高效液相色谱仪使用sop

LC300高效液相色谱仪使用SOP

1. 目的与意义

规范LC300高效液相色谱仪的使用操作，保证高效液相色谱仪稳定性。2. 责任

所有使用人员全面负责本SOP的实施。

3. 仪器的组成

本系统由高压输液泵、紫外检测器(190～800 nm或190-400nm)、Rheodyne 7725i手动进样阀、EasyChrom色谱工作站、管路接头等组成。

4. 操作步骤

4.1 准备

4.1.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm或者0.22um滤膜过滤，超声脱气10-15min，装试剂的溶剂瓶一定用泡沫洗涮干净，再用纯净水涮干净，装试剂前用对应的试剂润洗3遍。

4.1.2 根据待分离制备的样品需要更换合适的色谱柱（注意方向）。

4.1.3 配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm或0.22μm滤膜过滤。

4.1.4 确保串口线将设备与计算机连接好，电源线链接正常。

4.2 开机

接通电源，依次开启泵、检测器开关，打开计算机进入操作系统，双击桌面的EasyChrom色谱工作站(中文版)图标进入工作站。

4.3 排气泡

将入液管放入装有流动相的储液瓶中，打开排气阀；用针管等在排气阀处吸出空气，之后打开泵，用大流速冲洗片刻；如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

4.4 创建分析方法

可在EasyChrom工作站的配置上直接设置流动相比例、流速、检测波长、时间程序以及检测器开启与关闭等参数，并重命名、保存。

4.5 平衡系统

用流动相（梯度系统选用初始梯度平衡柱子）冲洗柱子至基线平稳，一般需要大于15分钟至1小时，使用缓冲盐、离子对试剂的时候可能会更长。

4.6 进样

点击基线采集开始平衡柱子20分钟左右，基线完全平衡后在控制面板上点击归零（或在配置页面下可以设置进样后自动归零）；点击“单次运行”，设置好样品信息，点击“运行”按钮，等待进样；用进样针定量吸取样品溶液，在LOAD状态下推针进样，再顺时针转动进样阀手柄至INJECT状态即完成进样操作，谱图采集直接触发。

4.7 保存谱图

谱图采集之前，设置好名称，数据库后再采集结束自动保存数据，一定记得规范命名。

4.8 报告输出与打印

单击工具条上面的打印按钮，即可输出报告（推荐使用写字板格式），报告头和报告尾可以在分析报告标签下设置，也可以打印好后再进行设置。

4.9 实验后注意冲洗色谱柱，对于反相色谱柱（C18 ,C8等），若果流动中加有缓冲盐，先用低浓度有机相（5%-10%甲醇或乙腈）以1的流速冲洗15--30分钟，再替换成纯有机相冲洗20分钟以上，如果流动相中没有加缓冲盐则可以直接用有机相（甲醇或者乙腈）冲洗半小时以上，最后色谱柱要在有机相中保存。

5. 注意事项

5.1 流动相及样品溶液必须用0.45um或者0.22um滤膜过滤，流动相还要进行超声脱气处理。

5.2 进样时一定注意规范操作，注意六通阀两个状态，切换时动作一定要连续。

5.3 试验结束后，停泵，待泵的压力逐步降为0后，方可关闭泵的电源。

5.4 仔细阅读色谱柱说明书，保证色谱柱系统的适应性（如流动相pH 2-8等）。

5.5 如流动相中含有缓冲盐，实验前需要用含有5%甲醇或乙腈的水冲洗柱子约15-30min，再过渡到100%有机相；实验后同样需要用含有5%甲醇或乙腈的水冲洗柱子约15-30min，再过渡到纯有机溶剂，冲洗20min以上，保存柱子。同时，在整个实验过程中，要使用泵头冲洗装置，保证水不能干涸。

5.6 如果设备在运行过程中出现压力剧烈跳动、流量不准时，要将单向阀卸下用洗耳球顺着单向阀吹3—5下，逆着单向阀吹3—5下，检查单向阀功能是否正常（正常情况下单向阀顺着吹是通的，逆着吹是不通的）。然后用甲醇超声清洗20分钟，再用丙酮超声20分钟，再换成纯净水超声20分钟，最后用甲醇超声5-10分钟，再安装到设备上，启动设备观察压力是否剧烈跳动。正常后方可继续实验。