粮油检验高粱中单宁含量测定编制说明

MMFSCNG0189 高粱 单宁 分光光度法MM_FS_CNG_0189高粱中单宁含量的测定1.适用范围本方法适用于高粱中单宁含量的测定。

2.原理概要用二甲基甲酰胺溶液振荡提取高粱中单宁。

过滤后取滤液，在氨存在的条件下，与柠檬酸铁铵形成一种棕色络合物，用分光光度计在525nm波长处测定其吸光度值，与标准系列比较定量。

3.主要仪器和试剂3.1.主要试剂单宁酸标准溶液：2.5g单宁酸溶于水中，定容至1000mL。

避光、低温保存，一周内稳定。

推荐使用分子量为1701.25的单宁酸作为标准品，并且配制0.3mg/mL的单宁酸标准溶液，按(4.5.2)测得吸光度值应在0.45～0.55范围之内。

8.0g/L氨溶液：取浓氨水(25％～28％)3.6mL，定容至100mL。

75％(V/V)二甲基甲酰胺溶液：取75mL二甲基甲酰胺，加水约20mL，混匀，放至室温，然后定容至100mL。

3.5g/L柠檬酸铁铵溶液：柠檬酸铁铵试剂铁的含量在17％(m/m)～20％(m/m)之间；3.5g/L溶液，使用前24h配制。

3.2.仪器分析天平（感量0.0001g）、机械粉碎机（带孔径为1.0mm的筛子）。

中速滤纸、振荡机、可见分光光度计（10mm比色皿）。

4.过程简述4.1.试样制备按GB 5491取样。

样品弃去杂质，粉碎后全部通过1.0mm孔径的筛子，混匀。

试样在避光、干燥的条件下最多保存几天。

4.2.水分测定按GB 5497测定试样水分含量。

4.3.提取称取试样约1g，精确至0.0001g，置于100mL三角瓶中，准确加入50mL75％二甲基甲酰胺溶液，加塞子密封，于振荡机上振荡60min，然后用双层滤纸过滤，滤液备用。

4.4.测定用移液管吸取提取液1.0mL，置于试管中，用移液管移加6.0mL水和1.0mL氨溶液，振荡均匀、静置。

自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。

用移液管吸取提取液1.0mL，置于试管中，用移液管移加5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液，振荡均匀，再加1.0mL氨溶液，充分振荡均匀、静置。

高粱中丹宁的测定方法—钨铁钠测定法
原理：单宁类化合物在碱性溶液中能将钨酸钠还原发生蓝色反应，蓝色深浅与
丹宁含量成正比。

标准曲线测制吸取标准丹宁溶液（配制每毫升含.01毫克丹宁的水溶液）0、
0.5、1、2、3、4、5毫升分别放入盛有70毫升水的100毫升容量瓶中，加F-D 试剂（注一）5毫升和饱和碳酸钠溶液（注二）10毫升，加水至刻度，充分混匀，30分钟后用72型分光光度计在650毫微米波长下测定光密度，并绘制光密度—丹宁含量曲线
丹宁的提取与测定取高粱粒10克于锥形瓶中，加水50毫升，于60℃恒温
箱中过夜，将清液过滤至250毫升容量瓶中，高粱粒再加30毫升热水，于80℃水浴中在提取20分钟，清液一并过滤于250毫升容量瓶中，依法提取3-4次，用三氯化铁检查，直至不出现蓝绿色为止，定容待测。

吸取样品上清液（如不清澈需经离心后再测）2毫升置于盛有70毫升水的100毫升容量瓶中，加入5毫升F-D试剂和10毫升饱和碳酸钠溶液，加入至100毫升，充分摇匀，30分钟后与650毫微米下比色，记录下光密度读数。

