生物化学实验

碱性硫酸铜溶液 • A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏 水后，稀释至约700mL，溶液清晰后稀释至1000mL。 • B液：晶体硫酸铜5g，溶于水并稀释至100mL，加数滴浓硫酸 作稳定剂。 临用时，A液：B液=15：1（V/V）混合，保存于冰箱（太阳下 数小时失效） 0.33mol/L H2SO4溶液：于53mL水中加入1mL浓硫酸 葡萄糖标准液（0.1mg/mL） 10%钨酸钠溶
二、试剂与设备
抗坏血酸标准溶液（0.1mg/mL）：准确称取10.0mg纯抗坏血 酸，溶于1%草酸溶液，并稀释至100mL。贮于棕色瓶，冷藏， 现用现配。 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液：500mg 2,6-二氯酚靛酚溶于 300mL含有104mg NaHCO3的热水中，冷却后用水稀释至 500mL，滤去不溶物，贮于棕色瓶，冷藏，每次用时，用标 准抗坏血酸溶液标定。 吸管 2%草酸溶液 容量瓶 1%草酸溶液 移液管 1%HCl 电子天平 新鲜水果 研钵 漏斗 滴定管
二wenku.baidu.com试剂与设备
苔黑酚-三氯化铁试剂：100mg苔黑酚溶于100mL浓盐酸中， 再加入100mg FeCl3.6H2O，现用现配。 离心机 干酵母粉（市售） 烧杯 乙酸 电炉 pH试纸 漏斗 无水乙醚 量筒 95%乙醇 移液管 0.2%NaOH溶液 玻璃棒 10%硫酸 天平 氨水 吸管 5%硝酸银（棕色瓶保存）
二、试剂与设备
实验 醋酸纤维素膜电泳法分离 牛血清蛋白
实 验 目 的
1
复习蛋白质的相关理论知识
2
掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的方法
一、实验原理
蛋白质是两性电解质，在pH小于其等电点的溶液中，为正离 子，在电场中向阴极移动，反之则向阳极移动。 血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等多种 蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中， 所带净电荷不同，同时由于相对分子质量的不同，造成在电 场中移动速度不同，故可利用电泳法分离 。 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，可以 进行比色定量。
血清 醋酸纤维薄膜 镊子 载玻片 电泳仪 电泳槽 点样管
实验 酵母RNA的提取及鉴定
实 验 目 的
1
掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法
2
掌握苔黑酚法鉴定RNA的原理和方法
一、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶 于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此可制 得粗RNA制品。 在酸性条件下，RNA分子中的核糖基转变成α-呋喃甲醛，后 者与苔黑酚（3,5-二羟甲苯）作用生成绿色复合物。可用比色 法定量。当核糖核酸浓度在10-100μg/mL范围内，其浓度与 吸光值呈线性关系。
实验 维C的定量测定 （2,6-二氯靛酚滴定法）
实 验 目 的
1
了解滴定法测定含量的方法
2
掌握2,6-二氯酚靛酚法测定Vc的原理和方法
一、实验原理
维生素C又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二 氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。 2,6-二氯酚靛酚钠盐水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈玫瑰红 色，当其被还原时就变为无色。因此可用2,6-二氯酚靛酚滴 定样品中还原型抗坏血酸，当抗坏血酸完全被氧化后，稍多 加一点染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。 如无其它杂质干扰样品，提取液所还原的标准染料量与样品 中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
蛋白质名称 白蛋白 α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白 等电点 4.88 5.06 5.06 5.12 6.85-7.50 相对分子量 69000 200000 300000 90000-150000 156000-300000
二、试剂与设备
巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.075M）：巴比妥2.76g和 巴比妥钠15.4g溶于1000mL蒸馏水，pH校正后用； 染色液：氨基黑10B 0.5g，甲醇50mL，冰乙酸10mL，蒸馏 水40mL，混匀； 漂洗液：乙醇45mL，冰乙酸5mL，蒸馏水50mL，混匀；
实验 血糖的定量测定 （Folin-Wu法）
实 验 目 的
1
掌握Folin-Wu法测定血糖含量的原理和方法
2
学会制备无蛋白血滤液
一、实验原理
无蛋白血滤液中的葡萄糖与碱性硫酸铜共热，Cu2+ 即被血滤液中的葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）， Cu2O又使钼酸试剂还原成低价的蓝色钼化合物（钼 蓝）。血滤液的糖含量和产生的Cu2O成正比， Cu2O的量与形成钼化合物的量成正比，可用比色法 测定。