SDS-PAGE全部试剂配方

S D S-P A G E 30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)30%Acr-Bis(29:1) 1000ml 100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺) 290g 29g1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 10g 1g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。

0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。

严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。

使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。

如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)【组分浓度】1MTris-HCL名称用量备注Tris 12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml (36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

【保存条件】室温保存。

【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。

1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)【组分浓度】1.5MTris-HCL名称用量备注Tris 18.17g去离子水80ml浓盐酸3ml (36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】1L称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

Minigels•migration buffer 500ml12.14 mM Tris 100 ml 5 x stock134.2 mM Glycin0.1% SDS 5 ml 10% SDS1 mM EDTA 1 ml 0.5 M EDTA pH 8394 ml Millipore water• 5 X stock migration buffer 1l60.7 mM Tris 15g Tris671 mM Glycin 72g GlycinMillipore water to 1 Liter•2xSDS buffer 4 ml125 mM Tris-HCl pH 6.8 1ml 0.5 M Tris-HCl pH 6.820% Glycerol 0.8 ml 100% Glycerol4% SDS 1.6 ml 10% SDS10% •-Mercaptoethanol 0.4 ml •-Mercaptoethanol0.005% Bromphenolblau 0.2 ml 0.1% Bromphenolblau•5xSDS buffer 4 ml225 mM Tris-HCl pH 6.8 0.45 ml 2 M Tris-HCl pH 6.8 50% Glycerol 1.55 ml 100% Glycerol5% SDS 1 ml 20% SDS10% •-Mercaptoethanol 1 ml •-MercaptoethanolSpatule tip bromphenol blueSolutions (calculated for 4 minigels)•separating gel (10%) 20ml9.6ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |10% Acrylamid 5 ml 40% Acrylamid- degase -1 mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (11%) 20ml9.1 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |11% Acrylamid 5.5 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (12%) 20ml8.6 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5 ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |12% Acrylamid 6 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (12.5 %) 20ml8.35ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |12.5% Acrylamid 6.25 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (15%) 20ml7.1 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |15% Acrylamid 7.5 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•stacking gel (4%) 10ml6.3ml Millipore Water |125mM Tris-HCl pH 6.8 2.5ml 0.5M Tris-HCl pH 6.8 |0.1% SDS 100µl 10% SDS |4% Acrylamid 1ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 100µl APS (100µg/ml)0.1% TEMED 10µl TEMED•Tricine separating gel (16%) 10ml1 M Tris-HCl pH 8.45 3.35ml 3M Tris-HCl pH 8.450.1% SDS100µl 10% SDS16% Acrylamid 4 ml 40% Acrylamid10% Glycerol 1 ml glycerol1.5 ml H2O0.5 mg/ml ammonium persulfate 50µl APS (100mg/ml)0.05 % TEMED 5µl TEMED0Western blot buffer2L:400ml EtOH12.12 g Tris28.83 g Glycine1.6 L H2OCoomassie Stain Solution:1L:1.6 g CBB R-250400 ml EtOH80 ml Acetic acidDestain Solution :10L :2 L EtOH0.7 L Acetic acid7.3 L H2O•2xSDS loading buffer 4 ml125 mM Tris-HCl pH 6.8 1ml 0.5 M Tris-HCl pH 6.820% Glycerol 0.8 ml 100% Glycerol (甘油)4% SDS 1.6 ml 10% SDS10% •-Mercaptoethanol 0.4 ml •-Mercaptoethanol（巯基乙醇）0.005% Bromphenolblau 0.2 ml 0.1% Bromphenolblau（溴酚蓝）。

SDS-PAGE试剂配方SDS-PAGE电泳所用溶液:30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)丙烯酰胺 (Arc) 29 gN,N’-亚甲双丙烯酰胺 (Bis) 1 g用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4?存放丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH 值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4?贮存。

5×Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)Tris碱 15.1 g甘氨酸(电泳级) 94 g10 %SDS 50 mL使用时稀释5倍使用2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL10,(W/V)SDS 4 mL甘油 2 mLβ-巯基乙醇 1.0 mL(DTT(二硫苏糖醇) 0.31g)溴酚兰 0.02g双蒸水 0.5 mL室温存放备用考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝R-250 (G-250) 1.0 g甲醇 450 mL冰醋酸 100 mLddHO 450 mL 20.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95,乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用考马斯亮蓝脱色液(甲醇脱色液效果好，但有毒性)甲醇 100 mL冰醋酸 100 mLddHO 800 mL 2医用酒精:冰醋酸:水=4.5:0.5:5(V:V:V)SDS-PAGE所需溶液:A液——30,丙稀酰胺(W/V):丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4?贮存。

