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鱼精蛋白研究及发展前景摘要：鱼精蛋白是存在于各类动物精巢组织中的一种多聚阳离子肽，具有高效、安全、功能性等特点，是值得开发的一种新型天然食品防腐剂。
对鱼精蛋白的来源、组成及提取工艺、抗菌特性、缺陷、毒性和存在的问题及展望等方面进行了简述。
关键词：鱼精蛋白防腐剂毒性缺陷前景目前食品工业中大量使用的防腐剂主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐、对羟基苯甲酸酯等等。
尽管以上几种化学防腐剂具有不同的杀菌能力，但同时也具有不同的程度的安全问题。
目前消费者越来越倾向于天然无毒食品，因而从各种动植物中寻找、提取安全无毒的防腐剂便成了食品添加剂行业最大的热点。
在此背景下，以海产鱼类精巢为原料分离得到的具有广谱抗菌作用的鱼精蛋白，作为一种天然的食品防腐剂，越来越成为各国食品行业的关注的焦点。
鱼精蛋白是一种天然抗菌物质，属于多聚阳离子天然肽类，自1937年Mc Clean 等报道了鱼精蛋白具有抑菌活性以来，作为化学行业的替代品便开始在食品行业崭露头角。
目前，鱼精蛋白在食品工业中的应用越来越广泛，与化学合成防腐剂相比，具有安全性高、防腐性好、热稳定等优点，而且，鱼精蛋白还具有很高的营养性与功能性，例如能降血压、助呼吸、促消化、抑肿瘤、抗血栓、强化肝功能、抑制血液凝固等。
1鱼精蛋白的来源、组成及提取、纯化（1）鱼精蛋白的来源和组成鱼精蛋白又称精蛋白，是一种碱性蛋白质，以所谓的鱼精核蛋白的形式存在，是一种小且简单的球形碱性蛋白质，分子量小，通常在一万以下，通常是由三十个氨基酸组成。
目前，已从许多的鱼类（鲑鱼、鲱鱼、红鳟鱼等）和哺乳动物类（如老鼠、人、公野猪等）的成熟精巢中提取出鱼精蛋白。
按氨基酸的组成和数量的不同可将其分为三种：①单鱼精蛋白，碱性氨基酸只含精氨酸一种；②双鱼精蛋白，碱性氨基酸除精氨酸外，还含有组氨酸或赖氨酸；③三鱼精蛋白，碱性氨基酸含有精氨酸、组氨酸、赖氨酸三种；事实上鱼精蛋白的成分不是单一成分，而是由数种非常类似的成分组成的混合物。
本法系比较肝素标准品(S)与供试品(T)延长新鲜兔血或猪、兔血浆凝结时间的程度,以测定供试品的效价。
肝素标准品溶液的配制精密称取肝素标准品适量，按标示效价加0.9％氯化钠溶液溶解使成几种不同浓度的溶液，相邻两种浓度每1ml中所含肝素单位数相差应相等,且不超过5个单位，一般可配成每1ml中含85、90、95、100、105、110、115、120、125等单位的溶液。
供试品溶液的配制供试品如为粉末，精密称取适量,按干燥品计算，加0.9％氯化钠溶液溶解使成每1ml中含1mg的溶液。
供试品如为注射液,则按标示量加0.9％氯化钠溶液稀释至同样浓度。
血浆的制备按肝素生物检定法中血浆制备法制备(附录Ⅻ D)。
检定法取管径均匀(0.8×3.8cm)清洁干燥的小试管8支,第1管和第8管为空白对照管，加入0.9％氯化钠溶液0.2ml，第2～7管为供试品管，每管均加入供试品溶液0.1ml,再每管分别加入上述一种浓度的肝素标准品稀释液0.1ml,立即混匀。
