盐酸二甲双胍化验试剂配制方法

HPLC法测定盐酸二甲双胍的不确定度分析1.目的对高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍含量进行不确定度分析，找出影响不确定度的因素，分析不确定度来源，给出分析结果的不确定度，使之符合测量不确定度指南和客户对检测结果的要求。

2.不确定度分析2.1测量方法简述依据《药品补充检验方法和检验项目批准件（批准件编号2009029）》“二、高效液相色谱法(2)”。

2.1.1对照品溶液的制备取盐酸二甲双胍对照品适量置25ml容量瓶，加甲醇溶解至刻度，临用时取10ml与另一对照品溶液等量混合（10ml+10ml）。

2.1.2样品溶液的制备称取一次口服剂量的待测样品，加三氯甲烷20ml，超声10min，过滤，滤渣挥干，加甲醇20ml，超声10min，过滤，滤液作为供试品。

2.2仪器设备：CPA225D 电子天平仪器编号：A-LH2-48 U=0.02mg，k=2YP1002N 电子天平仪器编号：A-LH2-45 U=10mg，k=2岛津LC-20A HPLC色谱仪仪器编号：A-LH2-7625mL量瓶，容量允差±0.03mL（A级）10mL移液管，容量允差±0.02mL（B级）环境条件：（20±3）℃，相对湿度≤60%3．不确定度分量的来源及其分析4.不确定度分量评定 4.1对照品A ：称取对照品的不确定度u rel (m s )：检定示值误差（检定证书）：0.02mg 按B 类不确定度，矩形分布分析： u c =0.02/3=0.0115 mg则对照称量的合成相对不确定度为（称取量m s =10mg ）： u rel （m s ）=0.0115/10=0.00115B ：对照品溶液用25ml 定容的不确定度u rel.c (25ml)1） 25ml 容量瓶允差为±0.03ml 按B 类不确定度，三角形分布分析：)1(c u =0.03/3 =0.018ml ； 2）温度效应：实验室温度变化约为±3℃，对照品用甲醇溶解，甲醇的体积膨胀系数约为1.2×10-3℃-1，温度影响的体积变化：ΔV=α×Δt×V=1.2×10-3×3×25=0.09ml ，按矩形分布)2(c u =0.09/3=0.05196mLu(25ml) =)2()1(22c c u u +=2205196.0018.0+=0.055u rel （25ml ）=0.055/25=0.0022C:对照品用10ml 移液管等体积稀释的不确定度1）10ml 移液管允差为±0.02ml 按B 类不确定度，三角形分布分析：)3(c u =0.02/3 =0.0115ml ； 2）温度效应：实验室温度变化约为±3℃，对照品用甲醇溶解，甲醇的体积膨胀系数约为1.2×10-3℃-1，温度影响的体积变化：ΔV=α×Δt×V=1.2×10-3×3×10=0.036ml ，按矩形分布)4(c u =0.0036/3=0.02079mLu(20ml) =)4(2)3(222c c u u +=2202079.0*20115.0*2+=0.034u rel （20ml ）=0.034/20=0.0017 4.2重复性平行制备7个平行样，上机测定，结果重复性： RSD （x ）=1.36% (n=7)，可直接作为不确定度。

盐酸二甲双胍生产操作法生产前准备工作生产设备、动力设备的检查1．检查反应锅所有阀门开、关是否良好，必须保持良好：2．投料前必须保持所有阀门呈关闭状态：3．检查所有安全阀，真空表，压力表等是否良好，必须保持良好；4．检查反应锅减速器极端面轴封是否保持良好，必须保持良好；5．检查真空干燥机运转及其管道系统是否正常，必须保持良好精致工段）6．检查压滤器及其管道系统，安全阀是否正常，必须保持良好（缩合工段）7．检查水冲泵、真空泵、真空储气罐及真空管道系统、空压机及其管道系统是否良好，必须保持良好；8．检查能源系统：蒸汽压力、冷却水压力、冰盐水温度是否达到生产要求，必须符合生产要求；9．检查计量设备及系统：磅秤是否正常、各计量高、低位液位管是否正常，必须保持正常；10. 检查生产操作作用是否齐全：11. 检查劳防用品的配备及穿戴。

