核酸检测试剂技术要求

核酸检验试剂配制方案核酸检验是一项非常重要的实验室技术，用于检测和分析DNA和RNA的序列和结构。

核酸检验试剂的配制是核酸检验工作中的关键环节，下面是一个700字的核酸检验试剂配制方案。

一、试剂准备1. Tris-HCl缓冲液：将121.14g Tris-HCl溶解在800ml去离子水中，调pH至7.5，加去离子水至1L。

2. EDTA溶液：将186.1g EDTA二钠溶解在800ml去离子水中，加去离子水至1L。

3. NaCl溶液：将58.44g NaCl溶解在800ml去离子水中，加去离子水至1L。

4. Lyse Buffer溶液：将10ml Tris-HCl缓冲液、1ml EDTA溶液、8ml NaCl溶液混合，加去离子水至50ml。

5. 2×载脂体缓冲液：将40ml Tris-HCl缓冲液、8ml EDTA溶液、70ml NaCl溶液混合，加去离子水至200ml。

6. 蛋白酶K溶液：将1mg的蛋白酶K溶解在1ml去离子水中。

7. 合成引物：按需要合成引物序列，并与合成公司确认纯度和浓度。

二、试剂配制1. DNA提取试剂配制：将1ml Lyse Buffer溶液和10μl蛋白酶K溶液混合，制成DNA 提取试剂。

2. PCR反应液配制：将50μl 2×载脂体缓冲液、5μl DNA模板、1μl合成引物、3μl MgCl2、1μl dNTP混合，加去离子水至100μl，制成PCR反应液。

3. 电泳缓冲液配制：将242g Tris和36g boric acid溶解在800ml去离子水中，加去离子水至1L，pH调至8.0，加入20ml 0.5M EDTA混合，最终体积调至1L。

4. DNA标记液配制：将1μl DNA样品和9μl DNA加载缓冲液混合，制成DNA标记液。

5. 试剂保存温度：将所有试剂保存在适宜的温度下，避免阳光直射和高温。

三、注意事项1. 试剂配制时要严格按照实验室的操作规程进行，避免实验污染。

YY/T 1182-2010核酸扩增检测用试剂（盒）1范围本标准规定了核酸扩增检测试剂（盒）【以下简称“试剂（盒）”】的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和说明书、包装、运输和贮存等。

本标准适用于核酸扩增检测试剂（盒）的质量控制。

核酸扩增检测试剂（盒）应包括核酸提取、核酸扩增及产物分析试剂组份，如核酸扩增检测试剂（盒）内不含有核酸提取组份，应由生产企业说明或指定提取试剂（盒）。

本标准不适用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突变检测用试剂（盒）及血源筛查的试剂（盒）。

2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 21415-2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性3术语和定义以下术语和定义适用于本文件。

3.1 聚合酶链反应polymerase chain reaction,PCR聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。

3.2 PCR杂交（膜上、板上）PCR hybridization具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）可以通过氢键的方式，按碱基互补配对原则相结合，探针结合于特定核酸序列或PCR产物的杂交过程可以在液相中进行，也可以将其中一个固定在固相载体上进行。

3.3 PCR 电泳 PCR electrophoresis根据PCR产物分子质量和所带电荷的不同在电场中进行分离的技术。

3.4实时荧光PCR real-time polymerase chain reaction,PCR在PCR过程中利用荧光染料释放的荧光定量的变化直接反映出PCR扩增产物量的变化，荧光信号变量与扩增产物变量成正比，并通过对荧光的采集和分析以达到对原始模板量进行分析的PCR。

附件3核酸扩增法检测试剂注册技术审查指导原则一、前言本指导原则主要针对核酸扩增类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导性技术要求。

本指导原则系对核酸扩增法检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。

本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将进行适时的调整。

二、适用范围本指导原则适用于核酸扩增法检测试剂的注册技术审查，其他类核酸检测试剂可参照相关内容。

三、基本要求（一）基本原则1.核酸扩增类检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。

研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。

2．试剂生产企业应具有与其技术要求相适应的人员、厂房、设施和仪器设备以及适宜的生产环境，配备满足核酸提取和扩增检测以及操作人员防护所需的设备。

建立专用实验室，实验室应当严格分区，人员和物品应当单向流动，以最大限度地防止实验过程中样品之间的污染和避免扩增产物的污染。

生产用于病原微生物核酸检测的生产企业应建立符合生物安全要求的设施和措施。

3.试剂生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求，建立相应的质量管理体系，并应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。