结果计算从标准曲线上查处相应的丹宁微克数，代入下式，即求出样品由丹宁含量。

丹宁（%）=(P*vo/w*v1)*100
式中：p-由曲线上查的丹宁微克数，w-提取丹宁所有的高粱样品重量（克），v0-提取液定容体积（毫升）。

（注一）750毫升水加入钨酸钠100克，磷钼酸20克及磷酸50毫升，回流2小时，防冷，稀释成1升。

（注二）每100毫升水中加入无水碳酸钠35克，在70-80℃下溶解，放置过夜，次日用极少量的结晶碳酸钠作为晶钟，轻轻放入过饱和碳酸钠溶液中，结晶过滤，饱和碳酸钠备用。

高粱1.范围本标准规定了高粱的相关术语和定义、分类，质量要求，检验方法，判定规则等要求。

本标准适用于公司收购食用高粱2.规范性引用文件3.术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1容重：高粱籽粒（通过4.5MM圆孔筛留存在2.0MM圆孔筛上）在单位容积内的质量，以克/升（G/L）表示。

3.2不完善粒：受到损伤但尚有使用价值的颗粒，包括以下几种：A病斑粒：粒面有病斑，伤及胚或胚乳的颗粒。

B虫蚀粒：被虫蚀，伤及胚或胚乳的颗粒。

C破损粒：籽粒破损，伤及胚或胚乳的颗粒。

D生芽粒：芽或幼根突破种皮的颗粒。

E生霉粒：粒面生霉的颗粒。

F热损失粒：受热后胚或胚乳显著变色和损伤的颗粒。

3.3杂质：通过规定筛层和无使用价值的物质，包括下列几种：A无机杂质：泥土、沙石、砖瓦块等杂质。

B有机杂质：无使用价值的高粱理、高粱壳、异种杂粮等杂质。

3.4色泽气味：一批高粱固有的色泽气味。

3.5带颗粒：带有高粱壳的高粱粒。

（实际收购中带颗粒占有15%左右）4分类根据高粱的外种皮色泽分为三类：A红高粱：种皮色泽为红色的颗粒B白高粱：种皮色泽为白色的颗粒C其他高粱；上述两类以外的高粱5.质量要求5.1各类高粱按容重定等，其质量指标见表1表1 高粱质量指标5.2卫生指标按GB2715和国家有关标准和规定执行。

6.检验方法6.1检验的一般规则：按GB/T5490-2010执行6.2扦样、分样：按粮食检验-扦样分样执行6.3色泽、气味检验：按粮食检验-色泽气味鉴定执行6.4杂质、不完善粒检验：按粮食检验-杂质不完善检验执行6.5水分检验：按粮食检验-水分测定法执行6.6容重检验：按粮食检验-容重测定法执行7.判定规则各类高粱以容重定等，其余指标作为增扣价依据。

低于三等的为等外高粱。

等外高粱一般情况下拒收，如受气候影响高粱质量下降，低于三等和带壳粒超标的高粱按应急会议纪要规定收购；水分超标的高粱拒收；杂质、不完善粒超标部分按百分比扣除让步接收。

高粱单宁含量的测定
白高粱单宁测定是指测定白高粱（小麦谷类）中氨基甲酸内酯含量的测定方法。

AANA属于小麦谷类中的主要营养成分，其中单宁正是小麦谷类最重要的活性组分之一。

因此，测定白高粱单宁及其含量对评价小麦谷类品质和加工性质具有重要意义。

目前，白高粱单宁含量测定常用的方法是薄层色谱法（TLC）。

简而言之，该法采用溶液抽提方法，用苯乙烯-乙醛-1,4-丙二醇-1-乙基-2-己腈蒜酸-三氟甲烷等溶剂混合高粱样品，以苯甲酸溶剂萃取，精馏、凝胶后取液分离，收集下游处理液，做出乙醇类溶液然后常温冷冻干燥，在双正离子模式下，再次水解，用苯乙烯-乙醛-1, 4-丙二醇-1-乙基-2己腈蒜酸-三氟甲烷等后处理液，采用薄层色谱法，将分离液研制在层析介质上，从而实现AANA物质的测定。

