鹿骨胶原蛋白特性的研究

酶法制备鹿骨多肽的工艺研究郭冰洁;苑广信;安丽萍;张静;杜培革【摘要】目的探讨鹿骨多肽胰蛋白酶酶解的最优工艺.方法采用热水抽提法提取鹿骨中的胶原蛋白,再经胃、胰蛋白酶酶解,制得鹿骨多肽,该实验先以鹿骨蛋白产率为指标,确定了鹿骨蛋白最佳提取时间,再以鹿骨多肽的水解度为指标,通过单因素和正交实验优化鹿骨多肽的胰蛋白酶酶解工艺.结果鹿骨多肽最佳制备条件:底物浓度为4％,酶的用量为7500 U/g,pH=8.0,温度37℃,时间为4 h,此时水解度为24.52％.结论此工艺确定了热水抽提法提取鹿骨蛋白及胃、胰蛋白酶水解制备鹿骨多肽的最优工艺,为分离纯化鹿骨活性肽奠定了基础.【期刊名称】《北华大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(020)001【总页数】4页(P47-50)【关键词】双酶;鹿骨多肽;正交实验;工艺优化【作者】郭冰洁;苑广信;安丽萍;张静;杜培革【作者单位】北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013【正文语种】中文【中图分类】R284鹿产品为长白山特色资源，骨骼作为鹿的副产物年产量巨大，大部分都未得到充分利用，仅停留于骨制品的初级加工，如骨骼超微粉、肥料等.然而鹿骨骼中营养物质丰富，含有大量蛋白质、磷脂质、磷蛋白、多种维生素，还含有多种微量元素，并参与人体多种代谢，具有重要的药理作用[1].鹿骨骼中的蛋白是优质蛋白，安全可靠.研究发现：骨多肽是骨提取物的主要成分，具有水溶性强、活性高等特点[2].目前已有显著改善骨质疏松作用的鹅骨多肽[3]、降压效果明显的猪髋骨ACE抑制肽[4]及具有抗氧化、延缓衰老的鱼胶原肽[5-6]等众多骨活性多肽.本研究以新鲜鹿骨为原料，采用胃、胰蛋白酶对热水抽提的鹿骨蛋白进行酶解，制备鹿骨多肽.通过单因素的正交实验优化得到双酶酶解鹿骨多肽的最优工艺，为鹿骨多肽的进一步研究奠定基础.1 材料与方法1.1 材料新鲜鹿腿骨(吉林市向阳鹿厂)；胃蛋白酶(600～1 000 U/mg)、胰蛋白酶(250U/mg)(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)；BCA试剂盒、Folin-酚试剂盒(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)；其他试剂均为分析纯，水为实验室自制超纯水(PINE-TREE XYF2-10-H)；ATY224型电子天平(日本SHIMADZU)；Five Easy plus 型pH计(瑞士METTLER TOLEDO)；冷冻干燥机(美国SP Scientific-Vritis BenchTop Pro)；Infinite M200型酶标仪 (瑞士TECAN)；Thermo Mixer C型恒温振荡器 (德国EPPENDORF).1.2 方法1.2.1 工艺流程新鲜鹿骨→粉碎→脱脂→脱钙→干燥→提取→鹿骨胶粗提液→盐析→复溶→透析除盐→冻干得鹿骨蛋白→胃蛋白酶酶解→胰蛋白酶酶解→沸水浴灭酶→离心取上清→冻干得鹿骨多肽→测水解度.1.2.2 预处理将新鲜鹿骨(1～3 cm2)碎块用自来水洗净，干燥打粉，过40目筛，备用.1.2.3 脱脂将预处理好的骨粉以1∶15的料液比用石油醚室温浸泡24 h，过滤，室温待粉末干燥.1.2.4 脱钙将上述骨粉以1∶10的料液比用0.5 mol/L HCL浸泡脱钙，每3 h换酸，重复6次，干燥备用.1.2.5 鹿骨提取时间的确定将骨粉以1∶10的料液比置于95 ℃水浴锅中回流提取，提取时间为1，2，3，4，5 h，过滤得鹿骨蛋白粗提液，通过测定蛋白产率确定最佳提取时间.1.2.6 蛋白酶的选择选用胃、胰蛋白酶酶解蛋白是模拟人体胃肠道环境，胃蛋白酶的条件为本实验室已优化得出，底物浓度为4%，酶用量为6 000 U/g，pH=2.0，温度37 ℃，时间为4 h.