HPLC法测定盐酸法舒地尔含量

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高效液相色谱法检测盐酸法舒地尔注射液的含量

制剂即细胞内钙离子拮抗剂。改善及预防蛛网膜下腔出血术后的脑血管痉挛及随之引起的脑缺血症状。国际医学专家在病理研究中发现，抑制患者组织内的Ｒｈｏ激酶异常活跃是治疗心脑血管疾病的关键，成为国际上的研究热点，盐目不同实验人不同机器酸法舒地尔注射液是国际上唯一一个已经上市的Ｒｈｏ激酶抑制剂，Ａ人Ｂ人安捷伦１２６０岛津Ｌｃ一１０Ａ我们对其含量测定方法进行了系统的研究如下：２实验部分２．１仪器：高效液相色谱仪安捷伦１２６０型；岛津１０ＡＴ；赛多利斯ＢＰ２１１Ｄ分析天平。色谱柱：Ｃ８柱（２５０×４．６ｍｍ，５ｍ）２．２试剂：乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。２．３试药：盐酸法舒地尔注射液（日本旭化成制药株式会社）２．４实验方法照高效液相色谱法（中国药典２０１０年版一部附录ＶＩＤ）测定。０．８５６１０４０．５０ｌ０１．７０．８５５国４１． ∞ １０１．０用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢铵溶１００％１．０６９３９８８．８１１００．７液一乙腈（６５：１０）为流动相；检测波长为２８０ｎｍ。理论板数按盐酸法１．０７００７３４．１６１Ｏｌ＿７１．Ｏ６８７４９０．４ｌ９９．８舒地尔峰计算应不少于３０００。ｌ２０％１．２８２０３６３．０６９９．２对照品溶液的制备：取盐酸法舒地尔对照品适量，精密称定，加１．２８２３３７４．０。９９．６１２８３国２６．勋１０１．１水溶解并定量稀释成每ｌｍｌ含盐酸法舒地尔０．０７５ｍｇ的溶液。供试品溶液的制备：精密量取本品ｌｍｌ，置２００ｍｌ量瓶中，加水为０．３２％。结果表明：该方法准确度较好。稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。２．５．４中间精密度试验测定法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各２０ｌ，分别注入根据不同分析人员不同时间采用不同仪器测定同一批样品（批液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。号：２０１１０３０１），考察本品的中间精密度，结果见表２。２．５方法学验证结论：不同分析人员之间的平均偏差为０．１３％＜２．０％，不同机器之间的平均偏差为０．９３％＜２．０％，说明本方法的精密度良好。取经１５０＇：Ｃ干燥４小时的盐酸法舒地尔对照品约１５ｍｇ，精密称２．５．５重复性试验定，置１００ｍｌ量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮分别精密量取自制样品（批号：２０１１０３０１）４ｍｌ、５ｍｌ、６ｍｌ各三份，备液。精密量取对照品贮备液０．５ｍｌ、ｌｍｌ、３ｍｌ、５ｍｌ、７ｍｌ、１０ｍｌ，分别置于９个ｌＯＯｍｌ量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再取ｌｍｌ至１０ｍｌ置于６个１０ｍｌ量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；照含量测定方法试量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取经１５０￣Ｃ干燥验，以盐酸法舒地尔的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回４小时的盐酸法舒地尔对照品适量，精密称定，加水稀释制成每ｌｍｌ归。见表１。约含０．０７５ｍｇ的溶液，摇匀，作为对照品溶液。照含量测定项下方法以Ｃ（ｇ／ｍ１）为横坐标，峰面积Ａ为纵坐标，进行线性回归得计算测得量，并计算平均含量及ＲＳＤ值，结果见表３。直线方程：结果表明：该方法重复性较好。Ｙ＝９１８４．８１７９１ｘ＋３２０２．７２７０３；相关系数ｒ＝＝０．９９９９。２．５．６溶液稳定性试验结果：盐酸法舒地尔在７．８４ｇ／ｍｌ～１５６．８ｇ／ｍ１浓度范围内与取自制样品（批号：２０１１０３０１）按照制备方法制备成供试品溶峰面积的线性关系较好。液，分别于０ … ２４６、８、１０、１２ｈ进行测定，考察本品含量测定液在１２ｈ内的稳定性。（变化率等于ｎ时的峰面积减去０时的峰面积再除分别取已知浓度的盐酸法舒地尔对照品溶液用水进行一系列以０时峰面积）。的稀释，精密吸取各稀释液２０１注人液相色谱仪，以信噪比１０：１结论：供试品溶液在１２ｈ内ＲＳＤ％为１．０４＜２．０％，各个时间与０的浓度为定量限度，连续进样２次，测得盐酸法舒地尔的定量限为时比较变化率＜３．０％，证明供试品溶液在１２ｈ内稳定。

