呼吸道九联检

呼吸道九联检操作程序呼吸道感染概述一、气管和支气管等咽喉呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、、上呼吸道感染常见的分为上呼吸道感染和下呼吸道感染呼吸系统，。

指鼻腔是急性上呼吸道感染、），tract infectionupper（acute respir 常见病因是呼吸道最常见的一种传染病咽或喉部急性炎症的概称。

，不仅性别职业和地区为病毒少数由细菌引起患者不分年龄。

、，、。

下呼吸道感染是最常见具有较强的传染性而且可引起严重并发症。

，肺炎支气管炎慢性支气管炎的感染性疾患包括急性气管——、，、、军团菌等微生物引衣原体由病毒支气管扩张等细菌支原体、、、，、治疗时必及时治疗的原则起其防治应遵循预防为主准确诊断，，、、须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。

免疫荧光法介绍一、又称荧光抗体免疫荧光技术）technique（Immunofluorescence生物化学是标记免疫技术中发展最早的一种它是在免疫学技术、。

，很早以来就有一些学者和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。

利用抗原抗体反应进行组织或试图将抗体分子与一些示踪物质结合，年首次采用荧光素进行标等于细胞内抗原物质的定位1941。

Coons 这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为记而获得成功。

用荧光抗体示踪荧光抗体技术technique）。

fluorescent（antibody 用已或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；这两知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。

因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合种方法总称免疫荧光技术，，用于检测或定也可以与其他蛋白质结合用于检测或定位各种抗原，，位抗体但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用所以人们习惯称，，为荧光抗体技术或称为免疫荧光技术用免疫荧光技术显示和检查。

，细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞或组织）（化学技术。

荧光免疫法按反应体系及定量方法不同还可进一步分做若干种。

，与放射免疫法相比荧光免疫法无放射性污染并且大多操作简便，，，便于推广该技术的主要特点是特异性强敏感性高速度快主。

呼吸道九联检简要操作规程一采血要求1. 静脉血，指尖血（儿童）2. 拒收溶血标本。

脂血标本不影响检测。

二所需实验仪器和设备1. 荧光显微镜2. 洗盒，湿盒3. 摇床4. 15微升和150微升量程的移液器5. 1000毫升量筒，1000毫升玻璃容器三准备工作：提前30分钟取出试剂盒恢复至室温，同时将试剂②中的成分加入1L蒸馏水，摇匀直至完全融化。

四试验步骤：25ul血清+25 ul PBS溶液↓混匀取混合后的液体30ul↓加150ul吸附剂[⑦]↓混匀，静置1分钟离心4000转10-15分钟↓在载玻片上每孔加15ul上清液↓放入湿盒37度温育60分钟↓用PBS洗液冲洗载玻片后，浸泡在PBS洗液中并放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗↓自然晾干或吹干，每孔加入15ul结合物[⑤]↓放入湿盒37度温育30分钟↓用PBS洗液冲洗载玻片，浸泡在PBS洗液中并放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗自然晾干或吹干↓加封闭介质盖上盖玻片观察结果注意事项：1，加样时，移液器不要触碰离心管底部的沉淀和九联检包被孔2，实验结束后，九联检片子最好在2-3小时内观察，第二天观察不影响结果判断。

若需保存，需冷冻避光。

3，结果判断第2,5,6,7,8,9包被孔的阳性细胞为荧光均匀分布在包被细胞上，并且为明显的绿色；阳性细胞数占3%以上时，报阳性，其余阴性。

4，PBS常温放置一星期不影响实验结果，但要保证在此期间不被污染5.若实验室没有摇床，洗涤过程中中间换一次PBS，同样能达到洗涤效果，而不需要震摇郑州安图绿科生物有限公司。

一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。

分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。

常见病因为病毒，少数由细菌引起。

患者不分年龄、性别、职业和地区。

不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。

下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。

二、非典型呼吸道病原体已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。

嗜肺军团菌嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)是一种兼性细胞内致病菌，有鞭毛，革兰氏阴性，军团菌科军团菌属多形态性的短小球杆菌。

