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全反式维甲酸抗肿瘤作用的研究进展【关键词】维甲酸肿瘤消化0 引言维甲酸类药物包括维生素A的天然及人工合成的衍生物。
维生素A (视黄醇)进入人体后转变成视黄醛，再经氧化变成维甲酸。
维甲酸是维持生长发育不可缺少的物质,尤其在促进上皮组织分化生长及维持其正常功能方面起重要作用。
维甲酸结构式由环状末端、多烯肽侧链和极性末端基团三部分组成，当这三部分结构各自由不同基团取代时，可得到生物活性不同的化合物。
目前维甲酸类化合物根据结构不同分为三代：第一代为极性末端被不同基团取代；第二代为环状末端基团的改变；第三代维甲酸则是多烯肽侧链的改变，并由于羧基方向不同分为两种异构体，即顺式维甲酸及全反式维甲酸(all trans retinoic acid，ATRA)，其中全反式构型最为稳定和常见。
维甲酸类化合物受体属于类固醇-甲状腺素核转录因子超家族，现已发现两大类受体可与维甲酸结合，介导维甲酸作用，即维甲酸受体(RAR)和维甲类X受体(RXR)。
RAR受体有三个亚型(RARα、RARβ、RARγ)，而RXR也有三个亚型(RXRα、RXRβ、RXRγ)。
RXR和RAR受体的每一成员均有许多异构体，如RAR α有α1、α2，RARβ有β1、β2[1,2]。
1 抑制增殖、诱导分化和凋亡维甲酸与受体通过配体结合区域互相结合，直接作用于靶基因,这是维甲酸类药物作用的经典途径。
维甲酸结合受体包含有DNA结合区域，可以识别基因组DNA的特异性序列。
维甲酸靶基因启动子序列中包含有维甲酸受体反应元件，通过受体和靶基因之间不同的作用方式，维甲酸类药物可以调节细胞中不同基因或酶的表达,使其活化或抑制，从而达到治疗目的[3]。
目前研究证实维甲酸还可以通过受体抑制转录活性因子AP1途径抑制某些细胞增殖。
AP1即活性蛋白1(Activeprotein1，包含有c Jun和c Fos)是一种转录因子，通常其活性形式为Jun (c Jun、Jun B、Jun D)与Fos(Fra1、Fra2、c Fos、Fos B)家族成员的同源或异源二聚体，可刺激肿瘤形成，在肿瘤的侵袭浸润中起重要作用。
熊果酸抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导凋亡张静;邓涛;陈会敏;胡志芳;张奕颖;罗和生;张秋萍【期刊名称】《武汉大学学报：医学版》【年(卷),期】2005(26)3【摘要】目的:探讨熊果酸对人胃癌细胞BGC823的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。
方法:运用MTT法检测细胞的增殖;Hoechest33258荧光染色观察DNA片段化;流式细胞术分析细胞周期和凋亡率;Westernblot检测BGC823细胞内细胞色素C(cytochromeC,cytC)、survivin、caspase3的表达。
结果:熊果酸对BGC823细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈浓度和时间依赖性,作用24h的IC50为43.10μmol·L-1;在熊果酸作用下BGC823细胞呈凋亡征象;G1期细胞数减少,细胞主要阻滞在S期;同时cytC释放和caspase3酶原活化增加,survivin表达降低。
结论:熊果酸能够在体外抑制人胃癌细胞BGC823增殖并诱导其凋亡,而促进cytC释放增加,下调survivin表达,继而引起caspase3的活化可能是其作用机制之一。
【总页数】5页(P375-378)【关键词】熊果酸;BGC-823;细胞色素C;survivin;caspase-3【作者】张静;邓涛;陈会敏;胡志芳;张奕颖;罗和生;张秋萍【作者单位】武汉大学人民医院消化内科;武汉大学医学院免疫学系【正文语种】中文【中图分类】R735.2【相关文献】1.过表达NOTCH-1抑制TNFα诱导的胃癌BGC-823细胞增殖抑制及凋亡 [J], 姚军;钱翠娟2.姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 [J], 周海燕;江红星3.熊果酸抑制胃癌细胞SGC7901增殖和诱导细胞凋亡的机制 [J], 张奕颖;邓涛;胡志芳;张秋萍;张静;江华4.AP-2α抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导凋亡的作用机制研究 [J], 张树琴;鲁毅;刘梅;王亚威;高茗5.维生素C对奥沙利铂诱导胃癌BGC-823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用研究[J], 张琳刚;刘静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
全反式维甲酸对人胃腺癌细胞株BGC-823迁移的影响杨艳艳;胡安拉;张素梅;周青;汪渊【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2014(49)7【摘要】目的研究全反式维甲酸( ATRA)对人胃腺癌细胞株BGC-823细胞迁移能力的影响及其可能机制。
