抑制11β-HSD1对滑膜成纤维细胞炎症因子表达的影响

11β-羟基类固醇脱氢酶1与代谢综合征
张爱萍;张木勋
【期刊名称】《医学综述》
【年(卷),期】2006(012)003
【摘要】11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)在体内主要为还原酶,负责活性的糖皮质激素向其无活性前体的转换,调节局部糖皮质激素浓度,是糖皮质激素受体前调节,并决定糖皮质激素流向其受体而发挥作用.代谢综合征糖皮质激素敏感性增加,11β-HSD1调节异常,可能是肥胖、糖耐量低减、高血压和心血管疾病等代谢综合征重要发病机制之一,选择性11β-HSD1抑制剂有望成为其治疗靶点.
【总页数】3页(P134-136)
【作者】张爱萍;张木勋
【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院内分泌科,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院内分泌科,湖北,武汉,430030
【正文语种】中文
【中图分类】R587.1
【相关文献】
1.丹墨胶囊对正常大鼠组织11β-羟基类固醇脱氢酶及己糖-6-磷酸脱氢酶基因表达的影响 [J], 任斌;韦炳华;李瑞明;黄靓;罗美娟;刘石带
2.11β-羟基类固醇脱氢酶与代谢综合征的相关性 [J], 阮莉莉;邹朝春
3.丹墨胶囊灌胃大鼠组织11β-羟基类固醇脱氢酶及己糖-6-磷酸脱氢酶基因的表达[J], 傅晓华;李瑞明;洪晓丹;韦炳华;叶毅芳;任斌
4.11β－羟基类固醇脱氢酶1与代谢综合征的研究进展 [J], 刘斌(综述);缪珩(审校)
5.11β-羟基类固醇脱氢酶与代谢综合征 [J], 马里;孙子林;王尧
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

β-谷甾醇对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞功能的影响及机制Δ谷慧敏 1＊，孟庆良 1 #，左瑞庭 1，展俊平 1，马俊福 1，刘亚伟 2（1.河南省中医院风湿病科，郑州　450002；2.河南中医药大学骨伤学院，郑州　450002）中图分类号 R 965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）15-1847-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.15.11摘要 目的 研究β-谷甾醇对类风湿性关节炎（RA ）滑膜成纤维细胞MH 7A 功能的影响及其机制。

方法 使用网络药理学筛选β-谷甾醇的作用靶点及治疗RA 的靶点，两者取交集后进行拓扑分析寻找治疗RA 的最关键靶点。

用不同浓度（0、5、10、20、40 μmol/L ）的β-谷甾醇处理MH 7A 细胞并用CCK-8法检测细胞活性，筛选β-谷甾醇的最适给药浓度。

采用10 ng/mL 肿瘤坏死因子（TNF-α）体外诱导MH 7A 细胞后，加入β-谷甾醇（最适给药浓度）处理。

CCK-8法和EdU 法检测细胞增殖能力；划痕实验和Transwell 侵袭法分别检测细胞迁移及侵袭能力；酶联免疫吸附测定（ELISA ）法检测细胞上清液中白细胞介素1β（IL-1β）和IL-6的水平；qRT-PCR 法和Western blot 法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR α）mRNA 和蛋白表达水平。

MH 7A 细胞转染PPAR α小干扰RNA ，并通过上述实验方法检测PPAR α敲低后β-谷甾醇对MH 7A 细胞增殖、迁移、侵袭、炎症因子分泌及PPAR α蛋白表达的影响。

结果 PPAR α是β-谷甾醇治疗RA 的最关键靶点，β-谷甾醇的最适给药浓度为20 μmol/L 。

与模型组相比，β-谷甾醇组MH 7A 细胞活力显著降低、细胞增殖数显著减少（P ＜0.05），细胞迁移率显著降低、细胞侵袭数显著减少（P ＜0.05），IL-1β水平、IL-6水平均显著降低（P ＜0.05），PPAR α mRNA 和蛋白表达水平均显著增加（P ＜0.05）。

二甲双胍对成纤维样滑膜细胞增殖及炎性细胞因子分泌的影响董艳;杨润薇;黄莉婷;宋力【期刊名称】《微循环学杂志》【年(卷),期】2023(33)1【摘要】目的:探讨二甲双胍对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及分泌炎性细胞因子的影响。

方法:取我院行关节镜手术治疗的RA患者关节滑膜组织,采用改良组织块法培养原代FLS,用不同浓度二甲双胍(10、20、30μmol/L)干预FLS细胞,分别记为小剂量、中剂量、高剂量组,以常规养的FLS细胞为对照组。

采用CCK-8法检测各组细胞处理24h、48h、72h后细胞增殖情况,采用ELISA检测各组细胞处理72h后上清液中促炎细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-6(IL-6)和抗炎细胞因子:白细胞介素-10(IL-10)水平,比较组间各指标水平的差异。

结果:与对照组相比,72h后,中剂量组、高剂量组FLS增殖水平均降低(P<0.05);高剂量组上清液中TNF-α、IL-6、IL-17水平降低,IL-10水平升高(P<0.05)。

结论:高剂量二甲双胍具有抑制FLS增殖和促炎细胞因子分泌、促进抗炎细胞因子分泌的作用,对治疗RA具有一定的应用价值。

【总页数】5页(P20-23)【作者】董艳;杨润薇;黄莉婷;宋力【作者单位】华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院风湿免疫科;武汉科技大学附属武汉市普仁医院风湿免疫科;华中科技大学附属梨园医院【正文语种】中文【中图分类】R593.2【相关文献】1.S100A4在类风湿关节炎滑膜中的表达及其对成纤维样滑膜细胞分泌VEGF促进血管生成的影响2.MicroRNA-16对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响3.苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响4.类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其机制研究5.黄芪甲苷对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及白细胞介素6分泌的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

促炎症细胞因子刺激人类关节滑膜B型细胞表达粘附分子蒋建平;侯凡凡;张训【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2001(017)002【摘要】目的：透析相关性淀粉样变（DRA）病人关节滑膜组织粘附分子表达增强，并与局部炎细胞浸润密切相关。

旨在探讨DRA时诱导滑膜细胞粘附分子表达上调的机制。

方法：分离正常人关节滑膜B型细胞，与晚期糖基化终产物修饰的β2微球蛋白（AGE-β2m）、天然β2m、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（ IL-1β）在体外共同培养，用荧光单克隆抗体染色，流式细胞仪检测定量分析滑膜B型细胞表面细胞间粘附分子-1（ICAM- 1 ）、血管细胞间粘附分子-1（VCAM-1）、E-选择素（E-selectin）的表达。

结果：正常关节滑膜B型细胞表达ICAM-1、VCAM-1，但不表达E-selectin。

IL-1β、TNF-α能以时间和剂量依赖的方式上调滑膜B型细胞ICAM-1、VCAM-1的表达，但无诱导E-selectin表达的作用。

AG E-β2m和β2m对B型细胞粘附分子的表达无直接影响。

结论：DRA时关节组织存在的促炎症细胞因子可能上调滑膜细胞粘附分子的表达，从而促使局部的单核细胞浸润。

【总页数】4页(P69-72)【作者】蒋建平;侯凡凡;张训【作者单位】第一军医大学南方医院肾内科,;第一军医大学南方医院肾内科,;第一军医大学南方医院肾内科,【正文语种】中文【中图分类】R686.1【相关文献】1.地塞米松对LPS刺激的人类风湿性关节炎滑膜细胞中炎性细胞因子表达的影响[J], 刘柏合;沈放;李怡棠;白金叶;程桂芳2.人类关节滑膜A型和B型细胞的分离和体外培养 [J], 蒋建平;杨铁城;侯凡凡;朱志刚3.破骨细胞分化刺激因子在佐剂性关节炎大鼠滑膜中的表达及意义 [J], 石国勋;郑祥雄;任天丽4.槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响 [J], JIA Qingyun;WANG Yongjun;LIANG Qianqian;SHI Qi5.L－精氨酸抑制内皮细胞粘附分子－1表达与氧化型低密度脂蛋白促单核细胞粘附作用下降有关 [J], 林曙光;陈颜芳;伍淑英;杨和平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