生产原料的检查1．检查生产所需各种原料是否准备足量：2．检查各种原料是否具有合格证。

生产操作一）成盐工序：1、备料：（1）二甲胺水溶液：188kg 、（2）盐酸1: 196kg;2、按规定检查复核场地、设备是否清洁，检查并复核所用原料批号、规格、数量是否正常，记录反应锅编号：3、检查冰盐水温度。

关闭反应锅底阀、及其他阀门，开反应锅夹套冰盐水进、回阀进行冷却；4、称料前按规定复核磅称，将盐酸备入高位，二甲胺水溶液计量好，将锅内真空拉到—800Mpa 时关闭真空阀，打开进料阀用余真空将二甲胺水溶液抽入反应锅内，开启搅拌；5、当锅内温度冷却至20C以下时，打开盐酸阀开始加盐酸，控制锅内温度在26C以下;6、滴加盐酸至196kg后停止滴加，搅拌5—6分钟，打开人孔盖,测pH=1 —2，在搅拌 5 分钟复测pH=1—2 不变时，关闭人孔盖，关闭两只盐酸阀，滴加盐酸完成;7、关闭冰盐水进、回阀、打开锅子夹套空亚阀和盐水压回阀，将夹套冰盐水压回盐水箱，等压力表指针退到0 时，关闭夹套盐水压回阀和空压阀;8、打开锅子夹套蒸汽进、回阀，打开蒸馏冷凝器冷却水进、回阀，同时打开蒸馏阀、酸水低位的真空阀和酸水蒸出阀，开始减压蒸水，锅内真空度要求为—0.09Mpa 以下，锅内温度控制在130C以下，蒸净酸水得到白色蓬松状粉末即为二甲胺盐酸盐；9、关闭锅子夹套蒸汽进、回阀，当锅内真空度在—0.09Mpa 以下时（保留真空），关闭搅拌、蒸馏阀、酸水低位的真空阀、酸水真空阀；10、打开酸水低位放空阀和底阀，将费酸水放入废水池，放完后关闭酸水低位放空阀和底阀；11、注意事项：1）盐酸属于强腐蚀剂，要求在抽取时必须戴好防护面罩和防护手套，以免盐酸灼伤肌肤，如果有盐酸洒在衣服或皮肤上，应该立即用自来水冲洗；2）二甲胺水溶液是易燃、易挥发、有浓重氨味的液体，在抽取该原料时应该尽量避免洒出，也不要近距离嗅闻，以免伤害呼吸道，严禁明火接触；3）滴加盐酸速度不宜过快，减压蒸水保持真空度在—0.09Mpa以下，蒸水必须蒸干蒸净；二）缩合工序：1、备料二甲胺盐酸盐（成盐工序的整批料）、双氰胺：125kg、异戊醇：500kg、自来水：100kg;2、打开异戊醇低位底阀和放空阀，开启锅子异戊醇进料阀，用锅内余真空将计量好的异戊醇抽入锅内，如果余真空不能完全将异戊醇抽入锅内，可打开锅子真空阀将异戊醇全部抽入锅内，关闭异戊醇低位底阀和放空阀、锅子异戊醇进料阀和真空阀，打开锅子放空阀和人孔盖，将预备好的125kg双氰胺投入锅内，关闭锅子放空阀和人孔盖；3、开启搅拌，打开蒸馏阀、酸水蒸出阀和低位放空阀、夹套蒸汽进、回阀，升温至锅内温度128C时，关闭酸水蒸出阀和低位放空阀，前蒸馏物弃去。

一种盐酸二甲双胍的制备方法
嘿，你知道吗，今天我要给你讲讲一种盐酸二甲双胍的超级有趣的制备方法！
想象一下啊，这就好像是在搭建一个小小的化学城堡。

首先呢，我们要准备好各种材料，就如同给城堡准备好坚固的基石一样。

比如说，我们需要这个，需要那个（具体材料）。

然后呢，就像雕琢城堡的细节一样，开始一步步地操作啦。

哇，在这个过程中，每一步都好关键啊，稍有不慎可能就前功尽弃啦！你说是不是很刺激？但别担心，只要认真跟着来，肯定没问题！
接着，就会看到神奇的化学反应发生啦，就好像是城堡一点点地展现在眼前，那种感觉，哎呀，真的太奇妙啦！比如说（具体反应现象），哇，真的太有意思了！
等完成了所有步骤，嘿，盐酸二甲双胍就成功制备出来啦！就好像城堡终于完工，骄傲地矗立在那里。

