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多种菌种保藏的原理和方法多种菌种的保藏是为了保持其生物特性和保存其遗传信息，以便后续研究和应用。
在微生物学研究和应用中，常见的菌种保藏方法有冷冻保藏、干燥保藏、冷冻干燥保藏、凝胶保藏和液氮保藏等。
以下将详细介绍这些保藏方法的原理和具体步骤。
一、冷冻保藏冷冻保藏是最常见的菌种保藏方法之一、其原理是通过在超低温条件下将菌株冷冻保存，阻止其新陈代谢和繁殖，从而使菌株保持低活性状态。
冷冻保存可以使用明胶冻块、甘油、液氮等不同保藏物质，具体步骤如下：1.选取新鲜的菌株，生长到对应的阶段。
2.制备保存液，通常使用明胶冻块（10%明胶+10%蔗糖+10%琼脂）、甘油（20%甘油+10%消毒水）、液氮等。
选择合适的保存液可以根据菌株的特性和使用要求进行调整。
3.微生物菌株生长到对应阶段后，用无菌工具将其移至保存液中。
4.放置在超低温冷冻箱中，通常设置在-80℃的环境下保存，避免产生晶状冰或冻伤。
可以考虑使用其他液氮冷冻方法，如液氮喷雾冷冻法等。
5.菌株保存时间根据所用保存液和保存条件而有所不同。
文献上常见的冷冻保存时间一般为6个月，但很多菌株可以保藏数年或数十年。
二、干燥保藏干燥保藏是将菌株通过脱水处理后进行保存。
此方法的原理是通过将菌株暴露在干燥条件下，除去菌体内的水分，从而抑制其活性，确保长时间保存。
常见的干燥保藏方法有真空冷冻干燥法和常温干燥法。
1.用无菌试管或无菌孢子瓶盛装菌株，通常使用液体培养基等。
2.将菌株液体培养基均匀均匀分配到无菌培养皿或钢平。
3.将培养皿置于通风恒温箱中进行干燥，可以选择真空干燥或通风干燥。
真空干燥通常在-80℃下真空干燥24小时以上，而常温干燥则需要3-7天左右。
4.干燥后的培养物使用无菌器具封装密封保存，放置在低湿、阴凉的地方，通常保存在常温下60-70%相对湿度的环境中或4℃冰箱中。
三、冷冻干燥保藏冷冻干燥保藏是将菌株进行预冷冻处理，然后在真空条件下进行干燥保存。
此方法的原理是在菌株处于冷冻状态下脱水处理，从而更好地保存菌株的生物学特性。
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
素而设计的。
一、保藏方法大致可分为以下几种：1、传代培养保藏法2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。
病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5、冷冻保藏法6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。
保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
二、器材:细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
三、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种的保藏是非常重要的，因为这些菌种可能用于各种实验和研究中。
以下是一些常见的微生物菌种保藏方法：
1. 冷冻保存：将菌种在液氮或-80的冰箱中冷冻保存。
这是最常见的保藏方法，能够长期保存菌株并保持其遗传稳定性。
2. 干燥保存：将菌种在无菌室中取出，用无菌纸或吸水纸吸干，然后放入无菌瓶中密封保存。
干燥保存适用于某些孢子或芽孢的微生物，比如放线菌、链霉菌等。
3. 明胶斜培养基保存：将菌种接种在含有明胶的固体培养基上，然后密封保存。
这种方法适用于某些菌株，如革兰氏阳性菌和厌氧菌。
4. 低温保存：将菌种保存在4的冰箱中。
这种保存方式可以在短时间内保持菌株的活性，但不能长期保存。
5. 液氮保存：将菌种在锅内预冷冷冻过的无菌玻璃管中加入10%甘油或蔗糖，然后立即在液氮中保存。
这种方法适用于大多数微生物，并且可以长期保存。
菌种的保藏方法菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。