在实际应用中，为了保障测定结果的准确性，实验室应采用优质的仪器设备，合理选择天然样品，熟练操作抽取、过滤等步骤，正确操作质谱仪，熟悉使用薄层色谱法（TLC），这些步骤均关系到白高粱单宁测定的准确性。

综上所述，白高粱单宁测定是测定白高粱中氨基甲酸内酯（AANA）含量的重要方法，其准确性直接关系到影响小麦谷类营养成分及原料质量评定，因此，良好的仪器设备、规范的操作方法、优质的样品，以及正确使用TLC等研究，均对白高粱单宁测定具有重要意义。

农业行业标准《饲料原料高粱》编制说明（送审稿）一、标准制定背景及任务来源1、标准制定背景高粱（Sorghum bicolor）为被子植物门、单子叶植物纲、禾本目、禾本科、高粱属。

依色泽可将高粱分为红高粱、黄高梁、白高粱、混合高粱，可用于酿造、食粮、饲料用等。

世界前三大高粱主产国为美国、印度和尼日利亚。

美国是世界第一大高粱生产国和出口国，而中国是高粱的主要进口贸易国和消费国（图1-2）。

2017年，全球高粱产量在5916万吨左右，较前几年略有下降，主要由于美国高粱总产量下降约300 万吨导致；中国高粱产量为385万吨，较前几年略有上涨，但是与国内消费总量1000万吨相比，仍存在巨大的缺口，依旧需要通过进口高粱来弥补（图1-2）。

国内高粱的种植面积从1961年1亿多亩下降到如今不足1000 万亩（图3）；平均单产却产生巨大增长，由原先62千克/亩增长到现在300千克/亩；但全国高粱总产量也由曾经900多万吨下降到如今不足300万吨（FAO，2018）。

当然，多方面因素促成这种局面，包括粮食作物多样化、土壤的优化、品种改良和政策导向等。

国内种植的高粱主要功能也由食用型转变成酿造型，随着进口高粱的冲击，未来有可能转变成饲料用型，用以替代玉米用作能量原料，据推算，我国高粱总产约250万吨，80%用作酿造工业原料，10%用作饲料，5%用于食粮，5%为其他用途。

随着玉米价格的不断波动（图4），高粱作为非常规的饲料原料越来越受到饲料养殖企业的重视。

从2012年开始，我国首次以饲料用途进口澳大利亚高粱，随后美国高粱也进入中国市场，并且进口量不断飙升，2014年我国高粱进口量达600万吨，2015年进口量近1000万吨，远远高于我国高粱的年总产量，且大部分进口高粱进入饲料企业做能量饲料使用。

美国《猪的营养需要》（NRC，2012）显示高粱的消化能（3596 kcal/kg），代谢能（3532 kcal/kg）和净能（2780 kcal/kg）较玉米高出4%左右；在粗蛋白质（9.36%）和淀粉（70.05%）方面，也是高粱高于玉米，但是高粱大部分氨基酸标准回肠消化率低于玉米，这可能与高粱中抗性物质较多有关。

《粮油检验高粱单宁含量测定》国家标准编制说明《高粱单宁含量测定法》国家标准编制小组2008年4月20日1．工作简况（包括任务来源、协作单位、主要工作过程、国家标准主要起草人及其所做的工作等）1.1 任务来源及协作单位根据全国粮油标准委员会《2008年国家标准制修订计划》的要求，河南工业大学负责编制国家标准《粮油检验高粱单宁含量测定》(项目编号20063473-T-449)，河南工业大学组成了起草小组。

1.2 主要工作过程2008年2月，起草组检索和查阅了国际标准化组织和发达国家关于高粱单宁的测定方法，确定采用国际标准。

为了保证本标准为最新国际标准的版本，标准起草工作组查阅了国际标准最新的标准目录，通过国际互联网查阅了最近一段时间相关国际标准的修制定情况。

2008年3月，起草组开始对ISO 9648 : 1988(E) Sorghum — Determination of tannin content 进行了全文翻译。