怎么样，这个制备方法是不是超级吸引人？快来试试吧！我觉得这种制备方法真的是超级有趣又充满挑战，让人一旦开始就停不下来啊！。

HPLC法测定盐酸二甲双胍中二甲双胍的含量目的：通过HPLC方法测定二甲双胍在盐酸二甲双胍片剂中的含量。

方法：在色谱条件：选择Hypersil CN（200 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，流动相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（32∶78），检测波长：234 nm，进样量10μl，1.0 mL/min流速，柱温为室温（30℃）条件下进行检测。

结果：二甲双胍在2.56ug·mL-1-64.00ug·mL-1范围内线性关系良好，线性方程为：Y =65347X-324521（r=0.9996），平均回收率为100.46%，RSD为1.43%。

结论：采用高效液相色谱方法，可有效评估盐酸二甲双胍片剂中二甲双胍的含量，本法结果准确、方法简单、灵敏度高。

标签：HPLC法；二甲双胍；盐酸二甲双胍；含量二甲双胍是目前治疗2型糖尿病的首选药物，目前对于盐酸二甲双胍的含量测定方法较多，紫外及高效液相等检测方法，都有相继报道[1]。

考虑到紫外检测不能有效分离制剂中有关物质，所测结果准确性不高，故考虑分析高效液相法对盐酸二甲双胍片剂检测的有效性，结果报道如下：1 材料1.1 仪器与试药岛津LC-20A 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；乙腈由国药集团化学试剂有限公司提供，为色谱醇；磷酸、磷酸二氢钾均为分析纯；盐酸二甲双胍对照品（中国药品生物制品检定所，批号：150913-151102）；盐酸二甲双胍胶囊（常州兰陵制药有限公司，国药准字H11021518，批号为：140923、150316、150728）。

2 方法与结果2.1 方法学验证2.1.1 色谱条件色谱柱选择Hypersil CN（200 mm×4.6 mm，5 μm），，流动相：乙腈：0.01 mol/L 磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（32∶78），检测波长：234 nm，进样量10μl，1.0 mL/min流速，柱温为室温（30℃）。

盐酸二甲双胍质检方法一：质量指标二：质量检验方法1、外观性状目测颜色、颗粒形状，本品应为白色结晶或结晶性粉末，用鼻测其气味，几乎无臭。

2、溶解性（澄清度）盐酸二甲双胍分别能溶于水合甲醇中，且水中的溶解度要远比甲醇中大。

精确称量1.000g盐酸二甲双胍，加10mL水于比色管中，待完全溶解后，比色管从上往下看，如果纯清则表示其在水中的澄清度合格；同样精确称量1.000g盐酸二甲双胍，加30mL甲醇于比色管中，边晃动边使其慢慢溶解，待完全溶解后，比色管从上往下看，如果纯清则表示其在甲醇中的澄清度合格。

3、干燥失重精确称重1.000克样品于一称量皿中，放于105℃干燥炉中4小时至恒重，取出后放于一干燥皿中至室温，称重计算，减重不超过0.5%为样品合格。

计算方法如下：干燥失重=（m样—m干）÷m样4、炽灼残渣600度坩埚，先在高温箱中600℃加热1小时，而后取出放入干燥皿中冷却，精确称重。

准确称重1.000g样品放于坩埚中，直接放电炉加热至没有青烟（约半小时左右）凉至室温加0.5mL 硫酸，继续放电炉加热至无烟(低温加热至硫酸蒸汽，全部除尽)，而后放于600度高温炉中2小时，取出放于干燥皿中完成冷却，精密称量后，再在600-800℃炽灼至恒重，称重计算，小于0.1%为合格。

计算：A最后残渣质量÷m样品质量5、有关杂质（双氰胺对照试验）取二甲样品0.5g，加无水甲醇5mL（沿壁加入）于试管1中，水浴加热至完全溶解（加热取出多次，防止沸出试管），而后自然降温至35度，再加5mL乙醚搅拌冷却至20度，静止30分钟，用滤纸过滤，再用2.5mL乙醚洗试管，同样过滤合并滤液。

