临床医学检验新技术
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医学检验技术的新进展与应用随着科技的不断发展和进步,各个领域的技术也在迅速地发展和前进,医学检验技术也不例外。
现代医学检验技术以其高精度、高灵敏度、高特异性和快速等优点,已成为影响人们健康水平的重要标准之一。
本文将重点介绍医学检验技术的新进展和应用。
一、基因检测技术基因检测技术是医学检验技术的重要一环。
近年来,基因检测技术发展得越来越迅速,其研究领域也越来越广泛。
基因检测可以帮助我们预测某些疾病的发病风险、早期诊断某些疾病、评估治疗效果、预测疾病复发等,对于抗病治疗和预防疾病具有重要的意义。
基因检测先是从单一基因突变分析到基因组分析和转录组分析等多层面的研究,利用高通量测序技术实现了基因组信息的全面检测。
基因检测不仅涉及到人类生命的最基本单位--基因,还涉及到DNA、RNA以及蛋白质等层面,基因检测给医学诊断带来了极大的革命。
基因检测适用于各种疾病的检测,如肿瘤、食管癌、肝癌等。
如肿瘤基因检测就可以通过检测个体肿瘤基因的突变及蛋白质表达水平等信息,对肿瘤的发生及其对治疗的反应情况进行了深入研究,使肿瘤的诊断和治疗更为精准和有效。
二、分子免疫学技术免疫学是研究免疫系统及其免疫应答的科学,也是医学检验技术的重要组成部分。
免疫技术中分子免疫学技术的发展,给医学检验带来了重大的进展。
分子免疫学技术主要包括免疫分析技术、分子诊断技术和单克隆抗体技术等。
免疫分析技术是利用抗体或抗原-抗体反应来检测样本中特定成分的存在和量的方法。
其被广泛用于体液、细胞、组织标本的检测,如:肿瘤标志物的检测、细胞排异反应的检测等。
分子诊断技术采用基因工程技术,通过对特定基因的PCR扩增、DNA酶切等方法,检测生物样本中的目标基因进行基因诊断。
这种方法应用于染色体异常、神经系统疾病、病毒性疾病等的检测。
单克隆抗体技术是一种利用细胞杂交技术、酶标技术制备的对特定抗原高度敏感、特异性较强的单克隆抗体分子。
在肿瘤干预和治疗研究中特别有应用价值。
临床检验新技术新项目应用制度I目的为不断满足临床的需求,提供准确性高、特异性强的检验项目,医学检验科必须不断开展新的技术及新的检验项目,以更好的为患者服务。
Il范围适用于医学检验科各专业组室。
Ill制度一、新项目开展前应收集相关的检验资料(一)新项目、新方法性能评价:在正式使用某新仪器、新试剂、新方法检测患者样品、发出患者结果报告前,必须做方法学评价,并有相应实验记录。
(二)性能评价内容至少应包括:精密度(天间重复性)、准确度(方法学比较资料)、患者结果的可报告范围,还可对分析灵敏度、特异性、参考值等特性进行评价。
1.精密度评价:一批内进行20次重复测定,以反映批内随机误差;每天进行一次测定,累积20天结果表示天间随机误差。
2.方法学评价:凡有室间质控调查项目可用室间质控品作患者样品进行测定,结果与靶值相比;也可新、旧方法进行比对;也可与其他三级甲等医院进行对比。
对比时共做40个高、中、低浓度的标本,按室内质控允许偏倚范围进行评价。
3.患者结果可报告范围:用高浓度的新鲜标本按比例稀释,了解线性情况。
二、新项目审批医学检验科申请开展新项目时,应由医务科组织相关临床科室人员应进行可行性论证,待审批通过后才能向临床开展。
可行性论证主要应包含以下内容。
(一)新项目技术路线。
(二)征求相关临床科室专家意见。
(三)评估新项目开展的意义。
(四)评估开展该检验项目所需人力、设备及空间资源。
(五)核定该项目开展所需仪器、试剂的三证是否齐全。
(六)核定该项目的收费情况或在卫生与物价行政部门备案情况。
三、新技术、新项目技术培训(一)在新技术及新项目正式开展之前,应确定负责人员及操作人员,由上一级技术人员或公司应用工程师对负责人员及操作人员进行培训。
(二)培训内容包括技术原理、仪器操作、测定的操作步骤、维护保养、注意事项等,经培训考核合格者,方能操作。
(三)所有培训和考核应有记录。
四、新项目实施后跟踪开展新项目后,医学检验科应安排相关负责人员对项目实施情况进行跟踪,积极与临床沟通,听取临床科室对新项目设置合理性的意见,做好相关沟通记录并定期总结评审,改进项目管理。
医学检验中的新型检测技术应用与创新医学检验是现代医学领域中重要的一环,其在疾病诊断、治疗和预防中起着至关重要的作用。