盐酸法舒地尔注射液有关物质检查方法的研究

规定范围［５］，且分离度也大大提高。经对３批样品的含量测定，结果符合规定，此方法操作准确可靠，可同时检测复方泼尼松乳膏中醋酸泼尼松和氯霉素的含量，保证制剂的质量。
参考文献１陈新谦，金有豫．新编药物学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２０１１：６１２，
７７２梅艳，宋新文，汪洋，等．高效液相色谱法测定复方醋酸泼尼松乳膏含
按照《天津市医疗机构制剂规范》（２０１６年版）的原方法进行检测，醋酸泼尼松的拖尾因子为１．２５２，分离度１．８３４；氯霉素的拖尾因子为１．１５４，分离度为１．７６５。两种药物的拖尾因子过大，且分离度不甚理想，故降低有机项比例，提高分离度。原温度为常温，现升高温度，缩短出峰时间，使拖尾因子数值减小。又通过查阅文献［４］，选择２４０ｎｍ作为检测波长，以上色谱条件的改变，拖尾因子符合《中国药典》（２０１５年版）
天津药学ＴｉａｎｊｉｎＰｈａｒｍａｃｙ２０１８年第３０卷第１期
２５
挛及引起的脑缺血症状。临床试验证实，该药可用于治疗急性缺血性中风、脑血管病和心绞痛后遗症。［２－５］盐酸法舒地尔注射液在国外药典中均未收载，仅在国家药品标准［ＷＳ１－（Ｘ－１１０）－２００６Ｚ、ＹＢＨ０１７９２０１０、ＹＢＨ０１９５２０１１、ＹＢＨ０１５５２０１３、ＹＢＨ０３４６２０１２、ＹＢＨ０１７５２０１３、ＹＢＨ０１５８２０１３、ＹＢＨ０１９１２０１２］和进口注册标准（ＹＸ２００４０２４７）中收载。根据处方、生产工艺及相关文献资料显示［６，７］，盐酸法舒地尔的有关物质来源主要为工艺杂质、副产物和降解杂质。经研究确认了Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和Ｅ共５个已知杂质，分别为异喹啉－５－磺酸、异喹啉、法舒地尔二聚体、Ｎ－氧化物和高哌嗪。本文收集相关已知杂质对照品，在已有文献标准的基础上［８－１４］，经方法学验证，研究建立了更为合理有效的有关物质测定方法。１仪器与试药

高效液相色谱法测定盐酸法舒地尔的含量

高效液相色谱法测定盐酸法舒地尔的含量樊春艳;张沂;刘秀芳;杨峥维【摘要】目的：探讨高效液相色谱法（HPLC）测定盐酸法舒地尔含量的可行性。

方法采用高效液相色谱法测定自制盐酸法舒地尔含量。

色谱柱：phecda C18（250 mm ×4．6 mm，5μm），以1．0％三乙胺水溶液（用磷酸调节pH值至7．0）-甲醇（50∶50）为流动相；检测波长为275 nm，流速：1．0 ml/min；进样量：20μl；柱温：25℃。

结果 HPLC法测定盐酸法舒地尔的浓度在0．0484～0．2420 g/L的范围内，浓度与峰面积有良好的线性关系（r＝0．9994，n＝5），平均回收率为（99．4±0．47）％， RSD为0．47％（ n＝9）。