取刚抽出的兔血适量，分别加入上述8支试管内,每管 0.8ml，立即混匀，避免产生气泡,并开始计算时间，将小试管置37±0.5℃恒温水浴中,从采动物血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过2分钟；如用血浆,则分别于上述各管中加入0.7ml的血浆，置37±0.5℃恒温水浴中预热5～10分钟，每管分别加入1％氯化钙溶液0.1ml，立即混匀，避免产生气泡,并开始计算时间。
观察并记录各管凝结时间。
结果判断两支对照管的凝结时间相差不得超过1.35倍。
在供试品管的凝结时间不超过两支对照管平均凝结时间150％的各管中，以肝素浓度最高的一管作为终点管。
同样重复5次，5次试验测得终点管的肝素浓度,相差不得大于10个单位。
5次结果的平均值，即为硫酸鱼精蛋白供试品(干燥品)1mg中和肝素的单位数。
硫酸鱼精蛋白生物测定法一、兔全血法1 实验材料及用具1.1 天平精度0.01mg或0.1mg 肝素标准品或供试品称量用精度1mg 试剂称量用精度10g 家兔称重用1.2 恒温水浴37℃±0.5℃。
1.3 压板测凝器或测凝棒。
1.4 实验用具兔固定板、注射器及取血用针头、吸管、移液管、烧杯、带塞玻璃小瓶、小试管（0.8cm×3.8cm或1.0cm×7.5cm，有1ml刻度）、试管架、不锈钢或细玻璃搅棒、记时器、安瓿、脱脂棉、纱布、线、绳。
1.5 手术用器械剪毛剪、手术刀、直镊、止血镊、眼科直镊、眼科弯镊、动脉夹。
1.6 试剂局部麻醉剂（如普鲁卡因）、氯化钠。
2 溶液配制2.1 生理盐水称取氯化钠适量，加水配成0.9%溶液。
2.2 1%普鲁卡因溶液称取普鲁卡因粉末适量，用生理盐水配成1%溶液。
2.3 肝素标准品溶液2.3.1 取肝素标准品，放置至室温。
2.3.2 割开标准品小管（注意勿使玻屑掉入），精密称量，置小烧杯中。
2.3.3 将称得的毫克数，乘以标示单位数，得总单位数。
2.3.4 精密加生理盐水，配成200U/ml溶液，密塞，置4~8℃保存备用，可在一周内使用。
2.4 肝素标准品稀释液2.4.1 实验当日，取肝素标准品溶液，放置至室温。
2.4.2 精密量取标准品溶液一定量，用生理盐水配成85、90、95、100、105、110、115、120、125U/ml的标准品稀释液。
2.5 供试品溶液2.5.1 粉末实验当日，精密称取供试品适量，按干燥品计算，用生理盐水溶解配成1mg/ml的溶液，充分混匀。
2.5.2 注射液2.5.2.1 取供试品，放置至室温，割开安瓿。
2.5.2.2 精密量取安瓿内溶液一定量，按标示含量计算，加生理盐水稀释成1mg/ml的溶液。
3 实验动物健康无伤，体重2.5kg以上的家兔，雌雄均可，雌者无孕。
4 检定法4.1 实验当日，将实验动物仰卧固定在手术台上，剪去颈部的毛，或用生理盐水湿润的棉花或纱布，将毛向两侧分开，皮下注入1%普鲁卡因溶液20ml，10~20min后，用手术刀沿颈部正中线切开皮肤，用止血钳、镊小心分离开肌肉和血管，暴露并剥离一侧颈动脉一段约3cm长，两端分别用动脉夹夹住，或结扎远心端，用另一较粗的棉线在此段血管下穿过，打一活结，于棉线结扎处刺一小孔，做好取血前的准备。
临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical2018 年第 5 卷第 54 期2018 Vol.5 No.5441・实验研究・硫酸鱼精蛋白的液相分析方法在预混胰岛素及胰岛素类似物中的应用及思考秦丽静，田雪华（通化东宝药业股份有限公司，吉林 通化 134123）【摘要】通过对胰岛素及胰岛素类似物的预混制剂中的鱼精蛋白的测定，确认硫酸鱼精蛋白的液相分析方法可用于预混型胰岛素制剂生产过程的控制，以及鱼精蛋白原料药的质量控制，但不能很好的用于预混型胰岛素制剂产品的稳定性研究等质量控制。