随着科技的不断进步,新型检测技术在医学检验中得到了广泛应用与创新,为临床诊断提供了更为精准和高效的手段。
一项新型检测技术的应用与创新是指通过技术手段对疾病相关指标进行检验与分析,并为临床决策提供科学依据的过程。
这些新型技术在传统检验方法的基础上,通过引入先进的仪器设备、提高检测灵敏度与特异性、优化检测流程等手段,不断提高检验的准确性和效率。
近年来,新型检测技术在医学检验中的应用与创新可谓有目共睹。
首先是基因检测技术的广泛应用。
基因检测通过检测个体基因组的特定变异,可以帮助医生对遗传性疾病进行快速和准确的诊断与预测。
例如,通过测序技术可以检测染色体和基因突变,从而实现对遗传性疾病的早期诊断和治疗。
此外,还有越来越多的基因标记物被用于疾病诊断和预后评估,如肿瘤标志物、心血管疾病相关基因等。
其次,新型生物传感技术的应用也取得了重要的突破。
生物传感技术通过将生物分子与传感器相结合,能够对各种生物分子进行定量和定性的检测。
例如,蛋白质芯片技术可以通过识别和定量目标分子来实现蛋白质组学分析和临床诊断。
另外,纳米技术在医学检验中的应用也日益重要,具有高灵敏度、高选择性和高通量等特点,可广泛应用于病原体检测、基因分析和抗体检测等领域。
此外,新型免疫诊断技术的应用也为医学检验带来了重要的突破。
免疫检测技术通过利用人体免疫系统对抗原和抗体之间的特异性反应,对疾病相关分子进行检测。
例如,免疫荧光、免疫酶联免疫吸附测定(ELISA)等技术在肿瘤标志物、传染病病原体等方面的应用广泛,为疾病诊断和治疗提供了可靠的依据。
最后,新型分子识别与定量技术也为医学检验带来了重要的进展。
通过分子识别与定量技术,可以对微量分子进行高灵敏度和高精确度的检测。
例如,质谱技术能够通过对样品中分子的质量和相对丰度进行分析,实现对生物样品中各种代谢产物、蛋白质和核酸等分子进行定量和鉴定。
医学检验技术的发展与创新近年来,随着科技的高速发展和医疗需求的不断增长,医学检验技术也在不断创新和进步。
医学检验技术作为临床诊断过程中不可或缺的一环,对于提供准确、快速、可靠的临床结果具有重要意义。
本文将从实验室自动化、分子诊断、基因组学和无创检测等四个方面探讨医学检验技术的发展与创新。
实验室自动化随着科技的进步,实验室自动化成为了医学检验技术发展的重要方向之一。
传统实验室工作通常需要大量人工操作,并且容易出现人为误差。
而实验室自动化技术利用机器和计算机进行样品处理、数据分析和报告生成等工作,能够提高工作效率和结果准确性。
近年来,液体处理系统、样本输送系统以及分析仪器等在实验室自动化方面取得了突破性进展。
例如,全自动生化分析仪可以同时处理多个样本,并通过精确控制液体流量和温度来保证结果的准确性。
此外,自动化实验室还可以利用人工智能技术对数据进行分析和解读,帮助医生制定更准确的诊断方案。
分子诊断随着分子生物学的发展,分子诊断技术在医学检验领域得到了广泛应用,并对传统方法进行了革新。
传统的体外检查主要依靠生化方法来测定血液中各种成分的含量,而分子诊断技术则可以在更低的水平上检测、分析和诊断疾病。
例如,核酸检测技术通过对DNA或RNA进行扩增和检测,在遗传性疾病、肿瘤标志物等方面具有重要应用价值。
此外,蛋白组学也是一种常见的分子诊断技术,通过检测血液或尿液中特定蛋白质的含量或改变来判断疾病状态。
基因组学基因组学作为医学检验技术领域的前沿科学,对于理解人类基因组以及相关疾病具有重要意义。
近年来,高通量测序技术、基因芯片等新技术的出现,加速了基因组学的发展和应用。
高通量测序技术允许我们快速、准确地测定个体基因组序列,为疾病的预测、诊断和治疗提供了有力依据。
同时,基因芯片可以同时检测数万个基因的表达水平,并通过比较不同样本之间的差异来分析相关疾病的发生机制。
无创检测无创检测是医学检验技术领域最具创新性和实用性的方向之一。
医学检验技术的新产品及其应用随着科技的发展,医学检验技术也在不断地进步和创新。
新的检验技术和产品的问世,为临床医学和健康管理提供了更加精准和可靠的支持。
一、基因测序技术基因测序技术是一种通过读取DNA序列来分析个体基因信息的新型检验技术。
通过对DNA序列进行测定,可以对各种疾病的发生与发展进行分析,并且可以为医生提供更加精准的治疗方案。