胰蛋白酶水解条件则需进一步优化.1.2.7 盐析在鹿骨蛋白粗提液中缓慢加入硫酸铵，使其终浓度为80%，4.3×103r/min离心10 min，将沉淀复溶，透析除盐，冻干得鹿骨蛋白粉末.1.2.8 胰蛋白酶酶解单因素实验1)酶用量对鹿骨蛋白水解度的影响：在底物浓度为4%、温度为37 ℃、pH=9.0、时间为3 h的条件下，分别以3 000，4 500，6 000，7 500，9 000 U/g酶用量进行鹿骨蛋白水解，考察酶用量对鹿骨蛋白水解度的影响.2)温度对鹿骨蛋白水解度的影响：在底物浓度为4%、酶用量为6000 U/g、pH=9.0、时间为3 h的条件下，分别以31，34，37，40，43 ℃进行鹿骨蛋白水解，考察温度对鹿骨蛋白水解度的影响.3) pH对鹿骨蛋白水解度的影响：在底物浓度为4%、酶用量为6 000 U/g、温度为37 ℃、时间为3 h的条件下，分别以pH为7.0，7.5，8.0，8.5，9.0进行鹿骨蛋白水解，考察pH对鹿骨蛋白水解度的影响.4)时间对鹿骨蛋白水解度的影响：在底物浓度为4%、酶用量为6 000 U/g、温度为37 ℃、pH=8.0的条件下，分别酶解2，3，4，5，6 h，考察时间对鹿骨蛋白水解度的影响.5)水解度的测定：水解度(DH)采用TCA指数法进行测定，参照文献[7-9]，取酶解液3 mL加入等体积10%的TCA溶液充分混匀，使鹿骨蛋白的肽链被充分切断，随着反应的进行，蛋白的TCA溶解指数逐渐升高.静置30 min，4.3×103r/min 离心15 min，取上清液，用BCA试剂盒对游离态氮的含量进行测定.牛血清白蛋白标准曲线见图1.其中：N0：蛋白水解前上清液TCA可溶性氮；N1：蛋白水解后上清液TCA可溶性氮；N2：蛋白总氮含量.图1 牛血清白蛋白标准曲线Fig.1 The standard curve of bovine serum albumin1.2.9 酶解正交实验优化根据单因素实验结果，以水解度为衡量标准，对胰蛋白酶用量、温度、pH、酶解时间进行(L9(34))正交试验，优化鹿骨多肽制备工艺.各因素水平见表1.表1 因素水平Tab.1 Factors and levels水平A:λ(酶用量)/(U·g-1)B:θ/℃C:pHD:t/h17000347.5327500378.0438000408/551.3 统计学分析应用SPSS 16.0软件进行正交分析，所得数据以平均值±标准差表示.2 结果与分析2.1 单因素实验2.1.1 提取时间对鹿骨蛋白产率的影响由图2可知：一定时间内，鹿骨蛋白产率随时间的增加而增加.当提取时间为3 h 时，鹿骨蛋白产率达到最大值(29.03%).此后随着时间增减，产率增加趋于平缓或略有下降，这可能与长时间高温状态下，鹿骨胶原蛋白受热，α，β链断裂完全或部分蛋白变为游离氨基酸有关.因此，鹿骨蛋白提取的最佳时间为3 h.图2 时间对鹿骨蛋白提取率的影响Fig.2 Effect of time on the extraction rate of deer bone protein2.1.2 胰蛋白酶用量对鹿骨多肽水解度的影响由图3可知：鹿骨多肽水解度随酶用量的增加而增大.当酶用量为7 500 U/g时，水解度达到最大值.此后，水解度随酶用量的增加而趋于平缓，且基本保持不变.一定范围内，增加酶用量可以提高水解度，但超过7 500 U/g后，水解度基本不变.因此，鹿骨多肽水解的最佳胰蛋白酶用量为7 500 U/g.图3 胰蛋白酶用量对鹿骨多肽水解度的影响Fig.3 Effects of concentration of trypsin dosage on degree of hydrolysis2.1.3 温度对鹿骨多肽水解度的影响由图4可知：在一定温度范围内，鹿骨多肽水解度随温度升高而增大.当温度为37 ℃时，水解度达到最大值.此后，水解度随温度的增加而逐渐下降.一定范围内，升高温度可以提高水解度，但超过37 ℃后，水解度逐渐下降，由于酶的活性对温度极为敏感，超过胰蛋白酶的最适温度，酶活性下降，故水解度下降.因此，从经济角度讲，鹿骨多肽水解的最佳温度为37 ℃.图4 温度对鹿骨多肽水解度的影响Fig.4 Effects of temperature on the degreeof hydrolysis图5 pH对鹿骨多肽水解度的影响Fig.5 Effects of pH on the degree of hydrolysis2.1.4 pH对鹿骨多肽水解度的影响由图5可知：pH小于8.0时，鹿骨多肽水解度随pH的增加而增大.当pH为8.0时，水解度达到最大值.此后，水解度随pH的增加而减小.一定范围内，增加酶用量可以提高水解度，但超过胰蛋白酶的最适pH后，水解度不会增加反而下降.因此，鹿骨多肽水解的最佳pH为8.0.2.1.5 胰蛋白酶水解时间对鹿骨多肽水解度的影响由图6可知：鹿骨多肽水解度随水解时间的增加而增大.