方法不同浓度ATRA处理BGC-823后,MTT法检测ATRA对细胞增殖的影响并计算半数抑制率( IC50),倒置显微镜下观察细胞形态学变化,划痕法检测其对细胞迁移能力的作用,平板克隆法观察其对细胞体外克隆形成能力的影响, Western blot法检测可能与迁移相关蛋白的表达。
结果 ATRA对BGC-823细胞增殖具有明显的抑制作用,呈浓度依赖性, IC50为42．4025μmol/L；ATRA可抑制细胞生长速度,使细胞形态拉长；ATRA可抑制BGC-823细胞的迁移；ATRA可明显降低细胞克隆形成数(P<0．05)；Western blot结果显示ATRA显著降低肌球蛋白轻链激酶( MLCK)的表达和肌球蛋白轻链( MLC)的磷酸化。
结论ATRA 对人胃腺癌细胞株 BGC-823细胞的迁移具有抑制作用,可能与降低 MLCK表达和MLC磷酸化水平有关。
%Objective To explore the effect of all-trans retinoic acid ( ATRA ) on the migration of human gastric cancer BGC-823 cells and its probable mechanism. Methods MTT assay was performed to measure the prolifera-tion of BGC-823 cells treated with different concentrations of ATRA and calculated the IC50 . Light microscope was used to observe morphologic changes. The effect of ATRA on the migration of BGC-823 cells was analyzed by wound healing assay. The effect of ATRA on the colony formation rate of BGC-823 cells wasmeasured by plate col-ony formation assay. The expression of proteins involved in migration was detected by Western blot. Results AT-RA could inhibit the proliferation of cell line BGC-823 significantly. With the increase of concentration,the inhibi-tion rate was more obvious and the IC50 was 42. 402 5 μmol/L. ATRA could inhibit cell growth and made them e-longated. ATRA could decrease the distances of migration of BGC-823. ATRA could decrease the colony formation of BGC-823 significantly, compared with DMSO control(P<0. 05). ATRA could inhibit the expression of MLCK and phosphorylation of MLC protein which was detected by Western blot. Conclusion ATRA can inhibit the mi-gration of human gastric carcinoma cell line BGC-823,which may be related to the down regulation of expression of MLCK and phosphorylation of MLC protein.【总页数】5页(P867-871)【作者】杨艳艳;胡安拉;张素梅;周青;汪渊【作者单位】安徽医科大学分子生物学实验室、生物化学与分子生物学教研室、安徽省/省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室，合肥 230032;安徽医科大学分子生物学实验室、生物化学与分子生物学教研室、安徽省/省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室，合肥 230032; 安徽医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学系，合肥230032;安徽医科大学分子生物学实验室、生物化学与分子生物学教研室、安徽省/省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室，合肥 230032;安徽医科大学分子生物学实验室、生物化学与分子生物学教研室、安徽省/省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室，合肥230032;安徽医科大学分子生物学实验室、生物化学与分子生物学教研室、安徽省/省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室，合肥 230032【正文语种】中文【中图分类】R735;R966;R34【相关文献】1.