【关键词】预混双时相胰岛素制剂；硫酸鱼精蛋白；工艺过程控制；稳定性质量研究【中图分类号】R587.1 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2018.54.41.02随着国民生活水平的提高，中国的糖尿病患病率逐年增加，目前中国已成为糖尿病的患病率大国。
国内各大制药企业也均将研发精力转移到了糖尿病治疗领域，虽然目前已研发出了许多治疗糖尿病的药物，但到目前为止，最安全有效，积累治疗经验最丰富的药物仍是胰岛素类产品。
胰岛素也由最初的从猪、牛或羊的胰腺中提取的粗产品，到利用重组发酵技术生产的重组人胰岛素，直到目前利用基因工程技术对氨基酸序列及结构进行局部修饰，合成的人胰岛素类似物。
由于地域及生活习惯等特点，中国糖尿病患者人群以2型糖尿病为主，且具有患病初期胰岛β细胞功能受损严重、第一时相胰岛素分泌缺乏明显、空腹和餐后血糖同时不达标的患者比例高等特点[1]。
为了进一步改善胰岛素的起始治疗现状，使治疗更符合生理需求，各种胰岛素制剂也应运而生，其中预混胰岛素制剂因为可兼顾空腹及餐后血糖控制，使用更安全、灵活方便成为较理想的选择。
据不完全统计，约占70%的中国的糖尿病患者均使用的是预混型胰岛素。
目前治疗糖尿病的预混型胰岛素类产品主要为两类，一类是目前新研制出来并应用于临床的，以不同胰岛素类似物混合配制的双胰岛素制剂，如目前的德谷门冬双胰岛素，就是由德谷胰岛素联合门冬胰岛素组成的新一代基础餐时双胰岛素制剂[2]。
据中国市场调研在线了解精蛋白锌胰岛素注射液为含有鱼精蛋白与氯化锌的胰岛素(猪或牛)的灭菌混悬液。
每100单位中含鱼精蛋白1.0～1.5mg与锌0.2～0.25mg。
用于治疗中、轻度糖尿病患者，重症须与正规胰岛素合用，有利于减少每日胰岛素注射次数，控制夜间高血糖。
>>>更多信息请参考中国市场调研在线使用精蛋白锌胰岛素注射液有何不良反应?市场研究表明精蛋白锌胰岛素注射液是一种长效动物胰岛素制剂。
皮下注射后，在注射部位逐渐释放出游离胰岛素而被吸收。
本品药理作用与胰岛素相同，主要药效作用为降血糖。
胰岛素对糖、蛋白质、脂肪的代谢和贮存起多方面的作用：①促进肌肉、脂肪组织等对葡萄糖的主动转运，促进葡萄糖分解代谢、生成能量，或是以糖原或甘油二酯的形式贮存起来;②促进肝摄取葡萄糖并转变为糖原;③抑制肝糖原分解及糖原异生，抑制肝葡萄糖的输出;④促进许多组织对糖、蛋白质、脂肪的摄取，同时促进蛋白质的合成以及抑制脂肪细胞中游离脂肪酸的释放，抑制酮体生成，而调节物质代谢。
对于胰岛素分泌有缺陷或不足的糖尿病患者，注射外源性胰岛素可在一定程度上纠正各种代谢紊乱，主要是降低血糖，并可延缓或防止糖尿病慢性并发症的发生。
精蛋白锌胰岛素注射液的不良反应：1.低血糖反应：为胰岛素使用不当所致，胰岛素过量、注射胰岛素后未及时进餐或进行较剧烈的体力活动(肌肉摄取葡萄糖增加)时，易发生低血糖反应。
低血糖反应的早期症状为无力、饥饿、眼花、出冷汗、皮肤苍白、心悸、兴奋、手抖、神经过敏、头痛、颤抖等类似交感神经兴奋的症状;进一步发展为抑郁、注意力不集中、嗜睡、缺乏判断和自制力、健忘，也可有偏瘫、共济失调、心动过速、复视、感觉异常，严重者可惊厥和昏迷。
