shiyan26植物体内多酚氧化酶活性的测定

生化实验报告单位：学号：姓名：实验1.多酚氧化酶（PPO）的分离提取一、实验原理与目的氧化形成为醌，使组织形植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。

但是PPO的存在是水果、蔬菜褐变的主要原因之一，影响一些经济植物产品的质量。

多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。

本实验将采用马铃薯为主要材料，通过细胞组织破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。

通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关仪器设备的操作使用，以及蛋白质的提取、分离的系统技术。

二、实验材料与试剂1.材料：马铃薯（大约每小组100-200g）2.试剂：0.03M磷酸缓冲液pH6.（内含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，5％甘油，1％的聚乙烯吡咯烷酮）配制时配×10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液pH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCl2）配制时配×10倍浓缩液100ml；0.02M Tris-HCl缓冲液pH7.4（内含0.001M EDTA）配制时配×10倍浓缩液1000ml； NaCl；聚乙二醇： DEAE－纤维素 DE52；葡聚糖凝胶Sephadex G-200:三、实验步骤（1）粗酶提取：马铃薯丁按1:1（W/V）比例与0.03M磷酸缓冲液pH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，5％甘油，1％的聚乙烯吡咯烷酮）混合，匀浆后4层纱布过滤，滤液以6000rpm离心10min，弃除沉淀获得酶提取液。

（2）盐析分级沉淀：在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40％饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），然后6000rpm离心20min弃除沉淀；离心上清液再加入固体硫酸铵达到70％饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），再以6000rpm离心20min，弃除上清液，收集粗酶沉淀；沉淀用0.03M磷酸缓冲液pH6.0（内含0.02M 巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCl2）溶解，装入透析袋中用0.02M KCl溶液透析至无硫酸铵根离子，获得粗酶液供上柱使用。

实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验四、马铃薯块茎多酚氧化酶（PPO）活性测定及酶学性质一、实验目的1掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的一般原理及操作技术方法。

2了解酶的活性与植物组织褐变以及生理活动之间的关系。

二、实验原理马铃薯不耐储藏，在加工过程中去皮切分后非常容易发生酶促褐变，使外观品质和营养价值大为降低，制约着马铃薯的开发利用。

酶促褐变是马铃薯加工产业必须解决的难题。

其中多酚氧化酶是导致马铃薯等果蔬发生酶促褐变的重要酶类。

多酚氧化酶活性大小直接影响酶促褐变程度。

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)又称酪氨酸酶、儿茶酚酶、酚酶等．是自然界中分布极广的一种含铜氧化酶．普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中。

植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，使组织形成褐变．以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。

研究多酚氧化酶的特性对食品的加工与保藏工艺有非常重要的意义。

因此，检测食品中多酚氧化酶具有重要意义。

多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在一定的温度、pH条件下，有氧存在时，能使催化邻苯二酚氧化生成有色物质，单位时间内有色物质在410nm处的吸光度与酶活性强弱成正相关，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值的变化确定PPO的酶活大小。

多酚氧化酶邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2O2——————→邻醌＋H2O三、试验材料、试剂及试验用品1．材料：马铃薯块茎。

2．仪器：分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；试管；移液管；容量瓶3．试剂：L 磷酸缓冲液（pH=）；L邻苯二酚；L磷酸氢二钠；L磷酸二氢钠；10mmol/L 柠檬酸；10mmol/L抗坏血酸；10mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）；10mmol/L亚硫酸钠四、实验方法：1.多酚氧化酶的提取取马铃薯块茎样品，加入预冷的磷酸缓冲液（）3ml，研磨匀浆，转移到离心管中，再用7mL磷酸缓冲液冲洗研钵，合并提取液，在４℃下离心（8000r/min）5min，取上清液为多酚氧化酶提取液，并量取粗酶液体积。

实验七植物组织内过氧化物酶(POD)活性的测定
一、实验目的
掌握植物组织内过氧化物酶活性测定的原理和方法。

二、实验原理
过氧化物酶广泛存在于植物的各个组织器官中。

在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶可以使愈创木酚氧化，产生茶褐色物质，在470nm处有最大吸收峰，可根据单位时间内A470的变化值，计算POD活性大小。

