DNA芯片技术及其应用
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基因芯片技术及其应用简介- 论文关键字:技术应用基因研究方法病毒芯片检测摘要:随着基因芯片技术的发展,基因芯片越来越多的被人们利用,它可应用于生活中的方方面面,如:它可以应用于医学、环境科学、微生物学和农业等多个方面,基因技术的发展将有利于社会进一步的发展。
关键词:基因芯片;技术;应用基因(gene)是载有生物体遗传信息的基本单位,存在于细胞的染色体(hrse)上。
将大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上,称之为基因芯片(又称DNA 芯片、生物芯片)。
在一块1 平方厘米大小的基因芯片上,根据需要可固定数以千计甚至万计的基因片段,以此形成一个密集的基因方阵,实现对千万个基因的同步检测。
基因芯片技术是近年来兴起的生物高新技术,把数以万计的基因片段以显微点阵的方式排列在固体介质表面,可以实现基因检测的快速、高通量、敏感和高效率检测,将可能为临床疾病诊断和健康监测等领域,带来全新的技术并开拓广阔的市场。
1 基因芯片技术原理及其分类:1.1基因芯片的原理:基因芯片属于生物芯片的一种;其工作原理是:经过标记的待测样本通过与芯片上特定位置的探针杂交,可根据碱基互补配对的原则确定靶序列[1],经激光共聚集显微镜扫描,以计算机系统对荧光信号进行比较和检测,并迅速得出所需的信息;基因芯片技术比常规方法效率高几十到几千倍,可在一次试验中间平行分析成千上万个基因,是一种进行序列分析及基因表达信息分析的强有力工具。
1.2基因芯片分类:1.2.1根据其制造方法可分原位合成法和合成后点样法;1.2.2根据所用载体材料不同分为玻璃芯片!硅芯片等;1.2.3根据载体上所固定的种类可分为和寡核苷酸芯片两种;1.2.4根据其用途可分测序芯片!表达谱芯片!诊断芯片等2 基因芯片技术常规流程2.1 芯片设计根据需要解决的问题设计拟采用的芯片,包括探针种类、点阵数目、片基种类等。
.2.2 芯片制备将DNA, DNA或寡核昔酸探针固定在片基上的过程。
基因芯片技术的应用随着生物技术和基因研究的不断进展,基因芯片技术已经广泛应用于生物医学、农业、动植物繁殖、环境保护等领域。
本文将从基因芯片技术的原理、应用场景和前景展开阐述,探讨该技术的研究热点和发展趋势。
一、基因芯片技术的原理基因芯片是一种利用高通量技术同时检测成千上万个基因表达的工具。
它通过利用DNA技术将成千上万的基因DNA序列固定在玻璃芯片上,并可检测目标样本中RNA或cDNA的水平。
基因芯片技术主要包括以下步骤:1. 设计芯片:确定目标基因序列,利用计算机技术进行芯片设计,制备出针对目标基因甚至全基因组的芯片。
2. 样本制备:提取RNA或cDNA,并借助反转录技术将RNA 转化成cDNA,再对其进行扩增。
3. 杂交:采用特殊设备将目标样本中的cDNA标记为不同颜色的探针,与芯片表面的DNA序列杂交。
4. 扫描和分析:利用激光扫描装置对芯片表面进行扫描,测量复合体的强度,并进行统计和分析。
这样,我们就能够在一张小芯片上探测到成千上万个基因,分析并比较样本之间的差异,从而揭示出基因调控、信号传递和代谢途径等生物学特征。
二、基因芯片技术的应用场景基因芯片技术的应用范围极广,以下列举几种典型场景:1. 生物医学基因芯片技术在生物医学领域中主要用于诊断和治疗基因相关疾病。
例如,我们能够将基因芯片应用于肿瘤分型和分级、遗传性疾病的基因筛查、药物研发等方面。
此外,基因芯片技术还可以为个体化医学提供技术支持,为临床医生制定精准个体化治疗方案提供重要依据。
2. 农业基因芯片技术的应用在土地的病虫害监测、作物品种鉴定、转基因食品检测等方面具有重要意义。
