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课题2 月季的花药培养
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二、培养植株的鉴定和筛选 在花药培养中,通过愈伤组织形成的花粉植株,染色体组的数目 常常会发生变化。有些植株是由花药发育形成的单倍体花粉植株; 有些植株是由花药壁细胞发育形成的二倍体花药壁植株;还有的植 株是营养核和生殖核融合后发育成的。因此需对培养出来的植株 作进一步的鉴定和筛选。
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(2)流程解读 ①进行组织培养时要配备三种培养基,期间进行两次转接。 a.脱分化培养基:生长素与细胞分裂素比例适中,促进愈伤组织的 形成。 b.生芽培养基:生长素与细胞分裂素比值较低,促进芽的分化,抑 制根的形成。 c.生根培养基:生长素与细胞分裂素比值较高,促进根的分化,抑制 芽的形成。 ②若培养的外植体含有叶绿体,则培养过程中要提供充足光照, 使其进行光合作用;若培养的组织或细胞不含叶绿体,则培养过程 中不进行光照,以免光线对其造成损伤。
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3.接种和培养 (1)剥离花药:消毒后的花蕾,要在无菌条件下除去萼片和花瓣。 剥离花药时,一是要注意尽量不损伤花药(否则接种后容易从受伤 部位产生愈伤组织);二是要彻底去除花丝,否则不利于愈伤组织或 胚状体的形成。 (2)接种花药:剥离的花药要立刻接种到培养基上。通常每瓶接种 7~10个花药。 (3)培养:利用的培养基是MS培养基,pH为5.8,温度为25 ℃左右,幼 小植株形成后才需要光照。培养20~30 d后,花药开裂,长出愈伤组 织或形成胚状体。前者还要转移到分化培养基上,以便进一步分化 出再生植株;后者要尽快将幼小植株分开并转移到新的培养基上。 (4)通过愈伤组织形成的花粉植株,染色体组的数目常常会发生变 化,因而需要作进一步的鉴定和筛选。