靠的分析方法对葡萄籽提取物原花青素进行鉴定和分析。
4. 检测限值：确定葡萄籽提取物原花青素的检测限值，保证提取物的质量符合要求。
5. 外观特征：葡萄籽提取物原花青素应为深紫色至红棕色粉末，无异味。
6. 残留溶剂：葡萄籽提取物原花青素中不得含有明显的溶剂残留。
7. 重金属限量：葡萄籽提取物原花青素应符合国家或地区规定的重金属限量标准，确保产品安全。
需要注意的是，具体的执行标准可能会因国家、地区以及生产厂家的要求而有所不同，以上内容仅为常见的执行标准举例，具体要求还需参考相关标准文件。
葡萄籽提取物——原花青素的营养保健功能
屈自望
【期刊名称】《医学信息（西安下半月）》
【年(卷),期】2005(000)009
【摘要】葡萄籽为葡萄科葡萄属葡萄（Vitis vinifera L．）的种子，是生产葡萄鲜食、榨汁和葡萄酒业的废弃部分。
但近些年来，随着研究的不断深入，发现葡萄籽具有很高的营养价值和药用价值，其所含的有效成分原花青素（proeyanidin）具有抗氧化、清除自由基、降血脂、抗肿瘤等作用。
为了综合利用废弃的葡萄籽，以下就葡萄籽提取物原花青素近年来的相关研究作一综述。
【总页数】2页(P29-30)
【作者】屈自望
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量 [J], 吴巍;程秀凤;王春辉;崔文熹;傅荧荧
2.高效液相色谱法同时测定葡萄籽提取物中儿茶素、原花青素B1和原花青素B2的含量﹡ [J], 倪慧敏;汤洋;张言;杜倩;刘雨;孙鑫波
3.葡萄籽提取物原花青素在蛋糕及面包中的应用研究 [J], 王丽莎;唐雪燕;焦婷婷
4.葡萄籽提取物原花青素在蛋糕及面包中的应用研究 [J], 王丽莎;唐雪燕;焦婷婷
5.葡萄籽提取物原花青素的营养保健功能(综述) [J], 赵超英;姚小曼
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葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法有多种，其中一种常用的方法是索氏提取法和固相萃取法相结合，具体步骤如下：
1. 将葡萄籽进行干燥、粉碎、过筛、脱脂，得到葡萄籽粉末。
2. 将葡萄籽粉末进行提取、过滤、浓缩，再溶解，最后进行固相萃取，得到精制原花青素。
3. 精制原花青素过微孔滤膜后进入高效液相色谱进行检测。
另外，也可以使用Bate-Smith法和Porter法来检测葡萄籽中原花青素的
含量。
Bate-Smith法是先称取适量的葡萄籽提取物用甲醇溶解，然后加入
盐酸-正丁醇溶液在特定温度下反应一定时间后迅速冷却，在特定波长下测
定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
而Porter法是对Bate-Smith法进行了改进，主要是在试剂中添加了Fe3+以提高反应的程度和颜
色的稳定性。
请注意，不同方法提取和检测葡萄籽原花青素的步骤和条件可能会有所不同，具体的操作方法和参数需要根据实际情况和实验条件进行调整。
同时，由于提取和检测过程中可能会涉及到化学试剂的使用，因此也需要注意安全问题。
柱层析提取黑果腺肋花楸原花青素、维生素C及体外活性研
究
刘君宇;王晓林;钟方丽;陈浩
【期刊名称】《绵阳师范学院学报》
【年(卷),期】2024(43)2
【摘要】探索了柱层析循环联合法提取黑果腺肋花楸中原花青素和维生素C的工
艺条件,并对其体外活性进行研究.以提取液中原花青素及维生素C的质量为指标,确定其提取溶剂、吸涨率和浸泡平衡时间.结果表明,原花青素和维生素C的提取溶剂分别为40%乙醇溶液和纯水、吸涨率分别为2.6 mL/g和3.2 mL/g、浸泡平衡时
间分别为3 h和2 h.此条件下,经柱层析循环联合提取后,黑果腺肋花楸中原花青素
及维生素C的提取率均可达到95%以上.体外活性试验显示,黑果腺肋花楸原花青素、维生素C提取物均具有一定的抗氧化能力、抗肿瘤活性及抑制高尿酸血症能力.柱
层析循环联合法能够同时提取黑果腺肋花楸中的原花青素及维生素C,可以实现用
少量溶剂同时提取多种物质.