例如,在生产实践中,农民们经常遭受由于病虫害带来的经济损失,而基因芯片技术能够帮助他们快速诊断设备,确定病虫害的种类和数量,从而更好地进行管理和防范。
3. 环境保护环境污染问题已经成为全球性的挑战,而基因芯片技术则为环境保护带来了新的手段。
例如,通过检测微生物的基因组DNA,我们可以了解大气、水环境以及土壤中的微生物种类组成状况,协助我们了解生态系统的状况和进行环境监测。
基因芯片技术及其应用(精)基因芯片技术及其应用李家兴1001080728 园艺107基因芯片( gene chip, DNA chip, DNA microarray 又被称为DNA芯片、DNA微阵列和生物芯片, 是指以大量人工合成的或应用常规分子生物学技术获得的核酸片段作为探针, 按照特定的排列方式和特定的手段固定在硅片、载玻片或塑料片上, 一个指甲盖大小的芯片上排列的探针可以多达上万个[1- 3]。
在使用时,先将所研究的样品标记, 然后与芯片上的寡聚核苷酸探针杂交,再用激光共聚焦显微镜等设备对芯片进行扫描, 配合计算机软件系统检测杂交信号的强弱, 从而高效且大规模地获得相关的生物信息。
此项技术将大量的核酸分子同时固定在载体上, 一次可检测分析大量的DNA和RNA, 解决了传统核酸印迹杂交技术复杂、自动化程度低、检测目标分子数量少、成本高、效率低等的缺点[4]。
此外, 通过设计不同的探针阵列( array , 利用杂交谱重建DNA序列, 还可实现杂交测序( sequencing by hybridization,SBH [5]。
目前, 该技术在基因表达研究、基因组研究、序列分析及基因诊断等领域已显示出重要的理论和应用价值[6]。
1 基因芯片技术的产生和发展21 世纪将是生命科学的世纪, 基因芯片技术是近年产生的一项生物高新技术, 它将像计算机一样成为21 世纪即将来临的又一次新兴革命的奠基石[7,8]。
基因芯片技术的产生与发展与人类基因组计划(Human Genome Project, HGP 的研究密不可分[9]。
人类基因组的大量信息需要有一种快速、敏感、平行检测的技术,随着越来越多的基因被解码, 基因的功能研究成为迫切需要解决的课题。
在这一背景下, 以基因芯片技术为主体的生物芯片诞生了, 它被誉为是20 世纪90 年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一。
基因芯片技术充分结合灵活运用了寡核苷酸合成、固相合成、PCR 技术、探针标记、分子杂交、大规模集成电路制造技术、荧光显微检测、生物传感器及计算机控制和图像处理等多种技术, 体现了生物技术与其他学科相结合的巨大潜力。
基因芯片技术进展及应用前言基因芯片是一种高通量的生物技术,通过在芯片上固定上千种DNA探针,可以同时检测数以千计的基因表达水平及突变状态。
自2000年起,基因芯片技术迅速发展,成为基因组学、疾病诊断和药物开发等领域的重要工具。
本文将介绍基因芯片的工作原理、技术进展及应用。
基因芯片的工作原理基因芯片是利用微芯片上固定的DNA探针与待检测样品中的DNA分子杂交反应,以判断每个基因的表达量。
基因芯片可以分为两种类型:oligonucleotide(寡核苷酸)芯片和cDNA(互补DNA)芯片,前者是随机序列,后者是基于某些基因或细胞类型的反向转录而产生的序列。
检测流程如下:1.导入待检测的RNA或DNA样品。
2.提取病人或患者的RNA或DNA。
3.将RNA或DNA转录成cDNA。
4.用荧光标记cDNA。
5.将标记后的cDNA加入芯片孔洞中。
6.当RNA或DNA与芯片上的DNA探针杂交时,荧光信号就会产生。
将荧光信号扫描,记录每个小孔中DNA的荧光强度,最终得到基因表达量。
基因芯片的主要优点是对表征基因表达和突变状态有高通量的鉴定能力,同时还具有可重复性好,精度高,便携性强等特点。
基因芯片技术进展目前,基因芯片技术已经取得了很多进展,在以下几个方面已经取得了重要的突破。