滤液。

滤液置水浴上蒸发至干，（可先用电炉蒸干一部分水），残渣加水0.5mL溶解，作为备用样品。

双氰胺对照试样，取双氰胺对照品0.004g，溶于10mL水中，作为备用对照（即没1mL中含0.4mg）展开剂配比：正戊醇、吡啶、水（1:2:1.8），分别取样品5mL、10mL、9mL混合于瓶中备用。

血清中盐酸二甲双胍含量测定方法的建立和考核前言盐酸二甲双胍(metformin hydrochloride)是属于双胍类降血糖药物，该药在临床上使用多年，有很好的安全性和有效性。

临床上主要用于II型糖尿病患者的治疗。

本药可以单独使用或与磺脲类药物联合使用。

本文参考文献报道的方法，并对测定方法进行了改进，改进后的方法样品处理更简单，在保持精密度和准确度的情况下，所建立的方法在灵敏度方面也能够满足药代动力学研究的要求。

材料和方法1．药品和仪器1．1药品和试剂标准品：盐酸二甲双胍，北京德众万全药物技术开发有限公司提供，含量99.7％。

试剂：乙腈为美国Fisher产色谱纯乙腈，所用的其它试剂均为分析纯，试验中各种溶液的配制均使用双蒸馏水。

试验中使用的空白血清为购自北京红十字会血站。

1.2仪器和色谱条件Agilent 1100液相色谱仪系统，由单元泵、自动进样器、紫外检测器、色谱工作站组成，以上各部分均由美国Agilent公司生产。

色谱条件为：Alltima sillica色谱柱(150mm×4.6mm 5μm)；流动相为乙腈：pH7.0 0.05mol/L磷酸盐缓冲液=40：60；流速为1ml/L；检测波长为233nm；柱温为室温；进样量为40μl。

1.3贮备液的制备盐酸二甲双胍贮备液：称取适量的盐酸二甲双胍细粉于容量瓶中，用水溶解并稀释成50μg/ml的溶液作为贮备液，于冰箱中保存。

1.4血样处理方法精密量取0.25ml含有药物的血清，精密加入0.5ml乙腈(1:2)，振摇30秒后，4000r/min离心10min后，取出上清液，于自动进样器小瓶中直接进样分析。

1.5标准曲线和质控样的制备用贮备液和空白血清以三倍稀释的方式制备2.54, 0.847, 0.282, 0.094, 0.031, 0.011μg/ml的盐酸二甲双胍标准曲线溶液。

按照血样的处理方法进行试验，以盐酸二甲双胍的浓度对其峰面积进行线性回归。

ＨＰＬＣ法测定盐酸二甲双胍片的含量目的：用HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量。

方法：采用Diamond C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液含0.015 mol/L高氯酸（pH3.0）；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：218 nm，以峰面积计算。

结果：在0.1~0.3 mg/ml范围内盐酸二甲双胍片的峰面积和浓度呈良好的线性关系，r=0.999 4。

结论：本法简便、快捷、灵敏，可作为盐酸二甲双胍片质量控制的有效方法。

[Abstract]Objective:To establish an HPLC method for the content determination of Metformin Hydrochloride Tables. Methods:Analytical column was Diamond C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，the mobile phase consisted of 0.01 mol/L postassium dihydrogen phosphate and 0.015 mol/L perchloric acid, the flow rate was 1.0 ml/min,UV detection was set at 218 nm and the peak area was calculated.Results:The linear range of metformin hydrochloride was 0.1~0.3 mg/ml,r=0.999 4.Conclusion:The method is simple，rapid and accurate.It can be used for the quality control of Metformin Hydrochloride Tablets.[Key words]HPLC;Metformin hydrochloride;Content determination盐酸二甲双胍是一种双胍类口服降糖药，用于非胰岛素依赖型糖尿病的治疗。

血浆盐酸二甲双胍的检测及药物动力学研究【摘要】目的建立高效液相色谱法测定人血浆中盐酸二甲双胍浓度的方法。

方法血浆样品用10%高氯酸沉淀血浆蛋白后，以苯乙双胍为内标物，高速离心后取上清液进行分析。

色谱柱为lunaC8(4.3mm×280mm，6μm)，柱温为37℃，流动相为乙腈—磷酸盐缓冲液(含0.1％十二烷基硫酸钠和0.1％三乙胺，pH6.5)一乙腈(62:38)流速为0.9ml/min，检测波长：287nm。