结论 HPLC法测定简单，专属性强、灵敏度高，可以用于盐酸法舒地尔的含量测定。

%Objective To investigate the feasibility of determination of fasudil hydrochloride content by high performance liq -uid chromatography(HPLC).Methods HPLC was used to determine the content of a self-prepared fasudil hydrochloride solution . Separation was performed on the phecda C 18 column (250 mm ×4.6 mm, 5 μm) with the mobile phase of triethylamine solution (the pH value adjusted to 7.0 using phosphoric acid)-methanol (50∶50), at a detection wave length of 275 nm, a flow rate of 1.0 ml/min, feed volume of 20μl and column temperature of 25℃.Results With HPLC, the content level was within 0.0484-0.2420 g/L. Linear relationship could clearly be noted between the content and the peak area (r=0.9994, n=5).Average recovery rate was (99.4 ± 0.47)%and relative standard deviation (RSD) was 0.47%(n=9).Conclusion HPLC was asimple, sensitive and specific detec-tion method, which could be used for the determination of fasudil hydrochloride content .【期刊名称】《海军医学杂志》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】2页(P218-219)【关键词】高效液相色谱法;盐酸法舒地尔;含量测定【作者】樊春艳;张沂;刘秀芳;杨峥维【作者单位】100048 北京，海军总医院药剂科;100048 北京，海军总医院药剂科;100048 北京，海军总医院药剂科;100048 北京，海军总医院药剂科【正文语种】中文【中图分类】R917盐酸法舒地尔作为一种新型、高效的血管扩张药，具有抑制平滑肌收缩最终阶段的肌球蛋白轻链磷酸化，使血管扩张。

HPLC法测定阿法骨化醇中有关物质

（threshold of toxicological concern，TTC）的概念，并将 ng·mL-1 的单一对照品储备液。精密量取各对照品 TTC 限度设定为 1.5 µg·d-1。即认为人的一生（寿命储备液适量，分别以乙腈 - 水（70∶30）配成质量浓
按 70 岁计算）中，每天摄入 1.5 µg 基因毒性杂质，致癌的风险是可接受的（小于 10-5）。此后在行业发展
法舒地尔中痕量 5- 异喹啉磺酸甲酯和 5- 异喹啉辨提取离子流色谱（extracted ion chromatogram，EIC）
磺酸乙酯的分析方法，进行了方法学验证，并对 6 批定量，对于 5- 异喹啉磺酸甲酯，提取 m/z 224.037 59
盐酸法舒地尔样品进行了测定。结果表明本方法简（［M+H］+）（质量偏差 <5×10-6）为定量离子，对于

Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis 药物分析杂志
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药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2021,41(1)
（70∶30）逐步稀释后进样测定，以信噪比约为 3 计算检测下限，以信噪比约为 10 计算定量下限，最终确定 5- 异喹啉磺酸乙酯的检测下限和定量下限分别为 0.15 ng·mL-1 和 0.5 ng·mL-1，换算为样品中的含量水平分别为 0.30 µg·g-1 和 1.0 µg·g-1；取定量限浓度的对照品溶液，按“2.2”项下色谱和质谱条件连续进样 6 次，记录峰面积并计算 RSD 为 3.1%。 2.3.5 回收率试验取盐酸法舒地尔样品约 10 mg，精密称定，置 20 mL 量瓶中，精密加入 5- 异喹啉磺酸甲酯和 5- 异喹啉磺酸乙酯的对照品储备液各 1.0 mL，用乙腈 - 水（70∶30）稀释至刻度，摇匀，即得回收率供试溶液。平行配制 6 份回收率供试溶液，按“2.2”项下色谱和质谱条件进样分析，计算加样回收率。5- 异喹啉磺酸甲酯的平均回收率为 95.4%， RSD 为 2.1%；5- 异喹啉磺酸乙酯的平均回收率为 97.1%，RSD 为 1.9%。 2.4 样品测定取盐酸法舒地尔样品 6 批，分别按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱和质谱条件进样分析。结果 6 批样品中均未检出 5- 异喹啉磺酸甲酯和 5- 异喹啉磺酸乙酯。典型样品的色谱图见图 3。 3 讨论 3.1 质谱质量分析器的选择目前三重四极杆质谱是小分子药物液质联用定量分析最常用的检测器，选择反应监测（selective reaction monitoring，SRM）或多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）扫描模式已成为标准化的定量分析模式［14-15］。通过选定特异性的母离子进行碰撞诱导裂解（collision-induced dissociation，CID），再选定特异的子离子进行检测，以提高方法的选择性和灵敏度。在方法建立的过程中，该方法需对每 1 个目标化合物的二级质谱参数进行优化，包括母离子和子离子的选择，CID 能量的优化等。该步骤通常是方法建立时最为烦琐和耗时的步骤［15］。本研究采用 Q-Orbitrap 高分辨质谱建立分析方法，首先通过四极杆对目标化合物进行选择性通过，然后将目标化合物输送至 Orbitrap 进行高分辨扫描，最后通过一级质谱精确质荷比的提取进行定量。Orbitrap 具有极高的分辨率（可达 100 000 以上，本研究为 75 000）和质量精度（相对质量偏差 0.1×10-6~5×10-6），仅用高分辨一级质谱 EIC 即可实现定量分析。由于采用了