B液——1.5mol/L Tris?HCl，pH8.8:18.17g(9.09g)Tirs碱，溶于80mL(40mL)去离子水中，加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL(50mL)。

C液——1.5mol/L Tris?HCl，pH6.8:12.1g(6.05g)Tirs碱，溶于80mL(40mL)去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL(50mL)。

SDS-PAGE 凝胶配方及制胶12%分离胶试剂5ml 8ml 10ml 15ml 25ml30ml 60ml 90ml 120ml 30%Acr-Bis （ml ） 2 3.2 4610122436 48 1.5M Tris-HCl PH8.8（ml ） 1.25 2 2.5 3.75 6.25 7.5 15 22.5 30 ddH2O （ml ） 1.65 2.64 3.3 4.95 8.25 9.9 19.8 29.7 39.6 10%SDS （ul ） 50 80 100 150 250 300 600 900 1200 10%APS （ul ） 50 80100 150 250300 600 900 1200 TEMED （ul ） 3 4.8 6 9 15 18 36 54 725%浓缩胶试剂4ml 6ml 8ml 12ml 16ml 20ml 24ml 36ml 48ml 30%Acr-Bis （ml ） 0.66 0.99 1.32 1.98 2.64 3.3 3.96 5.94 7.92 1M Tris-HCl PH6.8（ml ） 0.5 0.75 1 1.5 22.5 34.56ddH2O （ml ） 2.74 4.14 5.48 8.28 11.02 13.7 16.56 24.84 33.12 10%SDS （ul ） 40 60 80 120 160 200 240 360 480 10%APS （ul ） 40 60 80 120 160 200 240 360 480 TEMED （ul ）4681216202436481、按顺序加溶液，每加完一个溶液摇匀一下。

00000002、TEMED 要在通风橱中加，加入后混匀30秒左右后再注胶；吸打时枪头不出液面，以减少气泡 000000003、分离胶配好后要用水封顶，聚合至少40min （也可聚合一夜）00000004、加入浓缩胶后插梳子（要洗干净），梳子倾斜插入，避免产生气泡。

SDSPAGE所有详细试■ 剂配方SANY 标准化小组#QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN# 称S181.7gTrisfi«溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解.加浓HCL调节所需耍的pH值=8・&将洛液定容至ILt 高温高压灭菌后.室温保存。

(1. 5mmol/LTris"HCL(pH8. 8) : 18. 15gTris 和48mllmol/LHCL 混合.加水稀释到100ml 终体积。

过滤后4七保存。

)【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，I大I为Tris溶液的pH值随温度的变化差界很大.温度每升商1°C,溶液称取2g高纯度的SDS迓于100、200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水.689加热溶解.滴加浓盐酸调节PH 至7・2・定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害•请注总:防护。

io%过硫酸鞍溶液------ io%(w G AP称取O・lg过硫酸钱宜于l・5ml离心管•加ImL去离子水吹打溶解.JC保存【保存条件】49保存【注意事项】10%过疏酸钱溶液在49保存时•可使用2周左右•超过期限会失去催化作用5XTris-酸电泳缓冲液------------ oXTris-Clycinebuffer (SDS-PAGE 电泳缓冲液)【组分浓度】称取15. IgTris, 91. 0g甘氮酸(glycine) , 5. OgSDS,用800ml蒸馅水或去离子水溶解.充分搅拌溶解•定容至1000ml,室温保存。

得0・125mol/LTris7 25mol/L甘氨酸电极缓冲液。

临用前稀释5倍。

【保存条件】室温保存•两年有效。

【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。

电泳缓冲液可以回收.回收后可再使用「2次.但为了取得最佳的电泳效果,应使用新电泳液°0. 25MTris-HCL (pH6. 8)：10%(W/V)SDS：0. 5%(W/V)BPB(^酚蓝):50%(V/V)廿油：5%(W/V) 0-筑基乙醇(2-ME)【配制方法】fit取1.25mLlMTris-HCL (pH6・8) , 0・5gSDS, 25mgBPB・2・5mL甘油,宜于lOmL塑料离心管中■加去离子水溶解后•定容至5mL,小份(0・5mL/份)分装，于室温保存。