畜牧兽医学报 2023,54(8):3533-3545A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c ad o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.08.037开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响焦广明1,2,吕英光1,2,桑金芳1,2,寇志鹏1,2,刘 涛1,2,王 月1,2,陆翔宇1,2,朴晨曦1,2,马亚军1,2,张建涛1,2,王洪斌1,2*(1.东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030;2.黑龙江省动物疾病致病机制与比较医学重点实验室,哈尔滨150030)摘 要:旨在探究脂肪间充质干细胞(a d i p o s e d e r i v e d m e s e n c h y m a l s t e m c e l l s ,A D S C s )与甲泼尼龙(m e t h y l pr e d -n i s o l o n e ,M P )联合用药对小型猪异体皮肤移植(a l l o ge n e i c s k i n g r af t ,A S G )所产生的免疫排斥反应与创口愈合的影响㊂对12头小型猪建立同种异体皮肤移植模型,根据术后对异体皮肤移植皮片不同的干预方式,将小型猪随机分为4组:异体皮肤移植组(A S G )㊁甲泼尼龙组(M P )㊁脂肪间充质干细胞组(A D S C s )㊁脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药组(A D S C s +M P )㊂术前与术后7㊁14d 采集血液和组织样本,术后即刻及术后7㊁14㊁21d 拍照记录移植表皮临床变化情况㊂通过对移植皮片表观检查㊁病理组织学检测,血常规以及血清生化,移植皮片组织氧化应激㊁炎症㊁再生的指标检测,综合评价4组不同干预方式对小型猪异体皮肤移植所产生的免疫排斥反应与创口愈合方面的影响㊂从皮片表观与病理学分析可知,A S G 组移植皮片存活时间在7d 左右㊁M P 组移植皮片存活时间在7~14d ㊁A D S C s 组与A D S C s +M P 组存活时间为14~21d ㊂并且在7㊁14d 时A D S C s +M P 组的G S H ㊁S O D 的表达量显著升高,在免疫排斥方面,A D S C s +M P 组的C D 4+T 细胞的数量,N F -κB 的蛋白与基因表达量,I L -2㊁I F N -γ㊁T N F -α㊁I L -1β㊁I L -6促炎因子的表达量相对于A S G 组显著降低㊂在创口愈合方面,A D S C s +M P 组相对于A S G 组V E G F ㊁T G F -β的蛋白表达,S D F -1㊁C X C R 4的表达显著上升㊂并且A D S C s +M P 组相对于A S G 组,P I 3K ㊁A K T ㊁11β-H S D 1的蛋白与基因的表达量显著降低㊂综上所述:A D S C s +M P 组相对于A S G 组与M P 组,可以延长移植皮片存活时间㊂并且A D S C s +M P 可以有效通过促进G S H ㊁S O D 的表达抑制氧化应激㊂在排异方面,A D S C s +M P 可以通过抑制N F -κB 的表达抑制I L -2㊁I F N -γ㊁I L -6㊁T N F -α等炎性因子的表达,从而抑制移植过后的免疫排斥反应㊂并且A D S C s +M P 可以通过促进V E G F ㊁T G F -β等愈合因子的表达促进创口愈合㊂进一步研究发现AD S C s 可能通过P I 3K /A K T 来影响11β-H S D 1的表达,进而抑制皮肤皮质醇含量,并促进T G F -β㊁VE GF 等生长因子的表达来促进创口肉芽组织再生与血管迁移㊂关键词:小型猪;脂肪间充质干细胞;异体皮肤移植;免疫排斥反应;创伤愈合;甲泼尼龙中图分类号:S 857.132 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)08-3533-13收稿日期:2023-01-30基金项目:国家自然科学基金面上项目(31972757)作者简介:焦广明(1997-),男,黑龙江哈尔滨人,硕士,主要从事兽医外科学研究,E -m a i l :1007163867@q q.c o m *通信作者:王洪斌,主要从事临床兽医学研究,E -m a i l :h b w a n g1940@n e a u .e d u .c n E f f e c t o f A d i p o s e M e s e n c h ym a l S t e m C e l l s i n C o m b i n a t i o n w i t h M e t h y l p r e d n i s o l o n e o n A l l o g e n e i c S k i n G r a f t s i n M i n i p i gs J I A O G u a n g m i n g 1,2,L ÜY i n g g u a n g 1,2,S A N G J i n f a n g 1,2,K O U Z h i p e n g 1,2,L I U T a o 1,2,WA N G Y u e 1,2,L U X i a n g y u 1,2,P I A O C h e n x i 1,2,MA Y a ju n 1,2,Z H A N G J i a n t a o 1,2,WA N G H o n gb i n 1,2*(1.C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e ,N o r t h e a s t A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,H a r b i n 150030,C h i n a ;畜牧兽医学报54卷2.H e i l o n g j i a n g P r o v i n c i a l K e y L a b o r a t o r y o f P a t h o g e n i c M e c h a n i s m f o rA n i m a l D i s e a s e a n d C o m p a r a t i v e M e d i c i n e,H a r b i n150030,C h i n a)A b s t r a c t:T h e a i m o f t h i s e x p e r i m e n t w a s t o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f t h e c o m b i n a t i o n o f a d i p o s e d e r i v e d m e s e n c h y m a l s t e m c e l l s(A D S C s)a n d m e t h y l p r e d n i s o l o n e(M P)o n i mm u n e r e j e c t i o n a n d w o u n d h e a l i n g i n a l l o g e n e i c s k i n g r a f t s f r o m m i n i a t u r e p i g s.A n a l l o g e n e i c s k i n g r a f t m o d e l w a s e s t a b l i s h e d f o r12m i n i p i g s,a n d t h e m i n i p i g s w e r e r a n d o m l y a n d e q u a l l y d i v i d e d i n t o f o u r g r o u p s a c c o r d i n g t o d i f f e r e n t p o s t o p e r a t i v e i n t e r v e n t i o n s o n a l l o g e n e i c s k i n g r a f t s k i n p i e c e s: a l l o g e n e i c s k i n g r a f t g r o u p(A S G),m e t h y l p r e d n i s o l o n e g r o u p(M P),a d i p o s e m e s e n c h y m a l s t e m c e l l s(A D S C s),a n d c o m b i n e d a d i p o s e m e s e n c h y m a l s t e m c e l l s a n d m e t h y l p r e d n i s o l o n e (A D S C s+M P)g r o u p.B l o o d a n d t i s s u e s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d p r e o p e r a t i v e l y a n d a t7a n d14d p o s t o p e r a t i v e l y,a n d c l i n i c a l c h a n g e s o f t h e g r a f t e d e p i d e r m i s w e r e p h o t o g r a p h e d a n d r e c o r d e d i mm e d i a t e l y,a t7,14a n d21d p o s t o p e r a t i v e l y.T h e e f f e c t s o f t h e f o u r d i f f e r e n t i n t e r v e n t i o n s o n t h e i mm u n e r e j e c t i o n a n d w o u n d h e a l i n g o f a l l o g e n e i c s k i n g r a f t s i n m i n i p i g s w e r e e v a l u a t e d b y t h e p h e n o l o g i c a l e x a m i n a t i o n,p a t h o l o g i c a l h i s t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n,b l o o d a n d s e r u m b i o c h e m i s-t r y,a n d t h e i n d e x e s o f o x i d a t i v e s t r e s s,i n f l a mm a t i o n a n d r e g e n e r a t i o n o f t h e g r a f t e d s k i n t i s-s u e s.F r o m t h e s k i n s l i c e p h e n o t y p i c a n d p a t h o l o g i c a l a n a l y s i s,i t w a s o b s e r v e d t h a t t h e s u r v i v a l t i m e o f t h e g r a f t e d s k i n s l i c e