【总页数】7页(P56-62)
【作者】刘君宇;王晓林;钟方丽;陈浩
【作者单位】吉林化工学院化学与制药工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】TQ461
【相关文献】
1.黑果腺肋花楸原花青素提取工艺优化及其抗氧化活性
2.超声波辅助酸性天然低共熔溶剂提取黑果腺肋花楸花青素及其稳定性和抗氧化活性分析
3.黑果腺肋花楸中花青素的提取及其抗氧化活性研究
4.黑果腺肋花楸果花青素提取工艺优化及抗氧化研究
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柱层析法连续提取葡萄籽油和多酚的工艺技术王明阳;李璠;解瑞林;韩寒冰;刘杰凤【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2015(000)019【摘要】研究连续提取并分离葡萄籽中的葡萄籽油和多酚的最佳工艺条件。
将干燥的葡萄籽粉末用石油醚湿润装进层析柱中，浸泡2 h，先后用石油醚和60%乙醇溶液连续洗脱，连续收集石油醚6倍体积（mL/g）和60%乙醇溶液10倍体积洗脱液，混合洗脱液分层，醚层中含有葡萄籽油，下层醇水液中含有多酚。
连续提取的葡萄籽油和多酚的提取率均达到99%，经萃取一次性分离葡萄籽油和多酚，得率分别是97.6%和98.0%。
利用柱层析连续提取葡萄籽油和多酚，并通过萃取可把两种成分一次性分离开来，工艺简单，时间短，有机溶剂用量少，提取效率高，具有广泛应用价值。
【总页数】4页(P122-125)【作者】王明阳;李璠;解瑞林;韩寒冰;刘杰凤【作者单位】茂名出入境检验检疫局，广东茂名525000;茂名出入境检验检疫局，广东茂名525000;茂名出入境检验检疫局，广东茂名525000;广东石油化工学院环境与生物工程学院，广东茂名525000;广东石油化工学院环境与生物工程学院，广东茂名525000【正文语种】中文【相关文献】1.富硒茶中茶多酚和茶多糖的连续提取工艺研究 [J], 冯丽琴;杨芙莲;董文宾;韩玮2.响应面法优化“酶法-超声波”连续提取核桃青皮多酚 [J], 伏慧慧;谭梅;郭艳秋;侯太芳;张丽;宋丽军3.沉淀-柱层析法纯化茶多酚及儿茶素含量测定 [J], 朱宇惠;张继4.吸附柱层析法制备纯化茶多酚中EGCG单体 [J], 王伟涛;马朝阳;陈尚卫;朱松;娄在祥;王洪新5.茶多酚,咖啡因连续提取工艺 [J], 朱冬雪;何照范因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
柱层析法联合提取分离葡萄皮渣中葡萄籽油、花色素和原花青素
摘要
选择直径为1.25cm的层析柱，在其中填充葡萄皮渣粉末5g，用石油醚浸泡1小时后，添加石油醚并收集洗脱液共15 mL,然后转换添加70%乙醇溶液并继续收集洗脱液，等乙醇溶液完全置换柱内的石油醚为止（收集的石油醚约20 mL），此时，停止添加洗脱液并关闭开关，材料浸泡1小时后，继续用70%乙醇提取洗脱，收集洗脱液25mL，合并洗脱液，萃取分离，石油醚层液经减压浓缩得到葡萄籽油粗产品，重量法测其含量；分光光度法分别测定下层醇水溶液中原花青素的含量，减压浓缩得到花色素和原花青素粗产品。
关键词
柱层析葡萄皮渣葡萄籽油花色素原花青素
1 前言
葡萄皮渣是葡萄酒工业的下脚料，占全果量的20%以上，果皮和种籽分别占皮渣41.74%和58.26%。
葡萄籽油是从葡萄的种子中提取而得到的，精制后呈漂亮而自然的淡黄色或淡绿色，葡萄籽含油量为14%～17%，含亚油酸为主的不饱和脂肪酸达70%以上，亚油酸是人体不能合成的必需脂肪酸，葡萄籽油具有多种生物学功效，有效预防高血压、血栓、动脉硬化及心脏病。
葡萄皮含有丰富的花色素，而葡萄籽中含原花青素最多，它们都有广泛的生化和药理活性, 如抗氧化、清除自由基、护肝解毒、抗菌及抗癌等功能, 已经成为医药、保健品的重要原料及食品、化妆品的重要添加剂。
然而，在研究和开发葡萄皮渣的资源过程中，人们往往把它们割裂开来，葡萄皮中的花色素很少受到关注。
本实验利用柱层析法实现同时提取三类物质，并希望达到成本低，效率高。
2 实验目的
通过实验，达到提取分离葡萄籽油、花色素和原花青素的目的，为葡萄皮渣的资源开发利用提供可行的实验数据。
3 实验原理
葡萄籽油极性低，易溶于石油醚，花色素是一种花青素苷，易溶于水和乙醇，原花青素是植物体内广泛存在的多酚类化合物，溶于乙醇。