例如,对于癌症患者,基因测序技术可以帮助医生判断患者体内癌细胞突变的情况,进一步指导治疗方案的选择。
同时,基因测序技术还可以帮助人们预测自身患病的可能性,提醒人们进行科学的预防工作。
二、液体活检技术液体活检技术是利用血液中的DNA分子和肿瘤细胞等来进行肿瘤诊断的一种新型技术。
相对于传统的肿瘤活检技术,液体活检无需切除肿瘤组织,对患者的创伤减轻很大。
液体活检技术在临床上应用广泛,可以用于癌症早期筛查和评估疗效。
与此同时,液体活检技术还可以用于判断肿瘤是否存在转移,并且可以通过监测肿瘤细胞的动态变化来判断治疗效果。
三、高通量测序技术高通量测序技术是一种迅速发展的基因检测技术,可以对较大的基因组进行测序。
高通量测序技术的问世极大地提升了我们对基因组的深度了解,为临床医学提供了更加准确和可靠的基因组解析工具。
高通量测序技术主要应用于基因组学和转录组学研究,可以用于发现新的基因、诊断疾病、为药物研发提供依据等。
在临床实践中,高通量测序技术可以有效提高患者诊断的准确率,并且还可以为患者提供个性化治疗方案。
四、生物芯片技术生物芯片技术是一种基于微电子加工制造的检测系统,可以为生物学、医学和药物学领域提供高通量、多参数的分析和筛选手段。
生物芯片技术的问世,极大地提高了检测效率和灵敏度。
生物芯片技术广泛应用于基因表达分析、蛋白质组学研究、药物筛选等领域。
在临床实践中,生物芯片技术可以用于快速检测病原体、诊断肿瘤、监测治疗效果等。
总结医学检验技术的快速发展,为我们的健康提供了更加精准和可靠的保障。
医院临床检验新技术新项目应用制度一、背景和意义随着医学科技的不断发展,临床检验技术也在不断更新和完善。
新技术和新项目的应用可以提高医院临床检验的准确性、快速性和效率性,为患者提供更好的诊断和治疗方案。
然而,新技术和新项目的应用也面临着一些挑战,比如标准化操作、设备维护、数据管理等问题。
因此,制定医院临床检验新技术新项目应用制度,能够规范临床检验工作流程,确保新技术和新项目的有效应用。
二、制度内容1.新技术和新项目引入授权程序医院应设置专门的技术引进评估委员会,负责评估和审批新技术和新项目的引入申请。
申请者应提交技术方案、设备信息、成本效益分析等相关材料,并提供其他医院或同行医院的推荐信。
2.新技术和新项目引进评估标准3.新技术和新项目应用培训医院应建立新技术和新项目应用培训制度,对临床检验科相关人员进行必要的培训和考核。
培训内容应包括新技术和新项目的原理、操作规范、质控措施和故障处理等,以确保操作人员具备必要的技能和知识。
4.设备维护和质控监督医院应建立设备维护和质量控制监督制度,对新技术和新项目的设备进行定期维护和检测,确保设备的正常运行和准确性。
医院还应建立质控样本库和质控措施,定期对新技术和新项目的检测结果进行验证和监督,以确保结果的准确性和可靠性。
5.数据管理和信息共享医院应建立临床检验新技术和新项目的数据管理系统,对检测数据进行规范化和集中化管理。
同时,医院还应加强与其他医疗机构和科研机构的信息共享,推动新技术和新项目的应用和进步。
三、实施措施1.建立专门的管理团队医院应设立临床检验新技术和新项目的管理团队,由相关科室的专业人员组成,负责制定和实施相关制度和措施,并监督新技术和新项目的应用效果。
2.制定操作规范和培训计划医院应根据新技术和新项目的操作特点和要求,制定相应的操作规范,并制定培训计划,对操作人员进行必要的培训和考核,确保操作人员具备必要的技能和知识。
3.加强协作和沟通医院应建立跨科室的合作机制,加强临床和实验室之间的协作和沟通,共同制定和优化新技术和新项目的应用流程,提高工作效率和准确性。
医学检验新技术新项目医学检验是现代医学中不可或缺的一环,它通过对人体样本的分析和检测,为医生提供了重要的诊断和治疗依据。
随着科技的不断进步,新的技术和项目不断涌现,为医学检验领域带来了许多创新和突破。
一项新的医学检验技术或项目的引入,通常需要经过严格的研究和验证,确保其准确性、可靠性和临床应用的有效性。
首先,研究人员会进行实验室内的基础研究,通过对样本的处理和分析,评估新技术或项目的潜力。
这些实验通常包括对样本中特定分子、细胞或基因的检测,以及对其与疾病之间的关联性的研究。
一旦实验室内的研究取得了一定的进展,研究人员会将新技术或项目应用于临床实践中。
这通常需要进行临床试验,以评估其在真实患者中的表现和效果。