菌种保藏的目的是保存菌种的遗传信息、保持菌种的稳定性和纯度，为后续的研究提供保障。
本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。
1. 冻干法冻干法是一种常用的菌种保藏方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻干管吸取菌液。
将冻干管放入液氮中，冷冻至-80℃，待冻干后，将管子密封，保存在-80℃的冰箱中。
冻干菌株可以保存多年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
2. 静态液氮法静态液氮法是一种高效、长期保存菌株的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入液氮中，冷冻至-196℃，保存在液氮罐中。
静态液氮保存的菌株可以保存数十年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
3. 冷藏法冷藏法是一种简单、易行的菌株保存方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将冻存管放入4℃的冰箱中保存。
冷藏法保存的菌株可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
4. 活体保存法活体保存法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。
活体保存法可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
5. 长期培养法长期培养法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。
每隔一段时间，将菌株转移到新的培养基上进行培养，以保持菌株的纯度和稳定性。
总之，菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。
食用菌菌种保藏的基本方法食用菌菌种保藏是指在适当的条件下，延长菌种的保存寿命，保持菌种的菌丝形态、菌核活力以及遗传信息的方法。
常见的食用菌菌种保藏方法有冷冻保存、液氮保存、干燥保存、石膏包埋保存等。
1. 冷冻保存：冷冻保存是将菌种培养物以-80摄氏度的低温条件下保存。
冷冻保存具有保存周期长、操作简便的特点。
具体步骤为：将菌种培养物接种在琼脂平板或液体培养基上培养到菌落充分生长，然后用聚合物添加剂（如甘油、大豆油、卵磷脂等）加入培养物中，制成菌株的冻存物，将冻存物在-80摄氏度的冰箱中保存。
菌种在冷冻保存中还需定期进行代代传承，以维持菌株的稳定性。
2. 液氮保存：液氮保存是将菌种培养物以极低的温度(-196摄氏度)保存。
液氮保存能更好地保护菌种的细胞结构、蛋白质、碳水化合物等组分，减小冰冻对菌种的损伤。
具体步骤为：将菌种培养物接种在琼脂平板或液体培养基上培养到菌落充分生长，然后将细菌培养物加入含有细胞保护剂（如甘油、肉汤等）的1.8ml冻存管中，迅速冷冻至-80摄氏度以上，然后转移到液氮罐中保存。
菌种保存在液氮中，可以保存几十年甚至更长时间。
3. 干燥保存：干燥保存是将菌种培养物在低温低湿的环境下，使其逐渐失去水分而保存。
干燥保存的优点是操作简单，保存周期长，且菌种易于恢复。
具体步骤为：将菌种培养物接种在琼脂平板上培养到菌落充分生长，然后用无菌棉签或无菌吸管将菌落转移到无菌滤纸上，放置在通风干燥处，待菌落完全干燥后，将滤纸装入无菌试管或无菌塑料袋中，密封保存。
4. 石膏包埋保存：石膏包埋保存是将菌种与石膏混合包埋后保存。
石膏包埋保存的优点是操作简便、保存周期长，对于某些对温度敏感的菌种保藏效果较好。
具体步骤为：将菌种培养物接种在琼脂平板上培养到菌落充分生长，然后用芯子将培养物取出，混合适量石膏搅拌均匀，装入无菌塑料袋或无菌瓶中，封好保存。
在进行食用菌菌种保藏的过程中，应注意以下几点：- 菌种的分离与筛选：只有选取健康、快速生长、菌株形态周正且菌核完整的细胞进行保存，才能保证保存的菌株具有较高的活力。