2008年4月，完成ISO 9648 : 1988(E)的翻译并形成《粮油检验高粱单宁含量测定(征求意见稿)》，通过正式文件向国内相关高等院校、科研机构、生产企业和个人征求意见。

2. 国家标准编制原则和确定国家标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、实验方法、检验规则等）的论据（包括实验、统计数据），修订国家标准时，应增列新旧国家标准水平的对比2.1 编制原则本标准等同翻译ISO 9648 : 1988(E) Sorghum — Determination of tannin content，为我国高粱单宁含量测定提供方法。

2.2 确定国家标准主要内容的依据根据GB/T 1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》、GB/T 20000.2-2001《标准化工作指南第2部分：采用国际标准的规则》、GB/T 1.2-2002 《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》规定的要求, 为了便于使用, 做了下列修改。

食品中单宁的测定1、单宁的性质单宁是多酚中高度聚合的化合物，它们能与蛋白质和消化酶形成难溶于水的复合物，影响食物的吸收消化。

可分为水解单宁（HT）和缩和单宁（CT），两者常共存。

后者也称原花色素全谷、豆类中的单宁含量较多。

单宁又称单宁酸、鞣质，存在于多种树木（如橡胶树和漆树)）的树皮和果实中，也是这些树木受昆虫侵袭而生成的虫瘿中的主要成分，含量可达50 %～70 %。

单宁为黄色或棕黄色无定形松散粉末，在空气中颜色逐渐变深，有强吸湿性; 不溶于乙醚、苯、氯仿，易溶于水、乙醇、丙酮，水溶液有涩味。

单宁不是单一化合物，化学成分比较复杂，大致可分为两种，一种是缩合单宁，是黄烷醇衍生物，分子中黄烷醇的第2 位通过C - C 键与儿茶酚或苯三酚结合。

一种是可水解的单宁，分子中具有酯键，是葡萄糖的没食子酸酯，另一种是常用的单宁。

单宁长期以来仅被我国人民用来鞣制生皮使其转化为革。

自20 世纪50年代后，单宁能与蛋白质、多糖、生物碱、微生物、酶、金属离子反应的活性以及它的抗氧化、捕捉自由基、抑菌、衍生化反应的行为被揭示后，其应用前景和范围迅速扩大。

目前它在食品加工、果蔬加工、贮藏、医药和水处理等方面已取得重要突破，近年来它在化妆品生产中也崭露头角。

2、单宁的来源与应用2.1单宁的来源单宁，是英文（Tannins）的译名，它是葡萄酒中所含有的二种酚化合物其中的一种物质，尤其在红葡萄酒中含量较多，有益于心脏血管疾病的预防。

葡萄酒中的单宁一般是由葡萄籽、皮及梗浸泡发酵而来，或者是因为存于橡木桶内而萃取橡木内的单宁而来。

单宁的多少可以决定酒的风味、结构与质地。

缺乏单宁的红酒质地轻薄，没有厚实的感觉，薄酒莱红酒就是典型代表。

单宁丰富的红酒可以存放经年，并且逐渐酝酿出香醇细致的陈年风味。

当葡萄酒入口后口腔感觉干涩，口腔黏膜会有褶皱感，那便是单宁在起作用。

2.2单宁的应用（1）单宁在医药中的应用单宁不仅是多种传统草药和药方中的活性成分 ,而且具有独特和多样的生理活性 ,其药学活性是综合作用的结果。

植物单宁的含量测定方法1 植物单宁单宁（Tannins）又称单宁酸、鞣质、鞣酸。

按Bategnt的定义，指相对分子质量为500~3000的能沉淀蛋白质、生物碱的水溶性多酚化合物。

主要应用于[1]医药、食品、制革、日用化学品、水处理等领域。

单宁在传统医药上内服可治胃肠道出血和止痢，外用于局部止血和创面保护防止感染发炎；近年研究发现单宁还具有抑菌抗病毒、抗过敏、抗氧化和延缓衰老、预防心血管疾病、抗肿瘤和促进免疫等作用。