临床试验需要遵循严格的伦理规范和科学方法,确保患者的安全和权益。
通过对大量患者的观察和数据收集,研究人员可以评估新技术或项目的敏感性、特异性、准确性和预测价值。
除了实验室和临床研究,新的医学检验技术或项目还需要考虑其在实际应用中的可行性和经济效益。
这包括对设备和试剂的成本评估,以及对技术操作的培训和标准化的需求。
此外,新技术或项目的推广和普及也需要考虑到医疗机构的接受程度和患者的需求。
在医学检验新技术和项目的发展过程中,科研人员、医生、医学检验师和政府监管机构等各方都发挥着重要的作用。
他们共同努力,确保新技术或项目的科学性、可行性和可靠性。
只有经过充分的研究和验证,新的医学检验技术和项目才能真正为临床医学带来益处,提高疾病的早期诊断和治疗效果。
医学检验新技术和项目的研究和应用是医学领域中的重要课题。
通过不断的创新和突破,我们可以提高医学检验的准确性和效率,为患者提供更好的医疗服务。
然而,我们也必须保持谨慎和审慎,确保新技术或项目的可靠性和安全性。
只有在科学的指导下,我们才能真正实现医学检验的进步和发展。
临床医学检验新技术荧光定量PCR所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
技术原理:将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得CT值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
临床应用:各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价;地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测;肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断;遗传基因检测实现遗传病诊断。
检测种类涉及多种病原体,从细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体、螺旋体到寄生虫。
酶联免疫分析技术酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)技术自20 世纪70年代初问世以来,发展非常迅速,目前被广泛应用于免疫学、医学、生物学等许多领域。
ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
技术原理:酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术,其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
测定时,将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,后加入酶标抗体与免疫复合物结合,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分,最后加入酶反应底物,根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法。
根据检测目的和操作步骤不同,有双抗体夹心法、间接法、竞争法三种类型的常用方法。
临床检验科学前沿探索在临床检验科学领域,前沿探索一直是医学界关注的焦点之一。
随着科技的不断发展和医学技术的日益完善,临床检验科学也在不断向前迈进,探索出更多新的方法和技术,为医学诊断和治疗提供了更多可能性。
1. 基因检测技术在临床检验中的应用基因检测技术是近年来备受关注的一种检测方法,在临床检验中也得到了广泛应用。
通过基因检测,可以更准确地判断个体对药物的代谢能力,预测疾病的发生和发展趋势,甚至可以帮助医生选择更合适的治疗方案。
基因检测技术的不断进步和应用,为临床诊断提供了更多的可能性。
2. 微生物组检测在感染病诊断中的作用微生物组检测是近年来兴起的一种新型检测技术,通过对人体内微生物组的检测,可以更准确地判断感染病的病原体种类和数量,为感染病的诊断和治疗提供更有效的依据。
微生物组检测的不断发展和应用,为临床感染病的诊断提供了新的思路和方法。
