毕业设计（论文）开题报告（学生填表）篇二：医院废水开题报告(1)
1、课题来源
2、研究目的和意义
3、国内外研究现状和发展趋势综述
4、本课题的主要研究内容及拟采取的技术路线、试验方案 篇三：开题报告初稿
多种特异性结核抗原联合应用检测血清中
结核抗体的探索
一、 立论依据
(一) 结核病是临床上常见而较难早期确诊的疾病， 血清学诊断可成为结核病的快
速辅助诊断手段，但由于特异性欠强，敏感性低，尚需进一步研究。结核病血清学方法
主要是检测血清和组织液中的特异性抗结核抗体。结核抗原的选择至关重要。目前常用的抗
原性物质有3 种: (1) 结核菌蛋白; (2) 结核菌胞壁脂多糖;(3) 结核菌体。由于结核抗原
多而复杂，结核病患者的抗体谱呈现出多样性。lyashchenko等用10种重组结核分枝杆菌蛋
白抗原检测结核病患者血清中的特异性抗体，结果显示近90%的结核病患者血清中至少存在
一种抗结核抗体，抗体在体内表达的数量、种类及水平可以随患者的免疫背景、疾病的不同
阶段以及结核杆菌菌株的不同而不同。结核病患者的抗体反应是针对多种结核抗原的，任何
一种抗原都无法检测结核病患者血清中所有的抗结核抗体，因此联合多种抗原进行检测，在
保证特异性的基础上有助于提高诊断的敏感性。目前血清学研究的主要方向是筛选多个纯化
的特异性抗原组成联合抗原，以便增加血清学诊断的敏感性。近年来我国应用基因工程技术
克隆、表达mt 基因,简便地获得了大量mt 单一的蛋白抗原( 如cfp10、esat6、mpt63、mpt64、
ag85a、ag85b、katg、16 000、38 000、65 000 等蛋白) 为我国应用特异性结核抗原检测血
清中结核抗体提供了可能。
(二) 常见抗原：
①脂阿拉伯甘露聚糖抗原(lam)。lam是结核菌细胞壁上的主要脂多糖成分，它在生长中
的结核菌表而能大量表达。lam核心骨架为甘露聚糖，侧链为甘露糖、阿拉伯糖单位，分r
以磷脂酞肌醇c mip)的形式锚在胞质膜上，lam抗原表位存在于阿拉伯甘露聚糖单位上。小
同种间、株间lam存在差异，主要体现在其非还原端阿拉伯糖单位。构成形式即花色上。目
前研究表明lam至少有两种存在形式:来源于h}}ra的ara lam和来源于h}}rv的man lam。
抗lam抗体大多结合在aralam非还原端阿拉伯糖单位抗原表位上，而具有毒性的manlam可
能在疾病的致病过程中起着更为重要的作用。park等}sa]对细菌学确诊的27例结核性脑膜
炎患者发现，23例((85.2070)结核患者脑脊液中lam-igg为阳性，而无菌性脑膜炎及其它神
经系统疾病组78例患者中仅3例阳性，特异性达95.9070。因此认为检测脑脊液中特异性lam
抗体对结核性脑膜炎诊断有价值。park等)sa)对细菌学确诊的27例结核性脑膜炎患者发现，
23例((85.2070)结核患者脑脊液中lam-igg为阳性，而无菌性脑膜炎及其它神经系统疾病组
78例患者中仅3例阳性，特异性达95.9070。因此认为检测脑脊液中特异性lam抗体对结核
性脑膜炎诊断有价值。
② a60抗原是一种能被分解成单一成分的脂一多糖一蛋白集合物，是旧结素和
ppd的主要组成成分。作为一种强有力的免疫原，能激发特异的免疫应答及迟发型超敏
反应. 在印度，gupta等以a60作为抗原检测4_52例结核及161例对照儿童血清 中特异性
igm和iga抗体，敏感性为75.5070，特异性为92070}30}。对于337例结 核和131例对照
成人，igg和iga的敏感性达91.6070，而特异性保持在90.0070}3}}0 chiang}32}等用
a60,38kda,kp90作抗原分别检测活动性结核病人血清中相 应的抗体，结果显示a60作为血
清学抗原比38kda,kp90更有效。anuradha等[33]检
测了神经系统结核患者和其他肺外结核患者脑脊液和血清中的抗a60抗体，诊断结核病
的准确率为75%。因此，对于肺外结核病，a60抗原同样具有诊断价值。
③ 14kda蛋白是a一品状小分r热休克蛋白家族的成员。该蛋白携带有结核 杆菌特异
性的b细胞表位，用单克隆抗体检测发现其至少存在四种小同的抗原
决定簇，能诱导特异的体液免疫应答。7ackett}26]和bothamely}2}等研究发现:原发型
结核病患者以及与痰涂片阳性的结核病患者密切接触者的血清中，抗14kda抗体滴度升高，
提示14kda蛋白在感染初期就具有明显的免疫原性。
④ cfp 10(culture filtrate protein 10)与esat-6同属于一个家族，是山结
核杆菌基因组rd 1区相同的操纵r编码的低分r量蛋白[t2 n，只存在于结核分
枝杆菌群及其它几种致病性分枝杆菌中，是t细胞的靶抗原，能诱导皮肤迟发
型超敏反应步{刺激外周血单核细胞产生特异性ifn- }。单独用cfp 10作为抗原检测结
核病患者血清中特异性抗体，敏感性低。当与38kda蛋白联合应用时，cfp 10能检测出对38kda
抗原缺乏反应的结核病患者血清特异性抗体，在保持高特异性的基础上，可以弥补38kda对
涂片阴性结核病患者检测敏感性的小足。