全反式维甲酸对人胃腺癌细胞中Akt及其磷酸化蛋白表达的影响 [J], 杨艳梅;张春艳;马玉彦;杨悦;任丽君;秦莉;袁玉涛2.全反式维甲酸对人胃腺癌细胞株SGC-7901凋亡的影响 [J], 魏翔;陈绍龙;贾宁;周青;李静静;张素梅;汪渊3.全反式维甲酸对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移及Notch1、DLL4、VEGF-C表达的影响 [J], 桑露倩;李娜;王映;都小晗;路颜娟;路太英4.全反式维甲酸联合LY294002对食管癌EC1细胞增殖、迁移及PI3K、MMP-2表达的影响 [J], 崔会娟;李娜;路彦娟;李珊珊;王珍珍;路太英5.全反式维甲酸对宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC侵袭、转移能力的影响及其分子机制研究 [J], 胡海燕;刘植华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
BGC-823胃癌细胞凋亡相关蛋白受miR-421调控后的表达分析浦雄勇;姚永良;孙王伟;蒋一彪;吴建红【摘要】Objective To study the molecular mechanism of miR-421 in the apoptosis of BGC-823 gas-tric cancer cells. Methods miR-421 mimics and miR-421 inhibitors were transfected into BGC-823 cells by siRNA transfection technology. The expression of proteins related to apoptosis or receptors such as caspase-3, Bax, Bcl-2, TNFR-Ⅰand TNFR-Ⅱwere detected by Western blotting. Results The miR-421 mimics and miR-421 inhibitors were transfected into BGC-823 cells successfully. The expression of caspase-3 and Bax proteins were en-hanced in BGC-823 cells transfected with miR-421 inhibitors, while the expression of Bcl-2, TNFR-Ⅰand TNFR-Ⅱwere decreased. Conclusion The expression of apoptosis proteins caspase-3, Bax, Bcl-2 and cell surface recep-tor proteins TNFR are regulated by miRNA-421 to influence the apoptosis of BGCe-823 gastric cancer cells.%目的：研究miR-421在胃癌BGC-823细胞凋亡过程中的分子机制。
伊维菌素对人胃癌细胞BGC—823MGC—803迁移和侵袭的影响及机制研究【摘要】本研究旨在探讨伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823和MGC-803迁移和侵袭的影响及机制。
我们发现伊维菌素能显著抑制这两种胃癌细胞的迁移和侵袭能力，同时通过调节特定信号通路来实现抑制作用。
这表明伊维菌素有望成为胃癌治疗中的新型药物。
本研究结果为深入理解胃癌发展机制和开发新的治疗策略提供了重要参考，为伊维菌素在临床应用中的潜力提供了有力支持。
伊维菌素对人胃癌细胞迁移和侵袭具有明显的抑制作用，有望成为未来胃癌治疗的有效药物之一。
【关键词】胃癌、伊维菌素、细胞迁移、细胞侵袭、抑制作用、信号通路、治疗、新型药物1. 引言1.1 背景介绍胃癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，也是导致人类死亡的主要原因之一。
据统计，每年有数百万人因胃癌而丧生。
虽然目前的治疗方法包括手术、化疗和放疗等，但效果并不理想，患者的生存率仍然较低。
寻找具有更好疗效和较少副作用的新型治疗药物对于胃癌患者至关重要。
伊维菌素是一种来自真菌的天然产物，已被证实具有抗肿瘤活性。