其不抗酸，无孢子，无荚膜，类似于杆菌。

不能分解明胶、糖类或是尿素，同时，不可参加酵解反应。

嗜肺军团菌无色，也非自身荧光，氧化酶与过氧化氢酶测试阳性，β-内酰胺酶阳性。

专性需氧，在自然界可长期存活，如在蒸馏水中可存活100d以上，污水中可存活一年，对热和一般消毒剂敏感。

菌落特征为灰白色，有光泽，湿润，圆形，凸起，并有特殊臭味，革兰氏染色不明显，多用镀银法或Giemsa法染色。

广泛分布于天然淡水环境或人工水域中，在阿米巴体内寄生，亦可感染人巨噬细胞，在其胞内繁殖和杀死人巨噬细胞，是引起军团菌病（军团菌肺炎）的重要病原体。

军团菌病在国内外时有爆发流行，中央空调冷凝塔水系统是引起军团菌病的主要传染源，病死率较高。

目前已知军团菌有48个种70多个血清型，其中嗜肺军团菌有15个血清型，血清型-1是引起社区获得性肺炎和院内感染性肺炎的重要病原体。

呼吸道感染病原体IgM九联检非典型肺炎是一组由非典型病原体：如嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等引起的肺部炎症，临床表现不一，临床中很难针对特定病原体进行治疗，容易造成患者治疗不当以及抗生素滥用。

呼吸道感染病原体IgM九联检采用间接免疫荧光法检测血清中相关病原体IgM型抗体，对疾病的早期诊断和指导治疗具有重要的意义一、检测内容、方法及检测人群1、检测内容：包括①嗜肺军团菌血清1型②肺炎支原体③Q热立克次体④肺炎衣原体⑤腺病毒⑥呼吸道合胞病毒⑦甲型流感病毒⑧乙型流感病毒⑨副流感病毒1、2和3型3、适用人群：儿童及成人呼吸道感染患者，尤其是呼吸道症状不典型，或长期发热抗生素治疗无效者二、临床意义1、呼吸道感染性疾病的早期快速诊断;2、对病原体的鉴别诊断提供导向性依据3、指导临床合理用药三、标本采集1、空腹静脉采血3ml（普通不抗凝管）2、严格无菌操作四、结果报告及意义1、结果报告：以阴性（—）/ 阳性（+）表示2、结果意义①嗜肺军团菌血清1型：是社区获得性肺炎的重要致病菌，最常见的是嗜肺军团菌血清1型，感染者常伴随有全身症状。

在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。

军团菌肺炎潜伏期为2~10天，IgM抗体在感染后1周左右出现，并可持续存在3~6个月。

②肺炎支原体：肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，肺炎支原体可在呼吸道黏膜上皮内潜伏，部分患者无明显症状；但大部分患者为显性感染。

在3岁以下儿童以上呼吸道感染多见，成人以肺炎表现为主。

肺炎支原体肺炎潜伏期14~21天，起病缓慢，IgM抗体一般在感染后1周出现, 3～4周达高峰, 可持续存在3~6个月。

③Q热立克次体：Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。

IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。

急性感染Q热立克次体的潜伏期为2～38天，通常为12～19天，IgM抗体一般在感染后2周左右出现，4～8周达高峰, 可持续存在3~4个月。

呼吸道感染时你做了呼吸九联检吗？呼吸道感染又称呼吸系统感染，是我们普通人最常遇到的一种疾病，其主要临床表现为：如发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难等。

其实在很久以前的欧洲，大家也并不知道真实原因，主流医学都以为是瘴气所致，直到1856年法国微生物学家路易斯·巴斯德(1821—1895)才初窥了微生物的秘密，从此逐渐发现了诸如呼吸道感染的根本原因。

呼吸道感染的罪魁祸首就是病原体入侵了我们人体的鼻腔到咽喉部（上呼吸道感染）、气管和支气管等呼吸系统（下呼吸道感染）。

上呼吸道感染（普通感冒）,在呼吸道感染中比例最大，具有较强的传染病，多数病因是由病毒引起,少数则是细菌引起。

不管患者的年龄、性别、所从事的工作和所在的地区，都有极强的传染能力,而患者个体免疫能力的不同还可能引起严重的并发症，当然患者可以自愈的，一般5-7天就可以康复。

下呼吸道感染指急性气管到支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等,由支原体、衣原体、细菌、病毒、军团菌、立克次体等微生物所引起,防治原则为预防为主、正确诊断、及时治疗。

为了对抗这些引起呼吸道感染的小小微生物，我们就需要找出凶手究竟是哪种病原体，这样我们才能更好地选择合适的抗生素对症下药。

就需要做检测，做什么检测--呼吸九联检。

呼吸九联检检测的是什么？以下我们来依次介绍下它们。

1、嗜肺军团菌中的嗜肺军团菌血清1型是感染率最高的,可以导致非典型性肺炎，概率是10%，全身症状较重。

嗜肺军团菌入侵人体到有症状时间一般是2-10天,lgM抗体的产生是嗜肺军团菌入侵后1周后出现的，在3-6个月时依然存在。

2、肺炎支原体在儿童和青少年中最为常见是肺炎支原体所导致的肺炎,呼吸道黏膜上皮是肺炎支原体的埋伏,有些人感染无明显症状，部分人全身症状较重，肺炎支原体在入侵人体到有症状的时间为4-21天,发病较慢,1gM抗体的产生在1周的时候出现，在3-4周浓度最高, 在3-6个月时依然存在。

