线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒产品组成：产品编号BB-4105-1 BB-4105-2 BB-4105-3规格20 assays 50 assays 100 assaysJC-1 100ul 250ul 500ul10×孵育缓冲液4ml 10ml 20ml产品简介：线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。

可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。

在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。

凋亡细胞则大多为FL1单阳性。

这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。

常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。

贝博线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。

试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；使用方法：悬浮细胞1、孵育缓冲液和JC-1染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制孵育缓冲液和JC-1染色工作液。

取100ul 10×孵育缓冲液加900ul无菌纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×孵育缓冲液；在500ul 1×孵育缓冲液中加入5ul JC-1，涡旋混匀配成JC-1染色工作液；2、收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。

线粒体膜电位检测（JC-1)大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。

JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。

根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。

所需仪器或者试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。

2． JC-1避光保存及使用。

3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。

4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。

线粒体膜电位变化检测细胞凋亡实验原理JC-1（5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide）是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。

可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。

在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光（FL-2 通道）；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1 为单体(monomer)，可以产生绿色荧光（FL-1 通道）。

这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。

常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。

线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。

通过JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

JC-1 单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为527nm；JC-1 聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。

实验用品1.12⨯75mm 的Falcon 管和15ml 聚苯乙烯离心管2.微量加样器和加样头3.线粒体检测试剂盒（货号551302，100tests），包括JC-1和10 ⨯ Assay Buffer, 注：每个KIT 包括 4 小瓶JC-1 试剂，每小瓶试剂足够检测25 个样本4.离心机5.CO2 培养箱6.流式细胞仪样本制备图1：试剂准备和JC-1 染色步骤总揽1.在JC-1粉末中加入125ulDMSO使其充分溶解，配成JC-1 Stock Solution，需根据实验的量分装-20度保存。

2.根据样本量配制JC-1 Working Solution，每个样品500ul 1×Assay Buffer + 5ulJC-1 Stock Solution。

O I.II.III.IV.V.Order:order@Kit cStorStora Peri One Prot1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Re@signalwayanti contents:SpecificaJC-1Incubation concentrate rage age it at -20od of validitYeartocol:. Collect samp are about 2-The cells arePreparation Prepare Incusamples and incubation b buffer; then staining worResuspend minutes in 5CentrifugateCells were reAnalysis resfluorescence esult Analys 1. Detect c FL1 cha are nor 2. Observ filter , anRed + b M ation 1 n buffersolution℃ without lig ty ples cells as -5×105.e washed tw of Incubationubation buffe d the followin buffer concen add 5μl JC-1rking solution the cells with5% CO2 incu e to collect ce esuspended sults by flow c e microscopy sis cell apoptosi annel and re mal cells, FL e under fluornd observe th by two-color Mitocho For Resea 20 as 1004m ght, and avoi well as nega wice with PBS n buffer solu er and JC-1 s ng proportion ntrate solutio 1 to the 500u n; h 500μl JC-1bator; ells at room t with 500μL cytometry or y or laser sca is by flow cyt d fluorescen L-1+, FL-2- a rescence mic he yellow-gre filter , and ob ondrial M Cat. arch Use On ssays 0ulml d repeated f ative, positiv S, then Centr tion and JC-staining work ns. Add 900n, mixing an ul incubation staining wo temperature;preheat incu r fluorescenc anning confo tometry : the nce detected are apoptotic croscope: ob een by single serve the gre Membra . No: CA0 CA0 CA0nlyS 50 assay 250ul 10ml freezing and e control cel rifuge and co -1 staining so king solution μl sterile deio d preheating buffer and v rking solutio ; ubation buffe ce spectropho ocal microsco e green fluore through the cells.bserve Green e filter are no een by single ane Pote 003-1 20003-1 50003-2 100Support:tech@ys 10thawing.ls, and the n ollect cells; olution: according to onized water g to 37 ° C to vortex mixing n, 37 °C, and r; otometer, or opy.escence dete FL2 channe n ++, Red + ormal cells; o e filter are ap ential A 0T 0T 0T @signalwayan 0 assays 500ul 20ml number of ce o the number to 100μlo get incubati dubbed JC-d incubate fo observations ected through l. FL-1+, FL-+ by two-colo bserve Gree poptosis cells Assay ki CA003CA003t llsr of ion -1or 15 s by h the-2+ or en ++, s.。

