天然药物化学实验指导书
制药工程专业
生物科学与工程学院
2010年1月
天然药物化学实验须知
一、每次实验以前，必须预习本实验内容，了解其操作程序和理论要点，切勿盲目进行实验，实验时须准备记录薄一本，随时正确记录每一实验应记的项目。如原料用量，实验时发生的现象，反应结果，产品数量、熔点、沸点、产品纯度等，以作写正式报告的依据。
二、实验所得产品，如不供下一实验用，应交给指导老师，并注明品名、数量、组别、姓名、日期。
三、实验规则
1．实验时不能阅读与本实验无关的书籍，不要高声谈笑，也不能擅自离开，严禁在实验室内吸烟及吃东西。
2．实验室要经常保持整齐清洁，桌上不要乱放无用的仪器与药品。火柴杆、废纸等不要乱抛在地上、废酸、碱液应倒入污水缸中，易燃烧及易挥发的废液应倒入水槽中，并立即用水冲掉。
3．药品、仪器都是国家财产，须节约爱护使用，若有损坏，应填写仪器损坏单，报告指导教师，及时领取，并酌情赔偿。
4．试剂、药品、公用用具，使用后立即放回原处，不可乱放，并应注意不可盖错试剂瓶塞，以免污染试剂。
5．装有易燃性液体的瓶子，不得放在灯火近旁。
6．加热乙醇、乙醚、石油醚、苯等易挥发可燃的液体时，应使用装有冷凝管的烧瓶，在水浴上进行加热，加热前应放入沸石1—2粒，或一端封死的毛细管，防止爆沸冲击，若在加热时未放沸石则应冷却后再加，不可热时追加，添加溶剂时应离开火源，稍冷后再添，并应重新加入沸石。
7．实验过程中，万一遇见溶液着火，应立即用石棉布或其他物品把它盖上，使其隔绝空气而熄灭。
8．实验完毕后，应将用过的仪器洗刷洁净放好，并应指定值班人员将实验室打扫干净，污水缸的废液拿到室外适当地方处理埋掉，离开实验室时，应检查门、窗、水电是否关好。
9．严禁将实验室内的仪器、药品携带室外。
以上须知清严格遵照执行。
实验一大黄中蒽醌类化合物的预试
大黄为蓼科大黄属植物掌叶大黄(Rheum Palmatum L)，唐古特大黄(R．tanguticum Maxim．)或药用大黄(R．officinale Baill)的根茎，主要含蒽醌类化合物，有泻下和抗菌作用，为常用中药之一。
一、实验目的
l、掌握梯度pH萃取法和提取分离大黄中各种蒽醌甙元的原理及实验方法。
2、了解蒽醌类化合物的颜色反应及色谱检查方法。
二、实验原理
1、大黄中主要成分的物理性质：
1)、大黄酸(Rhein)mp321℃
2)、大黄素（Emodin）mp254～6℃
3)、芦荟大黄素(Aloe-emodin)mp223～5℃
4)、大黄酚(Chrysophanol)mp193～6℃
5)、大黄素甲醚（Physcion）mp203～7℃
其甙有大黄酸葡萄糖甙mp 266℃；大黄素葡萄糖甙mp 189℃；芦荟大黄素葡萄糖mp 239℃；大黄酚葡萄糖甙mp245℃；大黄素甲醚葡萄糖甙mp 235℃；番泻甙A、B、C、D、E等。
2.实验原理
本实验是根据大黄中的蒽醌类甙元成分能溶于氯仿的性质，采用氯仿提取，又利用羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5％碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5％碳酸钠溶液，只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。通过蒽醌类化合物的颜色反应及色谱检查。
三、实验样品、器材及试剂
1、样品：大黄
标准品：大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，大黄酚，大黄素甲醚
2、器材：恒温水浴锅，1000毫升园底烧瓶，各种烧杯，冷凝回流装置，
500mL分液漏斗，抽滤瓶，旋转蒸发仪，硅胶G薄层板（5×10cm），
层析缸，纱布，PH试纸，紫外灯。
3、试剂：氯仿、20％H2SO
4、5％NaHCO3，5％Na2CO3，0.25％NaOH ，5％NaOH，甲醇，乙醇，乙酸乙酯，丙酮，冰醋酸，醋酸镁。
四、实验内容
(一)大黄中蒽醌甙元的提取分离
1、大黄中蒽醌甙元的提取：取大黄粗粉50克置于1000毫升园底烧瓶中，加20％H2SO4 30毫升，氯仿200毫升，水浴回流一小时，稍冷后过滤，滤出浸液，药渣再加20％H2SO430毫升，氯仿200毫升，水浴回流45分钟，滤出浸液，合并所得浸液，残渣弃去，氯仿提取液于分液漏斗中，分出酸水层，得氯仿提取液。回收氯仿至剩余氯仿约l00毫升，用蒸馏水洗至pH6。
2、大黄酸的分离：将含有总蒽醌苷元的氯仿液100ml于500m1分液漏斗中，加5%NaHCO3溶液150m1充分振摇（注意防止乳化，下同），静置至彻底分层，分出碱水层置250m1烧杯中，在搅拌下滴加20％盐酸至pH3，待沉淀析出完全后，过滤，沉淀干燥后，加冰醋酸②10ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。
3、大黄素的分离：5%NaHCO3溶液萃取过的氯仿层，再加5％碳酸钠溶液300ml 振摇萃取，静置至彻底分层后，分出碱水层，在搅拌下用20％盐酸酸化至pH3，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀经干燥后，用15ml 丙酮热溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
4、芦荟大黄素，大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离：经Na2CO3提取过的氯仿液，再用5％NaOH溶液提取四次(80、60、40、40毫升)，合并NaOH液，用盐酸中和至不再析出沉淀，析出黄色沉淀，抽滤，水洗，70℃烘干，称重。
5、芦荟大黄素的分离：4得沉淀物溶于少量氯仿(约30毫升)，用0．25％NaOH溶液提取三次(20、10、10毫升)，合并提取液用盐酸中和至中性，析