近年来，研究发现伊维菌素对各种肿瘤细胞的生长和扩散具有明显的抑制作用。
在实验室研究中，伊维菌素被发现可以抑制胃癌细胞BGC—823和MGC—803的迁移和侵袭能力，这为将其作为新型胃癌治疗药物提供了可能性。
基于以上背景，本研究旨在探究伊维菌素对人胃癌细胞迁移和侵袭的影响及可能的机制，为开发更有效的胃癌治疗药物提供新的思路和方向。
1.2 研究目的研究目的是明确伊维菌素对人胃癌细胞BGC—823MGC—803迁移和侵袭的影响及机制，探讨其在胃癌治疗中的应用前景。
具体包括：1. 研究伊维菌素在抑制胃癌细胞迁移和侵袭方面的生物学效应；2. 探究伊维菌素对信号通路的调控机制；3. 分析伊维菌素作为潜在药物在胃癌治疗中的可行性。
通过本研究，旨在为发现新型胃癌治疗药物提供实验依据，深入理解伊维菌素的药理作用机制，为其临床应用提供科学依据。
全反式维甲酸对胶质瘤干细胞的影响及相关调节机
制研究的开题报告
研究背景与意义：
胶质瘤是一种最常见的原发性脑肿瘤，在脑肿瘤中占据一定比例。
目前治疗手段主要为手术、放疗和化疗。
然而由于胶质瘤的侵袭性、复发性以及化疗耐药性等问题，提高治疗效果一直是需要解决的问题。
近年来，研究表明胶质瘤干细胞（GSCs）的存在是导致胶质瘤难以治愈的主要原因之一。
全反式维甲酸（RA）是一种维生素A衍生物，因其对白血病等恶性肿瘤的治疗作用而备受关注。
然而，全反式维甲酸在对胶质瘤干细胞方面的研究还比较有限。
本研究旨在探究全反式维甲酸对胶质瘤干细胞的影响以及其相关调节机制，以期为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法。
研究内容与方法：
1. 评价全反式维甲酸对GSCs的影响：采用MTT法和流式细胞术分析全反式维甲酸对GSCs增殖和凋亡的影响。
2. 探究全反式维甲酸诱导GSCs分化的机制：使用全反式维甲酸处理GSCs，采用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光染色等方法探究全反式维甲酸调节GSCs分化的分子机制，包括Notch信号通路、Nanog和Oct4等干细胞标记基因的表达、细胞衰老标志物p16和p21的表达等。
3. 评价全反式维甲酸在GSCs治疗中的效果：采用裸鼠移植瘤模型观察全反式维甲酸在体内对GSCs的抑制作用。
研究预期及创新性：
通过上述研究，本研究预期发现全反式维甲酸对GSCs的抑制作用以及其调节分化的机制，并验证其在体内治疗胶质瘤的效果。
该研究将为
深入探究胶质瘤的发病机制和治疗方法提供新的思路，对于促进胶质瘤治疗的研究具有重要的创新意义。
全反式维甲酸与胃癌预后相关性及其机制研究冯振游;胡孔旺;丁慧明;黄志国【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2022(57)8【摘要】目的探讨全反式维甲酸(ATRA)治疗对胃癌术后患者生存期是否产生影响,分析ATRA是否通过调控上皮间质转化(EMT)对胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡产生影响。
方法选取胃癌术后患者共198例,分为对照组和ATRA组,比较两组间患者生存期的差异。
体外培养MGC-803胃癌细胞,分为对照组和ATRA组。
CCK-8实验检测其增殖能力,细胞划痕实验检测其迁移能力,Transwel实验检测其侵袭能力,流式细胞术检测凋亡情况。
Western blot、RT-qPCR和免疫荧光检测EMT相关基因(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达情况。
结果ATRA可以延长胃癌术后患者的生存时间。
经ATRA处理后,胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,同时会促进胃癌细胞的凋亡。
Western blot、RT-qPCR和免疫荧光结果显示ATRA会下调胃癌细胞N-cadherin和Vimentin的表达水平,上调E-cadherin表达水平。
结论ATRA可以延长胃癌术后患者的生存时间,促进胃癌细胞凋亡,通过调控EMT抑制胃癌细胞增殖,迁移,侵袭。
【总页数】7页(P1216-1221)【作者】冯振游;胡孔旺;丁慧明;黄志国【作者单位】安徽医科大学第一附属医院普外科【正文语种】中文【中图分类】R735.2【相关文献】1.全反式维甲酸对胃癌患者免疫功能、肿瘤细胞增殖及其预后的干预作用研究2.全反式维甲酸对人胃癌细胞株HGC-27生长抑制作用的研究3.全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞增值和凋亡的影响及其机制研究4.全反式维甲酸对人胃癌细胞株HGC-27生长抑制作用的研究5.全反式维甲酸对胃癌患者免疫功能、肿瘤细胞增殖及其预后的干预作用研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