2.过敏反应：过敏反应可为全身性及局部性的过敏，局部性过敏表现为注射部位出现红斑、丘疹、硬结，一般发生在注射胰岛素后几小时或数天。
全身性过敏反应在注射胰岛素后立即发生，全身出现荨麻疹，可伴有或不伴有血管神经性水肿、呼吸道症状(如哮喘、呼吸困难)以及极为少见的低血压、休克甚至死亡。
硫酸鱼精蛋白含量标准品硫酸鱼精蛋白含量标准品是一种常用的实验室试剂，用于测定药品、食品、化妆品等中鱼精蛋白含量的定量分析。
在进行定量分析实验时，需要标准品来建立校准曲线，从而准确测定样品中鱼精蛋白的含量。
以下将详细介绍硫酸鱼精蛋白含量标准品的制备方法、特点及应用。
1.制备方法1)选取高纯度的鱼精蛋白作为原料。
2)按照一定比例将鱼精蛋白与硫酸溶液混合，形成含有一定浓度鱼精蛋白的溶液。
3)对溶液进行混合、搅拌、搅匀等处理，确保鱼精蛋白能够均匀分散在溶液中。
4)进行多次反复的稀释、混合、搅拌等操作，使得溶液中的鱼精蛋白浓度具有一定的均匀性。
5)按照一定的标准浓度进行配比，制备出一系列含有不同浓度鱼精蛋白的标准品。
2.特点1)高纯度：原料鱼精蛋白需要经过一系列的洗涤、分离、纯化等处理，确保其纯度较高，以提高标准品的准确性和可靠性。
2)稳定性：标准品制备时需严格控制操作条件，保证每个批次制备的标准品具有一致的含量，并降低批次间的差异性。
3)可溶性：标准品中的鱼精蛋白需具有良好的溶解性，以确保样品在分析时能够均匀分散在溶液中，避免测定误差的产生。
4)易储存：硫酸鱼精蛋白含量标准品一般采用密封包装，防潮、防光、防氧等，以保证其存储期限和使用寿命，减小质量的波动。
3.应用1)药物研发：用于评价药物对鱼精蛋白的影响，评估其对鱼精蛋白的亲和性、结合能力等。
2)食品质量检测：用于测定食品中鱼精蛋白的含量，评估食品的营养成分和品质。
3)化妆品生产：用于测定化妆品中鱼精蛋白的含量，判断产品的安全性和有效性。
4)环境检测：用于分析水体、土壤等环境中鱼精蛋白的含量，评估环境的污染程度。
综上所述，硫酸鱼精蛋白含量标准品是一种常用的实验室试剂，具有高纯度、稳定性、可溶性和易储存等特点。
其应用广泛，可以用于药物研发、食品质量检测、化妆品生产和环境检测等领域。
标准品的制备方法和特点对于保证测定的准确性和可靠性至关重要，因此在实验操作中需注意操作规范，确保标准品的质量和可靠性。
精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用检查法家兔法1 实验材料及用具1.1 天平精度0.01mg或0.1mg 标准品称量用精度1mg 试剂称量用精度10g 家兔称重用1.2 紫外分光光度计。
1.3 离心机。
1.4 恒温水浴。
1.5 pH计。
1.6 实验用具微量注射器、微量取液器、定量加样器、容量瓶、吸管、移液管、小试管、小烧杯、量筒、凝集盘、脱脂棉、滤纸。
1.7 试剂枸橼酸、枸橼酸三钠、氯化钠、无水葡萄糖、过氧化物酶（POD PZ>3）、葡萄糖氧化酶（GOD）、二甲基苯胺、4-氨基安替吡啉（4-AA）、三氯醋酸、盐酸。
2 溶液配制2.1 0.1mol/L枸橼酸缓冲液（pH6.6）精密称取枸橼酸0.7350g，枸橼酸三钠13.620g，加水至500ml混匀。
pH范围应在5.4~7.0。
2.2 葡萄糖氧化酶试剂2.2.1 POD溶液精密称取POD适量，用水溶解使成3mg/ml的溶液，置4~8℃保存备用。