离子色谱法测定盐酸法舒地尔中高哌嗪含量

ａｒｅｌｉａｂｌｅｍｅｔｈｏｄｏｒｆｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｏｍｏｐｉ￣ｌｅｒａｚｉｎｅｉｎｆａｓｕｄｉｌｈｙｄｒｏｅｈｌｏｒｉｄｅｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．
ｆａｓｕｄｉｌｈｙｄｒｏｅｈｌｏｒｉｄｅｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｏｎａＳＨ￣ＳＣ－３（２５０１－ｎｌ＇ｎ×４．０ｎ＇ｌｌｎ）ｃｏｌｕｍｎ
ｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆｈｏｍｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅｗａｓ２．０－２０．０ｇ／ｍＬ（０．９９２４）．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｗａｓ０．０４９４ｇ／ｍＬ，ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９７．６％－９８．７％，ａｎｄＲＳＤｗａｓＯ．４７％（＝６）．Ｔｈｉｓｍｅｈｏｔｄｉｓａｃｃｕｒａｔｅ，ｓｉｍｐｌｅ，ａｎｄｅｉｃｆｉｅｎｔ，ｗｈｉｃｈｃａｎｐｒｏｖｉｄｅ
关键词离子色谱法；高哌嗪；盐酸法舒地尔

高效液相法检测盐酸法舒地尔注射液的含量

科技论坛
・３・
高效液相法检测盐酸法舒地尔注射液的含量
李菲马立萍（哈尔滨欧替药业有限公司，黑龙江哈尔滨１５００６０）
摘要：目的：建立检查盐酸法舒地尔注射液的含量测定方法。方法：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢铵溶液一乙腈（６５：１０）为流动相；检测波长为２８０ｒｍｌ。结果：盐酸法舒地尔浓度在０．０７５－０．１５ｍｇ／ｍｌ范围内，与峰面积呈良好的线性关系；盐酸法舒地尔平均回收率为９９．５％，ＲＳＤ为０．３％＜２．０％。精密度良好，重复性高，专属性好。结论：此方法可以准确检测盐酸法舒地尔注射
９１．６５９１．９７８９．６１
９９．４１
９９．９２９９．７８
２１仪器：高嬲夜相色义日本岛津制造所；赛多利斯ＢＰ２１１Ｄ分析天平。色谱柱：ｃ８柱（２５０ｘ４．０ａｍ，ｒ５１￣ｍ）。
液的含量。
关键词：盐酸法舒地尔注射液；高效液相色谱法；含量
１概述
表１含量测定线性关系
盐酸法舒地尔是一种蛋白激酶抑制剂即细胞内钙离子拈抗剂。改善及预防蛛网膜下腔出血术后的脑血管痉挛及随之引起的脑缺血症状。国际医学专家在病理研究中发现，抑制患者组织内的ＲｈＯ激酶异常活跃是渝帛脑血管疾病的关键，成为国际上的研究热点，盐酸法舒地尔注射液是国际上唯——个已经上市的Ｒｈｏ激酶抑制剂，由日本旭化成制药株式会社研制成功，经大量临床验证，盐酸法舒地尔注射液已成为预防和治疗心脑血管疾病的主要途径。市场潜力非常大，开发此品种有良好的市场前景。为了保证药品的有效性，对其含量测定方法进行了力栏究。