单细胞基因芯片传统的基因芯片技术只能检测细胞群体为单位的基因表达状态,难以发现细胞个体间的异质性。
单细胞基因芯片技术克服了这一限制,可以实现对细胞个体内数千个基因表达水平同时检测。
多组学芯片多组学芯片集成了基因表达、微小RNA、DNA甲基化、蛋白质组学等多个组学信息的检测,无需分别进行检测,大大降低了成本和时间。
蛋白质相互作用芯片蛋白质相互作用芯片通过检测蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸或蛋白质-化合物等相互作用,探究蛋白质的功能、调控及作用机制等方面。
应用于精准医学基因芯片技术在精准医学方面应用广泛。
通过基因芯片技术对病人的基因组测序分析,可发现致病的基因突变、基因拷贝数变异等情况,从而制定出精准的治疗方案。
基因芯片技术在分子诊断中的应用随着科学技术的发展,分子诊断已经成为医学领域中的一种重要诊断方法。
而基因芯片技术作为高通量分子诊断手段之一,早已经在生物医学研究和临床诊断领域中得到了广泛应用。
本文将详细阐述基因芯片技术在分子诊断中的应用。
一.基因芯片技术的概述基因芯片技术是一种高通量生物分析技术,也称为DNA芯片技术、基因微阵列技术等。
它主要是利用印刷生物材料到集成电路芯片上的方法,来探测已知的DNA序列或RNA序列、蛋白质等分子信息。
基因芯片是由微型反应器制成的,具有高度自动化、高通量、快速、灵敏度高等优点。
利用基因芯片技术,我们可以快速鉴定和筛选目标物质,并得到更准确的筛选结果。
同时可以发现新的分子和与疾病相关的基因和蛋白质等信息,有助于病理研究和治疗。
二.基因芯片技术在临床前分子诊断中的应用1.基因芯片检测遗传疾病基因芯片技术可以快速而准确地鉴定人类遗传病变的基因。
通过了解哪些变异基因存在,我们可以更好地预测疾病风险,诊断疾病,并制定个性化的治疗方案。
此外,基因芯片在新生儿筛查中也有着广泛的应用,可以提前发现遗传疾病,为儿童的健康提供保障。
2.基因芯片检测肿瘤基因芯片技术对于癌症患者的治疗方案的制定至关重要。
利用基因芯片技术,我们可以快速分析肿瘤的基因组,鉴定病人体内的致癌基因和抑癌基因等相关信息,从而为治疗提供更多的选择。
同时,在癌症治疗过程中,基因芯片技术还可以帮助监测肿瘤治疗的效果。
3.基因芯片检测菌群菌群是人体内微生物的总体称呼,目前研究显示菌群与肠道疾病、人体免疫力等相关。
利用基因芯片技术,我们可以高通量快速地鉴定不同菌株的特征、数量、种类和功能等信息,从而更准确地了解人体菌群的组成变化,并为未来的菌群治疗提供奠定基础的数据。
三.基因芯片技术在临床诊断中的应用1.诊断疾病通过基因芯片技术,医生可以在很短的时间内检测病人体内的有关基因序列信息,有助于更快地进行病原体检测,诊断疾病。
2.制定个性化治疗方案个性化治疗是现代医学中的一个热门话题,基因芯片技术可以获得更加精准的生物标志物信息,准确了解病情及患者个体差异。
基因芯片技术简介及应用随着基因组学研究的不断深入,人类已进入一个崭新的生物世纪,基因芯片在基因功能研究、临床诊断及新药开发等方面显示了巨大的威力,被誉为基因功能研究领域最重要的技术之一。
一、基因芯片技术基本原理基因芯片的创意来自于计算机芯片。
它和计算机芯片一样,具有超微化、高度集成、信息贮存量大等特点,所不同的是,计算机芯片采用的是半导体集成电路,而基因芯片是以基因片段作为“探针”来进行工作的。
(一)基因芯片的定义基因芯片(gene chip)又称DNA芯片,是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针,有规律地排列固定于支持物上,样品DNA或RNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光等标记分子,然后按碱基配对原理与固定的探针杂交,再通过荧光检测系统等对芯片进行扫描,通过计算机系统对每一探针的信号进行处理,从而迅速得出所需要的信息。
