乳酸菌培养及诱导培养基

乳酸菌菌种的培养筛选方法
简介
本文档介绍了乳酸菌菌种的培养筛选方法。

乳酸菌是一种有益菌，常被应用于食品工业和医药领域。

通过培养筛选方法，可以有效筛选出优质的乳酸菌菌种，以满足特定需求。

培养基准备
1. 选择适合乳酸菌生长的培养基，如MRS培养基。

2. 按照培养基的使用说明准备培养基溶液。

3. 灭菌培养基溶液，可使用高压灭菌器或高温灭菌法。

菌种接种
1. 从已有的乳酸菌菌种中选择适合的菌株。

2. 取一定量的菌种，注意保持无菌操作。

3. 将菌种转移到培养基中，可采用无菌环或吸管接种法。

4. 将接种好的培养基培养物置于恒温培养箱中，保持适宜的温度和氧气条件。

筛选方法
1. pH值筛选：选择适宜pH范围的培养基进行培养，通常在
pH 4-6之间。

2. 温度筛选：通过调整培养温度来筛选适应不同温度的菌种。

3. 抗性筛选：将菌种暴露在一定浓度的抗生素中，筛选出对抗
生素具有抗性的菌株。

4. 发酵性筛选：观察菌种在培养基中发酵的能力，以选择产酸
产气能力强的菌株。

筛选结果评估
1. 观察培养基的菌落形态，如形状、颜色等特征。

2. 测定菌株的生长速度和产酸量等。

3. 利用分子生物学方法进行菌株鉴定，如PCR、16S rRNA测
序等。

结论
通过以上培养筛选方法，可以高效地筛选出优质的乳酸菌菌种。

根据特定需求，可以选择适应不同环境和具有良好生产特性的菌株，为食品工业和医药领域的应用提供基础支持。

以上为乳酸菌菌种的培养筛选方法的简要介绍，希望对您有所帮助。

乳酸菌的培养作者：王庆起来源：《科技资讯》 2012年第18期王庆起(山东睿鹰先锋制药有限公司山东菏泽 274039)摘要:乳酸菌是发酵食品中应用最为广泛的细菌之一。

基于其特殊的生理功能,在发酵工程中,首先要选育优良菌种,但由于微生物在自然条件下都是杂居混生的,因此要选育良种,就必须对其中的纯种微生物进行分离或鉴定。

关键词:乳酸菌生理鉴定中图分类号:TS252.1 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2012)06(c)-0093-01乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是一类可发酵碳水化合物产生乳酸的革兰氏阳性细菌的总称,主要包括乳杆菌、乳球菌、明串珠菌、片球菌、链球菌及双歧杆菌等。

1 乳酸菌的生理功能乳酸菌的生理功能主要有:(1)具有粘附性和定植能力。

(2)产生抑菌活性的代谢产物。

(3)降低胆固醇。

(4)具有抗变异原性。

(5)改善肝脏功能。

(6)增强免疫功能。

2 乳酸菌的类型乳酸菌大体上可分为两大类。

一类是动物源乳酸菌,一类是植物源乳酸菌。

3 材料与方法3.1 材料3.1.1 样品市售进口奶酪。

3.1.2 培养基(1)MRS液体培养基:蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵1.45g、K2HPO4·H2O 2.6g、MgSO4·7H2O 0.58g、MnSO4·4H2O 0.25g、吐温80 1.0g、蒸馏水1000mL。

(pH 6.2～6.4,121℃,灭菌20min)。

(2)BCG培养基:A、B液灭菌后混匀。

A液:脱脂奶粉50g,1.6%溴甲酚绿酒精液0.35ml,蒸馏水250ml.(90℃,开盖灭菌10min).B液:酵母膏5g,琼脂10g,蒸馏水250ml。

(pH 6.8,121℃灭菌20min)A、B液灭菌后在无菌状态下混匀后倒平板。

3.2 方法3.2.1 样品的处理奶酪的处理:以无菌操作取奶酪1g,放入含有9mL灭菌加热至含40℃左右的生理盐水的灭菌广口瓶内,待奶酪溶解制成1∶10的均匀稀释液,并用无菌生理盐水逐级稀释至10-3、10-4、10-5。

食品中干酪乳杆菌的保存及促进生长的关键因素干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）作为一种常见的益生菌，在食品加工和保健品行业中被广泛应用。