在4 h时，水解度达到最大值.一定范围内，增加胰蛋白酶水解时间可以提高水解度，但超过4 h后，水解度基本维持稳定.因此，鹿骨多肽水解的最佳时间为4 h.图6 胰蛋白酶水解时间对鹿骨多肽水解度的影响Fig.6 Effects of trypsin hydrolysis time on the degree of hydrolysis2.2 胰蛋白酶酶解正交实验优化2.2.1 正交实验结果分析以水解度为测定指标，正交优化结果见表2.表2 正交实验结果Tab.2 Result of orthogonal experiment实验号A:λ(酶用量)/(U·g-1)B:θ/℃C:pHD:t/hη(水解度)/%1111112.282122221.633133315.764212318.695223117.386231216.29 7313214.438321313.929332117.76K116.55715.13314.16315.807K217.4531 7.64319.36017.450K315.37016.60315.85716.123R2.0832.5105.1971.643由表2可知：影响鹿骨多肽水解度的各因素影响程度依次为pH、温度、酶用量、时间，即C>B>A>D.由各组K值大小可知，最佳酶解条件组合为A2B2C2D2，均为单因素实验最佳条件，即最佳酶用量7 500 U/g、pH为8.0、酶解温度37 ℃、酶解时间4 h.在该组合条件下得到的鹿骨多肽水解度为24.52% .2.2.2 正交优化结果验证实验为验证正交实验结果准确性，采用酶用量7 500 U/g、pH为8.0、酶解温度37 ℃、酶解时间4 h为条件，进行了验证实验，实验结果见表3.由表3可知：重复3次，所得鹿骨多肽水解度均值为(24.96±0.24)%，与正交实验最优结果相近.故该正交优化结果可信.表3 验证实验结果Tab.3 Verification of experimental results项目实验次数123平均值±标准差η(水解度)/%25.3324.2725.2824.96±0.243 结论本实验先对鹿骨粉中的胶原蛋白进行热水抽提，再用胃、胰蛋白酶酶解蛋白的方式制备鹿骨多肽.通过单因素试验和正交试验优化了鹿骨多肽的制备条件，确定了制备鹿骨多肽的最优工艺，为分离纯化鹿骨活性肽奠定了坚实的基础.采用正交法对鹿骨多肽的胰蛋白酶酶解工艺条件进行优化，通过测定酶用量、温度、pH、时间对鹿骨多肽水解度的影响.结果表明：酶用量为7 500 U/g、pH为8.0、酶解温度为37 ℃、酶解时间为4 h的条件下得到的鹿骨多肽水解度为24.52% .【相关文献】[1] N S Sampath Kumar，R A Nazeer，R Jaiganesh，et al.Purification and identification of antioxidant peptides from the skin protein hydrolysate of two marine fishes，horse mackerel (Magalaspis cordyla) and croaker (Otolithes ruber)[J].Amino Acids，2012，42：1641-1649.[2] 蒋金利.鹅骨胶原蛋白及胶原多肽对骨质疏松的影响及作用机制[D].宁波：宁波大学，2015.[3] 李珂.猪髋骨胶原多肽的制备及其生物活性研究[D].长沙：湖南农业大学，2009.[4] 杨露，丁利君；蓝德安，等.马面鱼骨胶原多肽的理化特性及其抗氧化活性[J].食品科学，2013，34(11)：109-112.[5] 李皖光，汪桃花，王新文，等.4种大米蛋白水解度测定比较[J].粮食科技与经济，2017，42(5)：35-37.[6] 贾韶千，李艳霞.黄鳝鱼骨多肽制备及其抗氧化活性[J].食品科学，2016，37(1)：133-138.[7] 杨文博，张英华.蛋白质水解度的测定方法研究[J].中国调味品，2014，39(3)：88-90.[8] 罗艳华，王全杰，陈沛海，等.蛋白水解物水解度测定方法的研究[J].皮革与化工，2017，34(2)：26-31.[9] 李天娇，徐响，孙丽萍，等.油菜蜂花粉蛋白水解度测定方法比较[J].食品科学，2010，31(16)：184-187.。