4.核酸扩增类检测试剂的引物设计应当符合核酸检测设计的要求，扩增体系应设定合理的内标和外标，试剂需设置抗污染的特定措施，扩增产物须进行确证研究。

5.企业使用新型原材料时，应提供与通行原材料比对研究结果及相关资料。

解脲脲原体(UU)核酸检测试剂注册技术审查指导原则UU解脲脲原体(UU)核酸检测试剂注册技术审查指导原则 :1、审查范围及内容：(1)审查产品应符合国家产品检验标准，包括生物安全检测、灭菌检测以及核酸相关特性检测等；(2)审查应包括试剂产品的基本配方、样品浓度、检测精度、灵敏度、稳定性以及灭菌等性能的实验数据；(3)要求以有证据的方式表明试剂的引物、探针和探针蛋白等组分。

2、材料准备(1)试剂配方与制备：提供完整详细的试剂配方、成份、制备步骤及售货说明书；(2)产品注册文件：提供完整的商标名称、生产厂家、有效期以及使用说明书等品质保证书；(3)样品：提供质检机构安排检测用的试剂样品或试剂品质样品。

3、审查过程(1)现场考察：审查团队将就试剂生产设施及流程等采取现场考察；(2)审查报告：审查团队将从技术角度出具报告，以评定试剂是否符合国家标准；(3)检测数据：审查报告中应有完备的检测数据，说明试剂的基本性能；(4)复查评定：审查团队根据实际试剂材料情况，进行复查评定。

4、审查结果(1)根据实际现场情况以及审查理论分析，审查团队将发放审查结论；(2)审查结论分类为绿色、黄色、红色三种，根据分类给予相应的后续措施；(3)绿色表示审查通过，项目可以进行注册；黄色表示项目有改进空间，可以继续审查；红色表示项目未通过，不予注册。

5、步骤及要求(1)试剂配方技术标准：要求采用规范的配方及灭菌技术，确保试剂质量；(2)核酸测定检测：要求采用国家规范的测定方法，确保试剂检测精度；(3)灵敏度及稳定性小组试验：要求采用质检机构相关标准的方法，确保试剂的灵敏度及稳定性；(4)安全产品评估：要求采用安全性测试标准，确保检测产品安全性；(5)试剂操作规范：要求遵照检测操作规程进行操作，确保检测数据的有效性。

以上就是关于UU解脲脲原体(UU)核酸检测试剂注册技术审查指导原则的介绍，通过完整的审查内容，详细的材料准备，过程安排，评定要求等，确保检测产品优质和安全。

可经输血传播感染病原体核酸筛查技术要求1范围本标准规定了可经输血传播感染病原体核酸筛查技术的关键影响因素和性能验证要求，包括核酸筛查试剂的性能要求以及应用中常见问题分析。

核酸筛查方法包含聚合酶链反应（PCR）技术与转录介导扩增（TMA）技术。

本标准适用于核酸筛查试剂的验证评价及日常检测的质量控制。

2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

EP17-A2Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures;Approved Guideline—Second Edition3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

3.1聚合酶链反应polymerase chain reaction，PCR一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。

在特异性核酸模板、引物、DNA聚合酶、dNTP 等必要条件存在时，通过变性、退火、延伸不同温度变化的重复循环，使模板片段扩增放大数百万倍。

3.2转录介导扩增技术transcription-mediated amplification，TMA一种目的核酸的等温扩增方法，使用RNA转录（RNA聚合酶）和DNA合成（反转录），按照目标核酸序列产生RNA扩增子。

RNA和DNA都可以使用TMA方法扩增。

3.3信噪比signal-to-noise ratio,SNR or S/N核酸检测过程中，目的核酸的靶信号与背景噪音信号的比值。

通常PCR反应的信噪比在2-5:1时，可以将靶信号与背景信号区分开。

3.4分析灵敏度analytical sensitivity检测系统或方法可检测的最低分析物浓度。

在核酸检测中，分析灵敏度常用检出限（LoD）表示。

核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则首先，核酸检测试剂的生产需要满足以下几个原则：1.质量控制：核酸检测试剂的生产必须建立质量控制体系，确保产品质量的稳定性和可靠性。

