实验一MS培养基（芽诱导）的配制与茎段培养
一、 MS芽诱导培养基的合成
（一）、仪器设备
电子分析天平（精确称量）、灭菌器（主要为高压灭菌锅）、精密PH试纸、电炉、烧杯（1000ml）；量简（100ml）、移液枪（0.01-1ml）、培养瓶（500ml）、包口塑料及线绳若干，记号笔，培养箱、超净工作台、接种工具。
（二）、试剂
（MS）培养基的配制试剂
大量元素（母液）；微量元素（母液）
铁盐（母液）有机物（母液）
琼脂蔗糖
激素 IAA BA等；酸碱调解物质 NaOH(0.1N) HCl(0.1N)
（三）（MS）培养基的合成(配制1L)
1烧杯体积标定------用量简取1000毫升倒入烧杯，用记号笔标出液面位置
2化琼脂-----烧杯中加入水约400-600毫升，加琼脂7克，加热溶化
3加母液-----大量元素母液50ml，微量元素母液1ml．
铁盐母液10m1．有机物母液10ml、
4加蔗糖-----30g
5加激素（根据培养基的用途，按要求加入本实验中，BA2.0+NAA0.05）
6定容---加水至1000刻度线
7调PH----5.8(冷却后，用0.1N的NaOH或0.1N的HCl调整Ph至5.8)
（四）、培养基的分装
将MS培养基的合成搅拌均匀后、分装到三角瓶中，每瓶约30m1．用一层聚丙烯塑料薄膜包上瓶口，用线绳扎口、写上标号
（五）培养基灭菌
按灭面器使用力法对培养基灭菌、高压保持20分钟，灭菌完毕后取出培养基，放在平台上冷凝。
（六）培养基灭菌后，原则上2~3天后使用
（七）母液在不取用时，存放在4℃冰箱中；
复习思考题：
(1)能不能把所有母液置于一个瓶里当作—种母液用于配制？
(2)分析导致固体培养基冷却后不能凝固的原因?
(3)为什么新配制的培养基不能即时使用？
实验总结：
二、茎段的组织培养
（一）仪器
超净工作台、酒精灯、酒精棉球，酒精消毒瓶、铅笔、火柴、接种工具等：
（二）材料
新采集的幼嫩的植物（菊花）枝条
（三）试剂
MS+BA2.0+NAA0.05（诱导培养基）、 70%酒精， 0.1%升汞消毒液；
（四）操作用序
（]）材料的制备将菊花的枝条剪成5~6cm长的茎段，用自来水流水冲洗，移到超净工作台上，用70%的酒精浸泡半分钟，再用0.1%的升汞溶液浸泡6分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3~5遍，放在装有无菌纸的培养皿内，水分吸干后在进行接种；
(2)接种将枝条原切口处剪掉、露出新切口、然后剪成带一个叶片的茎段插入培养基瓶中，每个三角瓶接种1~2段。
（3)培养将培养基放于23~25 ℃，光照为1000~2000lx，每日光照9~10 h/d ， 20~30天后；，从叶腋处长出侧芽；
复习思考题
(1)诱导培养基、增殖培养基、生根培养基的主要作用分别是什么？
(2)70%酒精， 0.1%升汞消毒液在消毒过程中的作用是否一样？是否可以只用一种消毒
液进行消毒？消毒时间是否可以任意改变？
（3）在外植体消毒过程中，是否可以先用升汞消毒液，再用酒精？为什么？
实验结果与总结：
实验二愈伤组织诱导培养基的配制与叶的组织培养
一愈伤组织诱导培养基的合成配制
（1）烧杯体积标定（500ml）--（2）化琼脂(3.5g，用水约200-300毫升，加热溶化)--（3）加母液（大量元素母液25ml，微量元素母液0.5ml．铁盐母液5m1．有机物母液5ml---加蔗
糖（15g）--（4）加激素（本实验中，BA0.25+NAA0.1）--（5）定容（加水至500ml刻度线
--（6）-调PH(5.8)—（7）装入三角瓶（500ml）封口---（8）灭菌---（9）分装（灭菌后
的培养皿）
二愈伤组织的诱导培养
（一）仪器设备
组培常用仪器
（二）试材与试剂
菊花伸展幼叶，70%酒精，0.1%升汞溶液愈伤组织诱导培养基：MS+6BA0.5 +NAA0.2 （三）操作程序
（1）选取生长正常无病虫害的伸展幼叶，经自来水冲洗后，按常规方法灭菌，然后，用剪
刀剪去叶片边缘，取中脉两侧处的部分，剪为0.5cm见方的小块，以待接种；
（2）以每个三角瓶4~5块的数量，将其平放在诱导培养基表面上，封口；在23~25℃，光
照1000~2000Lx，光照时间为9~10h条件下培养，每隔3~7天观察一次，剔去污染，并给予
记录；
复习思考：
（1）用叶片作为外植体接种的优势在哪里？
（2）为什么外植体切割时，还常常用接种工具在外植体上戳几个伤口？
（3）为什么用培养皿作培养容器时，培养基要先灭菌后分装？
实验结果与分析讨论
实验三基本培养基的配制与胚胎的培养
一基本培养基的合成配制
（1）烧杯体积标定（500ml）--（2）化琼脂(3.5g，用水约200-300毫升，加热溶化)--（3）加母液（大量元素母液25ml，微量元素母液0.5ml．铁盐母液5m1．有机物母液5ml---加蔗糖（15g）--（4）定容（加水至500ml刻度线--（5）调PH(5.8)—（6）装入三角瓶（500ml）封口---（7）灭菌---（8）分装（灭菌后的培养皿）
二胚胎的培养
（一）仪器设备
尖镊子、常规组织培养仪器设备等
（二）试材及试剂
消毒剂（饱和漂白粉滤清液）基本培养基：MS
（三）操作程序
（1）材料选择及表面消毒选取无病害、虫害的种子，先将内果皮砸破，取出带内种皮的胚，放入饱和漂白粉滤清液10min，最后，用无菌水冲洗3遍，放在盛有无菌滤纸的培养皿内，吸除水分，以待接种；
（2）接种和培养种胚消毒后，在超净工作台内的解剖镜上，剥去种皮，将胚接种在基本培养基上，进行芽的诱导；
思考题
（1）胚胎培养可以解决什么问题？
（2）胚胎培养容易污染吗？
（3）为什么胚胎培养时，只需要基本培养基就能满足培养要求？
实验结果与总结：