Special Wild Economic Animal and Plant Research 特产研究64DOI ：10.16720/ki.tcyj.2022.156增加骨密度鹿骨片保健食品的功能学和安全性评价张悦，李珊珊，孙印石，孙德水※，霍晓慧※（中国农业科学院特产研究所，吉林长春130112）摘要：参考《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）之“增加骨密度功能检验方法”，对鹿骨片的功能进行验证，同时采用急性经口毒性试验、30d 喂养试验，对鹿骨片进行安全性评价。

结果表明，鹿骨片高、中和低剂量组对大鼠的骨钙含量及骨密度水平均显著高于低钙模型组，且与碳酸钙阳性对照组相比无显著差异。

急性经口毒性试验、30d 喂养试验中，受试动物体重、脏器重量、各脏器病理组织学检查、血液学指标及生化指标等均未见异常。

研究表明，鹿骨片具有增加骨密度的保健功能，且属于无毒级。

关键词：鹿骨片；保健食品；增加骨密度；安全性评价中图分类号：TS218；TS201.6文献标识码：A 文章编号：1001-4721（2023）06-0064-07Functional and Safety Evaluation of Health Food Products for IncreasingBone Density Deer Bone TabletsZHANG Yue,LI Shanshan,SUN Yinshi,SUN Deshui ※,HUO Xiaohui ※(Institute of Special Animal and Plant Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences,Changchun 130112,China )Abstract :The functions of deer bone tablets were verified by referring to the test method for increasing bone density of the Technical Spec-ification for the Examination and Evaluation of Health Food (2003Edition ).The results showed that the bone calcium content and bone den-sity levels of the high,medium and low dose groups of Deer Bone Tablets were significantly higher than those of the low calcium model group,and there was no significant difference compared with the calcium carbonate positive control group.In the acute oral toxicity test and the 30d feeding test,no abnormalities were found in body weight,organ weights,pathological histological examination of organs,haemat-ological and biochemical indices of the test animals.The study showed that deer bone tablets have the health function of increasing bone density and are of non-toxic grade.Key words :Deer Bone Tablet;functional food;bone mineral density;safety evaluation鹿骨为梅花鹿（）或马鹿（）等鹿科动物的骨头，是中国传统的动物药材之一。