包括严格的原料采购和检验、生产过程的严格控制、产品的稳定性测试等环节。

2.环境控制：生产核酸检测试剂需要在洁净、无菌的环境下进行，确保产品不受到污染。

同时，要定期对生产环境进行监测和清洁，确保环境的洁净度。

3.设备和仪器管理：生产核酸检测试剂需要使用合适的设备和仪器，并定期维护和校准，确保其正常运行。

同时，要对设备和仪器进行严格的管理，确保其不受到污染。

4.生产工艺和工序控制：核酸检测试剂的生产需要制定合理的生产工艺和工序，确保产品的质量和稳定性。

包括原料配制、反应体系的调整、加工工艺的优化等环节。

其次，核酸检测试剂的质量控制需要注意以下几点：1.原料的质量控制：核酸检测试剂的原料包括核酸提取试剂、试剂盒配套试剂、质控品等。

需要严格对原料进行采购和检验，确保其质量符合要求。

2.检验方法的验证和标准化：核酸检测试剂的生产需要建立合适的检验方法，并进行验证和标准化。

确保产品的测定结果准确可靠，并能和其他实验室的结果相比较。

3.生产过程的质量控制：包括生产的各个环节，如原料配制、反应体系的调整、加工工艺的优化等，需要制定相应的质量控制标准和流程，确保产品质量的稳定性和可靠性。

4.产品稳定性的测试：核酸检测试剂的稳定性是能否长期保存和使用的关键，需要对产品进行稳定性测试，包括温度、光照、湿度等条件下的稳定性研究。

5.质量问题的处理和纠正措施：当产品质量出现问题时，需要及时进行处理和纠正措施，并建立相应的改进措施，避免类似问题的再次发生。

最后，需要指出的是，核酸检测试剂的生产和质量控制是一个系统工程，需要全面考虑各个环节的影响因素，并建立相应的质量控制体系。

同时，随着科技的不断进步和应用的需要，核酸检测试剂的生产和质量控制技术也在不断发展和完善，需要及时关注和应用最新的技术和方法。

核酸检测试剂一、基本要求:1.试剂名称：核酸检测试剂（进口)2.用途：对献血者血液标本进行乙肝病毒DNA、丙肝病毒RNA,人类免疫缺陷病毒RNA检测。

要求HBV/HCV/HIV单管联检试剂。

3.数量：65000人份.［乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒(1+2）型核酸检测试剂盒(PCR—荧光法）：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒（1+2)型核酸质控试剂（PCR-荧光法）].4.★试剂适用设备:可以在现有S201设备上使用。

5.适用检测样本种类：血清及EDTA、ACD抗凝血浆。

6.★试剂原理基于荧光PCR技术的汇集模式或基于TMA技术的单检模式。

二、技术要求:1.试剂必须通过美国FDA批准或欧洲CE（IVD）认可,以保证产品技术和质量达到国际认可水平，投标试剂的注册标准应具有进字号的注册许可,投标人需在投标文件中提供相关证明文件。

2.试剂可检测到的基因亚型要求覆盖：HBV A—H所有亚型;HCV 1—6亚型；HIV－1 M组A－G所有亚型、O组、N组；HIV-2组.3.检测灵敏度（≥95％可信限)：HBV DNA≤20 IU/ml；HCV RNA≤50 IU/ml；HIV RNA≤51 IU/ml；临床特异性≥99。

7%。

4.★根据国家相关机构质控要求进行质控，试剂含有内标质控(Internal Control），为RNA内标或RNA\DNA双内标，全程监控检测过程，包括核酸提取，扩增及检测步骤，以防止技术性的假阴性。

系统内部有UNG酶防扩增污染控制。

5.试剂使用时操作简便,不需要用专用设备进行孵育融化。

不需要人工配制或分装，不需要开盖，试剂封闭操作，能有效防止交叉污染。

试剂包装容器需带条形码，满足检测设备自动扫描、自动读取判断试剂组分的需要。

6.装载样本及对应耗材试剂后，无需人工值守，直至试验结束接收结果，避免试验污染。

7.实验结束后,试剂架等材料无需84消毒液浸泡处理，方便操作人员对实验室的维护。

附件3核酸扩增法检测试剂注册技术审查指导原则一、前言本指导原则主要针对核酸扩增类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导性技术要求。

本指导原则系对核酸扩增法检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。

本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将进行适时的调整。

二、适用范围本指导原则适用于核酸扩增法检测试剂的注册技术审查，其他类核酸检测试剂可参照相关内容。

三、基本要求（一）基本原则1.核酸扩增类检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。

研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。

2．试剂生产企业应具有与其技术要求相适应的人员、厂房、设施和仪器设备以及适宜的生产环境，配备满足核酸提取和扩增检测以及操作人员防护所需的设备。

建立专用实验室，实验室应当严格分区，人员和物品应当单向流动，以最大限度地防止实验过程中样品之间的污染和避免扩增产物的污染。

生产用于病原微生物核酸检测的生产企业应建立符合生物安全要求的设施和措施。

3.试剂生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求，建立相应的质量管理体系，并应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。

4.核酸扩增类检测试剂的引物设计应当符合核酸检测设计的要求，扩增体系应设定合理的内标和外标，试剂需设置抗污染的特定措施，扩增产物须进行确证研究。

5.企业使用新型原材料时，应提供与通行原材料比对研究结果及相关资料。