w a s a r o u n d7d i n t h e A S G g r o u p,7-14d i n t h e M P g r o u p,a n d14-21d i n t h e A D SC s a n d AD S C s+M P g r o u p s.a n d t h e e x p r e s s i o n o f G S H a n d S O D w a s s i g n i f i-c a n t l y h i g h e r i n t h e A D S C s+M P g r o u p a t7a n d14d.I n t e r m s o f i mm u n e r e j e c t i o n,t h e A D S C s+M P g r o u p h a d s i g n i f i c a n t l y h i g h e r C D4+T c e l l s,p r o t e i n a n d g e n e e x p r e s s i o n o f N F-κB, a n d e x p r e s s i o n o f I L-2,I F N-γ,T N F-α,I L-1β,a n d I L-6p r o-i n f l a mm a t o r y f a c t o r s w e r e s i g n i f i-c a n t l y l o w e r i n t h e A D S C s+M P g r o u p r e l a t i v e t o t h e A S G g r o u p.I n t e r m s o f w o u n d h e a l i n g,t h e A D S C s+M P g r o u p s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n o f VE GF a n d TG F-β,a n d t h e e x p r e s-s i o n o f S D F-1a n d C X C R4r e l a t i v e t o t h e A S G g r o u p.t h e A D S C s+M P g r o u p c o u l d s i g n i f i c a n t l y i n h i b i t t h e p r o t e i n a n d g e n e e x p r e s s i o n o f P I3K,A K T,a n d11β-H S D1.I n c o n c l u s i o n,t h e A D S C s+M P g r o u p c o u l d p r o l o n g t h e s u r v i v a l t i m e o f g r a f t e d s k i n p i e c e s r e l a t i v e t o t h e A S G a n d M P g r o u p s.A n d A D S C s+ M P c o u l d e f f e c t i v e l y i n h i b i t o x i d a t i v e s t r e s s b y p r o m o t i n g t h e e x p r e s s i o n o f G S H a n d S O D.I n t e r m s o f r e j e c t i o n,A D S C s+M P c a n i n h i b i t t h e e x p r e s s i o n o f i n f l a m m a t o r y f a c t o r s s u c h a s I L-2,I F N-γ,I L-6a n d T N F-αb y s u p p r e s s i n g t h e e x p r e s s i o n o f N F-κB,t h u s s u p p r e s s i n g t h e i m m u n e r e j e c t i o n r e a c t i o n a f t e r t r a n s p l a n t a t i o n.M o r e o v e r,A D S C s+M P c o u l d p r o m o t e w o u n d h e a l i n g b y p r o m o t i n g t h e e x p r e s s i o n o f h e a l i n g f a c t o r s s u c h a s V E G F a n d T G F-β.F u r t h e r s t u d y r e v e a l e d t h a t A D S C s m a y a f f e c t t h e e x p r e s s i o n o f11β-H S D1b y i n h i b i t i n g P I3K/A K T,w h i c h i n t u r n s u p p r e s s e s s k i n c o r t i s o l c o n t e n t a n d p r o m o t e s t h e e x p r e s s i o n o f g r o w t h f a c t o r s s u c h a s T G F-βa n d V E G F t o p r o m o t e w o u n d g r a n u l a t i o n t i s s u e r e g e n e r a t i o n a n d v a s c u l a r m i g r a t i o n.K e y w o r d s:m i n i-p i g s;a d i p o s e m e s e n c h y m a l s t e m c e l l s;a l l o g e n e i c s k i n g r a f t s;i mm u n e r e j e c t i o n; w o u n d h e a l i n g;m e t h y l p r e d n i s o l o n e*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:WA N G H o n g b i n,E-m a i l:h b w a n g1940@n e a u.e d u.c n同种异体皮肤移植是指同种之间的不同个体间进行皮肤移植手术,一般广泛应用于自体皮肤发生大面积缺损,如烧伤或者创伤等,无法满足自体移植的情况[1]㊂但在移植之后,会产生非常严重的免疫排斥反应[2]㊂这种并发症可以在短时间内大量表达I L-2㊁I F N-γ等炎性因子破坏移植皮片,促使移植皮片坏死[3]㊂为抑制免疫排斥反应,目前临床上常用的方式是使用免疫抑制剂㊂有研究表明,单独使用43538期焦广明等:脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响雷帕霉素抑制剂或糖皮质激素等药物均具有良好的抑制免疫排斥的效果[4],但也可能会造成延长炎症期,抑制血管迁移,肉芽组织再生等伤口愈合不良的副作用[5]㊂因此为降低药物副作用,免疫抑制剂联合用药的方法被广泛应用于抗排斥反应的治疗中㊂M P是联合用药中较为常用的药物[6],因其具有良好的抗排异效果在组织器官移植上广泛应用,所以本试验采用M P作为联合用药的药物之一㊂间充质干细胞(M S C s)是近年来细胞疗法的主要应用细胞之一,其主要分布于脂肪㊁骨髓㊁胎盘㊁牙髓等组织部位[7]㊂其中A D S C s以取材方便,无伦理性,免疫原性低,治疗效果好等优势被广泛应用于各种疾病的研究中[8],并已经取得了很好的效果㊂因其具有抑制免疫排斥反应[9]㊁炎症反应㊁组织纤维化[10]㊁氧化应激,并促进细胞再生等优势,在皮肤损伤相关的研究中得到了很大关注[11-12]㊂因此本试验采取A D S C s与M P联合用药㊂有研究表明,巴马小型猪皮肤厚度㊁分层㊁光镜结构㊁超微结构㊁以及一些特殊结构都与人相似[13]㊂并且在猪㊁人㊁兔等皮肤损伤时应用I L-1α后,小型猪与人的皮肤创口的愈合速度显著提高,这说明猪与人的皮肤损伤主要是通过创面上皮化来修复㊂而兔是通过创口收缩的方式愈合[14]㊂所以小型猪作为动物模型可以更准确地模拟出A D S C s+M P对人异体皮肤移植的影响㊂本试验通过比较A S G㊁M P㊁A D S C s㊁A D S C s+ M P对小型猪异体皮肤移植所产生的免疫排斥反应与创口愈合方面的影响㊂旨在研究A D S C s+M P 在抗排异与促进创口愈合方面的应用前景,并为A D S C s+M P对异体皮肤移植临床应用奠定理论基础㊂1材料与方法1.1实验动物本试验经东北农业大学动物伦理委员会监督,选取1岁龄广西巴马小型猪12头(30~40k g,雌雄各半)㊂经临床与实验室健康检查后进行试验㊂在整个试验过程中,饲养管理条件保持一致㊂1.2仪器设备及试剂兽用便携式多参数监护仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司),动物呼吸麻醉机(美国S u r-g i V e t公司),E P O C H连续波长酶标仪(美国B I O T E K基因有限公司),组织研磨仪(上海净信实业发展有限公司)㊂丙泊酚乳状注射液(西安力邦制药有限公司),异氟烷(河北一品制药有限公司生产),D M E M低糖培养基(美国I n v i t r o g e n有限公司),胎牛血清(美国C l a r k公司),反转录试剂盒(T a K a K a生物技术有限公司),荧光定量P C R染料(湖南I n n o v a g e n e科技有限公司),I L-4㊁I L-6㊁I L-10㊁T N F-α㊁I L-2㊁I L-1β㊁I F N-γ㊁皮质醇㊁C X C R4㊁S D F-1(上海酶联生物科技有限公司),S O D㊁G S H(南京建成生物工程研究所)㊂免疫印迹中使用的一抗:P I3K(a b c l o n a l, A16950,1ʒ1000)㊁A K T(a b c l o n a l,WH133854,1ʒ1000)㊁P-A K T(W a n l e i b i o,W L P001a,1ʒ1000)㊁11β-H S D1(a b c l o n a l,WH298017,1ʒ1000)㊁11β-H S D2(P r o t e i n t e c h,14192-1-a P,1ʒ1000)㊁N F-κB (W a n l e i b i o,W L01980,1ʒ500)㊁P-N F-κB(W a n l e i b i o, W L02169,1ʒ1000)㊁V E G F(a b c l o n a l,WH306346, 1ʒ1000)㊁T G F-β(a b c l o n a l,A2124,1ʒ1000);二抗:山羊兔抗(P r o t e i n t e c h,S A00001-2,1ʒ10000)㊂1.3试验方法1.3.1动物分组将12头小型猪随机分为4组:异体皮肤移植(A S G)组,甲泼尼龙(M P)组,脂肪间充质干细胞(A D S C s)组,脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药(A D S C s+M P)组㊂1.3.2动物试验试验采用同种异体皮肤移植手术,每次需要两头小型猪同时开展手术㊂将两头小型猪同时麻醉后,分别在背部造8个4c mˑ4c m 的创口,创口间距5c m㊂并且将取下来的皮肤修整,保留表皮与真皮层,将两头猪的皮片顺次交换移植到异体皮肤上,采取结节缝合(图1),待异体皮肤移植结束后,用纱布固定,每日护理换纱布,并在7d 