鹿骨胶原蛋白特性的研究
赵玉红;高天
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2008(029)007
【摘要】采用酸和酶提取法从鹿骨中提取酸溶性胶原蛋白(ASC)和胃蛋白酶促溶性胶原蛋白(PSC),利用紫外扫描、傅立叶变换红外光谱、DSC、SDS-PAGE垂直电泳和氨基酸分析仪,研究了鹿骨胶原蛋白的结构、热收缩温度、相对分子量和氨基酸组成.结果表明:紫外扫描分析,鹿骨的ASC和PSC在234nm处均有强烈吸收,具有胶原蛋白的特性;红外光谱说明胶原纤维保留了大量的三股螺旋结构;经DSC测定,鹿骨的ASC和PSC热收缩温度分别为55℃和58℃.SDS-PAGE电泳显示,胶原蛋白含有3条不同的链,α1:、α2和β链.氨基酸分析表明,具有典型胶原蛋白的氨基酸组成.
【总页数】4页(P43-46)
【作者】赵玉红;高天
【作者单位】东北林业大学林学院,黑龙江,哈尔滨,150040;东北林业大学林学院,黑龙江,哈尔滨,150040
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.21
【相关文献】
1.鹿骨胶原蛋白的酶解及其水解物羟自由基清除活性的研究 [J], 赵玉红;韩琳琳;高天
2.鱼骨胶原蛋白的黏度特性研究 [J], 胡建平
3.齐口裂腹鱼骨胶原蛋白超声波辅助提取工艺及其特性研究 [J], 严秋萍;邬应龙;李月娥;蒋艳;郭玉春;秦涛
4.鱼骨胶原蛋白的纯化及其特性的初步研究 [J], 陈申如;蔡扬鹏;周琼;张其标;曹敏杰
5.牛骨胶原水解物抑制鲢鱼肌原纤维蛋白氧化和增强凝胶特性研究 [J], 王鹏;穆雅慧;何思宁;马松艳;马雪;张雅娜;郭丽
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

八九点钟Student Projects 22 \China Science & Technology Education∙研究背景鹿花盘是梅花鹿或马鹿锯茸后，在鹿角基部留下的茸角骨化后，在下一个生茸期开始时脱落的部分。

鹿花盘是我国一种传统名贵的中药，具有抗炎作用，用于治疗乳腺炎、风湿关节炎等。

在实际临床应用中常将鹿花盘熬制成鹿角胶。

然而，由于鹿花盘异常坚硬，熬制鹿角胶费时费力，资料显示其提取率只有17%。

本课题主要研究如何提高鹿花盘的提取率，以提高其利用率。

鹿花盘中主要的有效成分是蛋白质。

食品加工技术中经过膨化可以使玉米蛋白质得到降解，使蛋白质熟化变性利于吸收。

膨化过程中，蛋白质分子结构伸展、二硫键等次级键部分断裂，使其结构发生变化，由原来紧密有序的结构变成了松散无规则的构象，易被水解，从而使蛋白质的物理、化学特性得以改善，提取率显著提高。

因此，物理方法在提高提取率方面有很好的效果，如果将膨化和酶解法相结合，理论上会使大分子物质断裂得更为充分，更能增加水溶的概率。

因此，我想对鹿花盘提取方法进行改进，将鹿花盘膨化后，使用酶裂解的方法提取鹿花盘提取物，获得较高的提取率。

最关键的部分是对提取物的特性进行研究，以验证提取效果，为鹿花盘的深加工建立新方法。

∙研究过程 膨化条件的优化将鹿花盘用中药粉碎机粉碎后磨成细粉，分别过100目和300目筛子，制备成100目细粉和300目超微粉。

分别称取等量鹿花盘块、100目鹿花盘粉、300目超微粉，使用单螺杆膨化机膨化，测定膨化样品的直径。

以径向膨化率表示膨化度（径向膨化率=平均直径/模孔直径），并通过体视学显微镜测定未膨化和膨化鹿花盘粉的显微结构。

本研究主要考查3个因素对鹿花盘膨化度的影响：温度、含水量、压强。

结果显示，本实验条件下最适宜的物料粒度为100目；根据不同温度、模头压强和物料含水量对鹿花盘膨化度的单因素影响，在本实验条件下最适宜的膨化温度为120 ℃、模头压强为4 Mpa、物料含水量为25%。

