真菌分类学(标本的采集与制作)

实验实习指导实验一菌物标本采集和制作一、目的：通过菌物标本采集，了解菌物的生态和多样，进一步认识菌物对寄主的危害性，以及它们与自然界和人类关系。

二、采集用具：扩大镜（10—20X）、标本夹、绳、采集袋（箱）、小刀、剪、镊子、指形管（带塞）、标本纸、塑料袋、标笺、记录本、铅笔、固定液（FAA）、照相机等。

三、采集方法：采集的主要对象是植物的根、茎、叶、花器和果实等发病的部位，其上有明显子实体、或植株残体上和林间地上腐生的大型真菌。

1、采集叶部菌物时，用扩大镜注意观察发病叶片正反两面病斑上有无子实体（霉层、霜霉层、小黑点、锈粉、白粉、泡斑等）；采集时叶片不能太少（一般应采集数片至数十片），预防在制作和鉴定时破损，有的还需要固定作切片用，多余的可作交流；对采集到寄主不熟悉时，最好要采到它的花和果实或种子，以便有助于寄主鉴定；采到锈菌类黑粉菌类、要分别用纸将标本包好，记上标记，以免孢子混杂；如果病斑上未见到子实体的标本，可带回室内进行保湿培养，可能产生分生孢子。

2、采集茎秆部的真菌的，用剪子剪下发病茎秆上具明有明显子实体部分。

如为树干，用小刀将有子实体的树皮削下；如植株是萎茑型的茎秆上有时无霉层，可将茎秆剖开观察内部维管束是否变褐色，将标本带回室内进行分离培养。

3、采集花器或穗部的真菌时，注意发病花器易于腐烂，应先将发病花器的症状照下来，然后用纸包好，记上标记，如病穗上为黑粉状物，也先用纸包好，以免孢子混杂污染。

4、采集果实上真菌时，注意发病果实易于腐烂，应先拍照病果的症状，再用纸包好，记上标记，放入采集袋内。

5、采集根部的真菌时，先观察植株地上部有无不正常现象，然后拔起植株或刨开茎基部土壤，观察根上或茎基部有无菌层或菌丝束或小菌核等物。

6、采集幼苗的真菌时，可将发病幼苗拔起除去根上泥土，用纸包好，记上标记带回室内进行保湿培养或分离培养。

7、采集大型真菌（伞菌、多孔菌、地星、马勃等）时，最好在大雨后2—3天，林木中最多，一般发生在树丛或树桩基部，或树干上，地上或枯枝落叶上，这类真菌大多是肉质或胶质，易于败坏，也应先拍照他们的形态特征，然后用纸包好，记上标记，带回室内用浸渍法或烤干保存。

野外大型真菌识别、标本采集和室内分离一、目的与要求1、掌握野外标本采集的方法和注意事项2、认识常见的大型真菌。

二、实验原理大型真菌以夏秋多雨时的七、八月份出现最多（春季发生的菌类比较少，仅盘菌目中的羊肚菌、马鞍菌和丛耳菌等多发生于春末），所以此时采集标本最为适宜。

担子菌门是一群多种多样的真菌，约1.6万种。

其特征：①菌丝具横隔，有单核菌丝和双核菌丝（又称初生菌丝和次生菌丝），担孢子萌发时形成单核菌丝，单核菌丝接合，核不结合而形成双核菌丝。

双核菌丝时期相当长。

②形成担子、担孢子，在此过程中有锁状连合。

担子菌分为四纲：①层菌Hymenomycetes，如银耳、木耳、灵芝、蘑菇等。

②腹菌纲Gasteromycetes，如马勃、鬼笔等。

③锈菌纲。

④黑粉菌纲。

泰山常见药用蕈菌有：茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf.、灵芝Ganoderma lucidum (Leys. ex Fr.) Karst．、蜜环菌Armillaria mellea (Vahl. ex Fr.) Kummer．、脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii Reich.、猪苓Polyporus umbellatus (Pers.) Fr.、雷丸Polyporus mylittae Cook. et Mass.、猴头菌Hericium erinaceus (Bull. ex Fr.) Pers.、云芝Coriolus versicolor (Fr.) Fr.、银耳Tremella fuciformis Berk、木耳Auricularia auricular (L. ex Hook.) Underw．、紫芝Ganoderma japonicum (Fr.) Lloyd．、大马勃Calvatiagigantean (Batsch ex Pers) Lloyd.、紫色马勃C. lilacina (Mont. et Berk.) Lloyd.等。