3. 液体活检技术在肿瘤诊断中的价值液体活检技术是一种无创的检测方法,通过检测人体内的血液或其他体液中的微小DNA片段或蛋白质,可以更早地发现肿瘤的存在和发展趋势,为肿瘤的早期诊断和治疗提供更多的机会。
液体活检技术的逐渐成熟和应用,为肿瘤患者的生存率和治疗效果带来了重大的改善。
4. 人工智能在临床检验中的应用前景人工智能技术是当前科技领域的热门话题之一,其在临床检验中的应用前景也备受期待。
通过人工智能技术,可以更快速、更准确地分析大量的医学数据,帮助医生做出更准确的诊断和治疗方案。
人工智能在临床检验中的应用将为医学界带来更大的进步和突破。
总结:临床检验科学前沿探索是医学界不断追求的目标,基因检测技术、微生物组检测、液体活检技术和人工智能技术等新型检测方法的不断发展和应用,为临床诊断和治疗提供了更多可能性,也为医学的进步和发展奠定了更坚实的基础。
相信在不久的将来,临床检验科学将迎来更加广阔的发展前景。
荧光定量PCR所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
技术原理:将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA 互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得CT值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
临床应用:各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价;地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测;肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断;遗传基因检测实现遗传病诊断。
检测种类涉及多种病原体,从细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体、螺旋体到寄生虫。
流式细胞术流式细胞术(FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,与传统的荧光镜检查相比,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术。
技术原理:将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。
在液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱,后者与入射的激光束垂直相交,液柱中的细胞被激光激发产生荧光。
仪器中一系列光学系统(透镜、光阑、滤片和检测器等)收集荧光、光散射、光吸收或细胞电组抗等信号,计算机系统进行收集、储存、显示并分析被测定的各种信号,对各种指标做出统计分析。
临床应用:可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定,以及免疫学研究,并已开始用于细菌鉴定,病毒感染细胞的识别和艾滋病感染者T4、T8细胞的记数。
FCM通过荧光抗原抗体检测技术对细胞表面抗原分析,进行细胞分类和亚群分析。
这一技术对于人体细胞免疫功能的评估以及各种血液病及肿瘤的诊断和治疗有重要作用。
目前FCM用的各种单克隆抗体试剂已经发展到了百余种,可以对各种血细胞和组织细胞的表型进行测定分析。
一、在血液病诊断和治疗中的应用FCM通过对外周血细胞或骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析,对白血病等各种血液病的诊断、预后判断和治疗起着举足轻重的作用。
二、在血栓与出血性疾病中的应用FCM可以通过单抗免疫荧光标记(血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa,CD62,CD63等)监测血小板功能及活化情况,有利于血栓栓塞性疾病的诊断和治疗。
而用FCM测定钙离子浓度,可以作为活化血小板监测的非免疫性指标。
FCM可以测定血小板相关抗体含量,用于诊断及治疗监测,具有检测速度快、灵敏度高的优点。