基因芯片技术工作原理与经典的核酸分子杂交是一致的,都是应用已知核酸序列作为探针与互补的靶核苷酸序列杂交,通过随后的信号检测进行定性与定量分析。
在一块1cm2大小的基因芯片上,根据需要可固定数以千计甚至万计的基因片段,以此形成一个密集的基因方阵,与标记的样品分子进行杂交,实现对成千上万个基因的高通量同步检测(见文末彩图-1)。
图-1 经荧光扫描后的芯片图示(二)基因芯片技术的主要特点基因芯片技术归纳起来,具有高并行性、多样性、微型化和自动化这四大特点。
高并行性有利于基因芯片所示图谱的快速对照和阅读,效率大为提高;多样性则提供了样品的多指标测定,每块芯片上都含有成百上千种的寡核苷酸探针或cDNA探针,能够用于基因突变、单核苷酸多态性(SNP)、细菌分型等需要高通量的检测;微型化的好处在于对样品的需要量非常少,而且还能节省试剂用量,降低检测成本;自动化使得人力、物力投入减少,检测时间缩短并保证了质量。
同时,它还具有操作简便、信息综合处理能力强、结果可靠和仪器配套齐全等优势,因而备受青睐。
医学中的生物芯片技术生物芯片技术,顾名思义,就是在芯片上集成了多种生物学分析技术。
在医学领域中,生物芯片技术的应用已经变得非常广泛。
生物芯片技术可以用于细胞培养、人类疾病分析和药物筛选等等。
本文将会从技术的角度,详细探讨生物芯片技术在医学领域的应用。
1、DNA芯片技术DNA芯片技术是指将数万或数十万个DNA探针(CDNA 或Oligonucleotide)固定在一个芯片上,通过植入基因表达数据并结合生物信息学方法,可以确定相应的基因表达情况。
因此,该技术可以应用于货品质量鉴定、诊断疾病、生理学等方面。
DNA芯片技术通过序列匹配的方法,可以快速检测人类基因组核苷酸序列与特定疾病的关联,从而帮助科学家们更好地研究疾病的发生机理和治疗方法。
比如在肺癌的研究中,科学家们通过基因芯片分析方法,可以对比正常肺组织与肺癌组织的基因表达谱,寻找到与肺癌相关的基因,从而加深对肺癌的认识。
2、蛋白芯片技术蛋白质芯片技术是一种基于微流控技术的高通量分析技术,可以快速识别和鉴别蛋白质样品中的多种成分,以快速筛选具有关联的蛋白质。
在医学诊断方面,蛋白芯片技术可以为医生提供更快、更准确的诊断信息。
比如,在肿瘤的筛选中,可以快速检测血液中的蛋白质表达水平,从而帮助医生进行更早的诊断。
3、微阵列芯片技术微阵列芯片技术是目前生物学领域中最热门的一种技术,它可以一次性检测出大量的基因或蛋白质样品,从而在生命科学领域中快速获得数据。
在医学领域中,微阵列芯片技术可以用于检测癌症、疾病的早期预测、组织再生等领域。
比如,在癌症治疗中,微阵列芯片技术可以通过研究癌细胞的基因表达,快速寻找突变基因,从而提供更为准确的治疗方案。
总之,生物芯片技术在医学领域中具有重要的应用价值,特别是在疾病检测、预防、治疗方面。
因此,医学工作者和生物信息的专家们必须了解和熟悉生物芯片技术的原理和应用,而且应该尽可能地利用这种新技术来推动医学科学的发展。
何为基因芯片简述其原理及应用基因芯片(gene chip)是一种在一个固定的芯片上容纳了数千至数百万个特定DNA探针(DNA probe)的生物芯片。
它是通过标记特定DNA序列的方法,用于检测和分析DNA序列的存在和表达。
基因芯片可以帮助科学家了解某个生命体的基因组以及基因在不同条件下的表达情况,进而揭示基因与疾病之间的关联,以及基因与环境之间的相互作用。
基因芯片的原理是利用互补基因的碱基配对原则,通过将一个小小的、可能存在于样品中的DNA片段与芯片上的DNA序列进行杂交,来检测该DNA片段的存在。
基因芯片上的DNA序列由探针构成,探针的选择是根据以往的基因信息和预设的基因库来确定的。
当待测的DNA片段与探针杂交时,这个杂交信号会在芯片上通过荧光或其它信号的形式来探测和分析。