植物内生真菌的分类鉴定方法植物内生真菌是指在植物体内生活并与植物形成共生状态的真菌。

它们在植物生长和发育中扮演着重要角色，可促进植物的生长和抵抗病原微生物的能力。

对植物内生真菌进行分类鉴定是研究植物与真菌相互作用的重要基础。

本文将介绍植物内生真菌的分类鉴定方法。

一、分类鉴定的样本采集和处理1. 样本采集：根据需要采集植物的根系样本，选择表现出明显病状或异常的植株，或者在不同生长时期采集不同部位的样本。

2. 样本处理：将采集的样本用刀片或消毒的剪刀从植物体上切取。

为了避免外源杂菌的污染，可以在取样前用70%酒精或漂白粉消毒，然后用无菌蒸馏水或含有保鲜剂的缓冲液清洗数次，将清洗后的样本装入无菌离心管中。

二、分类鉴定的培养方法1. 消毒：将采集的样本在无菌工作台上消毒，可以用70%酒精或漂白粉进行表面消毒，然后用无菌蒸馏水洗涤数次。

2. 培养基：选择适当的培养基进行分离培养。

一般常用的培养基有马铃薯蔗糖琼脂培养基（PDA）、玉米粉蔗糖琼脂培养基（CMD）、毛状植物根培养基等。

3. 分离培养：将处理好的样本放置在培养基上，均匀涂抹或切割后排列，然后放置在适当的温度和湿度条件下培养。

4. 培养温度和时间：一般情况下，在适宜的温度（25-28°C）和光照条件（12小时光照/12小时暗）下培养一周左右，观察是否有菌落形成。

5. 菌落转接：当菌落形成后，可以用无菌环取样，将菌落转移到新的培养基上进行纯培养。

6. 保存：可以将纯培养的菌株进行保存，可以冷冻保存或进行液氮冻存。

三、分类鉴定的鉴定方法1. 形态学鉴定：通过观察菌落的形态、色素、菌丝等形态特征，以及产孢体、分生孢子的形态特征等来进行鉴定。

可以借助显微镜观察菌丝的形态、菌落的形态、菌丝状产孢体和产生的孢子形态。

2. 分子生物学鉴定：采用PCR方法对菌株进行鉴定。

通常可以从菌落或孢子中提取菌株的DNA，然后进行PCR扩增，再通过序列分析进行鉴定。

临床医学检验知识速记--（真菌）微生物学真菌(fungus)是一类具有典型细胞核，有核膜和核仁，胞浆内有完整的细胞器，无根、茎、叶，不含叶绿素，无光合色素，细胞壁含几丁质和纤维素的，单细胞或多细胞异养真核细胞型微生物。

细胞壁：不含肽聚糖，含几丁质及纤维素临床分类(按致病部位)：浅部真菌、深部真菌形态学分类：单细胞真菌、多细胞真菌真菌的形态与结构在鉴定上起重要作用（一）形态与结构1、单细胞真菌：圆形或卵圆形，包括酵母型和类酵母型真菌。

酵母型真菌以芽生方式繁殖，芽生孢子成熟后脱落成独立个体，不产生菌丝，其菌落与细菌菌落相似。

类酵母型真菌也以芽生方式繁殖，菌落与酵母型真菌相似，但它产生的芽体不从母细胞上脱落，而是延伸入培养基内形成假菌丝。

对人致病的主要有新生隐球菌和白假丝酵母菌。

2、多细胞真菌：由菌丝和孢子两种基本结构组成（1）菌丝：在环境适宜情况下由孢子萌发长出芽管，逐渐延长呈丝状，称菌丝。

按照功能分为：①营养菌丝：伸入培养基；②气生菌丝：露出培养基向空气中生长；③生殖菌丝按照结构分为：①有隔菌丝：多数致病性真菌；②无隔菌丝。

菌丝的形态大小不一(螺旋状/球拍状/鹿角状)、菌丝间有无分隔、形状特征(绒毛状/絮状/粉末状) → 鉴别真菌（2）孢子：由生殖菌丝产生的一种繁殖体，是真菌的繁殖结构。

有有性孢子和无性孢子两类①有性孢子：同一菌体或不同菌体上的2个细胞融合经减数分裂形成。

包括：卵孢子、接合孢子、子囊孢子、担子孢子，多为非致病性真菌所产生。

②无性孢子：菌丝上的细胞分化或出芽生成，不经两性细胞的配合。

病原性真菌大多形成无性孢子。

可分为三种a. 分生孢子：又可分为大分生孢子（其大小、细胞数和颜色是鉴定的重要依据）、小分生孢子（真菌都能产生，诊断意义不大）b. 孢子囊孢子c. 叶状孢子：又可分为芽生孢子（一般芽生孢子生长到一定大小仍不与母体脱离，则形成假菌丝）、厚膜孢子（是真菌的一种休眠形态）、关节孢子真菌种类不同，孢子形状大小也不同→ 鉴别真菌3、二相性真菌：少数真菌在营养、温度、理化因素等不同环境条件下，可发生单细胞与多细胞两种形态的可逆转化，称为双向性真菌。

