恶臭假单胞菌
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第一部分 防腐挑战实验调研结果 1 实验样品 样本要求新鲜,没有被微生物污染,一般每个样本为300g。 2 微生物挑战性实验
2.1实验菌株 不同国家、组织、企业对挑战实验选择的测试菌种有一定差异(如表1),国内参照美国化妆品、香精和洗涤剂协会(CTFA)推荐的菌种(因其较具代表性,如表2所示),所以更为恰当。(注意菌株来源问题:同属一个种的细菌来源不同,菌株不同,MIC值不同) 表1 某些国家、组织、企业用于化妆品微生物挑战试验的测试菌株
菌株 美国 (药典) 美国 (ISP公司) 英国 (药典) 德国 (Henkel公司) 德国 (S&M公司) 白假丝酵母 √ √ √ √ √ 黑曲霉 √ √ √ √ √ 红色青霉 √ 绿色木霉 √ 绳状青霉 √ 大肠埃希氏菌 √ √ √ √ 镉绿假单胞菌 √ √ √ √ 金黄色葡萄球菌 √ √ √ √ √ 粪肠球菌 √ 产气肠杆菌 √ 表皮葡萄球菌 √ 日勾维肠杆菌 √ 洋葱假单胞菌 √ √ 肺炎克雷伯氏菌 √ 恶臭假单胞菌 √ 荧光假单胞菌 √
表2 CTFA化妆品微生物挑战试验的菌株选择 种类 菌株 数量
革兰氏阳性菌 金黄色葡萄球菌 至少选一种 表皮葡萄球菌
发酵革兰氏阴性杆菌 肺炎克雷伯氏菌 至少选两种 阴沟肠杆菌 大肠埃希氏菌 变形菌属 日勾维肠杆菌
非发酵革兰氏阴性杆菌 铜绿假单胞菌 至少选一种 洋葱假单胞菌 荧光假单胞菌 恶臭假单胞菌 黄杆菌属 不动杆菌属
酵母 白假丝酵母 至少选一种 近平滑假丝酵母
霉菌 黑曲霉 至少选一种 黄绿青霉
产芽孢菌 枯草芽孢杆菌 供选用 生产现场分离菌 适当菌株 一种以上 2.2 培养基 牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂培养基 2.3 试验用菌液的配置
(1)标准悬液的配制 1%硫酸9.9ml与1%氯化钡0.1ml,混合后配制成的悬液浓度为3×108cfu/ml,此悬液再做3倍稀释。 (2)细菌菌悬液的配制 实验前将菌株接种到各个培养基斜面上,36摄氏度恒温培养48小时。将已培养好的活性菌种,用灭菌生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中,充分振荡摇匀。用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作稀释,浊度和标准悬液的浊度(3×108cfu/ml)相同为止; 此时的稀释菌液再做3倍稀释,即为所需的1×108cfu/ml的菌悬液,做细菌总数确定细菌数。 (3)霉菌菌悬液的配制 将已培养好的活性菌种,用灭菌的生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中,充分振荡摇匀;用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作依次的10倍稀释,每次的稀释用血球计数板计数,必须5个中格的霉菌总数在190~210,落在此范围内的菌悬液为我们所需的1×108cfu/ml的霉菌菌悬液,做霉菌总数确定霉菌数。
肠杆菌1.肠杆菌属产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、聚团肠杆菌、阿斯布肠杆菌、河生肠杆菌生物1群、河生肠杆菌生物2群、中间肠杆菌、格高非肠杆菌、阪崎肠杆菌、泰洛肠杆菌2.埃希菌属大肠埃希菌、福格森氏埃希菌、不活跃大肠埃希菌、伤口大肠埃希菌、赫尔曼氏埃希菌3.沙雷菌属粘质沙雷菌、深红沙雷菌、无花果沙雷菌、泉居沙雷菌、芳香沙雷菌1群、芳香沙雷菌2群、晋城沙雷菌、液化沙雷菌4.克雷伯菌属肺炎克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌、鼻硬节克雷伯菌、产酸克雷伯菌、解鸟氨酸克雷伯菌5.变形杆菌属奇异变形杆菌属、普通变形杆菌、潘尼变形杆菌6.普罗威登斯菌属产碱普罗威登菌、斯图普罗威登菌、雷极普罗威登菌、拉氏普罗威登菌7.沙门菌属猪霍乱沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌、雏白利沙门菌8.枸橼酸杆菌弗旁地枸橼酸杆菌、异型枸橼酸杆菌、丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌9.爱文菌属美洲爱文菌10.布特维西菌属水生布特维西菌11.爱德华菌属迟缓爱德华菌、保科爱德华菌12.巴提奥杆菌属乡间巴提奥杆菌13.哈夫尼亚菌属蜂房哈夫菌属14.西地西菌属戴氏西地西菌、拉氏西地西菌、奈氏西地西菌15.摩根菌属摩根摩根菌16志贺菌属17.克吕沃菌属抗坏血酸克吕沃菌、栖冷克吕沃菌18.莱克勒菌属不脱羧莱克勒菌19 .