学术论丛鹿茸胶原蛋白及多肽提取工艺的研究意义高鸿蒙锡林郭勒职业学院摘要:鹿茸是鹿科动物例如马鹿或梅花鹿没有骨化完全的幼角，将其提取鹿茸素后剩余的可溶性成分已没有药用价值，每年可高达20吨。

在其剩余部分中含有大量的胶原蛋白多肽，因此探索鹿茸胶原蛋白多肽提取工艺的影响因素及确定新法提取工艺的主要参数，为鹿茸胶原蛋白及多肽的利用及其相关鹿茸产品的开发奠定了一定基础，对促进养鹿业的进一步发展具有重要意义。

关键词:鹿茸；胶原蛋白；多肽1鹿茸的研究概况鹿茸是鹿科动物，例如马鹿或梅花鹿未完全骨化蜡质幼角，形成于鹿茸间充质干细胞组织分化。

鹿茸在我国已有几千年的历史，中医临床常用鹿茸作为强壮保健药。

《本草纲目》第一次收录鹿茸的功效，书中写到“鹿茸生精补髓，养血益阴，强筋健骨，治一切虚损、耳聋、目暗、眩晕虚痢”[1]。

通过前人研究与讨论，发现鹿茸中生物活性物质比例较高，这些生物活性物质对生物体的组织代谢具有促进作用，使机体的免疫功能得到增强和巩固，对心血管系统及神经系统具有很好的调节作用，对恢复和保持机体健康也有良好作用。

2胶原蛋白胶原蛋白是人体的一种非常重要的蛋白质，是一种生物性高分子物质，是白色、不透明、无支链的纤维性蛋白质，普遍存在于动物体的皮、肌腱和骨等及其他结缔组织中。

胶原蛋白具有良好的生物功能及生物学活性，能够参与细胞的迁移、分化、增值，并且由于其较弱的抗原性和良好的生物相容性[2]，经过处理，可以应用在医学、美容、食品方面得到广泛应用。

在医学方面，胶原蛋白可用作皮肤烧伤、烫伤的修补，促进伤口的愈合和硬组织修复。

胶原蛋白还可用作生医材料，可作为人工皮肤、人工气管、烧伤保护膜等；胶原蛋白能诱导血小板附着，激活血凝因子可用于止血，与明胶海绵相比，胶原止血海绵止血率高，副作用小，目前胶原蛋白海绵广泛用于各种手术。

在美容方面，胶原蛋白是皮肤的重要组成成分，经常在一些高档的抗皱等化妆品中有应用。

现代美容经常通过面部注射胶原蛋白保持皮肤弹性，减少皱纹。

鹿骨的功效营养药用价值及深入开发研究作者：冯印,刘艳,陈海燕来源：《农业与技术》2013年第12期摘要：鹿是人们都非常喜欢的一种动物，不光是因为它的外形可爱，脾气温顺，还因为鹿全身的各个部位都具有很大的价值。

本文着重的介绍了鹿骨的功效、营养价值、药用价值及对其深入的开发。

关键词：鹿骨；功效；营养价值；药用价值中图分类号：S8-0 文献标识码：A人们常说鹿的全身是宝，确是如此。

鹿茸是很名贵的药材，鹿血可以补气血、延缓衰老，鹿皮可以用来制成皮革用品，鹿肉是营养丰富、味道鲜美的食品等。

鹿骨作为鹿身上的一部分，当然也有着人们所不熟知的一些特殊的功效，下面着重阐述鹿骨的价值：1 鹿骨的动物原形与功效1.1 鹿骨鹿骨单单从字面上的意思来看在，大多数的人都应该能够明白，鹿骨就是鹿的骨头。