三、实验材料与设备
1．实验设备与仪器
电子天平、冰冻高速离心机、可见光分光光度计、电动玻璃匀浆剂等。

2．实验材料与试剂
20mM KH2PO4，
100mM PBS：取0.2M Na2HPO4，87.7ml与0.2MNaH2PO4，12.3ml混合。

反应液：取100mM PBS 50ml，加入愈创木酚28μl，搅拌溶解，待溶液冷却后加入30%的H2O219μl，混合均匀保存于冰箱中备用。

四、实验步骤
1．酶液制备
取1.0g植物叶片剪碎，置入玻璃匀浆杯中，加入预冷的20mM KH2PO45ml进行冰浴研磨提取。

匀浆液低温离心8500rpm 15min，上清液为酶粗提液，定容到50ml供测定。

2．酶活性测定
取光程为1cm的玻璃比色杯2只，一只加入反应液3ml，20mMKH2PO41ml作为调零管。

另一只加入反应液3ml，提取的酶液1ml，立即开始计时，在470nm波长处进行比色，开始记录数据，然后每隔一分钟记录一次吸光度值，共测3min。

3．计算
以每分钟A470的化变值0.01为一个相对酶活单位，计算植物组织内过氧化物酶酶活力的大小（单位：U/g鲜重）。

国标测土壤多酚氧化酶分光光度法简介：多酚氧化酶（Polyphenol oxidase，简称PPO）是一种存在于植物和动物组织中的酶类，广泛参与了许多生物体的物质代谢过程。

土壤中的多酚氧化酶在有机物的降解和土壤养分循环中发挥着重要的作用。

国家标准（GB21605-2008）中规定了利用分光光度法测定土壤多酚氧化酶活性的方法。

原理：该方法主要基于土壤中多酚氧化酶的活性，对酚类底物在多酚氧化酶作用下进行催化氧化反应，生成酚醌类产物。

通过测定产物在特定波长下的吸光度变化，进而确定多酚氧化酶的活性。

实验步骤：1.准备土壤样品：收集需要研究的土壤样品，并根据实验要求进行处理和干燥；2.制备土壤提取液：将土壤样品加入磷酸盐缓冲液中，并通过振荡或超声等方法进行充分混合；3.离心提取液：待提取液沉淀后，取上清液并将其离心；4.提取液的酚类物含量测定：将提取液加入含有酚醌类底物的溶液中，并在特定温度下进行反应；5.测定吸光度：根据特定波长下产生的酚醌类产物吸光度变化进行测定；6.计算多酚氧化酶活性：通过计算吸光度变化量，结合实验条件和标准曲线等数据，计算得到多酚氧化酶活性。

注意事项：1.样品的处理和提取过程应严格控制，避免对多酚氧化酶活性的影响；2.实验操作需要在一定温度下进行，以保证反应的准确性和可重复性；3.实验过程中需要使用吸光度计等仪器设备进行测量，确保所得结果的准确性。