全反式维甲酸对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖、迁移、侵袭的影响及其机制崔洁洁;龚梦嘉;何昀;毕杨【摘要】目的探讨不同浓度的全反式维甲酸(ATRA)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6体外增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及肝癌细胞间质标志蛋白和miR200家族的表达情况.方法以Hepa1-6小鼠肝癌细胞为研究对象,给予0、0.1、1.0和10.0μmol/L终浓度的ATRA处理,结晶紫染色检测细胞增殖,锥虫蓝拒染实验计数活细胞.Hoechst检测细胞凋亡,划痕实验检测迁徙能力,Transwell实验检测侵袭能力,荧光定量PCR(real-time PCR)法检测间质标志蛋白N-cadherin、sail和vimentin和0和10 μmol/L ATRA处理后的miR200家族的mRNA表达.结果ATRA处理后Hepa1-6细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显下降(P＜0.05),凋亡率增高(P＜0.05),间质标志蛋白N-cadherin、sail和vimentin的表达明显下调(P＜0.05),ATRA的浓度越高,这些作用越明显.10μmol/L ATRA处理后miRNA200a-3p,200c-3p,141-3p显著上调.结论 ATRA呈浓度依赖性促进肿瘤细胞Hepa1-6凋亡,抑制其增殖、迁移及侵袭能力,这可能与ATRA上调microRNA200家族,抑制细胞的间质表型有关.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2016(036)002【总页数】7页(P211-217)【关键词】肝肿瘤细胞;全反式维甲酸;迁移;侵袭;microRNA【作者】崔洁洁;龚梦嘉;何昀;毕杨【作者单位】重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心,重庆400014【正文语种】中文【中图分类】R735.7全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是维生素 A 在体内的重要活性代谢产物，人体95%的维生素A都贮存在肝内，肝脏病变时大大降低体内维生素A的储存，因此维甲酸类药物在肝脏疾病中的应用具有重要意义。
维甲酸抗肿瘤的研究进展
马晓燕;张南征
【期刊名称】《徐州医学院学报》
【年(卷),期】2003(23)2
【摘要】@@ 维甲酸(retinoic acid,RA)又称视黄酸或维生素A酸,是维生素A的衍生物.它由环已烯环、侧链和极性基团三部分组成,由于极性基团及侧链部分不同,维甲酸包括多种同分异构体,其中最重要的是13-顺式维甲酸(13-cRA)、全反式维甲酸(ATRA)和9-顺式维甲酸(9-cRA).
【总页数】4页(P185-188)
【作者】马晓燕;张南征
【作者单位】徐州医学院肿瘤学教研室,江苏,徐州,221002;中国人民解放军第九七医院消化内科,江苏,徐州,221004
【正文语种】中文
【中图分类】R73-36
【相关文献】
1.具有抗肿瘤作用的维甲酸类化合物的研究进展 [J], 郝北辰;张奕华
2.4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯抗肿瘤作用研究进展 [J], 孟遥;夏泉;葛金芳(综述);陈飞虎(审校)
3.全反式维甲酸抗肿瘤机制的研究进展 [J], 黄鑫;邓述恺
4.维甲酸经基因及非基因途径抗肿瘤治疗的研究进展 [J], 何韶辉;周旺;韩智涛;肖
建如
5.全反式维甲酸抗肿瘤作用的研究进展 [J], 叶红;但自力;唐望先
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
全反式维甲酸对胃癌BGC823细胞增值和凋亡的影响及其机制研究作者：师广勇来源：《中国实用医药》2010年第05期【摘要】目的探讨全反式维甲酸(alltrans retinoic acid,ATRA)对体外培养的胃癌BGC823细胞增殖和细胞凋亡的影响。
方法不同浓度全反式维甲酸处理培养的胃癌BGC823细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用RTPCR检测细胞Survivin基因mRNA的变化。