酶联免疫分析技术酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)技术自20 世纪70年代初问世以来,发展非常迅速,目前被广泛应用于免疫学、医学、生物学等许多领域。
ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
技术原理:酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术,其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
测定时,将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,后加入酶标抗体与免疫复合物结合,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分,最后加入酶反应底物,根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法。
根据检测目的和操作步骤不同,有双抗体夹心法、间接法、竞争法三种类型的常用方法。
临床应用:ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。
1、病原体及其抗体的检测病毒感染如肝炎病毒,巨细胞病毒,风疹病毒,疱疹病毒,轮状病毒,艾滋病病毒(HIV)等。
细菌感染如链球菌,布氏杆菌等。
寄生虫感染如阿米巴、弓形虫、锥虫等。
2、蛋白质如各种免疫球蛋白,肿瘤标志物如甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺碱性磷酸酶,激素如hCG, FSH, TSH, hGH, 酶如肌酸激酶-MB,其他蛋白质如铁蛋白等。
3、非肽类激素如T3, T4,雌二醇,皮质醇等。
4、药物治疗心脏病药物如地高辛,抗哮喘药物如茶碱,抗生素如庆大霉素等。
免疫印迹技术免疫印迹法(Western blotting) 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术基本原理:免疫印迹与DNA的Southern印迹技术相对应,两种技术均把电泳分离的组分从凝胶转移至一种固相载体(通常为NC膜),然后用探针检测特异性组分。
不同的是,Western blot所检测的是抗原类蛋白质成分,所用的探针是抗体,它与附着于固相载体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。
该技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异敏感等诸多优点,具有从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测,以及从多克隆抗体中检测出单克隆抗体的优越性。
临床应用:免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点,是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法,如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。
用免疫印迹技术可定性、定量地检测出待检样品中含量很低的特定病原体的抗原成分,对于一些能感染细胞而细胞病变不易观察的病原体的检测也很有用。
用单克隆抗体做为第一抗体进行免疫印迹,还可以对毒株做分型研究。
时间分辨荧光分析法时间分辨荧光分析法(Time resolved fluoroisnmuno assay,TRFIA)是近十年发展起来的非同位素免疫分析技术,是目前最先进的免疫检测技术。
技术原理:使用三价稀土离子(如Eu3+、Tb3+、Sm3+、Dy3+)作为示踪物,通过这些稀土离子与具有双功能结构的螯合剂以及抗原形成稀土离子-螯合剂-抗原螯合物。
当标记抗原、待测抗原共同竞争抗体,形成免疫复合物,由于免疫复合物中抗原抗体结合部分就含有稀土离子,当采取一些办法将结合部分与游离部分分开后,利用时间分辨荧光分析仪,即可测定复合物中的稀土离子发射的荧光强度,从而确定待测抗原的量。