优缺点：这种多酚氧化酶分光光度法在土壤中多酚氧化酶活性的测定中具有许多优点。

首先，操作简便，不需要复杂的设备和条件，适用于中小型实验室。

其次，该方法具有较高的灵敏度和特异性，能够准确地测定土壤中多酚氧化酶的活性。

此外，该方法还具有较好的重复性和可靠性，能够满足土壤生态学和环境科学中对多酚氧化酶活性的测定需求。

然而，该方法也存在一些不足之处。

首先，该方法对土壤样品的处理和提取过程较为敏感，需要仔细控制操作条件，以避免对多酚氧化酶活性的影响。

其次，由于该方法只能测定土壤样品中多酚氧化酶的总活性，对于活性的来源和特定酶类的测定有一定限制。

植物酶活指标植物酶活性指的是植物体内酶的催化活性程度，也称为酶活力。

植物体内酶活性与植物生长发育、代谢、环境适应能力等密切相关。

因此，研究植物酶活性指标具有重要的科学意义和应用价值。

一、植物酶活指标的类型1、氧化还原酶：包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）等。

2、酯酶：包括脂肪酶（LIP）和酯酶（EST）等。

3、氨基酸、蛋白质和多糖酶：包括谷氨酸脱氢酶（GDH）、丝氨酸脱酸酶（SDH）、多酚氧化酶（PPO）、多酚酶（POD）、木质素过氧化物酶（LPO）和纤维素酶等。

二、植物酶活指标的意义1、判断环境胁迫：有研究表明，氧气自由基及其产生的活性氧分子是植物生长发育、代谢过程中的一个重要因素。

而氧化还原酶在植物体内具有极高的活性，能够迅速清除氧气自由基及其产生的活性氧分子。

因此，通过测定植物体内氧化还原酶活性，可以判断环境胁迫程度及其对植物的影响。

2、评估生长发育状态：氨基酸、蛋白质和多糖酶等酶在植物体内能够催化孢子、芽、花、果实等生长发育过程中的代谢反应。

因此，可以通过测定这些酶活性的变化，来评估植物的生长发育状态。

3、诊断植物病害：植物病害的发生与否及其严重程度，常常会影响植物体内某些酶的活性，如过氧化物酶和谷氨酸脱氢酶等。

因此，通过测定植物体内的酶活性，可以较为准确地诊断植物病害。

三、植物酶活指标的测定方法1、样品的预处理：将植物材料（如叶片、根、果实等）取出后，立即将其冷冻或干燥，以避免其酶活性受到破坏。

2、酶活测定方法：根据不同酶的特点和催化反应特性，选择相应的酶活测定方法。

如氧化还原酶可以采用光谱方法或电化学法进行测定，酯酶可以采用碳酸酯法、碱式溶液法或带有色团的底物法进行测定，而氨基酸、蛋白质和多糖酶可以采用比色法、光度法或重量法进行测定。

四、植物酶活指标的应用1、农业生产领域：在农业生产中，常常需要对作物的生长发育状态和抗逆能力进行评估，而植物酶活指标的变化能够反映出相应的信息，因此可以用于指导作物的种植和环境调控。

保护酶活性测定方法一、过氧化物酶（POD）活性测定1、酶液的制备：称取样品3 g，加入预冷的0.05 mol/L pH7.8的磷酸缓冲液少量，用粗纱布过滤，定容至10ml，低温离心（12×104r/min,0~4℃）15min,取上清夜置于低温冰箱备用。

2、试剂：0.05 mol/L pH 5.5磷酸缓冲液0.05 mol/L 愈创木酚溶液（2-甲基酚）20%三氯乙酸溶液2%H2O23、仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸量管4、过氧化物酶活性测定：（1）加入反应混合液2.9 ml磷酸缓冲液1 ml愈创木酚溶液（2-甲基酚）1 ml H2O20.1ml酶液（2）37℃水浴锅中保温15min,迅速转入冰浴，并加入2ml三氯乙酸溶液终止反应（3）过滤，适当稀释。

在470nm处测OD470。

5、结果计算：以每分钟内OD变化0.01为1个酶活力单位。

即酶活力=OD×D / 0.01t酶的比活力= OD×D /（0.01tw）其中：OD为反应时间内吸光度的变化W为材料鲜重t为反应时间D为稀释倍数。

即提取的总酶液为反应系统内酶的倍数二、多酚氧化酶（PPO）活性测定1、酶液的制备：称取样品3 g，加入预冷的0.05 mol/L pH7.8的磷酸缓冲液少量，用粗纱布过滤，定容至10ml，低温离心（12×104r/min,0~4℃）15min,取上清夜置于低温冰箱备用。

2、试剂：0.05 mol/L pH 5.5磷酸缓冲液0.05mol/L儿茶酚溶液（邻苯二酚）20%三氯乙酸溶液2%H2O23、仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸量管4、多酚氧化酶活性测定：（1）加入反应混合液3.9 ml磷酸缓冲液1 ml 儿茶酚溶液0.1 ml酶液（2）37℃水浴锅中保温15min,迅速转入冰浴，并立即加入2ml三氯乙酸溶液终止反应。