根据相近相溶的原理，先用石油醚提取洗脱葡萄籽油，再70%乙醇溶液同时把花色素和原花青素提取洗脱出来，收集到的洗脱混合液萃取时油类物质在上层石油醚中，花色素与原花青素则留在下层的醇水溶液中，分别减压浓缩得到葡萄籽油和花色素与原花青素的混合物。
采用重量法测定葡萄籽油的含量。
花色素酸性溶液吸收峰波530 nm，摩尔消光系数4.62×104，在一定浓度范围内吸光值和浓度呈线性关系，因此可通过比色法测定其含量;原花青素为无色物质，在可见光区无特征吸收峰，在紫外区有唯一特征吸收峰，最大吸收波长280nm，花色素在紫外光区280nm也有吸收，但吸收值小得多，因此可通过紫外分光光度法测原花青素的含量。
4 实验设备
100ml烧杯100ml容量瓶50ml容量瓶10ml的刻度试管量筒胶头滴管粉碎机玻璃层析柱旋转蒸发仪紫外分光光度计电子分析天平722型分光光度计烘箱干燥机
5实验材料及试剂
5.1 试剂和试剂的配制
5.11 试剂
原花青素对照品、石油醚、无水乙醇、蒸馏水、70%乙醇溶液。
5.1.2 原花青素母液配制
50ug/mL原花青素对照品母液（取5mg原花青素对照品用无水乙醇溶解，并定容至100mL）
5.1.3 盐酸乙醇配制
0.1mol / L盐酸乙醇（取8.3mL浓盐酸用95%乙醇稀释成1L）
5.2 材料处理
葡萄皮渣置50℃烘箱烘干，粉碎过40目筛，置干燥器中备用。
6 实验步骤
6.1 标准曲线的制作
分别取对照品原花青素母液2.00、4.00、6.00、8.00m L于10m L刻度试管中，用无水乙醇定容至10m L，充分摇匀，制得浓度分别为10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml 系列的标准液，在280nm处测定光密度，以浓度为横坐标，光密度为纵坐标，制作原花青素的标准曲线。
6.2 样品的提取与分离
准确称取5.0g葡萄皮渣粉末，与石油醚同时缓慢装入层析柱中，在装样过程中石油
醚始终保持没过样品，样品在柱中浸泡1小时，以每小时收集20 mL 的速度收集石油醚洗脱液20 mL ，用70%乙醇溶液连续洗脱，以每小时收集25 mL 的速度收集乙醇洗脱液25 mL 。
合并两份洗脱液，萃取分层分离，分别减压浓缩得葡萄籽油和包含花色素和原花青素膏状物。
6.3 产品含量的测定
重量法测定葡萄籽油的含量。
取萃取下层液进行稀释，测花青素的吸光值OD 530、OD 620和OD 650，再计算在OD 530的光密度，计算各份提取液的花色素的含量；测原花青素的吸光值OD 280，根据标准曲线，计算原花青素的含量。
7 计算
7.1 花青素含量计算
()()6206506205301.0OD OD OD OD OD ---=λ
花色素含量（μmol/g ）=41062.4⨯λOD ×m
V ×1000 OD λ：在波长为530 nm 的光密度，
4.62×104：摩尔消光系数，
V ：提取液总体积（m L ），
m ：样品质量（g ），
1000：计算结果换算成μmol 的倍数。
7.2 原花青素含量计算
原花青素含量（mg/g ）=X
V G D V M ****1000 M ：通过标准曲线计算待测样品液原花青素的含量ug/mL
Vx ：待测样品液的取样体积，mL
D ——样品溶液稀释倍数
G ——样品称取的质量g
V ——样品定容的体积,mL
8注意事项
上样前，认真检查层析柱是否有漏和堵的现象，柱上样时要均匀缓慢。
9 经费预算
对照品（40元），乙醇（25元）
参考文献
[1]曾富华. 生物化学实验技术教程[M]. 到北京: 高等教育出版社, 2011: 172~173.
[2]韩寒冰, 周天, 刘杰凤等. 柱层析循环法联合提取脐橙皮中橙皮苷与多糖的工艺研究[J].食品工业科技, 2013, 34(20): 260~264.
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[4] Han HB, Li H, Hao RL, et al. One-step column chromatographic extraction with gradient elution followed by automatic separation of volatiles, flavonoids and polysaccharides from Citrus grandis [J]. Food Chemistry, 2014, 145: 542–548.。