HPLC法测定盐酸法舒地尔注射液中盐酸法舒地尔含量论文

HPLC法测定盐酸法舒地尔注射液中盐酸法舒地尔的含量【中图分类号】r97 【文献标识码】a 【文章编号】1672-3783（2013）03-0271-02盐酸法舒地尔注射液国家食品药品监督管理局国家药品标准中含量测定所用的方法为紫外-可见分光光度法，高效液相色谱方法与紫外-可见分光光度法相比，能使主药与辅料能有效分离，避免辅料对含量测定的干扰，使检测结果更准确，所以将含量方法改为高效液相色谱法。

1 仪器与试药：岛津 spd-10a vp紫外检测器；岛津spd-m10a vp 二极管阵列检测器；岛津 lc-15c 溶剂泵；岛津lc-10at vp 溶剂泵；岛津 lcsolution 15c色谱工作站；岛津 lcsolution色谱工作站。

盐酸法舒地尔对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100614-200401），盐酸法舒地尔注射液（天津红日药业，规格为2ml：30mg）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法2.1 色谱条件：色谱柱：phenomenex c18 （250×4.60mm，gemini 5μ c18 110 ）；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；检测波长：275nm；运行时间：12min；进样体积：20μl；流动相：1.0%三乙胺水溶液（用磷酸调ph值至7.0）：甲醇（55：45）；系统适用性要求：理论板数按盐酸法舒地尔峰计算应不低于6600。

2.2 对照品溶液的配置：取盐酸法舒地尔对照品约30mg，精密称定，至100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.3 供试品的配置：精密量取各批市售品2ml至100ml量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀。

2.4 测定法：精密量取对照品溶液及供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

按外标法以峰面积计算，即得。

3 方法学研究3.1 波长的选择为了准确的测定盐酸法舒地尔的含量，参考国家药品标准“盐酸法舒地尔”有关物质项下的检测波长，并取本品及各步反应中间体进行uv光谱分析，结果可知除了高哌嗪对紫外无吸收外，在275nm 波长处，5-异喹啉磺酸、中间体及盐酸法舒地尔均有最大吸收。

HPLC法测定盐酸法舒地尔注射液的含量

药学研究・￣ｕｍａｌ矿ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２
．
ＨＰＬＣ法测定盐酸法舒地尔注射液的含量
Hale Waihona Puke 宋玉才，吕永超（鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂２７６０００）
ＡｓｔａｂｌｅＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｎｄｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗａｓａｃｃｏｍｐｌｉｓｈｅｄｏｎａｎＷｅｌｃｈＵｌｔｉｍａｔｅＸＢ —Ｃ８ｃｏｌｕｍｎ
ｗａｓ９９．８７％ｗｉｔｈｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇＲＳＤｏｆ０．２４％．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｍｅｔｈｏｄｈａｄｓｔｒｏｎｇｐｒｏｐｅｒｔｙａｎｄｈｉｇｈａｃｃｕｒａｃｙ，ｉｔｃａｎｂｅ
摘要：目的
建立高效液相色谱法测定盐酸法舒地尔注射液含量的方法。方法
采用ＷｅｌｃｈＵｌｔｉｍａｔｅＸＢ—ｃ
色谱柱（４．６ｍｍ× ２５０ｍｍ，５ｍ），流动相为０．０３ｍｏｌ・Ｌ磷酸氢二铵溶液一乙腈＝７６：２４（用磷酸调节ｐＨ值至４．５），检测波长为２７５ｎｍ，流速为１．０ｍＬ・ｍｉｎ～。结果盐酸法舒地尔在９０．０４～２１０．０８ｐ．ｇ・ｍＬ的浓度范围

盐酸法舒地尔标准

盐酸法舒地尔Yansuan Fashudi’er Fasudil HydrochlorideNS NO ONH.HClC 14H17N3O2S·HCl327.83本品为六氢-1-（5-磺酰基异喹啉）-1（H）-1，4-二氮杂卓盐酸盐，按干燥品计算，含C14H17N3O2S·HCl应为99.0%～102.0%。