⑤ esat-6 (6kda early secretory antigenic target)是从结核分枝杆菌短期培
养滤液中纯化分离出的一种低分r量分泌性蛋白，在结核杆菌感染早期阶段就
可被机体识别，具有较强的细胞免疫活性「i }}。通过对小同分枝杆菌的短期培养 滤液
进行分析，发现esat-6仅在结核分枝杆菌群(包括人型分枝杆菌，牛型分
枝杆菌和非洲分枝杆菌)及其它几种致病性分枝杆菌，如堪萨斯分枝杆菌、
szulgai分枝杆菌、海水分枝杆菌中表达，bcg及其它分枝杆菌小表达esat-6，因此，
可以将esat-6作为致病性结核分枝杆菌感染的特异性诊断试剂。有资料显示对
esat-6发生体液免疫应答者，70%以上发生的是高水平的抗体反应，但是由于人的t胞
对esat-6的识别受mhc即hla的限制，因此，小同结核病流行地区的人对esat-6的反应性
是小相同的。
⑥ ag8_5复合体是一组具有较强细胞免疫和体液免疫活性的分枝杆菌分泌性 蛋白「i2}
最早在结核分枝杆菌和bcg的培养滤液中发现，后来发现ag8_5可在
所有分枝杆菌菌种中引起广泛交叉反应「’3]，说明分枝杆菌各菌株均可分泌。活 动性
肺结核病患者血清中ag8_5水平比其它疾病患者和健康对照者高_50 } 1 _50 信，因此可以
通过检测血液中的ag8_5，对活动性结核病加以诊断ag8_5复合体至少包括ag8_5a, ag8_5b
和ag8_5c三种蛋白。ag8_5b分r量为30kda，是结核分枝杆菌的主要分泌蛋白，约占分泌蛋
白总量的2207030070 0在对结核病的诊断上，ag8_5b较ag8_5a和ag8_5c更有价值由于
ag8_5b蛋白广泛存在于各种分枝杆菌中，而小同的分枝杆菌间存在抗原决定簇的差异，因此
可能会影响检测的特异性。
⑦ 38kda蛋白(ags, pst-1, pab) 1986年，young d}s}等首次以单克隆抗体为基础亲和
层析纯化了38kda蛋白。1989年，anderson ab}6}等以pbr322为载体，在大肠杆菌中以融
合蛋白的形式表达了该蛋白。38kda蛋白是一种与磷酸盐转运有关的脂蛋白，含有特异的b
淋巴细胞和t淋巴细胞抗原决定簇，对小鼠、豚鼠和人类b细胞具有免疫优势，能诱导早期
反应。haslov等[7]比较了_5种结核杆菌抗原，发现38kda蛋白的免疫学活性最强，是结核
杆菌的主要免疫原。缺乏抗38kda抗体的血清很难与结核杆菌其它抗原发生反应。38kda抗
原对痰涂片阳性结核病的诊断具有较高的敏感性，但对痰涂片阴性结核病的诊断敏感性低。
wilkinson等[9]以重组38kda蛋白为抗原检测225例结核病患者、34例健康者、24例其他
疾病患者血清中特异性抗体，敏感性为63.1 070，特异性为94.9070 0其中，涂(+)培(+)患
者敏感性为
78.4070，明显高丁涂o)培c)患者敏感性37.7070, 76%涂c)培(+)患者血清中含有抗
38kda抗体何秀云等po]以重组38kda蛋白和ppd为抗原检测bcg接种阳转健康者，38kda检
测的特异性明显高于ppd，从某种意义上可以说，38kda抗原能将结核病患者与bcg接种阳转
者区别开来，这可能与bcg虽然具有编码38kda蛋白的基因，但其蛋白的合成与表达受到抑
制有关。
(三) 结核病血清学影响血清学诊断敏感性和特异性的因素很多，除所有抗原的特异性和
纯
化程度、机体的细胞和体液免疫状态外，采用的检测方法也是一个重要影响因素。目前
用于血清血诊断的方法主要有：酶联免疫吸附试验、斑点免疫金渗虑法以及免疫印记法。
主要参考文献
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诊断的应用。中华结核和呼吸杂志。1988 11: 222
5． 全国结核病流行病学抽样调杳技术指导组，全国结核病流行病学抽样调杳办公
室.2000年全国结核病流行病抽样调杳报告.中国防瘩杂志，2002,24(2): 65
二、研究目标
研究多种特异性结核抗原联合应用对结核血清学诊断的价值，从中找到最经济，灵敏度，
特异度都较高的结核抗原组合。
三、研究内容
通过elisa法用各种结核抗原联合诊断血清结核抗体。①②③④⑤⑥⑦七种抗原用正交
分析方法分析其合理组合。
四、拟解决的关键问题
抗原种类数量较多，组合的方法也较多，会带来较大的工作量和资金消耗。同时，抗原
的取得和血清的来源也是较大的问题。
五、研究方法、技术路线、试验方法
采用高纯度结核分支杆菌纯蛋白衍生物作抗原,应用elisa 检测血清抗结核抗体,测定
试剂盒可由生物公司提供,按试剂盒说明书操作,在终止反应后,用酶标仪、波长490nm 测定a
值,并以p/ n ×100 计算, > 105 为阳性(其中p 为测定孔a 值、n 为临界孔a 值) 。
六、可行性分析
(1) 抗原可从生物公司购买。
(2) elisa法是试验室的常规技术。
(3) 患者血清可从滨医附院和结核病医院获得。
(4) 酶标仪试验室应该有。
七、本项目创新之处
现在用elisa法诊断血清结核的研究很多，但应用多种抗原联合测定的却很少（cnki上
无相关记载）。