2.2.2 取3mg/ml POD溶液0.2ml、GOD 120单位、4-AA 10mg、二甲基苯胺0.05ml混合，加枸橼酸缓冲液至200ml，置4~8℃保存备用，如显淡红色即不宜使用。
或用血糖测定试剂盒。
2.3 5%三氯醋酸溶液称取三氯醋酸5g，加水至100ml。
2.4 生理盐水称取氯化钠4.5g，加水近500ml，加苯酚1g，用3mol/L盐酸调节pH 至2.5后，补足水至500ml。
2.5 葡萄糖标准溶液2.5.1 精密称取无水葡萄糖200mg，加煮沸放冷的水至20ml得10mg/ml溶液。
2.5.2 分别精密量取10mg/ml溶液1.5ml、1.0ml、0.5 ml、0.25 ml置50 ml容量瓶中，加水至刻度，混匀得30mg/100ml、20 mg/100ml、10 mg/100ml、5 mg/100ml溶液。
上述葡萄糖标准溶液置4~8℃保存备用，如出现浑浊长菌时，不得使用。
2.6 胰岛素标准品溶液2.6.1 取胰岛素标准品，放置至室温。
低精蛋白锌胰岛素注射液【注意事项】1、本品不能用于静脉注射，使用前应先摇匀。
2、使用本品时，不宜饮酒，过度饮酒易引起低血糖。
3、本品如与心得安、保泰松等药同用，可加强本品的降血糖作用。
4、本品与口服降糖药合用，能加强本品的降血糖作用。
5、运动员慎用。
【孕妇及哺乳期妇女用药】孕妇，特别在妊娠中期及后期，对胰岛素需要量增加。
在分娩后对胰岛素需要量迅速减少。
如果是妊娠糖尿病，产后血糖即可正常，应停用胰岛素。
【儿童用药】青春期前儿童对胰岛素敏感性较青春期少年高，因此较易发生低血糖，须适当减少胰岛素用量，青春期少年须适当增加胰岛素用量（约20%～50%），青春期过后再逐渐减少。
【老年用药】老年人易发生低血糖，须特别注意，应注意饮食、适当的体力活动与胰岛素量的配合。
【药物相互作用】 1.糖皮质类固醇、促肾上腺皮质激素、胰高血糖素、雌激素、口服避孕药、甲状腺素、肾上腺素、噻嗪类利尿剂、二氮嗪、β2-受体激动剂、H2-受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、可乐宁、苯妥英钠等可升高血糖浓度，合用时应调整这些药或胰岛素的剂量。
2.口服降糖药与胰岛素有协同降血糖作用。
3.抗凝血药、水杨酸盐、磺胺类药及抗肿瘤药甲氨喋呤等可与胰岛素竞争和血浆蛋白结合，从而使血液中游离胰岛素水平增高。
非甾体消炎镇痛药可增强胰岛素降血糖作用。
4.β受体阻滞剂如普萘洛尔可阻止肾上腺素升高血糖的反应，干扰机体调节血糖功能，与胰岛素合用可增加低血糖的危险，并可掩盖某些低血糖症状，延长低血糖时间。
合用时应注意调整胰岛素剂量。
5.氯喹、奎尼丁、奎宁等可延缓胰岛素的降解，使血中胰岛素浓度升高从而加强其降血糖作用。
6.血管紧张素转换酶抑制剂、溴隐亭、氯贝特、酮康唑、锂、甲苯咪唑、吡多辛、茶碱等可通过不同方式直接或间接影响致血糖降低，胰岛素同上述药物合用时应适当减量。
7.奥曲肽可抑制生长激素、胰高糖素及胰岛素的分泌，并使胃排空延迟及胃肠道蠕动减缓，引起食物吸收延迟，从而降低餐后高血糖，在开始用奥曲肽时，胰岛素应适当减量，以后再根据血糖调整。
肝素复合物在体内代谢转化过程尚未被阐明。
鱼精蛋白也是一种弱抗凝剂，过量可引起凝血时间指标短暂轻度延长。
【适应证】主要用于因肝素钠或肝素钙严重过量而致的出血症及自发性出血，如咯血等。