菌种保藏管理菌种保藏管理是指对微生物菌种进行保存、管理、鉴定和利用的一系列工作。
菌种保藏管理的目的是保护微生物资源，促进微生物资源的研究和利用，防止微生物污染和传播，维护科学研究的诚信和公正。
一、菌种保存菌种保存是指将微生物菌株保存在适宜的条件下，以保证其生命活力和遗传稳定性。
常见的菌种保存方式有以下几种：1. 冷冻保存：将菌株在-70℃以下的低温条件下保存，可保存数年至数十年。
2. 干燥保存：将菌株在低湿度条件下干燥保存，可保存数年至数十年。
3. 液氮保存：将菌株在液氮中保存，可保存数十年至数百年。
4. 长期培养：将菌株在适宜的培养基上连续传代培养，可保存数年至数十年。
二、菌种管理菌种管理是指对保存的菌株进行鉴定、分类、记录和更新等工作。
常见的菌种管理工作有以下几个方面：1. 鉴定和分类：对保存的菌株进行鉴定和分类，确定其种属和亚种。
2. 记录和更新：对保存的菌株进行详细的记录和更新，包括菌株来源、保存时间、保存方式、鉴定结果等信息。
3. 质量控制：对保存的菌株进行质量控制，包括检测菌株的纯度、活力和遗传稳定性等指标。
4. 分发和交换：将保存的菌株分发给需要的研究人员或机构，或与其他机构进行菌株交换。
三、菌种利用菌种利用是指利用保存的菌株进行科学研究和应用开发。
常见的菌种利用方式有以下几种：1. 研究应用：利用保存的菌株进行科学研究和应用开发，如发酵生产、药物研发、环境修复等。
2. 教学实验：利用保存的菌株进行教学实验，培养学生的实验技能和科学素养。
3. 保护利用：利用保存的菌株进行保护利用，促进微生物资源的可持续利用和保护。
总之，菌种保藏管理是保护微生物资源、促进科学研究和应用开发的重要工作，需要科学规范的管理和操作。
保藏菌种的方法
在微生物研究中，保藏菌种是非常重要的一环。
保藏菌种可以保证菌种的纯度和活力，并且方便长期保存和传递。
以下是一些常见的保藏菌种的方法：
1. 冷冻保藏法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用生理盐水或甘油溶液混合菌体，制成菌悬液，然后用干燥冰或液氮冷冻保存。
2. 真空干燥法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌水将菌体洗净，然后在真空条件下干燥保存。
3. 常温干燥法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌纸片或无菌土壤将菌体均匀涂抹在上面，然后在阴凉通风处晾干保存。
4. 液氮保藏法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌水将菌体洗净，然后用液氮冷冻保存。
在保藏菌种过程中，需要注意以下几点：
1. 保证菌株的纯度和活力，避免杂菌和死菌的混入。
2. 在保存菌种前，要对菌株进行鉴定和存档。
3. 在保存过程中，要保证温度、湿度、氧气和光照等环境条件
的稳定和适宜。
4. 定期检查保存的菌种，确保其纯度和活力。
综上所述，保藏菌种是微生物研究中不可或缺的一环。
通过选择合适的保藏方法和严格的管理，可以确保菌种的纯度和活力，方便长期保存和传递。
菌种保藏的几种方法基本原理微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种：1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。
2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3．载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4．寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。
病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5．冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6．冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。