了解干酪乳杆菌的保存方法以及促进其生长的关键因素对于保证产品质量和增强其功能性具有重要意义。

本文将以食品中干酪乳杆菌的保存和促进生长为主题，探讨其关键因素。

一、干酪乳杆菌的保存方法1. 低温储存：干酪乳杆菌在低温下能够长时间存活，一般在2-8摄氏度的冷藏环境下保存。

冷藏可延缓菌株的新陈代谢和生长速度，延长其存活时间，但需注意避免低温冷冻，因为低温下可能导致菌株死亡。

2. 乳酸菌培养基：乳酸菌培养基是一种富含营养物质的培养基，可促进菌株生长。

将干酪乳杆菌接种于适宜的培养基中，进行适当的温度和湿度控制，有助于保持其菌落数量和活力。

二、促进干酪乳杆菌生长的关键因素1. pH值：干酪乳杆菌对环境pH敏感，适宜的pH范围对促进其生长至关重要。

一般而言，干酪乳杆菌偏好在pH为4.5-5.5的酸性环境中生长。

在食品加工过程中，可通过调整食品的pH值来提供适宜的生长环境，从而促进干酪乳杆菌的繁殖。

2. 温度：干酪乳杆菌在不同的温度条件下具有不同的生长速率和生长温度范围。

一般来说，干酪乳杆菌较适宜在30-37摄氏度的温暖环境中生长。

在食品加工和储存过程中，务必控制好适宜的温度，以保证干酪乳杆菌的生长和活性。

3. 营养物质：干酪乳杆菌的生长受营养物质的影响。

葡萄糖作为主要碳源，是干酪乳杆菌繁殖所必需的。

此外，氮源、无机盐和微量元素对菌株的生长也起着重要作用。

在食品生产中，可通过添加适量的营养物质来促进干酪乳杆菌的生长，提高菌株的数量和活力。

4. 抗生素：一些抗生素对干酪乳杆菌具有抑制作用，可能会破坏或减缓其生长。

因此，在食品加工和储存过程中，应尽量避免或减少抗生素的使用，以促进干酪乳杆菌的繁殖和生长。

5. 氧气含量：干酪乳杆菌属于厌氧菌，对氧气敏感。

高氧环境会抑制干酪乳杆菌的生长和代谢。

育肥猪发酵饲料用乳酸菌的培养基及培养条件优化杨胜;张利平;范寰;乔家运;王文杰【摘要】通过正交试验和响应面试验对用于育肥猪发酵饲料的乳酸菌培养基及培养条件进行了优化.结果表明:优化后的培养基配方为酵母粉10 g/L,蛋白胨15 g/L,葡萄糖6 g/L,MgSO4·7H2O 0.2 g/L,MnSO4 0.05 g/L,K2HPO40.2 g/L;优化后的培养条件为培养基初始pH值7.25,培养温度36℃,转速165 r/min.【期刊名称】《甘肃农业大学学报》【年(卷),期】2013(048)004【总页数】5页(P11-14,19)【关键词】乳酸菌;发酵饲料;育肥牛;培养基;响应面试验【作者】杨胜;张利平;范寰;乔家运;王文杰【作者单位】甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州 730070;天津市畜牧兽医研究所,天津300112;甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州 730070;天津市畜牧兽医研究所,天津300112;天津市畜牧兽医研究所,天津300112;天津市畜牧兽医研究所,天津300112【正文语种】中文【中图分类】Q93-335乳酸菌作为一种益生菌，具有调节机体胃肠道正常菌群、保持其微生态平衡、提高饲料消化率的功能[1].乳酸菌在发酵饲料的过程中能产生乳酸菌素和乳酸等有机酸，形成厌氧环境，可以抑制大肠杆菌等致病菌的增值，降低发病率[2－3].代永刚等报道，乳酸菌可分解食物中的蛋白质和糖类，对脂肪也有微弱的分解能力，能促进食物的消化吸收，产生对风味起决定性作用的芳香类物质，提高饲料的适口性[4].巩德球等研究发现，乳酸菌发酵饲料可以提高饲料消化率，降低料肉比和药物使用量，从而增加效益，生产出更优质安全的产品[5].本研究拟通过正交试验优化乳酸菌培养基，响应面试验优化乳酸菌培养条件，以期为发酵饲料用乳酸菌的大规模生产提供一定的科学参考.1 材料与方法1.1 种子培养基酵母粉10g／L，蛋白胨10g／L，MnSO4 0.05g／L，K2HPO40.2g／L，MgSO4·7H2O 1g／L，葡萄糖6g／L，pH 7.0，121℃灭菌15min.1.2 菌种活化将保存于斜面的菌种接一菌环到种子培养基，40℃、140r／min，培养24h，置于4℃冰箱保存，备用.1.3 种子液制备取40mL种子培养基于100mL三角瓶中，灭菌后接入10%活化的菌种，40℃、140r／min培养24h.1.4 菌体浓度测定菌体浓度的测定用分光光度法[6].1.5 活菌总数计数活菌总数用平板计数法测定[7].1.6 培养基优化正交试验设计试验设计为4因素3水平L9（34）的正交试验[8]，试验因素有酵母粉、蛋白胨、葡萄糖和MgSO4·7H2O（表1）.1.7 培养条件优化响应面试验设计根据Design Expert 8软件中的Box－Behnken中心组合设计原理，在单因素试验的基础上，以pH、温度和转速3个因素为自变量，益生菌的生物量为响应值，做3因素3水平的响应面分析试验[9].共17个试验点，每个试验3个重复（表2）.表1 L9（34）正交试验因素水平Tab.1 Factors and levels of L9（34）orthogoral experiment （g·L－1）水平 A酵母粉B蛋白胨C葡萄糖D MgSO4·7H2O 1 10 10 5 0.2 2 15 15 6 0.5 3 20 20 20 1.0表2 响应面试验因素水平表Tab.2 Factors and levels of response surface designx2温度／℃x3转速／（r·min－1）水平 x1 pH值－1 6.5 20 140 0 7.0 30 170 1 7.5 40 2002 结果与分析2.1 正交试验结果培养基成分正交分析试验设计结果见表3，从极差（R）可以看出，4种成分对D600的影响次序依次为：酵母粉＞MgSO4·7H2O＞葡萄糖＞蛋白胨，最优组合A1B2C2D1，即酵母粉 10g／L，蛋白胨15g／L，葡萄糖6g／L，MgSO4·7H2O 0.2g／L.表3 培养基成分正交试验结果Tab.3 The results of orthogonal experiment试验号 A B C D D600 1 1 1 1 1 1.939 2 1 2 2 2 1.906 3 1 3 3 3 1.808 4 2 1 2 3 1.885 5 2 2 3 1 1.933 6 2 3 1 2 1.817 7 3 1 3 2 1.676 8 3 2 1 3 1.713 9 3 3 2 1 1.783 k1 5.653 5.5 5.469 5.655 k2 5.635 5.552 5.574 5.399 k3 5.172 5.408 5.417 5.406 k1 1.884 1.833 0.823 1.885 k2 1.878 1.851 1.858 1.800 k3 1.7241.803 1.807 1.802 R 0.160 0.048 0.052 0.085 32.2 验证试验结果在以上优化培养基配方下进行3次验证试验，平均值为1.964.