默勒菌属威斯康星默勒菌20 拉恩菌属水生拉恩菌21.塔特姆菌属、痰塔特姆菌22.耶尔森菌属假结核耶尔森菌、小结肠炎耶尔森菌、中间耶尔森菌、克氏耶尔森菌、费氏耶尔森菌23.不动杆菌属洛菲不动杆菌、溶血不动杆菌、鲍曼不动杆菌、醋酸钙不动杆菌24. 寡养单胞菌属嗜麦芽窄单胞菌非发酵菌1.假单胞菌属铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、施氏假单胞菌、门多萨假单胞菌、产碱假单胞菌、假产碱假单胞菌2.伯克霍尔德氏菌属鼻疽伯克霍尔德氏菌、假鼻疽伯克霍尔德氏菌、洋葱伯克霍尔德氏菌、唐菖蒲伯克霍尔德氏菌3.丛毛单胞菌属食酸丛毛单胞菌、睾丸酮丛毛单胞菌4.短波单胞菌属缺陷短波单胞菌、波囊短波单胞菌5.窄食单胞菌属嗜麦芽窄单胞菌6.产碱杆菌属木糖氧化产碱杆菌反硝化亚种、木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种、粪产碱杆菌7. 不动杆菌属洛菲不动杆菌、醋酸钙不动杆菌、溶血不动杆菌、鲍曼不动杆菌8.黄杆菌属脑膜败血性黄杆菌、芳香黄杆菌、Ⅱb群黄杆菌、产吲哆黄杆菌9.威克斯菌属有毒威克斯菌、动物溃疡威克斯菌10.金色单胞菌属浅黄假单胞菌11.黄色单胞菌属栖稻假单胞菌12.弧菌属霍乱弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、河流弧菌、创伤弧菌13气单胞菌属嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、杀鲑气单胞菌、舒伯特气单胞菌、豚鼠气单胞菌14邻单胞菌属类志贺邻单胞菌15巴斯德菌属多杀巴斯德菌、溶血巴斯德菌16莫拉氏菌属莫拉氏菌17谢瓦纳拉菌属腐败谢瓦纳拉菌.葡萄球菌/微球菌1.葡萄球菌属金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌厌氧亚种,表皮葡萄球菌,头葡萄球菌,解糖葡萄球菌,华纳葡萄球菌,溶血葡萄球菌,人葡萄球菌、路邓葡萄球菌、斯莱福葡萄球菌、耳葡萄球菌、腐生葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、阿莱特葡萄球菌、模仿葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌、缓慢葡萄球菌2. 微球菌属微球菌,易变微球菌,玫瑰微球菌,克里斯汀微球菌链球菌/肠球菌1肠球菌属酪黄肠球菌,粪肠球菌,屎肠球菌,鸟肠球菌,母鸡肠球菌,坚韧肠球菌2.草绿色链球菌属牛链球菌,唾液链球菌,血液链球菌,中间链球菌,缓症链球菌,变异链球菌群3.β溶血链球菌群化脓性链球菌,无乳链球菌,马链球菌,兽瘟链球菌,似马链球菌,停乳链球菌,β溶血链球菌4.咽峡炎链球菌群星座链球菌,咽峡炎链球菌5.孪生球菌属溶血孪生球菌,麻疹孪生球菌6.肺炎链球菌属肺炎链球菌7.气球菌属绿色气球菌真菌1.隐球菌属新型隐球菌,白色隐球菌,罗伦隐球菌,地生隐球菌,指甲隐球菌2.假丝酵母菌属白假丝酵母菌,白色假丝酵母菌生物变种,季也蒙假丝酵母菌,乳酒假丝酵母菌,克柔假丝酵母菌,溶脂假丝酵母菌,葡萄牙假丝酵母菌,近平滑假丝酵母菌、伪热带蒙假丝酵母菌、皱褶假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、涏沫假丝酵母菌3.酵母属酿酒酵母菌4.丝孢酵母属白吉利丝孢酵母菌5.地霉属白地霉菌6.红酵母属粘红酵母菌,深红酵母菌7.毛孢子菌属白杰尔毛孢子菌8.地丝菌属念珠地丝菌【下载本文档,可以自由复制内容或自由编辑修改内容,更多精彩文章,期待你的好评和关注,我将一如既往为您服务】。
实验名称:
恶臭假单胞菌含质粒OCT是否可分解烷烃
实验目的:
1、了解质粒与微生物的抗性
2、判别恶臭假单胞菌中的质粒OCT是否能够分解烷烃
实验材料:
恶臭假单胞菌、石油(因其含有大量烷烃)、培养皿7
个、显微镜
实验设计:
1、取7个培养皿,分别在七个培养皿中各加入5ml的相同成分的石
油。
2、将七个培养皿编号为(1~7),并且分为三组(1;234;567),其
中1为对照组。
3、在2号3号4号培养皿中加入相同数量的恶臭假单胞菌(适量);
在5号、6号、7号培养皿中加入相同数量的去除OCT质粒的恶臭假
单胞菌(数量与234相同)。
4、将上述7个培养皿放置在相同适宜的环境下,一定时间后在显微
镜下观察石油的量。
5、通过与对照组1的对比,得出结论。
6、分析讨论结果。
实验数据:
编号 与对照组1对比后的石油量的变化
1 不变
2 减少
3 减少
4 减少
5 不变
6 不变
7 不变
结论:
由上述实验数据可知,恶臭假单胞菌含质粒OTC可减少石油
的量,如果将此质粒消除,则细菌不再能够减少石油的量。即:恶臭
假单胞菌含质粒OTC可分解烷烃,如果将此质粒消除,则细菌不再具
有分解能力。