单宁在食品行业中可作为功能性成分用于制作保健品，生产食品添加剂、风味剂等；在化妆品中主要起收敛、防晒、美白、抗皱、保湿、防腐等作用；在制革工业中，单宁是栲胶的主要成分。

2 单宁的含量测定经典的有皮粉法、干酪素法、氧化滴定法、分光光度法等；现阶段涌现出许多新型的测定方法，如高效液相色谱法、流动注射分析法、原子分光光度法等。

2.1 经典测定方法2.1.1 皮粉法皮粉法是国际上公认的单宁含量测定方法，从 20 世纪 60 年代至今，原苏联、日本、印度和中国都采用此法作为国家标准测试方法。

皮粉的主要成分是蛋白质，单宁是多元酚类，分子中的酚羟基与蛋白质的酰胺键以氢键结合形成不溶于水的沉淀，以此使单宁沉淀下来，用重量法测定其含量。

根据皮粉与单宁溶液接触方式不同，可将其分为震荡法和过滤法。

震荡法是皮粉与单宁溶液一起震荡来脱去溶液中的单宁；过滤法是将单宁溶液流过皮粉柱层以脱去单宁。

通常，过滤法所测的单宁含量比震荡法高5%～7%。

皮粉法所测的是单宁的绝对含量，并且不需要标样，操作简单，可用其测定中药水提液中鞣质的含量[2]。

但皮粉法的缺点是，用重量法测定样品时，须经过过滤、干燥、称重，样品耗用量大，测定时间较长，一般样品分析需20 h 左右，不适合大批量样品的快速测定；没有选择性，对低相对分子质量的多酚也具有一定的吸附能力，往往使测定结果偏高；适用于单宁含量高的样品，不适合低含量和微量测定；另外皮粉试剂的供应和质量都较难保证。

高粱丹宁的性质、抗营养作用及去毒
梁威
【期刊名称】《黑龙江畜牧兽医》
【年(卷),期】1991()6
【摘要】高粱作为畜禽能量饲料的重要来源,在我国,尤其东北地区种植较为普遍。

但是,长期高比例给畜禽饲喂高梁,却易降低畜禽饲料转化率,甚至导致畜禽中毒。

国内外学者研究发现,这与高粱中富含的抗营养物质——丹宁有关。

关于饲料中丹宁的性质、抗营养作用及其去毒,国内外研究很多,本文仅就高粱丹宁的研究情况作一介绍。

1.高粱丹宁的性质一般认为,丹宁是水溶性的酚类化合物,分子量500—3,000,除具有酚的一般性质外,还具有特殊性质,可与生物碱、白明胶或某些蛋白质发生沉淀反应。

【总页数】2页(P42-43)
【关键词】高粱;丹宁;性质;去毒;抗营养作用
【作者】梁威
【作者单位】西北农业大学畜牧系
【正文语种】中文
【中图分类】S514.01
【相关文献】
1.中药黄连对鲢鱼消化酶和去毒酶活力及抗MC-LR作用的影响 [J], 韩光耀;毕潇;余飞;孔德红;朱炎坤;周亮;谢丽玲
2.去甲斑蝥素抗白血病作用——细胞毒作用 [J], 郭建芬
3.高粱中抗营养因子的化学性质及其对畜禽的影响与作用机制(续完) [J], 万建美(译);孙相俞(译)
4.高粱中抗营养因子的化学性质及其对畜禽的影响与作用机制 [J], 万建美(译);孙相俞(译);E. B. Etuk;N. J. Okeudo;B. O. Esonu;A. B. I. Udedibie
5.畜禽饲料中抗营养物质的研究进展——单宁的性质、抗营养作用及去毒 [J], 梁威
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。