（3）过滤，适当稀释。

多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0190规格：50T/24S产品简介：PPO主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在410nm有特征光吸收。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存，用前混匀；试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。

操作步骤：一、粗酶液提取：1.收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2.称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定操作表：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管对照管试剂一600600试剂二150150样本150煮沸的样本15037℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入沸水中加热10min。

冷却后，5000g，常温离心10min，收集上清，用蒸馏水调零，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。

注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5 min沸水浴处理。

PPO活性计算：（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

班级：11级生科2班组员：XX XXX题目：过氧化物酶活性的测定过氧化物酶（P O D）在植物体内普遍存在，是活性较高的一种酶，与植物代谢作用和抗逆性等都有一定关系。

其主要生理功能：1.参与活性氧代谢过程2.参与木质素和木栓质的合成3.参与生长素的降解【实验原理】在过氧化物酶（P O D）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。

此产物在470n m处有最大光吸收值，故可通过测470n m下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。

【材料、设备与试剂】1.材料：植物叶片或其它任何植物材料。

2.仪器设备：分光光度计；低速冷冻离心机（配套的离心管）；恒温水浴锅；微波炉；研钵；容量瓶；移液管；试管；洗耳球等。

3.试剂及配制：0.2 m o l·L－1磷酸缓冲液（p H6）反应液（100 m l 0.2 m o l·L－1磷酸缓冲液中加入0.5 m l愈创木酚、1m l30%H2O2，充分摇匀。

最好在使用前配制。

）【方法与步骤】1.酶液提取：称取植物叶片0.2g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为5m l p H6磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在4000 r/m i n 离心15 m i n，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。

2.酶活性测定：吸取反应液3m l于试管中，加入酶提取液0.1m l，迅速摇匀后倒入光径1c m的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在470n m波长处，测定O D值。

每隔1m i n记录1次吸光值，共记录5次。

3.结果计算：按下式计算酶的相对活性。

取相对稳定的每分钟吸光度变化值（ΔA 470），代入下式计算出过氧化物酶的活性，即用每m i n内O D变化0.01为1个过氧化物酶活力单位（U）表示。

酶活性（U·g-1·m i n-1）=（△A470×V t）/W×V s×0.01×t式中：ΔA470——反应时间内吸光度的变化值。

植物生理学实验思考题考试要求：1.口答部分，30分，主要包括课后思考题、实验原理、实验结果。

2.实验部分，50分，主要是仪器的操作，有分光光度计、CO2气体分析仪、电导仪、阿贝折射仪。

实验到达30分以上才能及格。

考试不会太难，但也希望大家能够好好复习。

实验一、植物组织培养技术及烟草叶组织培养中形态发生和器官形成烟草叶组织培养中的形态发生和器官形成1.植物组织培养的原理、培养基的种类、现象原理：（1）植物细胞具有全能性，即每个植物细胞包含着能产生完整植株的全部遗传基因。

（2）只要条件合适，包含着全部遗传基因的细胞都能分裂分化，产生完整的植株。

培养基成分中生长素和细胞分裂素的比例决定了根或芽的分化。

培养基的种类及现象：（1）MS（不加激素）无生长现象（2）MS+BA1mg/L+NAA2mg/L 生长出愈伤组织2.外植体为什么不能切太小？不易成活3.植物组织组织中卫生么出现发霉？在操作过程中出现了污染。

4.植物激素对愈伤组织形成及器官分化有何影响？生长素/细胞分裂素：（1）高不定根（2）中愈伤组织（3）低不定芽5.在组织培养过程中应注意什么？灭菌无菌操作实验二、叶绿体色素的提取、分离及其理化性质色素含量的测定（分光光度计）1.实验原理及现象（1）色素提取植物叶绿体色素一般由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素等组成。

利用叶绿体色素不易溶于水而溶于有机溶剂的特性，可用80%丙酮、95%乙醇等有机溶剂提取。

（2）色素分离可用纸层析来分离叶绿体色素，当溶剂不断地从纸上流过时，由于混合物中各成分在两相（即流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以她们的移动速度不同，因而使样品混合物分离。

