1.什么是电压钳与膜片钳，有什么区别？
答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流，抵消离子通道开放时所产生的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。由于注射电流的大小与离子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。膜片钳技术钳制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极与细胞膜发生紧密接触，使尖端下的这片细胞膜在电学上与其它细胞膜分离，这大大降低了背景噪声，使单通道微弱的电流得以分辨出来。采用电压钳技术将这片膜的电位钳制在某一数值，可记录到单通道电流。从这点上看，膜片钳技术是特殊的电压钳技术。随着膜片钳技术的发展，它已经不仅仅局限于“膜片”的概念，也不仅仅采用电压钳技术，还常采用电流钳技术。
2.离子通道电导的单位是什么？如何换算？答：离子通道电导的单位是西门子（Siemens, S ），旧称姆欧，即安培/ 伏特。
常用皮西门子（pS）, 1pS= 10E-12 S , 1,000 pS = 1 pA/mV。
3.MultiClamp 700A 中，在放大器和信号器的连接中，放大器的raw output 是否需要连接信号器的ANALOG IN 接口? scaled output , raw output 有什么区别?
答：Raw output为原始信号输出，放大器输出的信号没有经过处理（如滤波、放大等）, scaled output 为定标输出,输出的信号经过了处理。后者的灵活度大，因此多采用。目前膜片钳放大器多设有scaled output ，你可将其与数模转换器（你所说的信号器）的ANALOG IN!接，这样放大器的输出信号就能传送给计算机了，此时已经没有必要再使用Raw output 了。若你想记录两个输出，则需要将Raw output与数模转换器的另一个ANALOG IN连接。
4.在Clampex的Edit protocol/Wave 中，Step和ramp各有什么适用范围？
答：Ramp多用于电流衰减缓慢的离子通道以及失敏不明显的受体通道的I-V曲
线制作，如多用于钾、钙离子通道。而像钠通道，其衰减非常迅速，在持续去极化的情况下，通道很快失活，无法使用ramp,另外诸如烟碱受体通道等具有
明显失敏特征的受体通道也不宜采用ramp。
5.什么是ramp?有什么作用？
答：与步阶（step ）不同，ramp在pCIamp软件中表示施加给细胞的一种逐渐变化的电压或电流，称为“斜坡电压或电流”，可用于作通道I-V 曲线。
6.input resistance 是什么意思？如何测量？
答：在电生理学中，“ input resistance ”指“输入膜电阻（Rin）”。全细胞记录时，给细胞膜施加一系列刺激方波（一般为超极化），在离子通道没有开
放的情况下测定跨膜电流，根据欧姆定律即可求出Rin。膜电阻（Rm与膜输入
阻抗Rin的关系为：Rm= 4n r2 Rin , r为细胞半径。
7.在一次电压钳全细胞记录中，是否每次一定要做电容消除、串连电阻补偿、漏减、和液接电位矫正？答：在电压钳实验中，如果需要给予细胞电刺激来改变细胞膜电位（如超极化或去极化），则会出现膜的被动反应，产生电容电流与电阻电流，此时，前者需要用电容补偿消除，后者需要用漏减功能消除。全细胞记录中，串联电阻是
必须要补偿的（至少要补偿80%），除非它很小而忽略不计。液接电位（一般在
10mV左右）也需要校正，除非它很小。你可采用Clampex软件中的菜单Tools/ Junction PotentiaI 功能对其测算，然后决定是否需要校正。
8.Decay 是什么意思？和inactivation 有何区别?