时拆除缝合线㊂其中A S G组:术后不用药干预, M P组:在术后颈部肌肉注射甲泼尼龙,注射剂量为5m g㊃k g-1,连续注射7d㊂A D S C s组:术后即刻在每个皮片下面进行皮下注射A D S C s㊂每个皮片的注射剂量为5ˑ104㊃c m-2㊂A D S C s+M P组:术后即可在每个移植皮片皮下注射5ˑ104㊃c m-2A D S C s,在颈部肌肉注射甲泼尼龙5m g㊃k g-1连续7d㊂所有组的猪均在术前与术后7㊁14d采集血液和组织样本,术后即刻㊁7㊁14㊁21d拍照记录移植表皮临床变化情况㊂1.3.3小型猪脂肪间充质干细胞的分离与培养采用手术的方式取出小型猪两侧腹股沟皮下脂肪,去除筋膜与血管,并放入0.1%I型胶原酶中5353畜 牧 兽 医 学 报54卷图1 手术模式图与术后即刻图片F i g .1 S u r g i c a l p a t t e r n d i a g r a m a n d p o s t o pe r a t i v e p i c t u r e 37ħ消化55m i n ,消化结束后,1500r ㊃m i n -1离心10m i n ,去除上清液,加入完全培养基㊂重悬后200目滤网过滤,再次1500r ㊃m i n -1离心10m i n,去掉上清液㊂加入5m L 红细胞裂解液1500r ㊃m i n -1离心5m i n,去掉上清液㊂加入完全培养基㊁接培养瓶并放入5%C O 2㊁37ħ培养箱中培养㊂待培养瓶中细胞融合70%~80%时传代,传到3~5代时收集脂肪间充质干细胞,备用㊂1.4 指标检测1.4.1 血常规及血清生化检测 本研究采用五分类血常规W B C ㊁N E U ㊁L YM 按照血常规仪器说明书步骤进行操作㊂G L B 按照试剂盒说明书进行操作㊂1.4.2 炎症相关因子和愈合相关因子检测 炎症相关因子I L -2㊁I L -4㊁I L -10㊁I L -1β㊁I L -6㊁T N F -α㊁I F N -γ与愈合相关因子皮质醇㊁C X C R 4㊁S D F -1均按照E L I S A 试剂盒(酶联,上海)说明书的步骤操作㊂1.4.3 氧化应激指标 G S H 与S O D ,均按照相应试剂盒说明书进行操作㊂1.4.4 蛋白提取与免疫印迹 取全层皮肤组织研磨碎,放入R I P A (i n v e n t i n -w b 001)㊁P M S F (碧云天s t 506-2)等冰上孵育30m i n ,离心取上清,B C A(碧云天)测蛋白浓度,调平蛋白浓度加上样缓冲液,煮沸10m i n ,-80ħ保存㊂取出蛋白上清,加到已经配好的胶中开始电泳㊂电泳结束后开始切胶,转模,封闭,敷抗体㊁洗膜㊁敷二抗㊁洗膜㊁曝光㊂1.4.5 总R N A 的提取与实时荧光定量P C R总R N A 采用T R z o L 试剂(I n v i t r o ge n ,15596-026)分离,使用染料(V a z u m e ,Q 711-02),研究使用引物序列详见表1㊂1.4.6 组织学分析和免疫组化染色 将取样皮表1 q R T -P C R 引物序列T a b l e 1 q R T -P C R p r i m e r s e qu e n c e s 引物P r i m e r序列(5'ң3')S e qu e n c e A K T 1FT G A G A A G A A G C T C A G C C C A C A K T 1RT C C A T G C T G T C G T C T T G G T C N F -κB F A C A A C C C C T T C C A A G T T C C CN F -κB RT T T C T C C T C A A T C C G G T G C C P I 3K FC G C T G C T T T A T C A G G T C G C A P I 3K RC G G T T G T C C T C T C T C A G C A C11B -H S D 1FT T T G C T C T G G A C G G G T T C T T 11B -H S D 1R G T C A T G G C C G T G T C T G T G T C 11B -H S D 2FC C T T G A G A T G A C C A A A G C C C T 11B -H SD 2R C G G A A A T G G C A T A T C T C C T G C肤放入4%多聚甲醛固定,待固定后石蜡包埋,用苏木精伊红染色㊂在免疫组化方面,用石蜡切片染色,柠檬酸钠修复液㊁亚沸腾修复,2%的山羊血清室温封闭1h ,10%山羊血清稀释一抗C D 4+(P r o t e i n -t e c h ,67786-1-I g,1ʒ1000)㊂1.5 数据统计分析使用G r a P h a d P r i s m 8软件进行统计分析,结果表示为 平均数ʃ标准差(x -ʃs ) ,差异显著性分析使用单因素方差分析方法(o n e -w a y A N O V A ),各组之间采用多重比较,P <0.05具有统计学意义㊂2 结 果2.1 异体皮肤移植皮片表观检查图2显示,A S G 组的移植皮片7d 时可见大量表皮脱落并形成白色苔藓样病变,移植皮片红肿,皮片触感较硬㊂14d 时移植皮片颜色变黑,皮片触感坚硬,切开皮片时可见真皮与表皮全层全部变黑㊂M P 组的移植皮片在7d 时,质地较软,颜色潮红㊂14d 时M P 组出现皮片颜色大面积变黑,质地较63538期焦广明等:脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响硬,切开皮片发现其表皮与部分真皮颜色变黑㊂A D S C s组的移植皮片在7d时可见皮片少部分颜色变红,质地较软㊂14d时可见皮片周围变黑,质地较软,切开皮片可见少部分表皮真皮变黑㊂A D-S C s+M P的移植皮片在7d时可见皮片上有点状潮红,无黑色坏死灶,质地柔软,切开皮片㊂14d时可见皮片颜色部分变黑,质地较软,切开皮片可见表皮真皮部分变黑㊂21d可见A S G组移植皮片部分脱落,创口中肉芽组织并未填充完全㊂M P组㊁A D-S C s组㊁A D S C s+M P组皮片均完全变黑,质地坚硬㊂图2移植皮片表观变化F i g.2A p p a r e n t c h a n g e s i n g r a f t s k i n2.2移植皮片病理学分析图3显示,7d时A S G组可见其表皮脱落,表皮层与真皮层分离,真皮层出现大量空泡㊂14d时皮肤结构不可辨认,成均质纤维化㊂7d时M P组皮片角质层增厚,有少量炎性细胞㊂14d时可见表皮角质层脱落,真皮中大量胶原纤维崩解并且由于坏死出现大面积空洞㊂7d时A D S C s组与A D S C s+ M P组有少量炎性细胞浸润,14d时可见A D S C s组与表皮角质层增厚,有炎性细胞浸润,A D S C s+M P 组有少量炎性细胞浸润㊂图3皮肤组织病理变化F i g.3P a t h o l o g i c a l c h a n g e s i n s k i n t i s s u e2.3血常规以及血清球蛋白检测图4可知,在7d时W B C结果表明,A D S C s组相比于A S G组显著下降(P<0.05),其他组无显著性差异㊂14d时A D S C s+M P组较A S G组显著下降(P<0.05),其他组无显著性差异㊂7d时N E U 结果显示,M P组相较于A S G组显著上升(P< 0.05)㊂在14d时A D S C s组与A D S C s+M P组相较于A S G组均极显著降低(P<0.01)㊂L YM在7353畜牧兽医学报54卷7㊁14d各组之间无显著性差异㊂G L B在7d时M P 组㊁A D S C s组㊁A D S C s+M P组相较于A S G组均极显著降低(P<0.01)㊂在14d时M P组相较于A S G组显著下降(P<0.05),其他组无显著性差异㊂与A S G组相比,*.P<0.05,**.P<0.01C o m p a r e d w i t h A S G g r o u p,*.P<0.05,**.P<0.01图4血常规及血清生化G L B结果F i g.4B l o o d r o u t i n e a n d s e r u m b i o c h e m i c a lG L B r e s u l t s2.4氧化应激反应检测图5显示,在7㊁14d时,A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P<0.01)的G S H表达量极显著高于A S G组与M P组㊂14d时,A D S C s+M P组(P<0.05)的G S H的表达量显著高于A D S C s组㊂在7d时,A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P<0.01)的S O D表达量极显著高于A S G组与M P组㊂M P组(P<0.05)的表达量显著高于A S G 组㊂14d时A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P 组(P<0.01)的S O D表达量极显著高于A S G组㊂A D S C s+M P组(P<0.01)的S O D表达量极显著高于M P组㊂M P组与A S G组无显著性差异㊂2.5C D4+T细胞免疫组化结果图6显示,7d时可见A D S C s组(P<0.05)与A D S C s+M P组(P<0.05)的C D4+T细胞的数量显著低于A S G组㊂M P组(P<0.01)C D4+T细胞数量极显著低于A S G组㊂A D S C s组与A D S C s+ M P组无显著性差异㊂在14d时可见M P组(P< 0.05)㊁A D S C s组(P<0.05)㊁A D S C s+M P组(P< 0.05)的C D4+T细胞数量显著低于A S G组,A D-S C s+M P组(P<0.05)显著低于M P组㊂2.6炎症因子表达量检测图7显示,在7d时I L-1β在A S G组的表达量均极显著高于M P组(P<0.01)㊁A D S C s组(P< 0.01)㊁A D S C s+M P组(P<0.01)㊂在14d时,I L-1β在A S G组的表达量显著高于M P组(P<0.05)㊁A D S C s组(P<0.05)㊁A D S C s+M P组(P<0.05)㊂M P㊁A D S C s㊁A D S C s+M P之间没有显著性差异㊂I L-6的表达量在7d时A S G组显著高于M P组(P<0.05)㊁A D S C s+M P组(P<0.05),极显著高于A D S C s组(P<0.01)㊂在14d时,I L-6A S G组的表达量极显著高于M P组(P<0.01)㊁A D S C s组(P<0.01)㊁A D S C s+M P组(P<0.01)㊂M P㊁A D-S C s㊁A D S C s+M P之间没有显著性差异㊂T N F-α的表达量7d时A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+ M P组(P<0.01)相对于A S G组极显著下降,M P 组相对于A S G组无显著性差异㊂14d时4组无显著性差异㊂I L-2的表达量在7㊁14d时相对于A S G 组,A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P< 0.01)极显著降低,M P组相对于A S G组无显著性83538期焦广明等:脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响与A S G组相比,*.P<0.05,**.P<0.01;与M