线粒体膜电位是反映线粒体功能的重要参数，其检测有助于评估细胞的能量代谢状态以及细胞凋亡等过程。

肝癌细胞线粒体膜电位的检测方法可以采用荧光探针法，常用的荧光探针包括JC-1、Rhodamine 123等。

这些荧光探针可以与线粒体膜电位结合，发出荧光信号，从而反映线粒体膜电位的变化。

具体操作步骤如下：
1.收集肝癌细胞样本，并进行适当的处理，如洗涤、离心
等。

2.将荧光探针与肝癌细胞孵育，使荧光探针与线粒体膜电
位结合。

3.洗涤去除未结合的荧光探针。

4.使用荧光显微镜或流式细胞仪等设备检测荧光信号，分
析线粒体膜电位的变化。

需要注意的是，荧光探针法虽然简便易行，但也可能受到一些因素的干扰，如细胞自噬、线粒体膜通透性改变等。

因此，在实际应用中，需要综合考虑多种因素，选择适当的检测方法，并结合其他指标进行综合分析。

此外，线粒体膜电位的检测还可以采用其他方法，如电化学法、原子力显微镜等。

这些方法的原理和操作步骤各有不同，可以根据具体需求和条件进行选择。

jc1线粒体膜电位流式
【最新版】
目录
一、JC1 检测线粒体膜电位的原理
二、JC1 的流式检测方法
三、JC1 的应用优势
四、总结
正文
一、JC1 检测线粒体膜电位的原理
线粒体膜电位是细胞内重要的生理指标之一，它直接影响着细胞的能量代谢。

JC1 是一种常用的线粒体膜电位检测试剂，其原理是基于 JC1 在低浓度下以单体存在，能检测到绿色荧光，而在高浓度下以多聚体存在，能检测到红光。

通过流式检测，JC1 可以对线粒体膜电位进行快速、准确的测量。

二、JC1 的流式检测方法
JC1 的流式检测方法通常分为两个通道，即 FL-1 和 FL-2。

在低浓度下，JC1 以单体存在，通过 FL-1 通道检测，可以得到绿色荧光信号。

在高浓度下，JC1 以多聚体存在，通过 FL-2 通道检测，可以得到红光信号。

通过比较不同浓度下的荧光信号强度，可以计算出线粒体膜电位的值。

三、JC1 的应用优势
相较于其他线粒体膜电位检测方法，JC1 具有以下优势：
1.快速：JC1 的流式检测方法可以在短时间内完成大量样本的检测，提高了检测效率。

2.准确：JC1 能对线粒体膜电位进行定量检测，结果更为准确可靠。

3.可重复性强：JC1 检测结果具有较好的重复性，适合进行大规模研究。

4.安全性高：JC1 对细胞毒性低，对实验结果影响较小。

四、总结
综上所述，JC1 是一种适用于线粒体膜电位检测的高效、准确、安全的试剂。

jc1线粒体膜电位流式摘要：I.引言A.介绍JC1荧光探针B.阐述JC1与线粒体膜电位的关系II.JC1在细胞内的分布与线粒体膜电位A.线粒体膜电位的定义B.JC1在不同线粒体膜电位下的分布C.JC1荧光信号与线粒体膜电位的关系III.流式细胞术检测JC1荧光信号A.流式细胞术的原理B.流式细胞术在JC1检测中的应用C.流式细胞术检测JC1荧光信号的结果分析IV.JC1在生物医学研究中的应用A.JC1在细胞凋亡研究中的应用B.JC1在神经科学研究中的应用C.JC1在其他生物医学研究中的应用V.总结正文：I.引言JC1是一种荧光探针，可以用于检测线粒体膜电位。

线粒体是细胞内的能量工厂，参与细胞的生长、发育和凋亡等过程。

线粒体膜电位是反映线粒体功能的重要指标。

JC1与线粒体膜电位之间存在一定的相关性。

当线粒体膜电位低于-100mV时，JC1主要分布在细胞质中，呈现绿色荧光。

当线粒体膜电位高于-100mV时，JC1开始聚集在线粒体上，呈现红色荧光。

因此，通过流式细胞术检测JC1的荧光信号，可以间接反映线粒体膜电位的变化。

II.JC1在细胞内的分布与线粒体膜电位A.线粒体膜电位的定义线粒体膜电位是指线粒体膜内外两侧存在的电位差。

线粒体膜电位在细胞的能量代谢、信号转导等方面起着重要作用。

B.JC1在不同线粒体膜电位下的分布当线粒体膜电位低于-100mV时，JC1主要分布在细胞质中，呈现绿色荧光。

当线粒体膜电位高于-100mV时，JC1开始聚集在线粒体上，呈现红色荧光。

C.JC1荧光信号与线粒体膜电位的关系JC1的荧光信号与线粒体膜电位呈负相关。

当线粒体膜电位较低时，JC1的绿色荧光信号较强；当线粒体膜电位较高时，JC1的红色荧光信号较强。

III.流式细胞术检测JC1荧光信号A.流式细胞术的原理流式细胞术是一种通过激光束对细胞进行快速、准确计数和分选的技术。

流式细胞术可以对细胞进行多参数检测，包括荧光信号检测。

细胞线粒体膜电位检测实验服务一、实验原理JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。

JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在，分别处于不同的荧光发射峰。

当JC-1 浓度低或膜电位水平低时，主要以单体形式存在，激发波长为527nm，呈绿色荧光；当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时，形成聚合物，发出红色的荧光，激发波长为590nm。