答：Decay是“衰减”之意，in activation 是“失活”之意，但在文献中经常
混用，decay 也常常被说成失活，例如钙电流的衰减常被说成失活，这样用也没什么问题。但实际上，两者细分的话还是有区别的。可以将Inactivation 分为稳态失活与非稳态失活。后者即Decay,是指在刺激因素（电位变化、施加药物等）持续存在下通道的失活，而稳态失活（Steady-state inactivation ）一般是指将膜电位钳制在不同的水平，然后观察通道的失活情况，做出失活曲线。
9.什么是尾电流，他主要反映通道的什么特性及用在那些方面？答：在离子通道的激活因素（去极化或超级化）结束时通道的关闭过程叫做去
激活（Deactivation），所记录到的电流称为尾电流（Tail current ），主要反映通道的关闭特征。延迟整流性K+离子通道以及一些不同类型的Ca2+离子通道，它们的尾电流均具有电压依赖性，关闭过程呈指数分布，可用指数方程拟合而获得通道关闭过程的时间常数。尾电流的分析对研究电压门控性离子通道的激活、关闭、失活等动力学过程很有帮助。如研究尾电流幅度与脉冲电压的关系、脉冲电压的不同持续时间或尾电流不同的钳制电压对尾电流幅度、衰减时间常数的影响等等。通过这些研究可了解通道关闭过程中出现的不同关闭状态。药物可影响通道的关闭过程，表现为尾电流的衰减过程变快或变缓慢。
10.如何理解steady state activation 中的steady state 的意义？答：“ steady state ”是“稳态”的意思。一般通过给予细胞持续一定时间的一系列去极化（多为去极化）脉冲来激活离子通道，记录通道电流峰值，再计算岀电导G,作出G-V曲线，该曲线称为稳态激活曲线，也就是我们常说的激活曲线。
膜片钳常见问题解答（三）
11.电极拉制程序中具体应该如何控制。在参数设定的摸索中，是否需要每次都用显微镜检测，还是另有更易操作的方法.
答：不同的拉制仪拉制参数的设置不尽相同，你需要阅读说明书，参数中主要是设定拉力（对于P-97 拉制仪，只需要设置Velocity ，可不用设定Pull ）与温度。一般第一步拉制电极颈部，温度要比第二步高（对于P-97 拉制仪，温度
的设定需要先测量RamPS），拉力不要过大，以保证颈部较短；第二步拉制尖端，一般要使温度低些，拉力大些。一般都是通过显微镜查看电极尖端，这很简单，并不复杂！最好是抛光，这样就在抛光仪显微镜下查看。注意抛光后的电极尖端开口会变小，故在拉制电极时，尖端开口要大些。检查电极还有其它方法，如“气泡数法”，也可用放大器通过测量电阻来查看。
12.Rm = 4n r2Rin ?似乎Rin是一个用细胞大小标化的膜电阻，那为什么不用电容Cm 来标化而用这个什么4n r2 ?细胞形状各异，Cm是个公认的膜面积的指标，电流密度不就是用Cm标化的吗？盼回答，同时希望能将Rin的意义再多讲一点，谢谢
答：（1）一定要注意不要拘泥于Rm和Rin这两个符号，文献中常混用，但实际上表示的大多是Rin。通常我们所说的“膜电阻”是指“膜输入阻抗Rin”，但也有人用来指Rm （2）你可以用Cm来计算膜面积，实际上这也正是我们的
做法，用来估算细胞大小，用于对通道电流幅度进行标化，但我们从来不用它
计算膜电阻Rm（也称为“固有膜电阻”）。Rm勺计算公式是数学理论上的，并没有多少应用的价值，我们很少发现有使用Rm勺（虽然符号用Rm 0（3）实
际上，Rin 反映的当然就是膜电阻，它被称为膜输入阻抗（或膜输入电阻），也时常被称为“膜电阻”（这正是使人们产生混淆的原因！），是膜的被动反应参数之一。所谓被动反应是指膜上离子通道没有开放时，膜所表现出的电缆特性。膜的被动反应参数还包括膜电容、轴浆电阻等。全细胞记录时，给细胞膜施加一系列刺激方波（多为超极化），在离子通道没有开放的情况下测定跨膜电流，根据欧姆定律可求出
Rin 。当大量离子通道开放时，膜对电流的阻力急剧降低，测试脉冲电压与通道电流