培养4h后乳酸菌进入生长对数期，18h后达到最大生物量，此后培养时间内生物量基本维持稳定.2.3 响应面试验结果2.3.1 响应面实验设计及结果培养基成分优化后，为了得到最佳培养条件，对温度、转速和pH值3个因素进行了响应面设计试验，以培养18hD600为生物量响应值，试验结果见表4.表4 培养条件相应面试验设计及结果Tab.4 Response surface design and its results of culture conditions试验号 x1 pH值x2转速量x3温度生物量1 0 1 1 1.718 2 0 －1 1 1.980 3 0 0 0 2.105 4 －1 0 1 0.316 5 1 0 －1 2.027 6 1 1 0 1.766 7 －1 1 0 0.424 8 0 －1 －1 1.919 9 0 0 0 2.193 10 1 －1 0 1.912 11 －1 －1 0 0.244 12 1 0 1 1.957 13 0 1 －1 1.916 14 0 0 0 2.129 15 －1 0 10.781对表4数据进行二次回归拟合，以生物量（y）为因变量，pH 值（x1）、转速（x2）和温度（x3）为自变量建立回归方程如下：在利用响应面图分析因素对响应值的影响时，如果响应曲面坡度比较平缓，则表明因素变化对响应值影响不大；如果坡度非常陡，则说明因素变化对响应值影响显著[10].从图1～3可以看出，各因素交互作用对响应值对D600的影响，pH值和温度对D600的交互效应最为显著.从表5可知，x1、x12、x22影响是极显著的.F值的大小可以判断各因素对18hD600影响的强弱.F值越大，影响作用越强[11－12].因此各因素影响程度依次是pH值、温度和转速.模型P值＜＜0.01影响是很显著的，失拟项P＝0.115 4＞＞0.05，说明回归方程具有较好的拟合程度，模型选择合适.通过回归模型和图1分析得y极大值是在：x1＝0.506，x2＝－0.179，x3＝0.617，即 pH 值、转速和温度分别在7.25、164.62r／min和36.17 ℃时D600存在最大值，为2.278.考虑到实际操作的可行性，将最优条件在回归方程得到的理论值基础上修正为：pH 7.3，转速165r／min，温度36℃.2.3.2 模型验证在以上优化条件下进行3次验证试验，平均值为2.129，与预测值较为接近，表明预测值与试验值有较好的拟合性，证明响应面分析法得到该乳酸菌培养条件是真实可靠的.表5 响应面方差分析表Tab.5 Variance analysis table of response surface design来源平方和自由度均方 F Pr＞F Model 7.15 9 0.79 75.47 ＜0.000 1 x1 4.35 1 4.35 413.25 ＜0.000 1 x2 6.632E－003 1 6.632E－003 0.63 0.463 2 x3 8.256E－003 1 8.256E－003 0.78 0.416 2 x1x2 0.027 1 0.027 2.55 0.171 4x1x3 0.072 1 0.072 6.81 0.047 7 x2x3 0.017 1 0.017 1.59 0.262 4 x21 2.57 1 2.57 244.38 ＜ 0.000 1 x22 0.18 1 0.18 17.20 0.008 9 x23 5.289E－003 1 5.289E－003 0.50 0.510 0残差 0.053 5 0.011失拟项 0.048 3 0.016 7.82 0.115 4纯误差 4.130E－003 2 2.065E－003所有项7.20 14图1 转速和温度交互作用响应面Fig.1 Effect of ratational speed and temperature on response surface图2 温度和pH值交互作用响应面Fig.2 Effect of temperature and pH on response surface图3 转速和pH值交互作用响应面图Fig.3 Effect of rotatinal speed and pH on response surface2.3.3 生长曲线菌种在接种后前4h生长较为缓慢，为生长迟滞期（0.4×108cfu／mL），4～14h为生长对数期（1.2×108cfu／mL），30h达到最大吸光度，即最大菌体浓度（2.2×108cfu／mL），此后菌体浓度相对稳定（图4）.图4 试验菌种生长曲线Fig.4 The growth curve of strains3 结论采用正交试验和响应面试验对该乳酸菌的培养基成分和培养条件进行了优化，通过分光光度法在波长600nm处测定培养18h的菌体浓度作为评价指标，得到最优培养基配方为酵母粉10g／L，蛋白胨15g／L，葡萄糖6g／L，MgSO4·7H2O 0.2g／L，MnSO40.05g／L，K2HPO40.2g／L.在最优培养基配方基础上，通过响应面试验，确定该乳酸菌最佳培养条件为pH值7.25，转速165r／min，温度36℃.参考文献[1] 姜旭德，游进，王春华.乳酸菌在畜牧业的应用[J].畜牧兽医科技信息，2007（8）：28－29[2] 杨雪海，赵娜，魏金涛，等.植物乳杆菌对致病性大肠杆菌的抑制效果研究[J].饲料研究，2011（1）：27－28[3] 谷巍，郭洪新，杨长庚.微生态发酵饲料在断奶仔猪初步应用的研究[J].饲料博览，2007（23）：37－40[4] 代永刚，田志刚，南喜平.乳酸菌及其生理功能研究进展[J].农产品加工·学刊，2009（7）：24－27[5] 巩德球，关玮，陆逵，等.热带地区乳酸菌发酵饲料对育肥猪生产性能的影响[J].饲料工业，2012，33（15）：26－28[6] 陈金春.微生物学实验指导[M].北京：清华大学出版社，2005：63－65[7] 中华人民共和国卫生部.GB 4789.2－2010食品微生物学检验菌落总数测定[S].北京：标准出版社，2010：1－5[8] 中国科学院教学研究所数理统计组.正交试验法[M].北京：人民教育出版社，1975[9] 李玉珍，肖怀秋，杨涛，等.响应面优化低值豆粕液态制备多肽工艺[J].大豆科学，2012，31（4）：654－654[10] Yin G H，Dang Y L.Optimization of extraction technology of the Lycium barbarum polysaccharides by Box－Behnken statisticaldesign[J].Carbohydrate Polymers，食品科学，2008，74（3）：603－610 [11] 龙云飞，王沛佩，杨克迪，等.响应面法优化亚麻籽油提取工艺[J].食品科学，2012，33（14）：45－49[12] 杨实权，张喜成，刘军锋，等.响应面法优化酿酒酵母产油脂条件[J].微生物学通报，2010，37（1）：91－95。