结果全反式维甲酸对胃癌BGC823细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(P【关键词】胃癌;BGC823;全反式维甲酸;细胞增殖;凋亡;SurvivinEffect of ATRA on proliferation and apoptosis of human BGC823 gastric cancer cellSHI Guangyong. Oncology Department, The Fifth Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China【Abstract】 Objective To observe the effect of alltrans retinoic acid(ATRA)on proliferation and apoptosis of human gastric cancer cell line BGC823 and its mechanisms.Methods BGC823 cells were treated with different concentration of ATRA.The cell proliferatiwas measured by methabenzthiazuron(MTT)assay and the apoptosis induced by ATRA was evaluated by TUNEL assay.The Survivin mRNA expression levels were detected by RTPCR.Results ATRA inhibited growth of BGC823 cells in a dosedependent and timedependent manner(P【Key words】Gastric cancer; BGC823; Cell proliferation; Apoptosis; ATRA; Survivin作者单位:450052郑州大学第五附属医院肿瘤科胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤。
虽然近年来在其诊治方面取得了一些成绩,但预后仍不理想,我国胃癌的死亡率仍居恶性肿瘤之首。
全反式维甲酸(alltrans retinoic acid,ATRA)是肿瘤诱导分化剂,对多种肿瘤细胞有诱导分化和促进凋亡作用[1],但是其具体机制还不是很清楚。
本研究应用全反式维甲酸作用于人胃癌BGC823细胞,来探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制,为其临床应用提供参考依据。
1 材料与方法1.1 材料与试剂胃腺癌细胞株BGC823购自中国科学院细胞库。
TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒购自洛阳华美生物工程公司。
全反式维甲酸(美国Sigma公司),RPMI1640培养基(solarboi公司),四甲基偶氮唑蓝(MTT,美国Sigma公司),二甲基亚矾(DMSO,美国Sigma公司),全自动Fax2100酶标仪(英国stat公司)。
Survivin(sc10811)兔抗人多克隆抗体、通用型SPKit(SP9000)免疫组化试剂盒和DAB kit(ZLI9032)免疫组化试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。
Trizol、异丙醇和酒精购自Sigma公司;逆转录试剂盒购和dNTP Mixture购自大连宝生物公司;Taq DNA聚合酶(Promega公司);PCR引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
1.2 细胞的培养应用10%灭活胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养液中(青霉素和链霉素各100 u/ml)培养BGC823细胞,置37℃、体积分数为5% CO2、饱和湿度培养箱中传代培养,所有试验用细胞均为处于对数生长期细胞。
全反式维甲酸溶于二甲基亚砜制成10 mmol/L的母液,20 4℃冰箱避光贮存备用。
1.3 MTT检测细胞抑制率消化收集胃癌BGC823细胞后计数并调整细胞浓度为按100 μl/孔细胞悬液(7个细胞/ml)接种于96孔板,加入全反式维甲酸终浓度分别为0.1、0.5、1、5、10 μmol/L的培养液,每一浓度设6个复孔,设阴性对照和空白对照孔4个,继续培养12、24、36、48、60、72 h。
倒置显微镜观察药物作用后的BGC823细胞形态的变化。
每孔加入5 mg/ml MTT溶液20 μl,培养箱内继续孵育4 h,终止培养,加人DMSO震荡混匀,在自动酶标仪上以570 nm波长测定各孔吸光度OD值。
抑制率=(1实验药物组OD值/空白对照组OD值)×100%。
同样实验重复3次。
1.4 凋亡指数的检测采用DNA末端原位标记染色法(TUNEL)检测1 μmol/L全反式维甲酸作用胃癌细胞0(对照)、12、24、48 h后凋亡情况,统计细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。
步骤严格按照洛阳华美生物工程公司提供的TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒说明书进行。
光镜下数5个高倍镜>l000个细胞,以背景无颜色,细胞核着棕黄色者为阳性细胞。
分别计数总细胞数量和凋亡细胞数量。