色素带分布:从上至下橙黄色（胡萝卜素）、鲜黄色（叶黄素）、蓝绿色（叶绿素a）、黄绿色（叶绿色b）。

（3）荧光现象叶绿素分子吸收光量子。

由基态上升到激发态，激发态不稳定，有回到基态的趋向，当由第一单线态回到基态时发射出的光称为荧光。

多酚氧化酶的测定试剂：1、0.02mol/l焦儿茶酚溶液：称0.22克焦儿茶酚溶于100毫升蒸馏水中，现用现配。

2、0.1mol/l碘酸钾：0.3567克碘酸钾溶于蒸馏水，定容至100毫升。

3、0.005mol/l碘液：碘化钾2.5克溶于200毫升蒸馏水中，加冰醋酸1毫升，再加0.1mol/l 碘酸钾12.5毫升，最后加蒸馏水定容至250毫升。

4、pH6.0磷酸缓冲液：87.7毫升A+12.3毫升B，用蒸馏水稀释至200毫升。

贮备液A：0.2mol/l磷酸二氢钠（27.6g NaH2PO4·H2O用蒸馏水配成1000ml）。

贮备液B：0.2mol/l磷酸氢二钠（53.65g Na2HPO4·7H2O或71.7g Na2HPO4·12H2O用蒸馏水配成1000毫升）5、其它：1%淀粉；10%偏磷酸；0.1%抗坏血酸（现用现配）方法：1、粗酶提取：称取新鲜样品2克，剪碎，置于研钵中，加入少量pH6.0磷酸缓冲液和少许石英砂，于冰浴中迅速研磨至匀浆，将全部材料用缓冲液冲洗入50毫升容量瓶中，并定容至刻度。

在18~20度下每隔3分钟摇动1次，共5次，然后再静置15~20分钟，其上清液即为粗酶提取液（可倾入干洁的三角瓶中备用）。

2、活性测定：取干洁50毫升三角瓶6只（编号），按照下表向各瓶中加入pH6.0磷酸缓冲液、0.1%抗坏血酸、0.02mol/l焦儿茶酚，并向③号瓶及⑥号瓶各加10%偏磷酸。

然后将三角瓶置于18~20度水浴或放在室温下使内外温度达到平衡之后，每隔1分钟向各瓶中依次加入酶液2毫升，全部加完后保温3分钟，再按原顺序仍然间隔1分钟向①、②、④、⑤号各瓶加入偏磷酸1毫升（注意：加完2号瓶后应间隔2分钟再加4号瓶），用于终止酶的活性。

最后向各瓶中加入1%淀粉溶液3滴作为指示剂，摇匀后用微量滴定管以0.005mol/l碘液滴定，当溶液呈现淡蓝色为止，记录碘液消耗量。

实验四植物组织中过氧化物酶活性的测定一、实验目的：1、学习测定植物组织中过氧化物酶活性的方法。

二、实验原理：过氧化物酶（POD）广泛存在于植物体中，该酶催化H2O2氧化，以清除H2O2对细胞生物功能分子的破坏作用。

在有H2O2存在的条件下，过氧化物酶使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测定470nm处茶褐色物质的生成量以检测POD活性。

三、实验仪器及材料：1、仪器：研钵、剪刀、天平、量筒、试管、分光光度计、移液管、比色皿、离心机、秒表2、材料与试剂：苹果、经逆境处理的绿豆幼苗、反应混合液、20mmol/LKH2PO4四、实验步骤：1、POD的提取分别称取绿豆幼苗、苹果果肉各2g,分别加入预冷的10ml 20mmol/LKH2PO4，于研钵中研磨成匀浆，以4000r/min离心10min，收集上清液，待用。

2、POD活性的测定取分光光度计比色杯2只，在其中一只加入3ml反应混合液和1ml KH2PO4作为对照；另一只加入3ml反应混合液，1ml苹果上清液，立即开启秒表计时，测定470nm处OD值，每隔30s读数一次。