基因芯片的应用非常广泛。
主要应用有以下几方面:1. 基因表达分析:可以通过检测基因芯片上的探针与待测样品中的RNA分子杂交的信号强度来了解不同生物条件下基因的表达水平。
通过比较不同样品的表达谱,可以发现与特定生理和病理状态相关的基因,了解基因在不同组织器官、不同疾病及不同治疗方案下的表达差异。
2. 基因组分析:基因芯片可以用于整个基因组的分析,包括检测基因等位基因的表达和遗传突变等。
通过对不同个体基因组的比较和分析,可以寻找与多种遗传性疾病相关的突变以及基因变异。
基因芯片还可以用于寻找与抗生物药物抗性相关的基因突变,以指导个性化治疗。
3. 疾病诊断和预测:基因芯片可以用于不同疾病的诊断和预测,包括癌症、心脑血管疾病等。
通过检测样品中特定的基因表达谱,可以判断个体是否处于正常状态或疾病状态,以及预测个体患病的风险。
基因芯片还可以用于药物疗效预测,通过分析患者基因表达差异,预测特定药物对患者的疗效,并指导个性化治疗。
4. 细菌和病毒检测:基因芯片可以用于检测和鉴定细菌和病毒等微生物的存在和基因组成。
通过将待测细菌或病毒的DNA与芯片上的特定探针进行杂交,在芯片上检测出杂交信号,可以快速而准确地鉴定细菌或病毒的类型和数量。
DNA芯片名词解释1. 概述DNA芯片是一种用于快速、高通量地检测和分析DNA序列的技术。
它是基于DNA的互补配对原理,通过将上万甚至百万个DNA片段固定到芯片表面上的微阵列上,再通过荧光信号检测和定量分析,从而实现对DNA样本的检测。
DNA芯片技术的出现,极大地推动了基因组学和生命科学领域的研究进展。
它提供了一种高效、快速、准确、可靠的方法,用于分析基因表达、基因突变、基因型鉴定等基因组学研究和临床诊断中。
2. DNA芯片的构成和工作原理2.1 构成DNA芯片主要有两部分构成:探针和底物。
•探针:探针是在芯片表面固定的DNA序列片段,用于与待检测的DNA样本中的目标序列特异性结合。
探针的设计需要考虑目标序列的特异性和互补性,通常使用合成的寡核苷酸进行构建。
•底物:底物是待检测的DNA样本,可以是来自生物组织、细胞或体液等。
底物需要经过预处理,如提取、扩增、标记等处理步骤,以便于与探针特异性结合。
2.2 工作原理DNA芯片的工作原理基于互补配对的原理。
具体步骤如下:1.样本制备:将底物中的DNA样本进行提取和扩增,以获得足够的检测目标。
2.样本标记:通过荧光或其他标记物对样本DNA进行标记,以便于检测和定量分析。
3.样本杂交:将标记后的样本DNA与DNA芯片上的探针进行杂交,在一定的条件下进行反应,使目标序列与探针特异性结合。
4.信号检测:通过扫描芯片上的荧光信号或其他检测手段,测量目标序列与芯片探针的结合程度。
常用的检测方法有荧光探针检测、比色法、电化学法等。
5.数据分析和解读:根据检测信号的强度和位置等信息,对样本中的目标序列进行定量和鉴定分析。
通过与已知数据库中的序列比对,可以确定目标序列的来源和性质。
3. DNA芯片的应用领域DNA芯片在生物科学和医学领域有着广泛的应用。
以下列举了一些主要的应用领域:3.1 基因表达分析通过DNA芯片技术,可以对细胞和组织中的基因进行高通量的表达谱分析。
dna芯片的基本方法和原理DNA芯片是一种高通量分析工具,用于检测和分析DNA序列信息。
它是一种微阵列技术,将大量的DNA片段固定在芯片上,通过对DNA的杂交反应,可以同时检测并分析多个DNA序列。
DNA芯片的基本方法包括:芯片制备、DNA样品制备、杂交反应和检测分析。
首先,制备DNA芯片需要在玻璃片或硅片上固定DNA片段。
制备芯片的方法有两种主要技术:光刻技术和喷墨技术。
光刻技术利用光刻胶和紫外光刻系统,通过光刻胶的相位态变化,在玻璃片或硅片表面形成具有特定空间结构的区域。
而喷墨技术则是利用墨水喷墨机将DNA片段直接打印在芯片表面。