3、立克次体侵入我们人体后可能会引起全身症状，会导致头疼、高热、非典型性肺炎、心肌炎。

呼吸道九联检结果判断标准
观察结果时，先在10倍镜下对载玻片进行观察，找到视野后再换至40倍镜下观察结果。

建议先观察第十孔（质控孔），这样有利于判断本底（减少杂质荧光的干扰或者病人自身抗体的干扰），其余各孔的观察顺序可以根据自己的习惯进行调整。

400倍镜下，九联检各孔的阳性判断标准如下：
第1、3、4孔：形态符合标准；亮度明亮；数量上均匀布满整个视野，400倍镜下每个视野内荧光个数超过70个
附注：1孔：形态为典型的杆状，3孔：形态为典型的球杆状，4孔位典型的球状。

详见下图：
图表1嗜肺军团菌（1孔）图表2立克次体（3孔）
图表3肺炎衣原体（4孔）
第2孔：国外显微镜下：荧光形态符合标准，亮度明亮，荧光细胞比例超过50%；国内显微镜：荧光形态符合标准，亮度可以，荧光细胞比例超过10% 附注：荧光形态为胞围荧光模式
图表4肺炎支原体（2孔）
第5、6、7、8、9孔：国外荧光显微镜：荧光形态符合标准，亮度明亮，荧光细胞比例超过3%即400倍镜下，每个视野中约5个阳性细胞；国内荧光显微镜下：荧光形态符合标准，亮度较亮，荧光比例超过1%，即400倍镜下，每个视野中约2-3个阳性细胞
附注：荧光形态为胞核、胞浆或胞膜混合荧光模式
图表5腺病毒（5孔）图表6呼吸道合胞病毒（6孔）
图表7甲型流感病毒（7孔）图表8乙型流感病毒（8孔）
图表9副流感病毒（9孔）
第10孔、质控孔：正常情况下为一些红色的细胞
图表10质控（第十孔）。

关于开展呼吸道病原体九联检的通知为满足临床要求，给临床和病患提供更好的检验服务，检验科开展了呼吸道九项病原体的检测，在免疫项目中开呼吸道九联检（收费375元）即可，医保项目，抽血当日即可出报告。

抽血：血清2-3ml（红盖试管）。

呼吸道九项病原体的临床意义采用西班牙VIRCELL公司生产的间接免疫荧光法检测试剂，同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM抗体，可检测的病原体包含：1、嗜肺军团菌 2、肺炎支原体 3、Q热立克次体 4、肺炎衣原体 5、腺病毒 6、呼吸道合包病毒 7、甲型流感病毒 8、乙型流感病毒 9、副流感病毒1、2、3型。

1、嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清I型，非典型性肺炎常伴随有全身症状，10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清I型引起的。

在血清学诊断中，间接免疫荧光法是唯一的标准技术。

临床上军团菌感染主要有两种表现形：肺炎型和庞蒂亚克热型。

前驱症状：乏力、头痛、全身肌肉酸痛，于1～2日内突然发热，可达40℃以上，多呈稽留热。

病程早期即可出现多系统受累症状，为本病的突出特点。

绝大多数患者有咳嗽，起初为干咳，半数患者转成非脓性粘稠痰或略带脓性痰，痰中常含少量血丝，个别可咯血。

少数患者有胸痛，呼吸困难较为多见。

肺部可闻及细湿罗音。

继之可出现明显肺实变体征。

约25%有恶心、呕吐及腹泻等消化道症状，有的腹泻为唯一首发症状。

神经症状多见于极期，有时非常突出，包括不同程度意识障碍、肌张力增强或阵颤、步态不稳等，可有暂时性肢体软瘫; 个别可有腹泻、清水样便。

或者失眠、眩晕、记忆力减退、意识朦胧、项强、震颤等神经系统表现.2、肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，肺炎支原体可在呼吸道黏膜上皮潜伏，部分患者无明显症状；但大部分患者为显性感染。

3岁以下儿童以上呼吸道感染多见，成人以肺炎表现为主。

发病初期有咽痛、头痛、发热、乏力、肌肉酸痛、食欲减退、恶心、呕吐等症状。

发热一般为中等热度，2~3天后出现明显的呼吸道症状，突出表现为阵发性刺激性咳嗽，以夜间为重，咳少量黏痰或黏液脓性痰，有时痰中带血，也可有呼吸困难、胸痛。