乳酸菌的制作原理
乳酸菌的制作原理是指利用合适的培养基和条件培养乳酸菌菌株，使其产酸和生长，最终得到活性乳酸菌产品的过程。

乳酸菌的制作过程可以分为以下几个步骤：
1. 菌株的选取：乳酸菌菌株的选择通常基于其对人体有益的特性，如抗菌作用、免疫调节功能等。

常见的乳酸菌菌株包括嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等。

2. 培养基的准备：选择合适的培养基是保证乳酸菌生长和繁殖的重要条件。

常用的培养基包括牛乳、乳清、大豆蛋白等，其中添加了一定的碳水化合物作为乳酸菌的能量来源。

3. 接种和培养：将选取的乳酸菌菌株接种到准备好的培养基中，然后在适当的温度和湿度下进行培养。

乳酸菌通常适合在温度为35-40摄氏度的环境中进行培养，而pH值在
4.5-6.5之间是
乳酸菌最适宜的生长条件。

4. 发酵和产酸：培养一段时间后，乳酸菌会开始进行发酵作用，将培养基中的碳水化合物转化为乳酸。

乳酸的积累会降低培养基的pH值，创造出适宜乳酸菌生长的环境。

5. 停止发酵和分离：发酵达到一定程度后，需要停止发酵过程。

通常通过改变培养条件或者降低温度来停止发酵。

然后通过离心、过滤等方法将乳酸菌分离出来。

6. 产品加工和包装：分离出的乳酸菌经过适当的处理和加工，如冻干、稳定剂添加等，最终制成乳酸菌产品。

然后将其进行严格的检验，包装并储存，以保持其活性和稳定性。

总之，乳酸菌的制作原理是通过选择适宜的菌株和培养条件，促使乳酸菌进行发酵作用并产酸，最终得到高活性的乳酸菌产品。

嗜酸乳杆菌试验方法一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化[J]. 中国酿造，20091、基础培养基(脱脂乳培养基)12.0 g脱脂奶粉，蒸馏水100 mL，pH自然，115℃灭菌20 min。

2、MRS固体培养基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，无水乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.33g，琼脂15g，pH 6.8左右，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌20min。

3、产酶培养基：脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。

1 出发菌株的活化及纯化保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体MRS培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。

划线接种到MRS固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖*。

长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。

嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征在MRS琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。

10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝状或卷发样。

革兰氏染色后可见菌体呈短杆状，单个或短链状排列，革兰氏染色阳性。

肉眼观察，嗜酸乳杆菌菌落较小,平台状，不规则、圆形凸起、边缘整齐、质地柔软、灰白色、有光泽。

1）500mL MRS液体培养基2）5个250mL的三角瓶，橡胶塞，牛皮纸，绳子3）5个培养皿4）1个接种环，酒精灯，打火机，酒精2 种子的制备活化的菌种接种于基础培养基，于36℃恒温培养24 h，保藏备用。

增菌培养基最佳接种量为3%（活菌数为108个/mL）★3 产酶诱导培养用脱脂乳配成12%的产酶液体培养基，每250mL三角瓶中装入100mL(含12g脱脂乳、1.50‰亚油酸)，加入1mL吐温80，115℃灭菌30 min后，接入2 mL 种子液(每mL含菌体5×108个)，36℃培养36h。