取1ml绿豆幼苗上清液重复上述操作。

五、实验结果：1、在酶液中加入3ml反应混合液后，苹果酶液立即呈茶褐色，而绿豆幼苗酶液的茶褐色深至黑褐色。

2、苹果酶液以及绿豆幼苗酶液在470nm处OD值如下：苹果酶液OD值与时间的关系曲线图以每分钟光密度（OD470nm）变化0.01为一个过氧化物酶活力单位，即：苹果POD活性=[ΔOD470/(0.01×wt)] ×D=[（0.28－0.249）/（0.01×3×2）] ×D=0.52D（此值忽略稀释倍数）其中w为样品鲜重，t为反应时间，D为稀释倍数绿豆幼苗酶液OD值与时间的关系曲线图绿豆幼苗POD活性=[ΔOD470/(0.01×wt)] ×D=[（0.940－1.56）/（0.01×3·2）] ×D =6.3 D（此值忽略与苹果酶液相同的稀释倍数）由于绿豆幼苗酶液浓度较大，测OD值前稀释了两倍，所以绿豆幼苗酶液POD 活性为12.67D六、结果分析：1、由苹果酶液OD值与时间的关系曲线图中，OD值与时间的关系基本呈线性关系，故任取变化较均匀的一段数据均可计算出POD活性。

[实验目的]：观察植物组织在不同浓度溶液中细胞质壁分离的产生过程及其用于测定植物组织渗透势的方法。

[实验原理]：当植物组织细胞内的汁液与其周围某种溶液处于渗透平衡状态，植物细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势，这种渗透势相等的溶液称为等渗溶液。

该溶液的浓度称为等渗浓度。

当用一系列梯度浓度溶液观察细胞质壁分离时，细胞的等渗浓度将界于刚刚引起初始质壁分离的浓度和尚不能引起质壁分离的浓度之间的溶液浓度。

代入公式即可计算出其渗透势。

[器材与试剂]：实验仪器：显微镜，载玻片及盖玻片，镊子，刀片；实验试剂：100ml 浓度为1mol/L 蔗糖溶液：用蒸馏水配成0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50mol/L 的蔗糖溶液各50mL ；实验材料：洋葱鳞茎 [实验步骤]：1.取带有色素的洋葱鳞茎，迅速投入各种浓度的蔗糖溶液中，使其完全浸入，约5—10min 。

2.从0.50mol/L 开始依次取出表皮薄片放在滴有同样溶液的载玻片上，盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察，并记录质壁分离的相对程度。

3.在实验中确定一个引起半数以上细胞原生质刚刚从细胞壁的角隅上分离的浓度，和不引起质壁分离的最高浓度。

4.在找到上述浓度极限时，用新的溶液和新鲜的叶片重复进行几次，直到有把握确定为止。

在此条件下，细胞的渗透势与两个极限溶液浓度之平均值的渗透势相等。

将结果记录于表中。

测出引起质壁分离刚开始的蔗糖溶液最低浓度和不能引起质壁分离的最高浓度平均值之后，可按下列各式计算在常压下该组织细胞质液的渗透势。

-Φs=RTiC1式中：-Φs 为细胞渗透势；R 为气体常数=0.083×105L ·Pa/mol ·K ；T 为热力学温度，单位K ；i 为解离常数，蔗糖为1；C 1为等渗溶液的质量摩尔浓度，单位是mol/kg ；则-Φs==0.083×105×(273+t)×1×C由于实验用的蔗糖溶液浓度单位为mol/L ，因此需要按下式对其浓度进行修正。

植物多酚氧化酶（PPO）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T0.1U/L – 4.0U/L使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中多酚氧化酶（PPO）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物多酚氧化酶（PPO）水平。

用纯化的植物多酚氧化酶（PPO）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物多酚氧化酶（PPO），再与HRP 标记的多酚氧化酶（PPO）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的植物多酚氧化酶（PPO）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物多酚氧化酶（PPO）浓度。

试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶789终止液6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份2 酶标试剂标准品（8.0 U/L）标准品稀释液3 酶标包被板4 样品稀释液5 显色剂A液6 显色剂B液10 说明书11 封板膜12 密封袋2张1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

4.0 U/L 2.0 U/L 1.0 U/L 0.5U/L 0.25U/L 5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。