结果盐酸二甲双胍的浓度在0.08～ 6.00mg/L范围内线性关系良好，回归方程为Y=0.7002C+0.0008(r=0.9698)，日内和日间精密度(RSD)均小于10％；检测限为0．6ng；检出浓度为45ng/ml～1150ng/ml。

结论本方法操作简便，适用于盐酸二甲双胍血药浓度的测定及药物动力学研究。

【关键词】盐酸二甲双胍；高效液相色谱法；血药浓度盐酸二甲双胍(metofrminhydrochloride，MH)是双胍类降糖药，可用于单纯饮食控制和/或运动疗法血糖水平未得到满意控制的Ⅱ型糖尿病病人；亦可作为单用磺脲类或盐酸二甲双胍治疗血糖水平未得到满意控制的Ⅱ型糖尿病病人的二线用药的降糖药。

主要机制为抑制糖的吸收、增加糖的利用和异生，与磺脲类降糖药相比，盐酸二甲双胍不增加体重。

且耐受性好。

对于血中盐酸二甲双胍其浓度测定，国内外多见报道[1]。

本实验依托各相关文献研究的基础，改良并建立起一种高灵敏度且操作步骤简单的高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍血浆浓度的方法：1试药与仪器1.1药品与试剂盐酸二甲双胍片剂制粉，含量99.6％(贵州天安药业股份有限公司提供)；内标苯乙双胍(山东科源)；高纯色谱级别乙腈；MKP、N,N-二乙基乙胺、发泡粉(天津）、磷酸等均为分析纯；三蒸水为本药剂科室自制。

1.2仪器日本岛津LC-6A型高效液相色谱仪，sPD 6A V紫外可见光检测器(日本岛滓)，LG-6A泵和C-R6A积分仪、CT06A柱温箱、手动进样阀，WH-2000色谱工作站；AG285电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；恒温水箱（江苏中大420型）；DT5-2自动平衡台式离心机(北京时代)；XW-80A旋涡混合器(上海琪特分析仪器有限公司)，微量进样器。

反向高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量重庆国舒制药有限公司重庆 401338重庆国泰康宁制药有限责任公司重庆 401520摘要目的：建立高效液相色谱法检测成品中盐酸二甲双胍的含量。

方法：采用高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片成品的含量，色谱柱为C18（4.6mm×250mm，5μm），以1.7%磷酸二氢铵缓冲液（取磷酸二氢铵17g，用水稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至3.2）为流动相，流速为2.0ml/min，柱温：40℃，检测波长：230nm。

结果：HPLC法能准确检测盐酸二甲双胍片的含量。

盐酸二甲双胍对照溶液进样体积为10μl时，在0.126mg/ml～0.502mg/ml浓度范围内线性关系好，线性方程为y=115793.4993x+61202.9655（相关系数r=1.0）；加样回收率回收率在99.7%~99.9%范围内，平均值为99.8%（n=9），RSD为0.45%。

结论：本高效液相色谱条件的专属性强、准确度高，重复性好，可作为盐酸二甲双胍片的含量控制方法。

关键词盐酸二甲双胍片；高效液相色谱法；盐酸二甲双胍；含量盐酸二甲双胍片在临床上主要用于单纯饮食控制不满意的II型糖尿病病人，尤其是肥胖和伴高胰岛素血症者，用本药不但有降血糖作用，还可能有减轻体重和高胰岛素血症的效果。

对某些磺酰脲类疗效差的患者可奏效，如与磺酰脲类、小肠糖苷酶抑制剂或噻唑烷二酮类降糖药合用，较分别单用的效果更好。

亦可用于胰岛素治疗的患者，以减少胰岛素用量[1]。

本品属于要求一致性评价的基本药物，我公司在该品的一致性评价过程中，由于《中国药典》2015年版以及《美国药典》对盐酸二甲双胍片的含量测定方法均采用紫外-可见分光光度法，由于该方法专属性不强，测定误差大，因此笔者摸索出一套高效液相色谱法测定本品的含量，现报道如下：1仪器与试药1.1仪器岛津LC-2030 HPLC色谱仪，紫外检测器；BS124S电子天平（赛多利斯天平）。