怎样培养天然乳酸菌的方法
要培养天然乳酸菌，可以按照以下步骤进行：
1. 准备材料：需要乳酸菌菌种和培养基。

乳酸菌菌种可以从天然的发酵食品中获得，如酸奶或酸菜。

培养基可以用牛奶、酸奶或乳酸菌培养基粉等准备。

2. 准备培养容器：选择一个干净的容器，最好是玻璃或塑料容器。

要确保容器在使用前已经彻底清洁和消毒。

3. 准备培养基：将培养基加热至40-50摄氏度，让其稍微变暖。

4. 加入乳酸菌菌种：将乳酸菌菌种加入培养基中。

要根据菌种和培养基的使用说明来确定加入的数量。

5. 摇晃或搅拌培养容器：将培养容器盖好，用手轻轻摇晃或用棒子轻轻搅拌，使培养基和乳酸菌菌种充分混合。

6. 存放和保温：将培养容器放置在温暖的地方，温度最好在35-40摄氏度之间。

可以使用保温箱或将容器包裹在保温材料中，以保持温度稳定。

7. 观察和维护：每天观察培养容器中的菌落，注意是否有任何变化。

如果需要，可以定期添加新的培养基来维持菌种的生存和繁殖。

8. 储存：一旦乳酸菌培养达到预期的水平，可以将其存储在冰箱中。

将培养物过滤，得到的滤液可以储存于冰箱中，并在之后使用。

需要注意的是，在培养乳酸菌的过程中要注意卫生，避免细菌污染。

另外，如果不具备培养乳酸菌的条件或技术，也可以选择购买乳酸菌制剂，以确保获得健康和安全的乳酸菌产品。

乳酸菌实验报告一、实验目的本次实验旨在研究乳酸菌的生长特性、代谢产物以及其在食品发酵中的应用效果，为进一步开发和利用乳酸菌提供科学依据。

二、实验材料与方法（一）实验材料1、菌种：从市场购买的活性乳酸菌饮品中分离得到的乳酸菌菌株。

2、培养基：MRS 培养基（用于乳酸菌的培养和计数）。

3、仪器设备：恒温培养箱、显微镜、pH 计、分光光度计等。

（二）实验方法1、乳酸菌的分离与纯化将购买的活性乳酸菌饮品进行梯度稀释，然后涂布于 MRS 固体培养基上，在 37℃恒温培养箱中培养 48 小时。

挑取单菌落进行多次划线分离，直至得到纯培养的乳酸菌菌株。

2、乳酸菌的生长曲线测定将纯化后的乳酸菌接种到 MRS 液体培养基中，在 37℃恒温摇床中培养。

每隔一定时间取样，测定培养液的 OD600 值（光密度值），绘制乳酸菌的生长曲线。

3、乳酸菌的产酸能力测定在培养过程中，定期测定培养液的 pH 值，以评估乳酸菌的产酸能力。

4、乳酸菌发酵食品的制作选择酸奶和泡菜作为发酵食品的代表，分别将乳酸菌接种到牛奶和蔬菜中，按照常规的发酵工艺进行制作，观察发酵过程中的变化，并对成品进行感官评价和质量检测。

三、实验结果与分析（一）乳酸菌的生长曲线经过测定，乳酸菌的生长曲线呈现出典型的“S”型。

在培养初期，乳酸菌处于适应期，生长缓慢；随后进入对数生长期，细胞数量迅速增加；最后进入稳定期，细胞生长速度减缓，数量趋于稳定。

（二）乳酸菌的产酸能力随着培养时间的延长，培养液的 pH 值逐渐降低，表明乳酸菌具有较强的产酸能力。

在培养 48 小时后，pH 值下降到 40 左右。

（三）乳酸菌发酵食品的制作1、酸奶接种乳酸菌后的牛奶在 42℃恒温培养箱中发酵 6-8 小时，形成了质地细腻、口感酸甜的酸奶。

在发酵过程中，牛奶的酸度逐渐增加，蛋白质凝固，形成了酸奶特有的组织状态。

通过感官评价，自制酸奶的口感和风味与市售酸奶相当。

2、泡菜将乳酸菌接种到蔬菜中，在常温下发酵 3-5 天，制成了泡菜。

乳酸菌分离鉴定及试验方法一、引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有重要的生物学功能和应用价值。

乳酸菌可以通过发酵作用，将葡萄糖、果糖等碳源转化为乳酸和其他有机酸，同时还会产生一些对人体有益的物质，如维生素、酶、抗生素等。

乳酸菌在食品工业、医药工业、农业等领域具有重要的应用前景。

乳酸菌的分离鉴定及试验方法对于深入研究乳酸菌菌种的特性、功能以及在不同领域中的应用具有重要意义。

本文将介绍乳酸菌的分离鉴定及试验方法，旨在为相关研究人员提供参考和指导。

二、乳酸菌分离方法1. 采样乳酸菌的分离首先需要进行采样工作。

可以从发酵食品、乳制品、蔬菜、水果、土壤、肠道等多种来源进行采样。

在采样过程中应注意样品的新鲜性和卫生性，避免外部污染对实验结果造成影响。

2. 培养基的选择乳酸菌可以利用多种培养基进行分离和培养，常用的培养基有MRS培养基、乳清培养基等。

根据具体的分离目的和需求选择适合的培养基。

3. 分离将采样得到的样品进行系列稀释，取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，培养温度一般在30-37摄氏度之间，培养时间约48-72小时。

4. 纯化观察培养基上的菌落形态，选择典型的菌落进行分离单菌培养，通过多次传代稀释可以纯化获得纯种的乳酸菌。

5. 形态观察利用显微镜对分离得到的菌株进行形态学观察，包括细胞形状、大小、排列方式等。

三、乳酸菌鉴定方法1. 生理生化鉴定通过对分离得到的菌株进行生理生化特性的研究，包括乳酸发酵能力、氧耐受性、温度、pH值的适应能力等，可以初步判断乳酸菌的种属。

2. 生化试剂法利用生化试剂对乳酸菌进行鉴定，如气体发生试验、氧化还原酶试验、酶活性试验等。

3. 分子生物学鉴定通过PCR扩增乳酸菌的16S rRNA基因序列，测序后与数据库比对，确定乳酸菌的种属分类。

四、乳酸菌试验方法1. 发酵活性测定通过测定菌株在不同条件下的发酵活性，如发酵速率、产酸速率、产酶能力等。

2. 抗菌活性测定测定乳酸菌对一些有害菌的抑菌作用，判断其在抗菌方面的潜力。

乳酸杆菌培养基配方乳酸菌是一类革兰氏阳性的杆状细菌，能够产生乳酸作为代谢产物。

乳酸菌在食品工艺中起到很重要的作用，如发酵食品的制作，以及调味品等的生产。

为了培养乳酸菌，需要使用适合它们生长的培养基。

下面是一种常用的乳酸菌培养基配方:-葡萄糖：10g-蛋白胨：5g-酵母浸没液：5g-磷酸氢二钾：2g-氯化钙：0.02g-硫酸亚铁：0.01g-青霉素：0.05g-pH调节至7.0以上配方中，葡萄糖是乳酸菌的主要碳源，提供能量和生长所需的碳源。

