动物细胞传代培养技术

• 这里，胰酶消化的程度是一个关键：消化过度则 对细胞的活性损伤较大，并有部分细胞漂浮，随 弃去的胰酶流失；消化不足则细胞难于从瓶壁上 吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。 • 影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活 性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反 复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的 温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以 及所加胰酶溶液的多少等。
2悬浮细胞的传代
• • • • 离心， 弃上清液， 加新鲜培养基， 分装传代。
二 细胞系的维持
• 1 做好细胞系的档案记录工作
• 2 遵来自百度文库细胞生长的规律 • 3 防止细胞间交叉污染 • 4 及时冻存放丢失
第四节动物细胞传代培养 技术
一、原代培养的首次传代
• 1 待细胞生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表 面后再传代 • 2 传代时不同细胞有不同的消化时间需注 意观察及时处理，原代消化时间长于传代 • 3 首次传代细胞接种量要多一些，尽快适应 新环境。
二 细胞传代方法
• 1、贴壁细胞的传代方法： • 贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生 长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多， 同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对 细胞进行传代扩增。 • 对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后 分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以 胰酶消化后再吹散分瓶，一般过程为 （以下操作 均按无菌操作的要求进行）：
• 将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃 去； • 加入0.25%胰酶溶液，视细胞瓶的大小加入体积 为0.5ml或更多，以使充分浸润； • 一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶壁半透 明的细胞层，当见到出现细针孔空隙时，弃去胰 酶溶液，并加入适量的细胞培养液终止消化； • 视实验要求分入多瓶继续培养，一般为一传二到 一传四的比例。