当细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光，根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。

【晶莱生物】大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（MMP）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。

它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转.二、实验流程1. 细胞培养；2. 用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性依照组合阳性对照组，收集细胞；3. 用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×106的细胞；4. 取100μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubat ion Buffer，混匀并预热至37℃；5. 吸取500μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液；6. 取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15~20min。

7. 室温离心（2000rpm,5min）收集细胞，用1×Incubation Buffer洗两次；8. 吸取500μL 10×Incubation Buffer重新悬浮细胞；9. 流式细胞仪检测，分析。

三、服务说明1.客户提供：细胞株(冻存株或培养好的细胞)，相关药品或MMP检测试剂盒（可代购）2 公司提供：实验步骤、结果图、数据结果和分析报告3实验周期：1-2周，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。

JC1线粒体膜电位流式1. 任务背景线粒体是细胞内的一个重要器官，其功能主要是产生细胞所需的能量。

线粒体膜电位（JC1）是评估线粒体功能的一个重要指标。

通过测定JC1可以评估线粒体膜电位的变化情况，进而了解细胞内能量代谢的状态。

2. 流式细胞术简介流式细胞术是一种用于分析和分类细胞群体的技术。

它基于单个细胞通过流动状态下检测器的原理，可以实时获取大量关于细胞表型、形态和功能等信息。

3. JC1染色原理JC1是一种荧光染料，可用于评估线粒体膜电位。

在正常情况下，JC1会聚集在高电位的健康线粒体上并形成聚集态（红色荧光），而在低电位或损伤状态下，JC1则会解聚并呈现单体态（绿色荧光）。

因此，通过检测JC1荧光信号的变化可以间接反映出线粒体膜电位的变化情况。

4. 实验步骤4.1 细胞样品的制备•从培养皿中取出待测细胞样品。

•使用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤细胞，去除培养基中的残留物。

•将细胞悬浮于适量的PBS中，使其成为单细胞悬液。

4.2 JC1染色•取适量的细胞悬液，转移至离心管中。

•加入相应体积的JC1染料溶液，并轻轻混匀。

•在37°C下孵育30分钟以使JC1染料充分进入细胞内。

4.3 流式细胞术分析•将染色后的细胞悬液转移至流式细胞仪样本管中。

•设置流式细胞仪参数，包括荧光通道、放大倍数等。

•运行流式细胞仪进行数据采集。

5. 数据分析与结果解释通过流式细胞仪采集到的数据可以得到每个单个细胞的JC1荧光信号。

根据荧光强度和颜色可以判断线粒体膜电位的状态。

•高红荧光：表示线粒体膜电位正常，细胞处于健康状态。

•低红荧光和高绿荧光：表示线粒体膜电位下降，细胞可能存在能量代谢异常或损伤。

•高红荧光和低绿荧光：表示线粒体膜电位升高，可能与细胞应激反应或代谢亢进有关。

根据以上分析，可以得出细胞内线粒体膜电位的变化情况，并对细胞功能进行评估。

6. 应用领域JC1线粒体膜电位流式在多个领域中得到广泛应用，包括但不限于： - 肿瘤学：评估肿瘤细胞代谢活性及药物敏感性。

JC-1单染法检测CCCP对内皮细胞线粒体膜电位的影响官福新;周露露;张宸豪;李妍【摘要】目的：分析碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）对人脐静脉内皮细胞ECV304线粒体的影响。

方法体外培养ECV304细胞，不同浓度CCCP处理细胞20 min 后，装载荧光探针JC-1或Rh123，流式细胞术检测JC-1单体的发射绿色荧光。

结果伴随线粒体毒性剂CCCP浓度增加，代表JC-1单体含量的绿色荧光强度增加。

结论流式细胞术检测JC-1单体的绿色荧光可反应线粒体膜电位的变化。

%Objective Analyze the influence of carbonyl cyano-to-chlorobenzene hydrazone ( CCCP ) on human um-bilical vein endothelial cells ECV-304 mitochondria .Methods ECV-304 cell was cultured in vitro and treated with different concentrations of CCCP for 20 minutes .After straining by fluorescent probes Rh 123 or JC-1 ,cells were meas-ured by flow cytometry .Results The intensity of green fluorescence emitted by JC-1 monomer increased with the in-creasing of CCCPconcentration .Conclusion The changing of cell MMP could be well detected by flow cytometry staining by new fluorescent probe JC-1 .【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】3页(P324-326)【关键词】线粒体膜电位;碳酰氰基-对-氯苯腙;流式细胞术【作者】官福新;周露露;张宸豪;李妍【作者单位】吉林医药学院药学院2012级药学本班，吉林吉林 132013;吉林医药学院药学院2010级药学本班，吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院，吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院，吉林吉林 132013【正文语种】中文【中图分类】R363线粒体是细胞内能量代谢的重要细胞器，是决定生存的控制中心。