保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
三、器材细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与 100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。
保藏温度要求在-4～4℃下。
液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。
具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。
二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。
其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。
将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。
取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。
-20℃保存时间较短。
或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。
甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。
三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。
冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。
为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
菌种科学保藏常用方法中华保健食品商务网 2004-5-31生产母种通常用PDA培养基，选用180×18毫米试管，制成斜面试管接种而成。
PDA培养基配方：土豆（去皮、去芽）200克（也可用淀粉，用量为6克/1000毫升）葡萄糖20克琼脂20克磷酸二氢钾2克复合维生素B 2克旦白胨5克硫酸镁0.3克加水1300毫升本刊记者高级农艺师丁湖广菌种是国家重要的生物资源，是以微生物为对象的研究和生产所必不可少的材料。
因此，世界各国对菌种的保藏极为重视，有55个国家专门设菌种保藏机构。
国际微生物学会设有世界菌种保藏机构，简称WFCC，编写有《世界菌种保藏名录》。
我国菌种保藏机构，有中国微生物菌种保藏管理委员会（设在北京），共保藏有8000多个菌株，其任务是收藏、供应各种优良菌种。
菌种保藏的目的是：使菌种长期保藏之后，仍然保持着原有的生命力、优良生产性能、形态特征，以及不污染杂菌和不发生虫害。
菌种保藏的原理是通过低温、干燥、隔绝空气（真空）和断绝营养等手段，以达到最大限度地降低菌种的代谢强度，抑制菌丝的生长的繁殖。
由于菌种的代谢相对静止，生命活动将处休眠状态，所以能够保藏较长时间。
现将菌种保藏的几种主要方法介绍如下。
一、斜面低温保藏这是一种常用最简便的保藏方法。
首先将需要保藏的菌种移接到PDA培养基上。
为了减少培养基水分散发，延长保藏时间，在配制时琼脂用量加到2.5％，再加入0.2％磷酸氢二钾、磷酸二氢钾及碳酸钙等缓冲剂，以中和保藏过程中产生的有机酸。
如果是保藏香菇和木耳菌种，应把配方中的葡萄糖换成麦芽糖，培养基装入量不少于12毫升。
菌种接种后置于用适宜温度下培养至菌丝长满斜面，然后选择菌丝生长健壮的试管，先用硫酸纸包扎好管口棉塞，再将若干支试管用牛皮纸包好。
也可以用无菌胶塞代替棉塞，既能防止污染，又可隔绝氧气，避免斜面干燥。
具体做法是：选择大小合适的橡皮胶塞，洗净晾干，在75％酒精液中消毒1小时后，用无菌纱布吸去酒精，在火焰上方烧去残留的酒精液；于无菌条件下，将试管口在火焰上灼烧灭菌，拔出棉塞，换上胶塞，再用石蜡密封，放入4℃左右的电冰箱内保存。
每隔3～4个月转管一次。
如果用胶塞石蜡封口，转管期可延迟至6个月。
