腐殖质的测定
(焦磷酸钠提取重铬酸钾法)
一般来讲，土壤腐殖质由胡敏酸、富里酸和存在于残渣中的胡敏素等组成。腐殖质的含量取决于有机质总量和土壤质地及土壤类型等。
1．方法选择
测定土壤腐殖质酸一般用0.1M 的氢氧化钠多次提取、蒸干，用标准重铬酸钾溶液氧化测定碳量。然而这种方法必须经过脱钙，手续繁琐。0.1M 焦磷酸钠(Na4P207·10H2O) 和0.1M 氢氧化钠混合液一次提取剂可省去脱钙手续，适宜于大批样品的分折。
2．方法原理
土壤中腐殖质由难溶于水的钙离子、镁离子、铁离子、铝离子等络合的腐殖质，易溶于水的钾、钠等离子结合的腐殖质，以及极少量游离态存在的腐殖质等组成。
采用0.1M 焦磷酸钠和0.1M 氢氧化纳混合液提取腐殖质，在强碱性的介质中具有极强的络合能力，能将士壤中的难溶于水和易溶于水的结合态的腐殖质，一次络合成易溶于水的腐殖质钠盐，从而比较完全地将腐殖质提取到溶液中来，其反应式如下所示。再将溶液中的碳量用测定土壤有机质的方法(重铬酸钾法) ，测得腐殖质酸碳量。
现分别介绍胡敏酸、富里酸和残渣中的胡敏素的测定。
3．试剂与主要仪器
[试剂]
(1)0.1Ｍ焦磷酸钠与０．４Ｍ氢氧化钠混合提取剂：称取分析纯焦磷酸钠(Na4P ２O ７·１０Ｈ２Ｏ)44．6克和4克分析纯氢氧化钠，加蒸馏水溶解后定容至1升，此溶液的p Ｈ为13 左右。
(2)０. １Ｎ氢氧化钠溶液：称取2克分析纯氢氧化钠溶于水中，冷却后立即定容至1升。
(3）0.05N 硫酸溶液：取28毫升1：1硫酸加入到800毫升左右水中，并用水定容到１升。
(4)1N硫酸溶液：取56毫升1：1硫酸加入到200毫升左右水中，待冷后用水定容到1升。
(5)0.8000N重铬酸钾标淮溶液：称取经过130℃烘3～4小时的分析纯重铬酸钾(K２Cr 2O 7）39.225克，溶解于４00毫升水中，必要时可加热溶解，冷却后稀释定容到1升，摇
匀备用。
(6)0.2N 硫酸亚铁溶液：称取化学纯硫酸亚铁(FｅＳＯ４·7Ｈ２Ｏ）55.6克(或硫酸亚
铁铵78．4克) ，加6Ｎ硫酸30毫升溶解，加水稀释定容到1升，摇匀备用。
(7)邻啡啰啉指示剂：称取化学纯硫酸亚铁０．６９５克和分析纯邻啡啰啉1．486克溶于100毫升水中，此时试剂与硫酸亚铁形成红棕色络合物．即［Fe(C１２H ３N ２) ３］＋＋。
(8)石蜡(固体) 或植物油。
[仪器]：分析天平；油浴锅；５毫升注射器；100毫升三角瓶。
4．操作步骤
(1)用0．1Ｍ焦磷酸钠和０．１Ｍ氢氧化钠混合液提取腐殖质：称取5克(精确到0．01克) 土壤样品放入200毫升三角瓶中，加入100毫升混合提取掖，用橡皮塞塞紧后在振荡机上振摆５
分钟，然后静置13—14小时(温度控制在２０℃左右) ，随之将溶液再次摇匀后即进行过滤(一
定要过滤清) ，如果很难道滤，可用离心机离心，弃去残渣，将溶液收集于100毫升三角瓶中待测。
(2)测定胡敏酸和富里酸总碳量：吸取上述提取液2～１５毫升(视颜色深浅而定) ，移入100毫升三角瓶中，用1N 硫酸中和到pH=7(用pH 试纸试验) ，使溶液出现混浊为止。这时可稍稍加热，将三角瓶放在水浴锅上蒸干，然后按测定土壤有机质的重铬酸钾法测定碳量，即得总碳量(在油浴上消化时，必须将三角瓶颈套上重物，以免倾倒)o
(3)胡敏酸碳量的测定：①吸取上述提取液10-50毫升(视颜色深浅而定。移入100毫升烧杯中，在加热情况下，逐滴加入1N 硫酸，使溶液的pH 调到3左右(用PH 试纸试验) ，此时应出现胡敏酸絮状沉淀。②再将此溶液放在电热板上以80℃保温半小时，使胡敏酸与富里酸充分分离，然后将烧杯中溶液静置过夜，出现胡敏酸和富里酸的分离。②将溶液用细孔滤纸过滤，用0.05N 硫酸洗涤沉淀物多次，宜到无色为止，弃去滤液。将沉淀用热的0.05N 氢氧化钠少量多次地洗涤，溶解到25-100毫升容量瓶中，成为胡敏酸钠盐，用蒸馏水定容到刻度，摇匀待测。
④吸取此液10-25毫升(视颜色深浅而定) 移入100毫升三角瓶中。用1N 硫酸中和到pH=7〔用pH 试纸试验) ，使溶液出现混浊为止。再在水浴上蒸干，用重铬酸钾法测定碳量即为胡敏酸碳量。
(4)富里酸碳量百分数，可由胡敏酸与富里酸总碳量百分数减去胡敏酸碳量百分数而得。
(5)土壤残渣中胡敏素的含碳量，可由土壤中的全碳量减去胡敏酸与富里酸总碳量求得。(1)用0.1M 焦磷酸钠和0.1M 氢氧化钠混合液提取腐殖质，因为提取温度和时间对提取结果有较大影响。有人但所得数值要比常温放置的提取方法要高些，可根据具体情况而定。
(2)出瓶外。
(3)吸取待测液进行定碳时，吸取的体积应适量(参考前页的图解) ，以免发生误差。
(4)在中和调节溶液pH 时，必须用稀硫酸，并不断用玻璃棒搅拌溶液．然后用玻璃棒蘸一下溶液放在pH (5)在蒸干前必须先将待测液中和到pH=7，否则将会引起碳的损失。