其次,为了进行杂交反应,需要对样品中的DNA进行制备。
这包括DNA提取、PCR扩增和标记化。
DNA提取是从待测样品中提取DNA分子,并将其纯化。
PCR扩增可以通过复制DNA片段来增加数量,以满足芯片上的检测需求。
标记化是将DNA片段与标记物(通常是荧光染料)结合,以实现检测和分析。
在杂交反应中,待测样品中的DNA与固定在芯片上的DNA片段进行互补配对,形成DNA双链。
通过加热和冷却过程,使DNA样品中的DNA和芯片上固定的DNA杂交,形成稳定的DNA双链。
最后,通过光信号检测和分析来确定杂交反应的结果。
利用荧光染料标记的DNA分子可以通过激光和光电检测系统来检测和记录荧光信号。
通过分析光信号的亮度和强度,可以确定待测样品中的DNA序列信息。
DNA芯片的原理是基于互补配对原则。
DNA是由四种碱基(腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶)组成的,这些碱基可以通过氢键形成稳定的双链结构。
在杂交反应中,待测样品中的DNA与芯片上固定的DNA片段进行互补配对,形成DNA双链结构。
因为碱基之间的互补性很高,任何与芯片上的DNA片段互补的DNA序列都可以与之杂交,从而实现DNA的检测和分析。
DNA芯片具有高通量、高灵敏度和高特异性的优点,在基因组学、遗传学、疾病诊断和药物研发等领域具有广泛的应用。
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成果简介
芯片技术及其应用
江虎军杨新泉
‘冯锋杜生明‘
王钦南关夏家
辉
‘国家自然科学基金委员会生命科学部北京
湖南医科大学医学遗传国家重点实验室长沙
关键词」芯片微阵列人类基因组计划
芯片技术产生和发展的背景
年月美国政府投资亿美元启动了世界上第一个人类基因组计划计划用巧年的时间完成这一计划实施以来其研究进展和给生命科学研究所带来的变化是当初人们所未能预料的由于这项计划将对人们关心的许多生命现象能从根本上找到答案所以项目实施之初便受到全世界许多科学家特别是从事生命科学研究的科学家和新闻媒体的广泛关注美国的许多生物技术公司对人类基因组计划的投人远远多于美国政府投资的亿美元估计可能达亿美元以上“八五期间国家自然科学基金委员会不失时机地以重大项目的形式在我国第一个资助了具有我国特色的人类基因组计划资助金额万元今天看来这项决策是多么的及时和重要作为重中之重“九五期间又以重大项目的形式连续予以资助资助金额万元到目前为止在致病基因克隆急性早幼粒白血病和中华民族的多样性研究等领域已取得了重要进展为国内外同行所关注人类基因组计划中的重要内容是完成全部人遗传密码的序列测定年月日美国英国德国法国日本和中国个人类基因组测序国家同时向全世界宣布完成了覆盖人类基因组的工作草图的序列测定科学家们意识到完成测序后如何鉴定人万个基因的功能已有约个人基因的功能得到初步鉴定将是人类基因组研究计划之后的重点特别值得一提的是从这项研究计划中所产生的新技术新方法已大大加快了人类认识其他生物的速度如对基因组的大规模测序到目前为止已完成了近种生物全基因组测序得到大量的序列和功能未知的基因显然随着测序的进展如何鉴定越来越多功能未知的基因已变得越来越重要众所周知任何
一
种生命现象的背后特别是那些高等生命的生命括
动不是由简单的一个或几个基因控制而是由多个基因的网络控制通过单个基因的研究去认识其中的规律具有明显的局限性生物个体在其不同部
位不同发育阶段不同的生理状态均涉及到许多基因的开启和关闭因而基因间的这种相互作用和调控表现出了生命的复杂性了解基因的功能及其
表达调控规律正是今后研究的必然
正是生命科学的这种强烈需求促使科学家们发
展了芯片技术这也标志着从结构基因组向功能基因组研究的转变川
芯片或微阵列技术
芯片技术是指采用特殊的
手
段将分子按一定方式密集排列并固定在面积有限的特殊材料表面通过将未知样品中的生物分