P组相比,##.P<0.01;与A D S C s组相比,+.P<0.05C o m p a r e d w i t h A S G g r o u p,*.P<0.05,**.P<0.01;C o m p a r e d w i t h M P g r o u p,##.P<0.01;C o m p a r e d w i t h A D-S C s g r o u p, +.P<0.05图5氧化应激反应指标结果F i g.5R e s u l t s o f o x i d a t i v e s t r e s s i n d e x e s与A S G组相比,*.P<0.05,**.P<0.01;与M P组相比,#.P<0.05C o m p a r e d w i t h A S G g r o u p,*.P<0.05,**.P<0.01;C o m p a r e d w i t h M P g r o u p,#.P<0.05图6C D4+T细胞在各组的表达F i g.6E x p r e s s i o n o f C D4+T c e l l s i n e a c h g r o u p差异㊂I F N-γ的表达量在7㊁14d时相对于A S G 组,M P组(P<0.01)㊁A D S C s组(P<0.01)㊁A D-S C s+M P组(P<0.01)极显著下降㊂在7㊁14d时, I L-4的表达量A D S C s+M P组(P<0.01)相对于9353畜 牧 兽 医 学 报54卷与A S G 组相比,*.P <0.05,**.P <0.01C o m p a r e d w i t h A S G g r o u p ,*.P <0.05,**.P <0.01图7 炎症因子表达量结果F i g .7 E x p r e s s i o n r e s u l t s o f i n f l a m m a t o r yf a c t o r s A S G 组极显著升高㊂A D S C s 组(P <0.01)与A D -S C s +M P 组(P <0.01)I L -10的表达量相对于A S G 组,A D S C s 组(P <0.01)与A D S C s +M P 组(P <0.01)在7㊁14d 时极显著上升㊂M P 组相对于A S G 组无显著性差异㊂2.7 炎症因子上游蛋白N F -κB 的表达量检测图8显示,在7㊁14d 时N F -κB 的蛋白结果表明㊂A S G 组P -N F κB 的表达量显著大于A D S C s组㊁A D S C s +M P 组㊂在7d 时M P 组(P <0.05)㊁A D S C s 组(P <0.05)㊁A D S C s +M P 组(P <0.05)的N F -κB 基因表达量显著低于A S G 组,M P 组㊁A D S C s 组㊁A D S C s +M P 组之间无显著性差异㊂14d 时,A D S C s 组(P <0.05)与A D S C s +M P 组(P <0.05)的N F -κB 基因表达量显著低于A S G 组,M P 组与A S G 组无显著性差异㊂2.8 创口愈合因子检测图9表明,7d 时M P 组T G F -β的表达量显著低于A D S C s 与A D S C s +M P 组㊂但14d 时M P 组与A D S C s 组㊁A D S C s +M P 组并未有显著性差异㊂V E G F 在7㊁14d 时A D S C s 组㊁A D S C s +M P 组的表达量显著高于M P 组㊂C X C R 4在7d 的A D S C s组(P <0.01)㊁A D S C s +M P 组(P <0.01)㊁M P 组(P <0.01)的表达量极显著高于A S G 组,A D S C s 组(P <0.05)显著高于M P 组,A D S C s+M P 组(P <0.01)极显著高于M P 组,A D S C s+M P 组(P <0.05)显著高于A D S C s 组㊂C X C R 4在14d的A D S C s 组(P <0.01)㊁A D S C s+M P 组(P <0.01)的表达量极显著高于A S G 组㊂M P 组(P <0.05)的表达量显著高于A S G 组㊂S D F 1在7㊁14d时,A D S C s 组(P <0.01)与A D S C s +M P 组(P <04538期焦广明等:脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响0.01)S D F 1的表达量极显著高于M P 组,A D S C s 组(P <0.01)极显著高于A S G 组㊂与A S G 组相比,*.P <0.05,**.P <0.01C o m p a r e d w i t h A S G g r o u p,*.P <0.05,**.P <0.01图8 N F -κB 的蛋白与基因的表达量F i g .8 P r o t e i n a n d g e n e e x pr e s s i o n o f N F -κB 与A S G 组相比,*.P <0.05,**.P <0.01;与M P 组相比,#.P <0.05,##.P <0.01;与A D SC s 组相比,+.P <0.05C o m p a r e d w i t h A S G g r o u p ,*.P <0.05,**.P <0.01;C o m p a r e d w i t h M P g r o u p ,#.P <0.05,##.P <0.01;C o m -p a r e d w i t h AD S C s g r o u p ,+.P <0.05图9 愈合生长因子表达量F i g .9 E x p r e s s i o n o f h e a l i n g gr o w t h f a c t o r 2.9 创口生长因子上游通路检测图10表明,在7㊁14d 时A D S C s 组(P <0.01)与A D S C s +M P 组(P <0.01)皮质醇(c o r t i s o l )的表达量极显著低于A S G 组与M P 组㊂在14d 时,A D S C s +M P 组(P <0.05)显著高于A D S C s 组㊂14d 时免疫印迹结果表明,在7㊁14d 时A D S C s 组1453畜牧兽医学报54卷与A D S C s+M P组的11β-H S D1显著小于M P组,并且其11β-H S D2的表达量显著大于M P组㊂P-A K T的表达中M P组显著大于A D S C s组与A D-S C s+M P组㊂在7㊁14d时M P组P I3K的表达显著高于A D S C s组与A D S C s+M P组㊂从基因表达量上分析:11β-H S D1在7d时A D S C s组(P< 0.01)的表达量极显著低于M P组,A D S C s+M P组(P<0.05)显著低于M P组㊂14d时A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P<0.01)的表达量极显著低于M P组㊂11β-H S D2在7d时A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P<0.01)的表达量极显著高于M P组,M P组(P<0.01)与A D S C s组(P<0.01)极显著低于A S G组,A D S C s+M P组(P<0.05)显著低于A S G组,A D S C s+M P组(P<0.01)极显著低于A D S C s组㊂14d时A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P<0.01)的表达量极显著高于A S G组与M P组㊂7d时A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P<0.01)的A K T 的表达量极显著低于M P组㊂14d时,A D S C s组A K T的表达量极显著(P<0.01)低于A S G组,显著(P<0.05)低于M P组㊂A D S C s+M P组(P<0.05)A K T的表达量显著低于A S G组㊂7d时A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P<0.01)P I3K的表达量极显著低于M P组,A D S C s+ M P组(P<0.05)的表达量显著低于A D S C s组㊂14d时A D S C s组(P<0.01)与A D S C s+M P组(P<0.01)的表达量极显著低于A S G组与M P组㊂与A S G组相比,*.P<0.05,**.P<0.01;与M P组相比,#.P<0.05,##.P<0.01;与A D S C s组相比,+.P<0.05, ++.P<0.01C o m p a r e d w i t h A S G g r o u p,*.P<0.05,**.P<0.01;C o m p a r e d w i t h M P g r o u p,#.P<0.05,##.P<0.01;C o m-p a r e d w i t h AD S C s g r o u p,+.P<0.05, ++.P<0.01图10创口生长因子上游通路的表达量检测F i g.10E x p r e s s i o n d e t e c t i o n o f t h e u p s t r e a m p a t h w a y o f w o u n d g r o w t h f a c t o r24538期焦广明等:脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响3讨论对于异体皮肤移植,移植皮片排斥反应评估主要是依据k a n i t a k i s与b a n f f2007分级[15]㊂其中k a n i t a k i s分级主要是依据皮肤表观变化㊂b a n f f 2007分级主要依据病理学变化,如:炎症浸润㊁角质层细胞状态等进行病理分级(表2㊁3)㊂从皮肤表观上分析,7d时A S G组在Ⅲ~Ⅳ级,M P组在Ⅱ~Ⅲ级,A D S C s组与A D S C s+M P组在Ⅰ~Ⅱ级㊂14d 时A S G组与M P组为I V级,A D S C s组皮片黑色坏死部分在1/3~2/3,为Ⅲ~Ⅳ级㊁A D S C s+M P组在Ⅱ~Ⅲ级㊂21d时4组皮片均为I V级㊂表明在21d时4组皮片均已坏死㊂从病理学分析可见,在7d时A S G组为Ⅲ~Ⅳ级,M P组在Ⅱ~Ⅲ级,A D-S C s组与A D S C s+M P组为Ⅱ~Ⅲ级㊂14d时A S G组与M P组为I V级,A D S C s组为Ⅲ~Ⅳ级, A D S C s+M P组为Ⅱ~Ⅲ级㊂综合两种分析评级方式可见在A S G组皮片存活时间为7d左右,而M P 组存活时间为7~14d,A D S C s组与A D S C s+M P 组存活时间则为14~21d㊂这说明A D S C s+M P 可以有效延长皮片存活时间㊂表2目测法皮片排斥分级T a b l e2V i s u a l s k i n r e j e c t i o n g r a d i n gk a n i t a k i s移植皮片排斥分级(目测法)k a n i t a k i s g r a f t r e j e c t i o n g r a d i n g(v i s u a l m e t h o d)分级依据G r a d i n g b a s i s0级(无)G r a d e0(N o n e)皮肤正常表现Ⅰ级(轻度)G r a d eⅠ(M i l d)皮肤淡粉色斑疹Ⅱ级(中度)G r a d eⅡ(M e d i u m)红斑Ⅲ级(重度)G r a d eⅢ(S