鹿在被宰杀过程当中，剔去鹿身上的肉和骨头周围的筋之后，最后剩下来的骨头就是鹿骨了。

如果非要给它下个定义的话，那么就是鹿科的动物（如梅花鹿、马鹿）的骨骼就称其为鹿骨。

1.2 鹿骨的动物原形鹿骨，顾名思义，一般都来源于鹿科动物，其中就包括梅花鹿和马鹿。

梅花鹿，主要的特点就是身上有很多白色的斑点，就好像是一朵朵梅花一样，这些斑点在冬天梅花鹿的毛很厚的时候不是很明显，斑点就会隐藏在棕色的毛中，到了夏天鹿毛相对薄的时候才会慢慢的显现出来。

梅花鹿的尾巴比较短，一般身长都在1.5m左右，重量大约有100kg。

梅花鹿的雄鹿的鹿角很大，而且还有很多的分叉，显得非常的威武。

1.3 鹿骨的功效鹿骨味甘，微热，没有毒性。

主要具有补虚羸，强筋骨的功效。

在古今中外的许多医书当中也记载了许多鹿骨的独特的功效，《别录》：安胎，下气；《千金·食治》：主内虚，续绝伤，补骨，可作酒；《唐本草》：主虚劳，可为酒主风虚，补骨髓；《纲目》：烧灰水服，主小儿洞注下痢；《四川中药志》：治风湿四肢疼痛及筋骨冷痹。

鹿骨不但可以作为一位中药药材来入药，鹿骨也可以作为一种可食用的食材用来烹调出美味的菜品[1]。

鹿茸胶原蛋白对创伤愈合作用的试验研究作者：车爽程然蒋薇张健薄士儒来源：《吉林农业》2017年第07期摘要：目的：研究鹿茸胶原蛋白对创伤愈合的影响，比较不同浓度胶原蛋白对创伤愈合的影响程度。

方法：采用低温酶解法提取鹿茸胶原蛋白，在正常小鼠皮部造成急性创伤模型，设1个对照组，1个京万红阳性对照组，3个实验组分别涂不同浓度胶原蛋白。

观察创面愈合情况，用创伤愈合率体现。

并测其皮肤强脯氨酸含量，进而对比胶原含量。

结果：高浓度胶原蛋白涂抹的伤口愈合率较高，其皮部胶原较多。

结论：鹿茸胶原蛋白对创伤愈合有促进作用，且愈合程度与胶原蛋白的浓度有关。

关键词：生药学；胶原蛋白；创伤愈合；羟脯氨酸中图分类号： S865.42 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/ki.jlny.2017.13.017鹿茸具有广泛的药理作用，但是深加工研究滞后，对其提取物有效活性成分的研究甚少。

胶原蛋白由于结构独特，理化性质及生物特性非常突出，在医疗上的应用具体表现在胶原蛋白具有低免疫源性、组织之间的协调作用强、物理机械性能好，可生物降解度高，具体体现在止血、治疗烧伤和骨折等方面手术的应用。

目前，以鹿茸为主料，分离提取出对医学，对机体具有调节作用的胶原蛋白活性物质成分，研究其对皮肤创伤愈合作用的研究未见报道。

通过本研究为后续开发鹿茸胶原蛋白相应的药品（如喷剂）奠定理论基础，以达到科学利用现有的鹿茸资源，增加鹿茸产品附加值的目的，从而促进我国鹿业养殖实现可持续性发展。

1 材料与方法1.1主要仪器设备紫外可见分光光度计、高速离心机、真空冷冻干燥机。

1. 2实验材料新鲜鹿茸，清洁级胰蛋白酶，清洁级小白鼠50只，羟脯氨酸标准品等。

1.3方法1.3.1提取在4℃条件下，利用盐酸使梅花鹿茸灰分中的不溶物变成可溶性盐类，选择氯化钠溶液作为除杂蛋白的主要试剂，达到将其脱除的目的[1]。

采用徐云凤的胰蛋白酶水解制备鹿茸胶原蛋白的方法，取新鲜的鹿茸50克，加入150毫升乳酸盐的缓冲液，用组织绞碎机绞碎，加入胰蛋白酶0.5克，加入激活剂氯化锰0.05克，pH值调为8.0，将溶液的温度调至52℃，放入反应罐3小时，离心去残渣，收集透明澄清的液体，在10℃条件下进行酶解提取[2]。