斜面低温保藏过程，冰箱内相对湿度应控制在40％～50％，尽量少启用冰箱，以免产生冷凝水而引起污染；若必须启用应边开、边取、边关，做到快速、短暂、熟练。
对于个别不耐低温的菌种，如草菇菌丝在5℃下易于死亡，一般置10～12℃条件下保藏，或加质量分数0.1无菌甘油作防冻剂，然后置于4～6℃冰箱贮藏。
低温贮藏法简单易行，适用于所有食用菌，是最实用贮藏方法，已得广泛应用。
在冰箱较普及的情况下，食用菌专业户、菇农等均可采用。
缺点是贮藏时间短，需经常继代培养，不但费时费工，而且传代多，易引起污染、衰退或造成差错。
二、液体石蜡保藏液体石蜡又名矿油，所以该法又称矿油保藏法。
这种方法操作简便，只要在菌苔上灌注一层无菌的液体石蜡，即可使菌种与外界空气隔绝，达到防止培养基水分散失，抑制菌丝新陈代谢，推迟菌种老化，延长菌种生命和保存时间的目的。
所以此种方法也称为隔绝空气保藏法。
具体操作：选用化学纯液体石蜡100毫升，装入250毫升锥形瓶内，瓶口加棉塞，置于0.103兆帕（1.055千克/厘米2）灭菌30～60分钟；然后置于160℃烘箱中处理1～2小时；或置40℃温箱内3天左右，见瓶内液体石蜡呈澄清透明，液层中无白色雾状物时即可。
其目的是使灭菌时进入瓶内的水分得到蒸发。
然后在无菌条件下，将液体石蜡倾注或用无菌吸管移入生长健壮、丰满的斜面菌种上，使液体石蜡高出斜面顶端1厘米左右；最后直立放置在洁净的室温下贮藏，转管时直接用刀切取1小块菌种，移接到新的斜面培养基中央，适温培养，余下的菌种仍在原液体石蜡中贮藏。
因经贮藏后的菌丝沾有石蜡，生长慢而弱，需再继代转接1次方可使用。
贮藏场所应干燥，防止棉塞受潮发霉；定期观察，凡斜面暴露出液面，应及时补加液体石蜡。
也可用无菌橡皮塞代替棉塞：或将棉塞外露部分用刀片切除，蘸取融化的固体石蜡封口，以减慢蒸发。
此法贮藏时间可达1年以上，有的可达10年，效果好。
三、悬液保藏此法是将需要保种的菇类菌丝球或孢子保藏在适当的媒液中。
现介绍3种媒液的保藏方法：1、生理盐水保藏法：本法适合保藏深层培养的菌丝球，以无菌生理盐水作为媒液进行保藏。
首先制备生理盐水，按常规法制备0.85％的生理盐水，健壮试管每管装约5毫升，经高压灭菌。
将保藏的菌种接入马铃署、葡萄糖液体培养基中，250毫升三角瓶装入60毫升，振荡培养5～7天（27～28℃，180转/分）。
然后吸取菌丝球4～5个放入上述试管中，管中加上无菌橡皮塞，并用固体石蜡封好，置于4℃下保藏。
据黑龙江应用微生物研究所报道，用此法保藏香菇、紫芝菌种，可存活18个月：保藏双孢蘑菇、木耳、银耳、金针菇、茯苓、假蜜环菌、金顶磨、糙皮侧耳、猴头菌等菌种、可存活2年。
2、蒸馏水保藏法：这是保存斜面菌种和孢子最简单的方法，有效期可达1年以上。
斜面蒸馏水贮藏：在锥形瓶内装入容量1/3左右的蒸馏水，加棉塞，在0.103兆帕（1.055千克/厘米2）121℃灭菌30分钟，冷却。
在无菌条件下，将蒸馏水倾注入需保藏的斜面菌种内。
加水量需高出斜面顶端1～2厘米，更换无菌橡皮塞，直立置于4～6℃冰箱内贮藏。
孢子蒸馏水贮藏：试管内分装入蒸馏水，装量约管长的1/5，加棉塞经灭菌冷却后在无菌条件下提取少许孢子，移入试管蒸馏水内，换上橡皮塞，直立置于4～6℃冰箱内贮藏。
上述两种方法，若保存时间较长，中途需补充无菌蒸馏水。
使用时从管内挑取菌种块或蘸取孢子悬液，移接至新的斜面培养基上活化培养。
原试管加塞后仍可继续贮藏。
3、营养液贮藏：马铃署综合培养基内不加琼脂，并加水稀释10倍，分装入试管内，装量约为管长1/4。
棉塞上衬1层低压乙稀薄膜，防止棉塞滋生杂菌。
然后经0.103兆帕（1.055千克/厘米2）121℃高压灭菌30分钟，冷却后在无菌条件下，移接入菌丝球或带琼脂的菌丝块，直立置室温8～28℃条件贮藏。
以后液面逐渐形成菌苔，并沿管壁蔓延。
使用时挑取菌苔或菌丝球、菌块，移接至新的斜面培养基上，适温活化培养。
四、载体保藏载体保藏是使食用菌孢子吸附在适当的载体上，如砂土、滤纸等进行干燥保藏的一种方法。
其原理是利用孢子具有坚厚的细胞壁，对干燥具有较强的抵抗力，在干燥环境中保存若干年后，遇到适宜的条件，仍会萌发生长的特性而进行保藏的。
绝大多数孢子都可采取此法保藏。