e v e r e)丘疹性红斑,红斑可连成一片Ⅳ级(坏死性)G r a d eⅣ(N e c r o t i z i n g)皮肤红肿,坏死样损害(皮肤黑色坏死超过三分之二并且质地坚硬)表3病理学分析移植皮片排斥分级T a b l e3C a s e a n a l y s i s o f g r a d i n g o f g r a f t e d s k i n r e j e c t i o nb a n f f2007移植皮片排斥分级b a n f f g r a f t r e j ec t i o n g r ad i n g分级依据G r a d i n g b a s i s0级(无)G r a d e0(N o n e)没有或极少炎性浸润Ⅰ级(轻度)G r a d eⅠ(M i l d)轻度血管周围炎性细胞浸润,未涉及表皮Ⅱ级(中度)G r a d eⅡ(M e d i u m)中度至中度血管周围炎性细胞浸润,表皮轻度海绵状态与细胞外渗,无角质细胞层死亡Ⅲ级(重度)G r a d eⅢ(S e v e r e)重度血管周围炎性细胞浸润㊁角化不良或角质层坏死Ⅳ级(坏死性)G r a d eⅣ(N e c r o t i z i n g)有明显表皮㊁真皮层坏死异体皮肤移植后,由于H L A的不完全匹配可能会导致移植物中的T淋巴细胞进入到受体体内,对受体造成全身性的炎症反应㊂本研究对受体小型猪血液进行血常规与血清生化进行检测㊂结果表明,应用A D S C s组与A D S C s+M P组可以显著减少血液中中性粒细胞与球蛋白的含量㊂说明A D-S C s+M P抑制由异体皮肤移植引发的全身性炎性反应㊂研究表明,导致异体移植皮片坏死的主要原因是供受体之间的免疫排斥反应㊂在异体皮肤移植7d时,移植皮片会与创口间组织粘连,并在创底与移植皮片之间会有相应的肉芽组织再生与血管重建㊂但当血供建立完成后,异体皮片中的树突细胞会随着血管进入到受体的次级淋巴结中,此时经抗原呈递细胞的识别后会刺激C D4+与C D8+的大量分泌[16],并会大量分化T H1进而促进I L-2与I F N-γ等炎性因子的分泌[17-18]㊂导致7~14d时在创底与异体移植皮片交界处产生大量炎症反应并导致移植皮片坏死㊂结果表明,A D S C s+M P可以有效抑制C D4+T细胞㊂并且通过抑制炎症因子上游蛋白N F-κB来抑制炎症因子I L-2与I F N-γ的表达,从而抑制免疫排斥反应㊂在伤口愈合炎症期时,巨噬细胞根据愈合过程的阶段表达不同的表型和活动㊂促炎巨噬细胞在早3453畜牧兽医学报54卷期被招募到伤口区域㊂它们表达T N F-α㊁I L1β㊁I L-6等促炎因子以杀死病原体,在抗炎反应后期时抗炎巨噬细胞会被召集到创口处抑制炎症的发展,并促进肉芽组织填充㊂但甲泼尼龙大量使用时,会显著延长伤口的炎症期,并抑制血管的重建与肉芽组织的再生㊂从而导致伤口愈合缓慢[19-20]㊂本研究表明,相对于M P组,A D S C s+M P可以显著促进抗炎巨噬细胞分泌I L-10㊁I L-4,并且抑制促炎巨噬细胞分泌I L-6㊁I L-1β㊁T N F-α㊂使创伤快速渡过炎症反应期,达到促进创口组织再生的目的㊂V E G F可以激活内皮细胞增殖㊁迁移和形成芽㊂此外,V E G F还参与了血管形成㊁伤口愈合和器官再生[21]㊂但糖皮质激素会通过抑制V E G F达到抑制血管再生的目的[22]㊂本研究结果表明,相对于M P组,A D S C s+M P组可以显著提高V E G F㊁S D F-1㊁C X C R4的表达㊂这证明A D S C s具有逆转糖皮质激素抑制血管生成和迁移的作用㊂除此之外,T G F-β具有抑制C D4+T细胞㊁抑制I L-2等炎性因子表达并增强肉芽组织再生等的功能[23-24],本试验结果表明甲泼尼龙可以抑制T G F-β的表达,但在A D S C s+M P中可显著促进T G F-β的表达㊂说明A D S C s+M P可通过促进V E G F㊁T G F-β等生长因子的分泌来促进创口愈合㊂在表皮真皮中存在11β-H S D1能将可的松转化为皮质醇发挥出抗炎的作用[25]㊂而当皮肤皮质醇表达过量时会导致延长皮肤创口愈合炎症反应期,抑制创口肉芽组织再生与血管重建[26-27]㊂当注射大量外源性糖皮质激素时,可以通过11β-H S D1的大量表达来促进皮质醇的升高[28],进而危害皮肤创口愈合㊂但这种升高可以被A D S C s所逆转㊂这证明A D S C s可以通过抑制11β-H S D1㊁促进11β-H S D2的表达来抑制皮肤皮质醇的含量,进而促进皮肤愈合㊂研究表明,外源性给予糖皮质激素时会导致机体P I3K/A K T的水平升高[29],并且当P I3K 被抑制时,11β-H S D1也会被抑制[30]㊂本试验结果表明,A D S C s可以逆转由甲泼尼龙引起的P I3K高表达㊂由此研究表明A D S C s有可能是通过P I3K/ A K T通路来影响11β-H S D1的表达,进而达到抑制皮质醇表达的目的㊂4结论1)A D S C s+M P组相对于A S G组,有效延长皮片存活时间至14~21d㊂并为以后更换组织工程皮等创造更有利的条件与时间㊂2)A D S C s+M P通过影响N F-κB的表达抑制I L-2㊁I N F-γ等炎性因子的表达抑制免疫排斥反应㊂3)相较于A S G组,A D-S C s+M P通过促进V E G F㊁T G F-β㊁S D F-1等愈合因子的表达,进而促进创口愈合㊂4)A D S C s可以通过P I3K/A K T通路影响11β-H S D1的表达,起到抑制皮脂醇增多的作用㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] S C H L O T TMA N N F,B U C A N V,V O G T P M,e ta l.A s h o r t h i s t o r y o f s k i n g r a f t i n g i nb u r n s:f r o mt h e g o l d s t a n d a r d o f a u t o l o g o u s s k i n g r a f t i n g t o t h ep o s s i b i l i t i e s o f a l l o g e n e i c s k i n g r a f t i n g w i t hi mm u n o m o d u l a t o r y a p p r o a c h e s[J].M e d i c i n a(K a u n a s),2021,57(3):225.[2] G O O P T U M,K O R E T H J.T r a n s l a t i o n a l a n d c l i n i c a la d v a n c e s i n a c u t e g r a f t-v e r s u s-h o s t d i s e a s e[J].H a e m a t o l o g i c a,2020,105(11):2550-2560.[3] C L I MO V M,MA T A R A J,F A R K A S H E A,e t a l.S u r v i v a l o f a l l o g e n e i c s e l f-a s s e m b l e d c u l t u r e d s k i n[J].T r a n s p l a n t a t i o n,2016,100(10):2071-2078.[4] U E N O P,F E L I P E C,F E R R E I R A A,e t a l.W o u n dh e a l i n g c o m p l i c a t i o n s i n k i d n e y t r a n s p l a n t r e c i p i e n t sr e c e i v i n g E v e r o l i m u s[J].T r a n s p l a n t a t i o n,2017,101(4):844-850.[5] B O O T U N R.E f f e c t s o f i mm u n o s u p p r e s s i v e t h e r a p yo n w o u n d h e a l i n g[J].I n t W o u n d J,2013,10(1):98-104.[6] HA HN E N K AM P K,BÖH L E R K,WO L T E R S H,e t a l.O r g a n-p r o t e c t i v e i n t e n s i v e c a r e i n o r g a n d o n o r s[J].D t s c h A r z t e b l I n t,2016,113(33-34):552-558.[7] A N U D E E P T C,J E Y A R AMA N M,MU T HU S,e ta l.A d v a n c i n g r e g e n e r a t i v e c e l l u l a r t h e r a p i e s i n n o n-s c a r r i n g a l o p e c i a[J].P h a r m a c e u t i c s,2022,14(3):612.[8] L I C,W E I S Q,X U Q C,e t a l.A p p l i c a t i o n o fA D S C s a n d t h e i r e x o s o m e s i n s c a r p r e v e n t i o n[J].S t e m C e l l R e v R e p,2022,18(3):952-967.[9] HU J L,KWO N S T,K I M S W,e t a l.E f f e c t s o fa d m i n i s t r a t i o n r o u t e o f a d i p o s e-d e r i v e d s t e m c e l l s o nt h e s u r v i v a l o f a l l o g e n e i c s k i n g r a f t s i n m i c e[J].T r a n s p l a n t P r o c,2021,53(7):2397-2406.[10] M A Z I N I L,R O C H E T T E L,A D M O U B,e t a l.H o p e sa n d l i m i t s o f a d i p o s e-d e r i v e d s t e m c e l l s(A D S C s)a n dm e s e n c h y m a l s t e m c e l l s(M S C s)i n w o u n d h e a l i n g[J].I n t J M o l S c i,2020,21(4):1306.44538期焦广明等:脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响[11] S MA K A J A,D E MA U R O D,R O V E R E G,e t a l.C l i n i c a l a p p l i c a t i o n o f a d i p o s e d e r i v e d s t e m c e l l s f o rt h e t r e a t m e n t o f a s e p t i c n o n-u n i o n s:c u r r e n t s t a g e a n df u t u r e p e r s p e c t i v e s-s y s t e m a t i c r e v i e w[J].I n t J M o lS c i,2022,23(6):3057.