实验 MS培养基母液和常用试剂的配制PPT
- 格式:ppt
- 大小:859.50 KB
- 文档页数:24
MS 培养基配方1、配置MS母液母液配置:加热都是用温水浴加热,全部都要避光保存,用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可表2.1大量元素母液药品20x g/L 500ml(20 x)KNO338g 19gNH4NO333 g 16.5gMgSO4•7H2O7.4 g 3.7gCaCl2 6.644g 3.322gKH2PO4 3.4g 1.7g溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解CaCL2.2H2O 4.4g/L表2.2微量元素母液药品100x g/L 500ml(100x g/L)KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OGuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g0.6222.3 g0.86 g0.025 g0.0025 g0.0025 g0.0415 g0.31 g1.115 g0.43 g0.0125 g0.00125 g0.00125 g溶于100ml蒸馏水,定容至500ml表2.3有机母液药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g烟酸0.05g0.025gVB60.05g0.025gVB10.1g0.05g甘氨酸0.2g0.1g表2.4铁盐母液药品100x g/L500mlFeSO4•7H2O 2.78g 1.39gNa2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,加水定容至500ml,置于小口瓶中,贴上标签2、固体MS培养基材料•找到4种母液:大量元素,微量元素,有机微量元素,铁盐母液•蔗糖,琼脂锥形瓶MS培养基配方:母液都稀释至1xMS培养基配方(1L)母液体积或重量(1L) 200ml大量元素20x50mL 10ml铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml有机100x10mL 2ml 蔗糖15g(15g/L)3g琼脂8g(8g/L) 1.6gPH先调至 5.85-5.88,最终灭菌后pH接近5.81)。
一、MS培养基母液的配制注意:1.除CaCl2·2H2O单独配制外,大量元素按照使用时高10倍的数值称取,将各种化合物称量后,分别用少量水在不同的容器内充分溶解,然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液,加适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
B.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一.养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积(CC)×——————————母液浓缩倍数(二)各种母液按顺序编号排列A.大量元素;B.CaCl2.2H2O;C.微量元素;D.铁盐;E.有机物;F.生长素萘乙酸(NAA):配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml;G..细胞分裂素、激动素(KT)配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
MS培养基的配制步骤大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5?5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入:2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、[烈宜醄NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0?1 mg/mL)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6-BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L 的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0?1 mg/mL 的母液。
植物组织培养MS培养基配方(一)母液配制与保存配制培养基时,如果每次配制都要按着杨成分表依次称量,既费时,又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率,一般将常用的基本培养基配制成10~200倍,甚至1000倍的浓缩贮备液,即母液。
母液贮存于冰箱中,使用时,将它们按一定的比例进行稀释混合,可多次使用,并在配制较多数量的培养基时,降低工作强度,也提高试验的精度。
基本培养基的母液有四种:大量元素(浓缩20倍),微量元素(浓缩100倍),铁盐(浓缩200倍),除蔗糖之外的有机物质(浓缩100倍)1大量元素配制大量元素母液时要分别称量,分别溶解,在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中,以防出现沉淀。
倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保存。
表1大量元素母液(配1L20倍的母液)2微量元素母液在配制微量元素母液时,也应分别称量和分别溶解,定溶时不分先后次序,可随意加入溶量瓶中定容(表2),一般不会出现沉淀现象。
倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保有存。
由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用,只有基螯合物才能被植物吸收利用,因此需要单独配成螯合物母液表3)。
配制方法:称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠,分别用450ml的去离子水溶解,分别适当加热不停搅拌,分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中,将两种溶液混合在一起,最后用去离子水定溶于1000mL,倒入棕色贮液瓶中,贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存注意配制时,应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。
混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中4、有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物,分别溶解后,用蒸馏水或去离子水定容于1000mL,放入细口瓶中备用,贴好标签于4℃冰箱中低温保存。
一、MS培养基母液的配制注意:1.大量元素按照使用时高10倍的数值称取,分别将各种化合物称量后,除CaCl2·2H2O单独配制外,其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
1.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
2.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
.生长调节剂母液配制:为了操作方便,节约时间,生长调节剂也可如同配制母液一样,先配成原液,这样配制培养基时只要稍加计算,按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水,可用少量不同的溶剂先溶解,萘乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA),赤霉素(GA3),2,4-D等生长素和玉米素(ZT)可先用少量95%酒精溶解,然后加水,如溶解不完全再加热。