蛋白胨和酵母浸没液提供氮源和其他必需的营养物质。

磷酸氢二钾提供磷酸盐，维持细胞内的酸碱平衡。

氯化钙和硫酸亚铁提供必要的矿物质。

青霉素使用抗生素可以抑制其他微生物的生长。

-酪蛋白胨：10g-氯化钠：5g-乳糖：10g-葡萄糖：10g-磷酸二氢铵：3g-氯化钾：1g-氯化镁：0.02g-pH调节至7.0酪蛋白胨是酪蛋白的水解产物，提供氮源和其他必需的营养物质。

氯化钠提供必需的无机盐。

乳糖提供碳源。

葡萄糖提供能量。

磷酸二氢铵提供磷酸盐。

氯化钾和氯化镁提供必需的矿物质。

-葡萄糖：20g-麦芽浸淀粉：10g-蛋白胨：10g-酵母浸没液：10g-三氯化钠：5g-磷酸二氢钠：2g-醋酸亚铁：0.5g-硫酸锰：0.025g-青霉素：0.005g-pH调节至7.0MRS培养基是一种常用的乳酸菌培养基，适用于乳酸菌的生长。

除了葡萄糖、蛋白胨和酵母浸没液提供碳源、氮源和其他必需的营养物质外，这个配方中还含有麦芽浸淀粉，可提供额外的碳源。

三氯化钠提供必需的无机盐。

磷酸二氢钠提供磷酸盐。

醋酸亚铁和硫酸锰提供必需的微量元素。

青霉素用于抑制其他微生物的生长。

以上是乳酸菌培养基的三个常用配方，不同的乳酸菌可能对不同的配方有不同的需求。

为了获得最佳的生长条件，还需要通过试验和调整培养基的成分和配比，以满足特定菌株的需求。

品质管理检测项目细菌形态学分类一乳酸杆菌乳酸杆菌的基本属性：乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量，并生成大量乳酸的一类细菌的总称。

利用发酵技术保藏食品，最典型的是通过乳酸菌的发酵。

这在发酵乳工业中已经得到广泛的应用。

利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵，已经生产出多种不同类型的发酵乳。

因而分离和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。

无芽孢，革兰氏染色呈阳性。

微好氧，厌氧发酵，最适温度30~40摄氏度，最适PH值为5.5~6.2，在微酸环境下可以生长，中性或者偏碱性环境中则生长速率下降。

在固体培养基上培养时，通常厌氧条件或者减少氧气压力和充有体积分数为5%~10%的CO2可以增加其表面生长物，有些菌株在分离时就是厌氧的。

（一）实验仪器和试剂：实验仪器：现有的仪器：欠缺的仪器：培养基和试剂：①培养基：BCP培养基、MRS培养基和SL培养基BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0.04g，琼脂15g，蒸馏水lO00ml，pH7 0；MRS培养基（可以培养包括双岐乳杆菌、嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌）：重量(g) 牛肉蛋白粉10 ，鱼肉汁10 ，酵母浸出汁粉5 ，葡萄糖20 ，醋酸钠5 ，柠檬酸二铵 2 ，吐温80 0.1 ，硫酸镁0.58 ，硫酸锰0.28 ，蒸溜水1 000ml ，备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4 。

乳酸杆菌选择性琼脂SL：酪蛋白水解物10g；酵母提取物5g；柠檬酸二铵2g；乙酸钠（CH3COONa？3H2O）25g；MgSO4？7H2O 0.58g；琼脂15g；葡萄糖20g；吐温80 1.0ml；磷酸氢二钾6g；FeSO4？7H2O 0.03g；MnSO4？4H2O 0.15g。

以上用量为1000ml培养基的用量。

溶解琼脂在500ml的沸水中，溶解其他组分在500ml的水中，用冰醋酸调pH=5.4，并混合已融化的琼脂，进一步煮沸5分钟，倾倒平板或此热的培养基适量分装入灭菌的试管，这样无需进一步灭菌，避免重复融化和冷却。

乳酸菌生长最佳培养基的筛选Prepared on 22 November 2020乳酸菌生长最佳培养基的筛选摘要：文中通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数、菌落大小及溶钙圈大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基。

实验表明,在添加胡萝卜汁的乳酸菌分离固体培养基上,乳酸菌生长最好,活菌数含量最高,菌落和溶钙圈最大。

同种培养基,半固体培养较固体培养更适于乳酸菌生长,前者出菌快,活菌数多。

关键词：乳酸菌固体培养基半固体培养基菌落乳酸菌是有益于人体健康的益生菌,主要存在于人体肠道,其有助于宿主调整正常菌群,维持肠道微生态环境的平衡。

乳酸菌的代谢产物能降低肠道内的pH值,抑制肠道中腐败菌的生长和减弱腐败菌在肠道的产毒作用,并有帮助消化、防止便秘,防止细胞老化,降低胆固醇,抗肿瘤以及调节人体生理机能等保健和医疗作用[1-5]。

