尽管许多试剂盒中提供的试剂都是即开即用型，但其中某些组分(如PBS)仍需要复溶或稀释。从患者身上采集样本后，往往不只需要检测HIV，还需要检测其他疾病；有时一份样本需要与多个实验室分享。由于样本体积通常不多，需要尽量节约使用。如果检测方法允许稀释样本，则应该本着尽可能节省样本的原则做稀释。然而，在试剂盒不允许稀释样本时，绝不能为了节省而使用不足量的样本做检测。
我们稀释样本时经常会听到1：2稀释、1：10稀释等说法，这里的“1：2”指的是将等体积的样本与稀释液混合，而“l：10”指的则是将1份样本与9份稀释液混合。
2．系列稀释
当需要稀释的倍数较高，如稀释1000倍时，单纯的将1份样本与999份稀释液混合是不合适的。为保证稀释的准确性，起始的样本体积不能太少，稀释1000倍后总体积会相当大，对于稀释液是一种极大的浪费。在做某些检测时，我们并不知道最合适的稀释倍数是多少，需要准备样本的一系列不同浓度的溶液，通过预试验来确定最终使用的稀释倍数。在以上两种情况下，就需要使用系列稀释法。
系列稀释的基本步骤是：准备一系列已加入稀释液的小管，取一定体积的样本加入第1管，混合后取出同样体积加入第2管，然后重复混合与移液步骤，直至最后一管。在做定性检测时，可以不换吸头，从第l管一直稀释至最后一管；在定量检测时，尤其是稀释标准品或检测病毒滴度时，每稀释一管一定要更换吸头。系列稀释过程中每一步稀释的倍数可用下面的公式计算：1／稀释倍数一移液体积／总体积。例如，需要做2倍系列稀释时，移液体积／总体积即为1／2。做系列稀释时的要点是：使用尽可能少的样本达到稀释目的；在不影响稀释准确性的前提下尽量减少稀释的次数。
我们可以通过下面的一个例子来直观地说明系列稀释法的使用：在某个检测中，我们需要将某样本稀释256倍。单纯从系列稀释的角度来讲，我们可以有多种稀释方式，如2倍系列稀释(表13．3)、4倍系列稀释(表13．4)、16倍系列稀释(表13.5)等。
做系列稀释时，每一管的稀释倍数依次呈指数增加，因此每一步操作中的误差也会呈指数放大，为减少误差，在上面三种稀释方式中，我们应该选择16倍系列稀释。
系列稀释时需要注意，每个管中稀释后的液体量(即移液量+稀释液的总体积)不能少于50ul，否则无法保证稀释的准确性。稀释时很容易因为搞错管子顺序而导致稀释失败，可通过以下的小技巧避免：将管子按顺序摆放，拿起一管稀释一管，稀释完该管后放回原位，然后拿起下一个管子稀释；当在微孔板中稀释时，可以稀释一列后马上用板盖盖住一列；或在试验台上做个标记，每稀释一列即将该列挪到标记的另一侧。
3．试剂复溶与玻璃器皿的使用
在复溶试剂时，需注意玻璃器皿如烧瓶上的“TC”标志。例如，烧瓶上标有“TC250m1@20℃，，表示该烧瓶在20℃可“容纳”250ml液体，但并不代表同样可以倒出250ml液体——因为液体会出现挂壁现象。在选取适当的器皿时，一定要看清上面的标识。在计算需要配制的试剂体积时，应留出适当的富余量，既防止容器的挂壁损失，也可以避免使用至最后吸入气泡。
4．血清稀释液的制备
为获得满意的检测结果，需要对样本制定严格的标准，但在实际情况中很难获得理想的样本。HIV检测时最好使用血清样本。尽管许多诊断试剂盒允许实验者自行选择使用血清还是血浆，但血浆不易于运输与保存，处理不当时，尤其是多次冻融之后，还会发生自发性凝血。在HIV检测的实际工作中尤其在参考品的制备过程中需要制备大量的稀释样品，而在该过程中应该使用全阴性血清样本进行稀释，不能使用血浆。但献血点采的血样本主要是抗凝血或血浆，一般不会采集大量血清。因此，应将血浆样本转化成血清，便于使用(World Health Organization，1996)。转化时使用的血浆应尽量为新鲜采集的，采血点采血后应及时送到实验室，尽快分离血浆。不管采血时现场检测的HIV结果是否阴性，实验室收到之后都应该进行复核。以下介绍两种转化方法。
将冻干的人源或牛源凝血酶使用去离子水复溶，配制成浓度为500U／ml的浓溶液。向血浆中加入适当体积的浓溶液，使其终浓度为0．5U／mI(牛源)或1U／mI(人源)。轻柔混合，37℃孵育1～2h。孵育期间，观察血浆是否发生凝结，如未凝结则应延长孵育时间。有时个别血浆始终无凝结现象，但仍可使用。孵育结束后，将混合物冷却至室温，然后冻存于一30℃。2～3天后取出，室温解冻。将得到的上层血清倒人其他容器中，注意不要混入血凝块。血凝块不要丢弃，每隔1h挤压一次，仍会析出一定量的血清。
(2)复钙
称取3g CaC12.2H2O，溶于10ml去离子水中，得到2mol／L的浓溶液。按照每100ml血浆加入O．5ml 浓溶液的比例，将CaCl2浓溶液与血浆混合，37℃水浴孵育1h，等待血凝块形成。如血浆较多或血凝块形成较慢，可适当延长孵育时间或增加CaCl2浓溶液的用量，但CaCl2终浓度不能超过O．02mol／L。血凝块形成后，将容器从水浴中取出，冷却后在低于一20℃的冰箱中过夜。第二天取出瓶子，室温解冻，将血清与血凝块分离。如处理的样本体积较小，可在特制的离心机中离心分离。如血清短时间内即会使用，可将其置于4℃，否则应冻存。
在使用以上两种方法时应注意，样本在冰箱中过夜时需连瓶放人结实的塑料袋子中，解冻时则需要将瓶子放人大烧杯中，以防个别瓶子破裂后内容物泄漏而发生污染。
转化过程中使用的部分试剂有一定的毒性，且检测阴性的血浆不能保证绝对安全，因此操作应在生物安全柜中进行。实验人员应穿隔离服，戴手套和口罩。在生物安全柜中操作既可避免感染，又可保持无菌环境，防止血浆／血清染菌。加凝血酶的方法较好，经此处理得到的血清与复钙法相比，既不易产生小凝块，又看起来“干净”——澄清度高。复钙过量还会有负效应，影响下游的某些检测。
HIV检测样品的稀释方法—雅培艾滋病检测试纸网提供，网址为：/