子与芯片上所载的己知分子间的杂交获取有无强弱的杂交信号进而提取未知样品中大量的生物信
息这项技术的特点是自动化程度高灵敏度高效
率高能同时进行大规模的搜索式研究而且成本低污染小操作空间小广泛用于基因功能鉴定疾病诊断测序药物筛选等研究领域芯片是生物芯片技术中的一种除此之外
还有蛋白质芯片枷细胞芯片
和组织芯片目前芯片的技术较
成熟市场上见到的基本上全是芯片且多为
本文于侧叉年月日收到© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
中国科学基金《洲年
芯片其他种芯片也有成功的报道
芯片又称为基因芯片或
微阵列芯片的片基
可以只
有几个平方厘米大小也可以大到上百个平方厘米在上面排列的生物分子少则几百个多则上万乃至几十万个因此采用什么样的手段将尽可能多的
生物分子排列在有限面积的片基上一直是生物芯片技术中的一个关键技术目前主要有两种方式一是方式在年由凡及其他的同事共同研发而成其原理与计算机的硅芯片制作相类似即采用光蚀刻技术首先在片基表面涂上一层光敏材料利用光拦技术在片基上蚀刻出大量的斑点使得片基上斑点处的活性基团暴露然后直接将生物分子固定在此处正如合成引物一样通过多次反复的过程即可在每一个斑点处合成出一段分子根据同样的原理也可以合成出一段寡肚制作成蛋白质芯片这种方法的最大优点是能制作高密度的芯片每平方厘米的片基上可以排列多达万个生物分子然而在每一个斑点处只能合成长度有限的分子通过这项技术很难合成出一个完整基因的分子制作生物芯片的另一种方式是由记的几和他的同事共同研发而成其原理类似于点阵式打印机即通过机械手直接将生物分子点在片基上采用这种方法制作的芯片的密度较上一种方法要低但由于点上去的分子已预先准备好所以可以将较长的分子甚至将一个完整的。分子点到片基上制作成本也很低人们往往将第一种方式制作出来的芯片叫基因芯片由于固定在片基上的寡聚核昔酸可以人为控制地进行合成所以可以根据不同的需要可开发出不同类型功能的芯片而由第二种方式制作出来的芯片叫微阵列主要用来进行基因的功能鉴定发明第二种制作微阵列技术的研究者已将芯片的制作细节公布于众人们可以从互联网上查到相关资料因此近年来采用这种方法制作芯片得到了很快的发展已有不少实验室从公司买回点样机根据自己的需要在尼龙膜或玻璃片或陶瓷片上点上几百个甚至上万个基因片段制成微阵列在研究中也取得了很好的效果这种方法的不足之处在于制作过程中点在片基上的需求量较大并且还要求点上的每一个点必须清晰一致点样机是一个可以三维移动的机械手并排排列着个不锈钢针头点样机每次能同时点个点一般情况下而内可以完成一个有个点的方阵如果要完成一个具有个点的微阵列则需要耗时现在市场上已有高效率的并排排列着个不锈钢针头的点样机科学家们在实验研究中首先必须从需要研究的样品中获取然后反转录为并用荧
光或放射性同位素予以标记然后将芯片与之进行杂交杂交前为了使双链的探针变性并减
少
探针自我形成的二级结构需要对探针进行热处理和缄处理杂交时每平方厘米的片基
上加
拼
的探针杂交液然后将芯片置人恒温恒湿的杂交室中过夜使得单链的探针尽可能地与片基上的
互补链得到充分的杂交完成杂交后再用缓冲液洗
去芯片表面未结合的探针然后从芯片上读取杂交
信号如果采用荧光标记探针则需要采用共聚焦激
光扫描阅读器读取杂交信号这种仪器能同时识别
两种荧光红荧光和绿荧光因此在同一块生物芯片上可以同时与两个来自不同的样品的探针进行杂
交其信号通过光电倍增管数字化后输人计算机计
算机检验芯片上每一个杂交点的荧光强度和杂交点间的荧光强度之比确定样品中哪些基因得到表达
表达的强度如何
如果采用放射性同位素标记探针采用普通的放射自显影即可读出杂交信号但在同一块生物
芯
片上每次只能与一个样品的探针进行杂交
从生物芯片上可以获取大量的数据但针对极度复杂的生命系统每一个实验室只能从一个方
面
获取有限的信息鉴于此有远见的科学家已经呼
吁在互联网上建立专门的数据库系统让在全世