鹿骨保健品的开发研究摘要：目的：将鹿骨制成鹿骨胶及保健品，并开发系列产品。

方法：采用高温高压蒸煮法制备鹿骨胶。

加入黄油、花生与糖，并考察其添加比例；考察辅料添加量和鹿骨胶添加量对鹿骨胶保健品品质的影响；考察鹿骨胶保健品的制备工艺。

结果：鹿骨胶的最佳制备工艺为蒸煮温度115°C、时间16h、料液比1:6。

结论：确定了鹿骨胶的最佳制备工艺，进一步对鹿骨胶的保健品进行开发。

关键词：鹿骨；制备工艺；产品开发我国最早的药学典籍《神农本草经》中就收载了鹿茸、鹿角和鹿角胶等鹿产品[1]。

据临床报道，高云程观察鹿骨胶治疗寒湿痹证，疗效较为满意，124例患者中，18例痊愈，50例显效，49例有效，7例无效[2]。

鹿骨粉对卵巢摘除导致大鼠骨质疏松症的影响，发现鹿骨粉可预防及治疗雌激素下降所致的骨质疏松症[4]于浩采用酸法加酶法提取鹿骨胶原蛋白，并研究其抗氧化活性，发现鹿骨胶原蛋白具有清除自由基的能力[5]。

刘春雷等采用酶解法水解鹿骨胶制备鹿骨胶原肽，并测定其具有较好的抗氧化能力[6]。

鹿骨胶在临床中疗效确切，具有良好的开发前景[7-11]。

1仪器与材料1.1实验仪器CY-010多功能提取罐（上海雅程仪器设备有限公司）、JY-30M鼓风干燥箱（上海亚荣生化仪器厂）、AB135-S 型1/10 万电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）、KQ-500E数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）1.2试药马鹿 Cervus elaphus 骨;无盐黄油、糖、花生、全脂调制奶粉、木糖醇、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁等均为食品级，市购。

2方法与结果2.1鹿骨胶的提取工艺2.1.1鹿骨加工前处理将鹿骨段浸泡在清水中，泡至鹿骨表面的污物易脱离后即可，将鹿骨投入转鼓冲洗1~2 h，洗至水清洁。

2.1.2鹿骨胶制备过程在温度115°C、时间 16 h、料液比 1:6条件下，将处理后的鹿骨粉碎成2~3cm，加入适量水进行高温高压蒸煮3次，过滤、浓缩、干燥，即得鹿骨胶。

鹿骨胶原蛋白的制备及其水解物抗氧化活性的研究
的开题报告
一、研究背景与意义
胶原蛋白是人体所需的重要蛋白质之一，具有增强皮肤弹性、保持
骨骼健康、促进肌肉发育等多种生理功能。

鹿骨作为优质的胶原蛋白来源，具有营养丰富、易吸收、无毒副作用等特点，因此广受人们喜爱。

同时，胶原蛋白水解物具有较强的抗氧化活性，能够防止身体老化和细
胞损伤，对人体健康具有重要意义。

因此，对鹿骨胶原蛋白及其水解物
的制备及其抗氧化活性研究具有重要意义，有望为保障人体健康提供有
力支持。

二、研究内容与方法
本研究将采用鹿骨为主要原料，运用传统工艺制备鹿骨胶原蛋白，
利用酶解技术将其进行水解处理。

通过理化指标测试、生化指标测定等
方法对鹿骨胶原蛋白及其水解物进行分析，评价其营养价值和抗氧化活性。

同时，还将通过高通量基因测序技术，探究鹿骨胶原蛋白及其水解
物的基因表达情况，深入阐述其生理作用机制。

三、预期结果与意义
预计通过本研究，能够制备出高品质的鹿骨胶原蛋白及其水解物，
可以为开发新型保健品和美容产品提供理论基础和实际应用价值。

同时，探究其基因表达情况，可以为深入认识鹿骨胶原蛋白的生理作用机制提
供新思路。

最终，本研究成果对于提高人们的生活品质、促进保健品的
开发，以及拓展传统鹿骨产业的发展具有现实意义和广泛应用前景。