在食品向天然型、功能型发展的今天,乳酸菌制品正愈来愈受到人们的重视,通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数,菌落和溶钙圈的大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基,用于乳酸菌制品的研究与开发一、材料及方法111菌种及来源保加利亚乳杆菌(lactobacillusbulgaricus),由西北农业大学微生物室提供。

(以下简称乳酸菌)。

112培养基11211固体培养基的筛选RJP培养基(1号):牛肉膏3g;蛋白胨3g;酵母膏3g;乳糖20g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH610。

LAB培养基(2号):牛肉膏10g;酵母膏10g;乳糖20g;琼脂15g;吐温80110ml;CaCO310g;KH2PO42g;蒸馏水950ml;pH616。

214号培养基(3号):牛肉膏3g,胰胨10g;NaCl5g;酵母膏6g;葡萄糖2g;半胱氨酸013g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH714~715乳酸菌分离培养基(4号):牛肉膏1g;蛋白胨1g;酵母膏1g;葡萄糖1g;蕃茄汁20%;吐温800105%;CaCO32g;溴甲酚绿0101%;琼脂115g;蒸馏水100ml;pH615。

乳酸菌的培养和生理功能乳酸菌和人类的生活有密切的关系，它是一类能利用糖类并产生乳酸的细菌，主要以无芽孢、革兰氏染色阳性细菌为主，目前大致可分为18 个属，共有200 多种。

除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。

随着研究的深入，乳酸菌对人类的贡献被越来越多的人认同并惊讶，也使更多的人尝试培养利用乳酸菌。

一、乳酸菌的培养1．乳酸菌的家庭培养家庭乳酸菌的培养其目的常常不是为了获得优质菌种，而是为了食用。

所以乳酸菌的产生常不单单是乳酸菌，往往有其他的杂菌。

它们都是某种食物的伴生产品。

主要有以下几种产菌方式：(1)自制酸奶产菌。

原料纯牛奶、原味酸奶4：1。

在消毒过的容器中倒入牛奶 (加热消毒放温过) ，在温牛奶中加入酸奶，用勺子搅拌均匀，盖盖。

然后保温发酵8〜10小时后，乳酸菌大量生成，此时食用口感佳。

( 2)酸菜制菌法。

在洗干净的非金属容器中码入去了老帮的白菜，压实，然后加满开水加一点盐，不加也行，用石头压上，防止白菜漂起，不要让白菜露出水面，把容器口用塑料膜封好与空气隔绝。

放置在10〜20C且20天以上，温度越高发酵时间越短。

酸菜的发酵是乳酸杆菌繁殖的过程，乳酸杆菌是厌氧菌，霉菌杂菌是需氧菌，加开水就是为了把水中的氧气清除掉，让其他菌无法繁殖，给乳酸杆菌创造生存条件，用塑料膜封口是为了防止空气重新溶入水中，酸菜经乳酸杆菌 (乳酸菌是对人有利的菌) 发酵后，产生大量乳酸，食用口感好。

在我国也有大量人群食用泡菜，其制作原理和泡菜类似也可产生大量乳酸菌，只不过要加入更多的辅料。

2．乳酸菌的实验室培养主要方法是把菌种种植于不同的培养基中，乳酸菌的培养基有很多种，依据不同的菌种而定，大多数乳酸菌在37〜42C下培养，［1］现列举常用培养基如下：(1)MRS培养基成分：蛋白胨10.0g ，牛肉粉5.0g ，酵母粉4.0g ，葡萄糖20.0g，吐温80 1.0mL，K2HP04•7H2O 2.0g 醋酸钠•3H2O5.0g ，柠檬酸三铵2.0g ，MgSO4•7H2O0.2g ，MnS04•4H2O 0.05g 琼脂粉15.0g，pH值为6.2。