界
的实验室中产生的数据全部汇集在一起也让全世界的科学家共享这一数据联合大家的力量去分析
和挖掘数据库中隐藏的秘密
芯片技术的应用及发展趋势
芯片的主要用途包括如下五个方面一是
检测物异片断其目的主要用来进行疾病诊
断病原微生物的检测等等
芯片的第种用途是进行基因的功能鉴
定川这也是目前芯片的一个主要功能科学
家们利用这一技术比较某一种生物在不同发育
阶
段不同生理状态也可以是在病理状态不同组© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
第期
江虎军等芯片技术及其应用
织间基因的表达谱从基因组水平了解基因在时间
空间和异常环境下所体现出的功能实际上芯片的这种功能只是辅助科学家们把所要研究的范
围缩小罢了并不是直接鉴定出某个基因的
功能
通过表达谱的比较只能说哪些基因参与了某一生命活动参与的程度有多大要想知道某个基因的确切功能还需进一步的实验研究才行对于单细胞的生物而言选取处在不同生理状态或不同发育状态的细胞很容易便可得到基因表达谱的差异即找到与该功能相关的基因对于多细胞的生物而言由于细胞间并不一定处在同一生理状态或同一发育状态因而得到所需的基因表达谱要相对困难些主要是取材上不易得到一致状态的细胞或组织但不管是单细胞生物还是多细胞生物科学家们最终将会了解到每一个细胞中所有基因的活动规律也会了解到每个基因在不同细胞中的活动规律芯片的第种用途是用来检测基因组中大量存在的单核昔酸的多态叩这将帮助科学家构建第三代人类基因组高密度物理图谱川既在的序列中便找到一个标记物芯片的第种用途是帮助科学家进行高通量的药物筛选通过芯片技术找到那些明显影响与某种疾病相关基因表达的化合物芯片的这种功能将在今后的药物基因组学研究领域得到广泛的应用芯片的第种用途是进行毒理学研究帮助科学家方便地找到环境中是哪些因素通过哪些基因对人或其它生物产生毒害作用美国是当今生物芯片技术研究最先进的国家美国政府和企业界用于生物芯片技术研究的经费已近亿美元估计今后还将进一步增加美国约有几家公司进行生物芯片研究和开发如等目前芯片市场上的份额被研发的芯片所占有目前芯片发展普及的限制因素是其价格〔’、公司生产的芯片便宜的约美元贵的则在美元以上而共聚焦激光扫描阅读器更加昂贵达美元以上所以开发研究廉价的芯片及其配套系统已是今后的一个必然趋势除此之外芯片今后的发展趋势还表现在开发研究更高密度的芯片甚至将包括人在内的生物个体的全部基因排列在一张芯片上这样更便于科学家从基因组水平去研究和把握生命现象背后的规律开发研究全功能生物芯片或称为缩微芯片实验室从样品到结果全部过程均在芯片上完成大大简化实验的环节
开发研究蛋白质芯片直接从蛋白质水平去了解研究生命现象背后更真实的情况
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奏馨
霎。
我国芯片研究的现状及对策
我国开展生物芯片研究较晚且投人很少但还是有一定的基础仅在生命科学部和
两
年内相继资助生物芯片方面的项目项资助总金额不足万元在国内已形成了专门进行生物芯片研究的实验室和研究队伍如清华大学生命科学系程京教授系清华大学特聘回国的优秀青年人才在该领域作出过突出的工作是国家杰出青年科学基金的获得者已在清华大学联合多个系组建了专
门的开展生物芯片研究的实验室中国人民解放军军事医学科学院王升启博士年初便获得所在单位的资助开展生物芯片的研究在合成标记和检测等方面均已取得很好的进展东南大学陆祖宏教授也是国家杰出青年基金获得者在超薄抗
蚀层的高分辨率刻蚀方面的研究达到国际水平由此他们发明了可以提高制作芯片效率
的
芯片印章技术中国科学院上海细胞生物学研究所
胡赓熙教授已率先在国内研发了包含个人基因的。微阵列并建立了一套点杂交的内
参照系统保证了杂交过程的完全均一性提高了分
析结果的准确性并多次举办技术培训班据估计国内民间风险资本用于生物芯片研发的投人约为