[12] E Y L E R T G,D O L P R,P A R O U S I S A,e t a l.S k i nr e g e n e r a t i o n i s a c c e l e r a t e d b y a l o w e r d o s e o f m u l t i p o t e n tm e s e n c h y m a l s t r o m a l/s t e m c e l l s-a p a r a d i g m c h a n g e[J].S t e m C e l l R e s T h e r,2021,12(1):82. [13]胡俊西.巴马小型香猪皮肤比较生物学研究[D].重庆:西南大学,2006.HU J X.C o m p a r a t i v e b i o l o g i c a l r e s e a r c h o f s k i n i nB a m a m i n i p i g[D].C h o n g q i n g:S o u t h w e s t U n i v e r s i t y,2006.(i n C h i n e s e)[14]陈俊颖,魏泓.猪皮肤在创伤修复中的应用研究进展[J].西南国防医药,2009,19(11):1151-1153.C H E N J Y,W E I H.R e s e a r c h p r o g r e s s o n t h ea p p l i c a t i o n o f p o r c i n e s k i n i n t r a u m a r e p a i r[J].M e d i c a lJ o u r n a l o f N a t i o n a l D e f e n d i n g F o r c e s i n S o u t h w e s tC h i n a,2009,19(11):1151-1153.(i n C h i n e s e)[15] C E N D A L E S L C,K A N I T A K I S J,S C H N E E B E R G E RS,e t a l.T h e B a n f f2007w o r k i n g c l a s s i f i c a t i o n o f s k i n-c o n t a i n i n g c o m p o s i t e t i s s u e a l l o g r a f t p a t h o l o g y[J].A mJ T r a n s p l a n t,2008,8(7):1396-1400.[16] L U O L,L I C W,WU W Q,e t a l.F u n c t i o n a la n a l y s i s o f a l l o r e a c t i v e m e m o r y C D4+T c e l l s d e r i v e df r o m s k i n t r a n s p l a n t a t i o n r e c i p i e n t a n d n a i v e C D4+Tc e l l sde r i v e df r o m u n t r e a t e d m i c e[J].J S u rg R e s,2012,176(2):649-656.[17] R I C H T E R S C D,HO E K S T R A M J,D U P O N T JS,e t a l.I mm u n o l o g y o f s k i n t r a n s p l a n t a t i o n[J].C l i nD e r m a t o l,2005,23(4):338-342.[18] B E N I C HO U G,Y AMA D A Y,Y U N S H,e t a l.I mm u n e r e c o g n i t i o n a n d r e j e c t i o n o f a l l o g e n e i c s k i ng r a f t s[J].I m m u n o t h e r a p y,2011,3(6):757-770.[19] WY N N T A,V A N N E L L A K M.M a c r o p h a g e s i nt i s s u e r e p a i r,r e g e n e r a t i o n,a n d f i b r o s i s[J].I m m u n i t y,2016,44(3):450-462.[20] A I T C H E S O N S M,F R E N T I U F D,HU R N S E,e ta l.S k i n w o u n d h e a l i n g:n o r m a l m a c r o p h a g e f u n c t i o na n d m a c r o p h a g e d y s f u n c t i o n i n d i ab e t ic w o u nd s[J].M o l e c u l e s,2021,26(16):4917.[21] L O G I E J J,A L I S,MA R S HA L L K M,e t a l.G l u c o c o r t i c o i d-m e d i a t e d i n h i b i t i o n o f a n g i o g e n i cc h a n g e s i n h u m a n e nd o t he l i a l c e l l s i s n o t c a u s e d b yr e d u c t i o n s i n c e l l p r o l i f e r a t i o n o r m i g r a t i o n[J].P L o SO n e,2010,5(12):e14476.[22] L A N G E N D O R F E K,R OMM E N S P M,D R E E S P,e t a l.D e x a m e t h a s o n e I n h i b i t s t h e p r o-a n g i o g e n i cp o t e n t i a l o f p r i m a r y h u m a n m y o b l a s t s[J].I n t J M o lS c i,2021,22(15):7986.[23] F U J I O K,K OMA I T,I N O U E M,e t a l.R e v i s i t i n gt h e r e g u l a t o r y r o l e s o f t h e T G F-βf a m i l y o f c y t o k i n e s[J].A u t o i m m u n R e v,2016,15(9):917-922. [24] MO R I K AWA M,D E R Y N C K R,M I Y A Z O N O K.T G F-βa n d t h e T G F-βf a m i l y:c o n t e x t-d e p e n d e n t r o l e si n c e l l a n d t i s s u e p h y s i o l o g y[J].C o l d S p r i n g H a r bP e r s p e c t B i o l,2016,8(5):a021873. [25] Z HO N G C X,WA N G S Z,D A N G L,e t a l.P r o g r e s s i n11β-H S D1i n h i b i t o r s f o r t h e t r e a t m e n t o fm e t a b o l i c d i s e a s e s:a c o m p r e h e n s i v e g u i d e t o t h e i rc h e m i c a l s t r u c t u r ed i ve r s i t y i n d r u g d e v e l o p m e n t[J].E u r J M e d C h e m,2020,191:112134.[26] T E R A O M,MU R O T A H,K I MU R A A,e t a l.11β-H y d r o x y s t e r o i d d e h y d r o g e n a s e-1i s a n o v e l r e g u l a t o ro f s k i n h o m e o s t a s i s a n d a c a n d i d a t e t a r g e t f o rp r o m o t i n g t i s s u e r e p a i r[J].P L o S O n e,2011,6(9):e25039.[27] T I G A N E S C U A,HU P E M,U C H I D A Y,e t a l.I n c r e a s e d g l u c o c o r t i c o i d a c t i v a t i o n d u r i n g m o u s e s k i nw o u n d h e a l i n g[J].J E n d o c r i n o l,2014,221(1):51-61.[28] D A S H T I-K HA V I D A K I S,S A I D I R,L U H.C u r r e n t s t a t u s o f g l u c o c o r t i c o i d u s a g e i n s o l i d o r g a nt r a n s p l a n t a t i o n[J].W o r l d J T r a n s p l a n t,2021,11(11):443-465.[29] MO R G A N S A,S H E R L O C K M,G A T H E R C O L EL L,e t a l.11β-h y d r o x y s t e r o i d d e h y d r o g e n a s e t y p e1r e g u l a t e s g l u c o c o r t i c o i d-i n d u c e d i n s u l i n r e s i s t a n c e i ns k e l e t a l m u s c l e[J].D i a b e t e s,2009,58(11):2506-2515.[30] S H I B A Y AMA Y,A L K HO U R Y C,N E MA Z A N Y YI,e t a l.C l a s s3p h o s p h o i n o s i t i d e3-k i n a s e p r o m o t e sh e p a t i c g l u c o c o r t i c o i d r e c e p t o r s t a b i l i t y a n dt r a n s c r i p t i o n a l a c t i v i t y[J].A c t a P h y s i o l(O x f),2022,235(1):e13793.(编辑白永平)5453。