【性状】本品为白色或类白色结晶或结晶性粉末。

无臭，味微苦；有引湿性。

本品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中几乎不溶。

【鉴别】（1）取本品约5mg，置小试管中，试管口用氢氧化镍试纸盖住，加热，绿色的氢氧化镍试纸即显黑色或灰色的斑点。

（2）取本品适量，加水制成每1ml中约含30μg的溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录ⅣA)测定，在275nm、312nm与324nm的波长处有最大吸收，在250m和297nm的波长处有最小吸收。

（3）取干燥失重项下的供试品测定红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致（中国药典2010年版二部附录Ⅳ C）。

（4）本品的水溶液显氯化物的鉴别反应（中国药典2010年版二部附录Ⅲ）。

【检查】酸度取本品0.30g，加水10ml溶解后，依法测定（中国药典2010年版二部附录Ⅵ H），pH值应为4.5～6.0。

溶液的澄清度与颜色取本品0.15g，加水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（中国药典2010年版二部附录Ⅸ B）在1小时内比较，不得更浑；如显色，与黄色1号标准比色液（中国药典2010年版二部附录Ⅸ A第一法）比较，不得更深。

有关物质取本品适量，加流动相制成每1ml中约含0.2mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～20%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。

HPLC测定盐酸法舒地尔的有关物质

第28卷,第4期光　谱　实　验　室V o l.28,N o.4 2011年7月Ch inese J ou rnal of S p ectroscop y L aboratory July,2011HPLC测定盐酸法舒地尔的有关物质葛欣　孟祥军①　李娜然(沈阳医学院化学教研室　沈阳市皇姑区黄河北大街146号　110034)摘　要　建立H PL C测定盐酸法舒地尔的有关物质。

采用C18色谱柱,以甲醇2磷酸二氢铵溶液(30∶70,用磷酸调pH值至3.5±0.05)为流动相;检测波长为275nm。

盐酸法舒地尔检测限为0.3m g mL,主成分峰与其有关物质能完全分离。

本方法简便、准确、专属性好,可用于盐酸法舒地尔有关物质的测定。

关键词　盐酸法舒地尔;有关物质;高效液相色谱法中图分类号:O657.7+2 文献标识码:B 文章编号:100428138(2011)04219082031　引言盐酸法舒地尔(Fasudil hydroch l o ride)是一种具有广泛药理作用的新型药物,它的分子结构为52异喹啉磺酰胺衍生物,为RHO激酶抑制物。

临床上主要应用于多种原因引起的缺血性脑血管疾病[1]。

盐酸法舒地尔原料在合成过程中存在有关杂质,为此,本研究参考新药转正标准W S12(X2111)22006Z盐酸法舒地尔及相关文献[2—4],通过方法学验证,建立了盐酸法舒地尔中对有关物质的H PL C,以对盐酸法舒地尔进行更有效的内在质量控制。

2　实验部分2.1　仪器与试剂L C210A tvp高效液相色谱仪(日本岛津公司);N2000色谱工作站(杭州赛尔泰科技有限公司)。

盐酸法舒地尔对照品(批号1006142200401,含量99.5%,中国药品生物制品检定所);盐酸法舒地尔(原料药,湖北黄石世星制药有限公司,批号20080601,20080602,20080603);甲醇(色谱纯);磷酸二氢铵(分析纯);其他试剂均为分析纯。