1、砂土管贮藏：此法具有广泛应用，适于贮藏孢子和酵母状分生孢子，而对菌丝体不适用。
操作时选用细河砂，用内径0.250～0.177毫米筛孔过筛,除去粗粒和砂未；另取耕作层以下、瘠薄的红黄壤土，通过内径0.149毫米过筛，砂土中含铁屑，需用磁铁衬纸吸除，并用0.05～0.1盐酸浸泡半天，除去有机质。
然后用清水反复冲洗至酸碱度近中性后，置于60～80℃烘箱中烘干。
砂土比例2:1或4:1混合，分装入10毫米×100毫米试管或安瓿瓶内，每管装量0.5克，高度约0.7厘米，加棉塞。
经0.138兆帕（1.4千克/厘米2）127℃高压灭菌30分钟，每天1次，共3次。
也可采用160℃干热灭菌1次，保持2～3小时。
灭菌后挑取少许砂土移至PDA 斜面上培养，证实无杂菌即可。
砂土管中接入孢子分为干接入和湿接两种。
干接时，用接种环直接挑取孢子2～3环，拌入砂土管中：湿接时，将孢子刮入5毫升无菌水的试管内，充分摇匀，制在孢子悬液，然后用1毫升吸管吸取悬液，每管中加入0.2毫升。
干接法制成的砂土管，含水分少，可直接放在盛有无水氯化钙、变色硅胶或生石灰的广口瓶内保存：湿接法制成的砂土管，需放入干燥剂的真空干燥器内，用真空泵抽气8～10小时，使之干燥。
此工作需在接入孢子后12小时内完成，以免孢子发芽。
抽干后砂土需用抽样进行无菌检查，合格者可放在盛有无水氯化钙或变色硅胶的大试管内，加橡皮塞，放置4～6℃冰箱中贮藏。
此法保藏孢子，寿命可达2～10年，使用时在无菌条件下，挑取少许砂土孢子，抖撒在PDA斜面上，适温培养，菌丝生长后，再转管培养1次。
2、孢子滤纸保藏：将食用菌孢子吸附在滤纸上，干燥后再行低温保藏。
此法操作方便，效果也较理想。
适用于蘑菇、金针菇、黑木耳和猴头菌等。
用滤纸保藏其孢子，可存活18个月。
具体操作：将白色滤纸或黑色粗而厚纸剪成宽约0.6厘米，长2厘米的滤纸条若干张，平铺在大培养皿底，经0.096兆帕（0.984千克/厘米2）120℃高压灭菌30分钟后，在烘箱中稍加烘干。
然后将灭菌的滤纸条培养皿移入孢子采罩内，接受孢子（孢子白色宜用黑色纸）。
待孢子弹射滤纸条后，用镊子将纸条移入PDA斜面中，管内先装若干变色硅胶干燥剂。
然后置干燥器中1～2天，充分干燥后，用火焰熔封试管口，即制成滤纸条保藏管，贴好标签，置于低温下保藏。
需用时先用砂轮在管壁外划痕，再在划痕处稍加热，然后用浸有来苏儿湿布敷上，管壁即自动破裂，此时以无菌操作，镊取滤纸条，将附有孢子的一面贴在培养基上，适温下培养一周左右，孢子即萌发菌丝。
五、天然基质保藏天然基质的种类很多，下面介绍常见的几种保藏法。
1、麦粒种保藏法：用麦粒来保藏蘑菇和灵芝菌种，保藏期蘑菇达18个月，而灵芝可达5年之久仍有生活力。
制作方法如下：选取无病虫害新鲜小麦，淘洗后在水温20℃下浸5小时，使麦粒含水量达25％为宜。
将麦粒稍晾干后，装入试管长度的1/3。
然后置于0.103兆帕（1.055千克/厘米2）高压灭菌40分钟后，趁热摇散，冷却接种。
每管内接入菌丝悬浮液一滴，摇匀后置于25℃室内培养。
当大多数麦粒出现菌丝时，移于干燥冷凉的地方保藏。
2、枝条种保藏法：采用树木枝条作为木腐型菇菌的保藏培养基。
选取直径1～1.5厘米的阔叶树枝条,截成1.5～2.0厘米长，晒干备用。
使用时将枝条在5％米糠水中浸泡12小时，吸足水分。
拌好木屑培养基，按枝条与木屑培养基以3:1的体积比混匀；装入大试管或菌种瓶内，并在表面覆盖一薄层木屑培养基，压平；清洗管壁。
按常规法进行灭菌接种、培养，待菌丝长好后，置于常温下或冰箱内保藏。
3、木屑种保藏法：配料按78％木屑、20％麸皮、1％蔗糖、1％石膏粉，加适量水拌匀；装入试管长度3/4，洗净管口，塞好棉塞；用牛皮纸包好管口，置于0.103兆帕（1.055千克/厘米）灭菌40分钟；接种后在25℃下恒温培养。
待菌丝长到培养基2/3小时取出，用蜡将棉塞封好，包上塑料薄膜，放入4℃冰箱内，能保藏1～2年。
使用时从冰箱取出后，置于25℃恒温箱内培养12～24小时。
4、发酵粪草种保藏法：草腐型菇菌以蘑菇发酵粪草料的保藏为例。
选取蘑菇栽培用的发酵料，晒干后去除粪块；将料草切成2厘米长，在清水中浸4～5小时，让料草浸透水，并使之失去一部分养分，沥水控湿至含水量68％左右。