乳酸菌的培养方法乳酸菌是一类广泛存在于天然环境和生物体内的革兰氏阳性菌，其通过发酵过程产生乳酸。

它们被广泛应用于食品工业和生物制药领域，具有促进消化、改善免疫功能、防止肠道感染等多种生理功能。

因此，乳酸菌的培养方法对于乳酸菌的研究和应用具有重要意义。

乳酸菌的培养方法包括液体培养和固体培养两种类型。

液体培养主要用于培养乳酸菌的大规模生产，而固体培养则多用于鉴定菌株或培养特定功能的菌株。

下面将详细介绍这两种乳酸菌的培养方法。

一、液体培养方法：1.选择培养基：液体培养乳酸菌的基本培养基成分包括碳源、氮源、矿物质和生长促进剂等。

常用的碳源有葡萄糖、果糖、麦芽糖等；氮源可以选择酵母粉、酵母浸渣等；矿物质包括无机盐类如硫酸镁、磷酸二氢钾等；生长促进剂如维生素、复合氨基酸等。

根据具体需求，还可以添加其它辅助成分如抑菌剂、抗生素等。

2.制备培养基：按照配方称量所需的成分，并逐一加入适量的水中，调整pH值为适宜的范围（通常为6.0-7.0），然后进行高压灭菌。

3.接种菌株：选取菌株，预培养于合适的基质中，待菌液充分生长稳定后，进行接种。

接种量根据乳酸菌的特性和培养基配方而定。

4.培养条件：将接种好的培养基装入培养容器中，通常可选择培养瓶、培养罐等。

然后，将其放置于适宜的温度（一般为30-37摄氏度）和气氛（通常是厌氧状态）条件下培养，培养时间根据菌株的生长速率而定。

5.菌液分离：培养一定时间后，将培养液进行高速离心或通过过滤等方法进行菌体的分离。

然后，可使用不同的保存方法保存培养液中的乳酸菌菌株。

二、固体培养方法：1.选择培养基：固体培养乳酸菌的培养基可选择琼脂或者琼脂糖等。

在选择琼脂的时候，需要根据菌株的需求来选择合适的琼脂类型，这些琼脂包括普通琼脂、地衣藓琼脂、地衣苔藓琼脂等。

2.制备培养基：将琼脂按照一定比例加入适量的水中，搅拌均匀后，进行高压灭菌。

然后将灭菌的琼脂培养基倒入培养器具（如培养皿）中。

3.接种菌株：取出已培养好的乳酸菌菌株悬浊液，用无菌的吸管等工具，在琼脂培养基表面均匀涂抹，待涂抹成薄膜状。

乳酸菌的培养方法
乳酸菌的培养方法包括以下几个步骤：
1. 选择培养基：常用的乳酸菌培养基包括罗格萨乳杆菌培养基、LM17培养基和De Man-Rogosa-Sharpe（MRS）培养基等。

这些培养基中含有适合乳酸菌生长和繁殖所需的营养成分。

2. 准备培养基：按照培养基说明书的要求，将培养基加入适量的蒸馏水中，并进行搅拌混匀。

3. 放热杀菌：将培养基装入试管或培养瓶中，用高压灭菌器或自动热压灭菌器进行高温高压灭菌，一般温度为121，压力为15 psi，时间为15-20分钟。

4. 接种菌株：将乳酸菌菌株接种于无菌条件下，可以选择斜面接种、液体悬浮接种或凝胶块接种等方法。

5. 培养条件：将接种的培养基培养瓶放入恒温培养箱中，温度一般为30-40，pH一般为
6.0-
7.0，培养时间根据所选菌株的生长速率而定，一般为24-48小时。

6. 培养结果观察：观察培养物的外观、菌落形态和颜色等，以判断菌株的生长情况和纯度。

除了以上基本的培养方法，还可以根据乳酸菌的特性进行不同的培养改进，如以实时荧光定量PCR检测菌株的生长情况、利用pH指示染料测定产酸量等。

工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方产品要菌体,菌种是复合菌种,做进一步的发酵用的,十分感谢!其实工业培养基跟实验室培养基只是说原料粗糙度或者说是原料选择的区别,品级不一样而已,要看楼主对于乳酸菌培养的要求了,比如楼主是要做高密度培养呢,还是直接就获取代谢产物,菌体离心收集后洁净度是否要高,还有发达就是楼主选择的工艺是否时候使用低品级的工业培养基呢,这些问题需要综合考虑才能最后定论培养基的内容。

1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克,蛋白胨1.0克,氯化钠0.5克,琼脂1.5克,水100毫升在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。

待NDS烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。

等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二马铃薯培养基取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。

在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。

过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。

每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。

配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。

2、放线菌培养基配方一淀粉琼脂培养基(高氏培养基)可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。

在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。

乳酸菌在培养基上的菌落特征乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，其在发酵及食品生产、医药制品等领域中具有重要的应用价值。

在分离纯化乳酸菌过程中，对乳酸菌在培养基上的菌落特征有一定的认识，可以帮助酸奶、营养酒等发酵产品的生产以及医药领域中相关药物的研究与改进。

一、形态特征乳酸菌在培养基上的菌落可以简单地分为平滑菌落和粗糙菌落两类。

平滑菌落的外形较为规则，表面光滑呈发亮状态，周缘清晰，直径一般在1-5 mm之间。

菌落的颜色主要与菌株的种类有关，有些为乳白色，有些为黄色、淡黄色甚至棕色。

粗糙菌落的外形不规则，菌落表面较为粗糙，常常呈现出海绵状，直径可达10 mm甚至更大，表面颜色也随菌株的不同而有所差异。

二、质地特征软质菌落质地松软，质地细腻，菌落表面光滑，易破碎。

中等质地菌落质地适中，表面较为平整，菌落周围的边缘明显。

三、透明度特征乳酸菌在培养基上的菌落透明度特征可分为透明、半透明和不透明三种。

透明菌落透光性强，看起来像透明的水滴，只在菌落边缘有色。

半透明菌落比较模糊，菌落中间清晰，边缘模糊。

不透明菌落透光性弱，没有看到菌落下的培养基颜色，高度浑浊。

四、边缘特征乳酸菌在培养基上的菌落边缘特征可以分为光滑边缘、锯齿状边缘和波浪状边缘三种。

光滑边缘菌落边缘清晰，呈现圆形或椭圆形，无凹凸突起。

锯齿状边缘菌落形态不规则，边缘有很多小锯齿状起伏，所以其边缘呈现出不规则的形状。

波浪状边缘菌落形状不规则，呈现出波浪状，边缘不明显，需要查看其下方培养基才能看得出来。

五、表面特征平滑表面菌落表面较为平滑，呈现圆形或椭圆形。

凹凸不平表面菌落表面凹凸不平，可能是由菌落内的气泡所致。

组织蒸发表面菌落呈现出较为光滑的环状，该现象主要是由于菌落内部的液体挥发形成的。

总结起来，乳酸菌在培养基上的菌落特征，包括形态、质地、透明度、边缘和表面特征。

这些特征可以通过肉眼或显微镜来观察，对乳酸菌的鉴别、区分、纯化以及乳酸菌的酸奶、营养酒等发酵产品的生产具有重要的参考价值。