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ＨＰＬＣ法测定盐酸法舒地尔含量
李扬
（哈尔滨誉衡药业股份有限公司，黑龙江哈尔滨１５００００）摘要：目的：建立测定盐酸法舒地尔含量的方法。方法：采用ＨＰＬＣ法，以１．０％四甲基氢氧化铵（磷酸调节ｐＨ值至７．０）一甲醇（７０：３０）为流动相；流速１．０ｍｌ・ｍｌ；检测波长２８０ｎｍ；进样量２０ｌ。结果：盐酸法舒地尔在１２．０７ｇ／ｍｌ～１２０．７０ｇ／ｍｌ范围内呈良好的线性关系（ｒ＝１）；本品８小时内稳定性良好；平均回收率＝９９．６４％，Ｒ．ＳＤ＝０．１９％＜２．０％；中间精密度良好，ＲＳＤ＝０．４７％＜２．０％；结论：本方法简便、准确、灵敏，适用于盐酸法舒地尔含量的测定。关键词：法舒地尔；含量；高效液相色谱法盐酸法舒地尔是一种蛋白激酶抑制剂即细表１重复性考察结果胞内钙离子拮抗剂。血管平滑肌的收缩是由于平滑肌细胞内ｃａ２＋浓度显著增高激活了关键酶的缘故。当ｃａ２＋达到一定浓度时，与ｃａ２＋结合蛋白钙调素结合，激活肌球蛋白轻链磷酸化酶，将肌球蛋白轻链磷酸化，引起肌肉收缩。蛛网膜下腔出血时，血管中释放出的各种血管收缩物质参与血管痉挛，最终通过肌球蛋白轻链磷酸化造成血管收缩。盐酸法舒地尔通过阻断血管收缩过精密量取供试品储备溶液ｌｍｌ及对照品储备溶液１．４ｍｌ至程的最终阶段，肌球蛋白轻链磷酸化，来扩张血管，抑制血管痉挛。１０ｍｌ容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成每ｌｍｌ约含盐酸１仪器与试药２ｕｇ（１００％）的供试品溶液，同法制备３次。分别取上述溶Ａｇｉｌｅｎｔ１２００高效液相色谱仪；ＭｅｔｔｌｅｒＸＳ１０５ＤＵ分析天平；盐法舒地尔７０ｕｌ注入液相色谱仪，记录色谱图。结果平均回收率＝９９．６４％，酸法舒地尔（批号１００３２１、１００３２２、１００３２３）；对照品：盐酸法舒地尔液２ＲＳＤ＝０．１９％＜２．０％本方法准确度良好。（中国药品生物制品检定所，批号１００６１４ — ２００４０１）。４．４中间精密度试验２色谱条件与系统适用性取１００３２１批供试品，由不同分析人员在不同日期用不同设备以１．Ｏ％四甲基氢氧化铵溶液（磷酸调节ｐＨ值至７．０）一甲醇考察含量的变化情况。ＲＳＤ＝０．４７％＜２．０％。试验（７０：３０）为流动相；流速１．０ｍｌ・ｍｌ；检测波长２８０ｎｍ；进样量分别进行含量测定，结果表明，中间精密度良好。２０ｌ。在上述色谱条件下，盐酸法舒地尔峰理论板数ｎ＝８２７２．９５２；４．５重复性试验与相邻共存物之间的分离度（Ｒ）均＞１．５；连续进样５次ＲＳＤ＝０．取１００３２１批供试品，依法测定其含量，按外标法以峰面积计算５７％；拖尾因子（Ｔ）＝１．０２８。含量，平行测定６份。结果见表１。３测定方法试验结果表明：本方法的重复性良好。精密称取供试品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每ｌｍｌ中
４．６含量测定约含６０ＸｇＩ的溶液。精密量取２０ｌ，注入液相色谱仪，记录色谱图；取盐酸法舒地尔供试样品，依法测定其含量。结果见表２。另取盐酸法舒地尔对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，结果：三批样品结果均在标示量的９０．Ｏ％～１１０．Ｏ％范围内。符合即得。规定。４方法学试验与结果５讨论４．１线性结果表明：盐酸法舒地尔在１２．０７ｇ／ｍｌ～１２０．７０ｇ／ｍｌ范围内精密称取盐酸法舒地尔对照品３０．１９ｍｇ，置５０ｍｌ量瓶中，加流）；本品８小时内稳定性良好；平均回收率动相使溶解并稀释至刻度，作为贮备液。分别精密量取贮备液１、３、呈良好的线性关系１９．６４％，ＲＳＤ＝０．１９％＜２．０％；中间精密度良好，ＲＳＤ＝０．４７％＜２．Ｏ％，５、７、１０ｍｌ，置于５０ｍｌ量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。精９三批中试样品含量均大于９９．０％。因此采用高效液相色谱法进行含密量取２０ｌ注入液相色谱仪，记录色谱图。以其峰面积（Ａ）为纵坐简单、便捷、准确。标，浓度（ｃ）为横坐标，进行线性回归。盐酸法舒地尔在量测定，