正常情况下,免疫复合物中的稀土离子自身荧光信号很微弱,若加入一种酸性增强液,稀土离子从免疫复合物中解离出来,和增强液中的β-二酮体、三正辛基氧化膦、Triton X-100等成分形成一种微囊。
后者被激发光激发后,则稀土离子可以发出长寿命的极强的荧光信号,使原来微弱的荧光信号增强将近100万倍。
采用时间分辨技术测量荧光,采用了门控技术,它是使背景荧光信号降低到零以后,再测定长寿命标记物的荧光。
临床应用:时间分辨荧光免疫分析可用来检测生物活性物质。
在内分泌激素的检测,肿瘤标志物的检测,抗体检测,病毒抗原分析,药物代谢分析以及各种体内或外源性超微量物质的分析中,应用TRFIA法越来越普遍。
近年来,已将这项技术应用于核酸探针分析和细胞活性分析、生物大分子分析,发展十分迅速。
一、TRFIA法在内分泌学中的应用内分泌激素是一些活性小分子,它们能与适当的抗体反应,具有免疫反应性,但不能产生抗体,不具有免疫原性,它们属于半抗原。
对这些半抗原的测定,一般多用竞争性时间分辨荧光免疫法测定。
这方面的测定主要有血清中孕酮、雌二醇、睾酮、甲状腺激素、前列腺素的测定等等。
二、TRFIA在肿瘤学中的应用对一些完全抗原,它们大多是既有免疫反应性又有免疫原性的蛋白质类,主要包括促甲状腺激素、血清胰岛素、血清癌胚抗原、血清甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等,主要采用非竞争性TRFIA法进行测定。
三、TRFIA法在免疫学中的应用某些免疫细胞(如NK、LAK、T杀伤细胞等)的活性,可以用TRFIA法来检测。
四、TRFIA法在微生物学中的应用目前TRFIA已广泛应用于乙型肝炎病毒、脑炎病毒、流感病毒、呼吸道合胞体病毒(RSV)、副粘病毒、风疹病毒、马铃薯病毒、轮状病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)、出血热病毒和梅毒螺旋体的抗原抗体以及某些细菌和寄生虫抗体的检测。
最近,潘利华等用TRFIA法进行了人血清中丙型肝炎病毒抗体(Anti-HCV)的检测,效果明显高于酶联免疫法。
飞行时间质谱技术飞行时间质谱技术的发展,给临床肿瘤早期标志物的发现带来了划时代的革命,它将传统的通常一次只能测定一个蛋白标志物革命性地发展到一次可测定数十个,甚至数百个蛋白,同时极大的提高了诊断的灵敏度和特异性。
技术原理:质谱仪需要在真空情况下运转,用以保护检测器,同时提高测量精度。
在实际使用中,一个微孔需要被使用。
仪器中气体样本首先通过微孔取样,然后到达离子源,有脉冲电场送入飞行时间模块。
然后使用垂直于送入方向的脉冲电场对离子进行加速。
这样做的主要目的是确定所有离子在水平方向没有初速度。
在U型飞行之后,达到传感器。
不同离子到达传感器的时间不同,借此来选择m/z。
通常的假设认为离子只能带一个电荷,如此,得到的信号,直接对应检测到离子的相对原子质量。
临床应用:在肿瘤早期诊断中的研究进展——液体芯片-飞行时间质谱技术利用磁珠俘获肿瘤患者与健康对照体液中低丰度特异蛋白或多肽,经飞行时间质谱测定和软件分析,建立由两者差异表达蛋白或多肽组成的质谱图模型,可对潜在的生物标记物进行鉴定。
化学发光免疫分析化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合的检测分析技术。
是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。
灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性。
技术原理:化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。
免疫反应系统将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
临床应用:用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物肿瘤标记物、内分泌功能、传染性疾病等多种检测项目。
生物芯片生物芯片技术起源于核酸分子杂交。
所谓生物芯片一般指高密度固定在互相支持介质上的生物信息分子(如基因片段、DNA片段或多肽、蛋白质、糖分子、组织等)的微阵列杂交型芯片,阵列中每个分子的序列及位置都是已知的,并且是预先设定好的序列点阵。