中国医药导刊2012年第 14 卷第 12 期（总第110期）2165目前肥胖和代谢综合征已成为世界性的社会难题,严重威胁着人类健康,而胰岛素抵抗(Insulin Resistance)是代谢综合征最基础的病理生理机制[1]。

研究表明胰岛素抵抗和2型糖尿病是一个慢性非特异性炎症过程,众多炎性因子参与这一过程[2]。

炎症在胰岛素抵抗和2型糖尿病发病机制中的作用正成为研究热点[3,4]。

单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte Chemotactic Protein-1,MCP-1),作为细胞趋化因子CC亚家族中的一员,是一种重要的炎症趋化刺激因子,介导炎症反应[5]。

11β-羟化类固醇脱氢酶1(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD1),通过将无活性的可的松转化为有活性的氢化可的松,从而调节糖皮质激素代谢,在胰岛素抵抗和2型糖尿病发生发展过程中起重要作用[6]。

在肥胖小鼠和2型糖尿病鼠中,通过抑制11β-HSD1的基因表达,胰岛素抵抗现象可以得到改善。

11β-HSD1抑制剂的研究可能是胰岛素抵抗及2型糖尿病治疗的新的方向,有着重要的临床意义。

研究指出,BVT.2733是一种新型的人工合成11β-HSD1抑制剂,它可以高度选择性地作用于内脏脂肪组织发挥其病理生理作用[7,8],对其作用机制的深入研究有可能为临床新药研制提供理论支持。

通过肥胖小鼠模型,本实验拟观察BVT.2733治疗对于炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及胰岛素抵抗相关指标表达水平的影响及探讨其在改善胰岛素抵抗及代谢综合征中的作用机制。

1 资料与方法1.1 一般资料Rotor Gene3000);紫外分光光度仪(美国AmershamBiosciences 公司);低温高速离心机(德国Eppendorf Centrifuge 5810R);总RNA抽提试剂Trizol和RNase inhibitor等逆转录试剂盒(Invitrogen公司);定量PCR Master Mix试剂(Toyobo公司);雄性C57BL/6小鼠(上海斯莱克实验动物有限公司)。

基因表达与滑膜炎炎症因子第一部分基因表达对滑膜炎的影响 (2)第二部分炎症因子在滑膜炎中的作用 (4)第三部分基因调控炎症因子的方式 (6)第四部分滑膜炎的发生机制 (9)第五部分基因表达与滑膜炎的关系 (12)第六部分炎症因子与滑膜炎的病理生理过程 (14)第七部分基因治疗滑膜炎的可能性 (17)第八部分研究方法和实验设计 (18)第一部分基因表达对滑膜炎的影响基因表达与滑膜炎炎症因子滑膜炎是一种常见的关节疾病，其主要症状包括关节疼痛、肿胀和活动受限。

滑膜炎的发病机制复杂，涉及到多种炎症因子的参与。

其中，基因表达对滑膜炎的影响是一个重要的研究方向。

本文将从基因表达的角度，探讨其对滑膜炎炎症因子的影响。

一、基因表达与滑膜炎基因表达是指基因转录和翻译的过程，通过这个过程，细胞可以制造出所需的蛋白质。

基因表达的调控机制复杂，包括转录因子、miRNA、非编码 RNA 等多种因素。

在滑膜炎中，基因表达的改变可能与炎症因子的产生和调控有关。

二、炎症因子与滑膜炎炎症因子是一类能够引起炎症反应的细胞因子，包括白细胞介素、肿瘤坏死因子、趋化因子等。

在滑膜炎中，炎症因子的产生和调控是一个重要的病理过程。

炎症因子可以引起滑膜细胞的增殖和分化，导致滑膜炎的发生和发展。

三、基因表达与炎症因子基因表达的改变可能影响炎症因子的产生和调控。

例如，一些研究发现，滑膜炎患者的滑膜细胞中，炎症因子的基因表达水平明显升高。

这可能与滑膜炎的发生和发展有关。

此外，一些研究还发现，一些炎症因子的基因表达水平与滑膜炎的严重程度有关。

例如，肿瘤坏死因子的基因表达水平与滑膜炎的严重程度呈正相关。

四、基因表达调控与滑膜炎基因表达的调控机制复杂，包括转录因子、miRNA、非编码 RNA 等多种因素。

这些因素可能通过调控炎症因子的基因表达，影响滑膜炎的发生和发展。

例如，一些研究发现，miRNA 可以通过调控炎症因子的基因表达，影响滑膜炎的发生和发展。