【不良反应】①本品快速静脉注射可引起低血压、心动过缓、肺动脉高压、呼吸困难、短暂面部潮红及温热感。
缓慢静脉注入，10分钟内不超过50mg，可避免上述反应。
②对鱼过敏，过去曾接受过本品或含鱼精蛋白的胰岛素（如中性鱼精蛋白胰岛素）者，易发生抗鱼精蛋白IgE介导的高敏或过敏反应。
③男性不育症或输精管切除者中某些人易发生对鱼精蛋白高敏反应。
在输注本品前给这类患者应用皮质激素或抗组胺药，可防止过敏。
5足量鱼精蛋白中和肝素后8～9小时，个别在18小时后，部分患者可发生肝素反跳和出血。
【禁忌证】对本品有不耐受史或不良反应史者禁用。
【用法用量】抗肝素过量：静注，用量与最后一次肝素的用量及间隔时间有关。
每1mg鱼精蛋白可拮抗100单位肝素。
由于肝素在体内降解迅速，在注射肝素后30分钟，每100单位肝素，只需用鱼精蛋白0．5mg；每次用量不超过50mg，需要时可重复给予。
抗自发性出血：静滴，5～8mg/kg体重/日，分2次，间隔6小时，每次以300～500ml生理盐水稀释后使用，3日后改为半量。
【注意事项】本品仅供静注，应缓慢给药。
给药后即需作凝血功能检查。
①对鱼过敏者慎用本品。
②静注速度过快可致心动过缓、低血压、胸闷、呼吸困难、颜面潮红等。
③妊娠及哺乳妇女应用本药必须有明确指征。
至于本品对生殖能力的影响，是否有致畸、致癌作用，是否经乳汁分泌等问题，均缺乏动物实验资料。
5本品宜单独给药，与某些抗生素（如青霉素、头孢菌素等）理化性质不相容。
硫酸鱼精蛋白Liusuan YujingdanbaiProtamine Sulfate书页号：2005年版二部－742[修订]【检查】干燥失重取本品，在105℃干燥3小时，减失重量不得过5.0%（附录Ⅷ L）。
人胰岛素注射液中锌含量测定的两种方法比较
黄志东;白海娇;刘国英;李海生
【期刊名称】《天津药学》
【年(卷),期】2005(17)6
【摘要】目的:建立用酸解法测定人胰岛素注射液中锌含量的方法.方法:将供试品与盐酸混合蒸干后,使与蛋白络合的锌转化成氯化锌,再与锌试剂反应、比色.结果:平均加样回收率为97.47%,RSD为0.39%.本法与法定的测定结果基本一致.结论:本法简便、重现性好,可用于控制人胰岛素注射液中锌的质量.
【总页数】2页(P5-6)
【作者】黄志东;白海娇;刘国英;李海生
【作者单位】天津市药品检验所,天津,300070;天津市药品检验所,天津,300070;天津市药品检验所,天津,300070;天津市药品检验所,天津,300070
【正文语种】中文
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原子吸收分光光度法测定精蛋白锌胰岛素注射液中的锌含量钱文[1];杨钻芷[2];史咏梅[3];金卫红[4]
【期刊名称】《药学与临床研究》
【年(卷),期】1999(000)001
【摘要】采用原子吸收分光光度法对精蛋白锌胰岛素注射液中锌的含量进行测定,以避免原方法测定时由于胰酶破坏不完全而带来的误差,平均回收率99.8％,RSD为0.9％(n=5)。
【总页数】2页(P24-25)
【作者】钱文[1];杨钻芷[2];史咏梅[3];金卫红[4]
【作者单位】[1]江苏省药品检验所;[2]江苏省药品检验所南京 210008;[3]南京210008;[4]南京 210008
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