实验五、真菌标本采‎集与制作（腐生菌、寄生菌和共‎生菌的认识‎）一、实验目的1、了解和掌握‎腐生菌、寄生菌和共‎生菌的生活‎习性和采集‎、保存方式2、掌握真菌标‎本的采集和‎保存方式二、实验材料1、植物病原真‎菌干标本2、大型真菌干‎标本3、大型真菌浸‎渍标本三、实验内容1．真菌的分布‎根据真菌生‎境和生活方‎式不同可将‎其分为：（1）水生真菌：在水中腐生‎于动植物尸‎体上，有的寄生于‎动植物上，危害水中动‎物，如水蕾属（Sapro‎l egni‎a）。

（2）地生真菌：这类真菌的‎种类较多，生活环境不‎同，庭院、公园、草原等地都‎可生长。

（3）木生真菌：有的寄生于‎活立木上，危害林中树‎木，形成森林病‎害；有的腐生于‎枯立木、倒木或伐木‎桩上，有利于清除‎林中垃圾，成为“林中清道夫‎”。

（4）病害真菌：这类真菌寄‎生于人、动物及各种‎农作物体上‎，使人、动物及农作‎物患病。

（5）共生真菌：真菌与藻类‎共生形成地‎衣；密环菌和天‎麻共生；接合菌、伞菌、担子菌与高‎等植物形成‎菌根。

2．真菌标本的‎采集制作（1）采集用具平底背筐，平底手提筐‎，纸盒若干个‎（或铝盒、小指管若干‎个，塑料袋若干‎个），木箱1～2个，液浸标本筒‎1～2个，掘根器，刨根器，手锯，短刀，刀片，白纸，纱布，号牌，线或细绳，钢卷尺，湿度计，温度计，pH试纸，测高计等。

（2）采集方法空气、土壤或动植‎物体上的真‎菌多属于霉‎菌，采集这类真‎菌常用分离‎或纯培养方‎法得到。

而伞菌、多孔菌、盘菌、锈菌、黑粉菌、银耳等各种‎真菌的采集‎方法如下：①地生真菌采‎集：采集时用手‎轻轻捏住菌‎柄基部，缓慢将菌体‎旋转一周，然后拔出，尽量带出地‎下部分，抖掉泥土。

采集时注意‎保持菌体的‎完整性，不要损伤各‎部，以免给鉴定‎带来困难。

有些菌类的‎菌柄在土中‎埋的很深，需用刀或掘‎根器挖出来‎。

有些伞菌柄‎的基部，盘菌和腹菌‎基部，有菌索伸入‎土中，注意一起采‎取。

XXXX医院真菌标本采集标准操作规程1 目的规范真菌标本采集、接种培养及鉴定标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2 适用范围各类真菌检测的标本。

3 标本采集及处理3.1 标本类型痰、尿、粪、脓液、脑脊液、血、拭子、皮屑、甲屑、气管穿刺抽取的痰液等。

3.2 标本采集与处理3.2.1 痰液、气管穿刺抽取的痰液。

3.2.2 尿液：早晨中段尿10ml，离心收沉淀液1 ml，作真菌涂片及培养。

3.2.3 口腔、咽喉、外耳道、阴道、和直肠黏膜的标本：应迅速放入内装1 ~ 2 ml无菌蒸馏水的试管送检。

常规KOH涂片及SDA培养。

3.2.4 粪便：无菌盒送检，挑取黏液、脓血接种于含氯霉素培养基上。

3.2.5 脓液：脓液标本应置无菌广口有盖玻璃瓶或小的无菌平皿中，立即送检。

3.2.6 脑脊液：采集于无菌试管3 ~ 5 ml立刻送检，离心后以无菌吸管吸取离心沉淀物1 ml，作黑汁涂片镜检和培养（SDA）25℃及37℃1周。

3.2.7 血液：分别于左右两侧尢菌抽血3 ~ 5 mI，立即置于脑心浸出液肉汤。

3.2.8 体液：支气管积液、关节腔积液、心包积液、腹水等10ml，离心沉淀后取0.5ml沉淀液作直接镜检（注意颗粒）及培养。

3.2.9 组织：标本置无菌平皿中立即送检，置无菌研钵或组织匀浆器加2 ml蒸馏水，研磨成浆或切成1 ~ 2 mm3的小块作真菌直接镜检（KOH涂片）及培养。

3.2.10 皮屑：皮损的边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑或活动边缘皮屑。

取材前用75％酒精棉球消毒取材处，标本作真菌直接镜检（KOH涂片）和培养。

3.2.11 甲屑：用细锉或牙科磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴近甲床部的甲屑，标本用酒精浸泡待干燥后以十点接种法分别种于含放线菌酮及不含放线菌酮的SDA平皿，25℃ ~ 28℃培养3周，并同时作KOH 涂片。

3.2.12 毛发：取病发15根、75%酒精消毒，3 ~ 5根作直接镜检，5 ~ 10根种于SDA斜面（加氯霉素），稍划破斜面掩埋。