实验一线粒体和液泡系的超活染色
[实验目的]
1、学习一些细胞的超活染色技术。
2、通过超活染色观察活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
[实验原理]
活体染色是指对生活有机体的细胞或的某些结构组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构。而不影响细胞的生命
活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生
活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为
适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于
被细胞吸收。站那思虑B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
[仪器、材料与试剂]
1、仪器：显微镜、恒温水浴锅
2、材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、黄豆幼根根尖、载玻片、盖玻片、10ml量筒、吸管、吸水纸
黄豆幼根根尖培养方法：将黄豆种子用温水泡胀后，培养在培养皿内多层润湿的滤纸上（水稍淹住黄豆为宜），30℃使其发芽，3~4天后，胚根伸长到
1cm以上。
3、试剂：
⑴ Ringer溶液（装入滴瓶）
氯化钠 0.85g
氯化钾 0.25g
氯化钙 0.03g
蒸馏水 100ml
⑵ 1%、1/3000中性红溶液（装入棕色滴瓶）
称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热（30~40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，装于棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
临用前，取已配制好的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，制成1/3000中性红液装入棕色瓶备用。
⑶ 1%、1/5000詹纳斯绿B溶液（装入棕色滴瓶）
称取0.05g詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加热（30~40℃），
使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。
[实验步骤]
(一)线粒体的超活染色与观察
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织
织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是一种毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察
1)用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后撕
取一小片洋葱鳞茎内表皮，置于染液中，染色10－15分钟。
2)用吸管吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮细织展平，盖上盖玻片进行观察。
3)先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，在高倍镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至一侧贴细胞壁处。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中有被染成蓝绿色的小颗粒。此即线粒体。仔细观察细胞质中线粒体的形态与分布。
(二) 液泡系的超活染色与观察
液泡系是指同一细胞内，许多大小相同或不同的液泡所组成的一个系统。存在于动物细胞和植物细胞。在植物细胞中，液泡有一个演进的过程。在动物胚胎或幼年细胞中，液泡大部分集中分布在细胞核的顶部上方，形成一个液泡区。
中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。
黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察：
1、用双面刀片把初生的黄豆幼苗根尖(约1－2cm长)小心切一纵切面(切片应尽量切薄)，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色5－10分钟。
2、吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地压下盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
3、在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点
向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数
目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大
部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
实验二细胞凝集反应
【实验目的】
1、初步掌握细胞凝集原理。
2、观察细胞凝集现象。
【实验原理】
细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表
面的分枝状糖外被。目前认为：细胞间的联系、细胞的生长和分化、免疫反应
和肿瘤发生都和细胞表面的分枝糖分子有关。
凝集素是一类含糖并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝结细胞和刺激细
胞分化的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞
间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
【仪器、材料与试剂】
1、仪器：显微镜、离心机、天平
2、材料：土豆、鸡血(一份鸡血加两份阿氏液置4O C冰箱冷藏)、载玻片、
盖玻片、滴管、离心管
3、试剂:
1)PBS缓冲液：称取NaCl 7.2g、Na2HP04 1.48g、KH2PO4 0.43g，加蒸馏水定容到1000m1，调Ph值到7.2。
2)阿氏液：葡萄糖2.02g，氯化钠0.42g，柠檬酸钠0.80g，柠檬酸0.055g，蒸馏水加到1000ml，置4O C冰箱中保存。
3)0.9%生理盐水
【实验步骤】
1、称取土豆去皮块茎2g，加10m1PBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含
有可溶性土豆凝集素。
2、制备2％的红细胞：(制备流程如下)
鸡血(一份鸡血加两份阿氏液)
混匀取15ml，离心(2000rpm)10’