按下面公式计算凋亡指数(AI),凋亡指数(AI)=(凋亡细胞数/总细胞数)×100%。
1.5 RTPCR检测Survivin基因mRNA表达的变化采用Trizol抽提法提取1 μmol/L的全反式维甲酸分别作用0、24、48、72 h后的总RNA;逆转录合成cDNA。
Survivin引物上游5’AGAACTGGCCCTTCTTGGA3’;下游5’AAGGAAAGCGCAACCGGACG3’,退火温度58 ℃,扩增片段长194 bp。
βactin引物:上游5’ATGGCACCGTCAAGGCTGAG3’;下游5’GCAGTGATGGCATGGACTGT3’,扩增片段长379 bp。
PCR反应操作均严格按照试剂盒说明进行,反应体系25 μl,扩增条件:94℃ 5 min;94℃ 30′,54℃ 30′,72℃ 60′,重復30个循环;72℃ 10 min。
反应完成后取5 μl PCR产物加loading buffer混合后进行琼脂糖凝胶电泳。
应用凝胶成像仪扫描成像,经图象分析处理后,按下面公式计算Survivin mRNA相对含量:Survivin mRNA相对含量=(Survivin mRNA光密度/βactin mRNA光密度)×100%。
1.6 统计学方法采用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析和t检验,数据用x±s表示,检验水准χ2=0.05,P2 结果2.1 光镜下细胞形态的变化:加入药物细胞培养12 h后,光学显微镜下观察。
部分BGC823细胞边缘不整,出现皱缩、变圆、脱落和漂浮细胞增多;部分细胞体积缩小,细胞解离成彼此黏附成簇的圆形小体凋亡小体。
2.2 全反式维甲酸对人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用 MTT结果(图1)显示,全反式维甲酸均能够显著抑制人胃癌BGC823细胞的体外生长,其对胃癌BGC823细胞的生长抑制作用随着全反式维甲酸浓度的升高而增加;并且在同一浓度组中,全反式维甲酸对胃癌BGC823细胞的抑制作用随时间的延长明显增加,其差异具有显著性(P图1 全反式维甲酸抑制人胃癌BGC823细胞生长的时效和量效关系2.3 全反式维甲酸对人胃癌BGC823细胞凋亡指数的影响全反式维甲酸可以明显诱导人胃癌BGC823细胞凋亡细胞,经1 μmol/L浓度全反式维甲酸作用24、48、72 h后,细胞凋亡指数分别从作用前的(3.34±1.15)增加至(12.6±1.91)、(21.45±3.76)、(32.57±2.71)。
而统计学分析不同时间组间有显著性差异(P2.4 RTPCR检测Survivin mRNA表达的变化 RTPCR检测1 μmol/L浓度全反式维甲酸作用人胃癌BGC823细胞0、24、48、72 h后细胞中Survivin mRNA表达情况。
结果(图2)发现,全反式维甲酸下调人胃癌BGC823细胞中Survivin mRNA表达,表达情况随着全反式维甲酸作用时间的延长而逐渐下降,呈现一定的时间依赖性关系。
图2 全反式维甲酸作用0、24、48、72 h后 Survivin mRNA表达情况M:marker; 1:对照(0 h); 2:24 h; 48 h; 4:72 h3 讨论胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,具有发病率高、發病隐匿、易转移和死亡率高等特点。
目前胃癌的主要治疗是实行综合治疗即手术、放疗、化疗等手段的合理应用。
虽然近年来胃癌的诊断和治疗技术已有很大提高,但胃癌患者总的生存率仍然很低,疗效不能令人满意。
近来很多新辅助化疗研究结果表明,对于局部进展期的消化系统肿瘤使用新辅助化疗后,无论是手术或同步化放疗均有助于提高治愈率和生存质量[2]。
维甲酸是促进上皮组织分化生长及维持其正常功能不可缺少的物质,很多研究表明维甲酸能够在细胞水平上诱导多种实体肿瘤细胞的分化,进而抑制肿瘤细胞的增殖[3]。
第三代维甲酸全反式维甲酸(alltrans retinoic acid,ATRA)目前构型最为稳定,作为维甲酸类的代表,是目前研究较多和较为成熟的维甲酸类药物[4]。
MTT结果发现在不同浓度和作用时间下,全反式维甲酸均不同程度的抑制人胃癌BGC823细胞的增殖,其增殖和抑制作用表现为剂量和时间依赖性。
研究表明,体内肿瘤的发生是由于细胞生长的失控及对凋亡信号的拮抗而引起的。
凋亡(apoptosis)是自然界普遍存在的现象,凋亡程序的启动受到多种促凋亡及凋亡抑制蛋白的调控。
而凋亡抑制蛋白表达升高与肿瘤的发生密切相关,诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的新思路,临床上使用的放射疗法和大多数化疗药物均都可通过诱导肿瘤细胞凋亡而显示疗效[5]。
为此笔者观察了全反式维甲酸对人胃癌BGC823细胞凋亡的影响:结果发现全反式维甲酸可以明显诱导人胃癌BGC823细胞凋亡,与对照组相比不同时间实验组凋亡率有显著性差异,并作用时间的延长呈时间依赖性升高。