SDS-PAGE1、SDS-PAGE :聚丙烯酰胺凝胶电泳2、Acr :丙烯酰胺；配胶时用30%Acr （质量比Acr ：Bis=29:1）3、Bis ：甲叉双丙烯酰胺4、DDW :超轻水5、SDS ：十二烷基硫酸/磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用10%）6、APS ：过硫酸铵NH 4S 2O 4配胶时用10%7、TEMED :四甲基乙二胺，促凝剂8、Tris-Hcl ：3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶ph=8.8,浓缩胶ph=6.8） 9、DTT ：二硫苏糖醇，DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。

10、IMA ：碘乙酰胺，碘代乙酰胺用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。

CH>2ICONH>2,是和碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制SH 酶类的物质。

5酣TO mlmt 20ml30祝4Qmd50ml6%Bd叫匸2.6 5.3 7.9 10.6 132 15.9 21.2 26.5 30%Atiylamde10 2.0 3.0 4.0 50 60 ao 10.0 15M Trls-HCl (pHS.Sl 1.3 2.5 33 5,0 6.3 7.5 100 125 lO^iSDSC05 01 015 0.2 025 03 04 0.5 10%过谦酸霰 CQ5 01 015 12 025 03 04 05 TEMED CO3400080G123.0160020C240032 004 8%姑2.3 4S S.93.3 11.5 13.S 18.5 232 30%Acrylamde 13 2.7 40 5.3 S.7 a.o 107 13^ 15M Trls-HCII'pHS S'I 1.3 2.5 38 5.0 63 75 100 1£.5 ItPiSDSC.05 0.1 0.16 X 0.25 0.3 0.4 0.5 彳贰过砺酸鞍COS QJ 0.S5 0.2 Q25 03 04 05 TEMEO C00300060W9D.01200t50G18 0024003 io^GelHiO19 4,0 5.9 7.9 &9 11S 159 19S Acryiamde 17 33 6.0 S.7 a.a too 13J 167 15M Trls-HCIipHsB) 13 25 3.8 5.0 63 7.5 W.O 1?5 I^SDSC.05 0.1 0.15 3.2 0.25 0.3 0.4 0.5 1贰■过硫股牧 C0501 0.15 £1.2 025 03 04 05 TEMED C(X)20034 0006 3.0C® 0.01 0012 0016 002 12%GalH J O16 33 49 5.e &2 $= 132 165 30陽3.0 40 SO B.O 100 12Q 160 20£l 1.5M Tris-HCI(pHS 印 13 25 30 5.0 6-3 75 100 1^5It^iSDSC.05 0.1 0.36 J 总 0.25 0.3 0.4 0.5 过硫鞭较C05 0.1 0.15 tl.2 025 03 Q4 05 TEMED CO320004 ooosO.OCf i0.01 0C12 0016 002 15%*l甌11 23 34 4-a 6 37 6.& 9? 11.5 30%A trylamde 2S SO 7.S 1U.0 125 150 2Q0 25a 15Ml Tris-HCIipHs 印 13 2.5 3.8 5.0 S3 7.5 100 125 10%SDSC.05 0.1 0.15 3.2 0.25 0.3 0.4 0.5 过盘盤钮COS 01 015 0.2 025 0.3 04 05 TEMEDCO^0004OOOSO.OCfl0010C12001E0.021）根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE 的分离胶（即下层胶）：Sap QFS f/cD时爭尸。

SDS-PAGE 试剂配制
凝胶脱色染色方法：
溶液1：无水乙醇250mL，冰醋酸50mL，水200mL；
溶液2：无水乙醇50mL，冰醋酸37.5mL，水437.5mL；
溶液3：0.25g考马斯亮蓝R-250 溶于100mL 95%乙醇中，滤纸过滤，待用。

电泳结束，取出胶放在胶盒中，加约50mL溶液1，微波炉加热1min，摇床摇10-20nin；倒掉溶液1，加入溶液2，再加1mL溶液3，混匀，微波炉加热1min，摇床摇，直至条带染色清晰为止。

上样缓冲液（5×）：（5×loading buffer）有
10%（W/V,g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（1ml）
1.称取0.1g过硫酸铵；
2.加入1ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；
3.贮存于4℃。

注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。

5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：（1L）
1.称取Tris粉末15.1g、Glycine（甘氨酸）94g、SDS5.0g；
2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解；
3.加去离子水定容至1L，室温保存。

注意：加水时应让水延着壁缓缓流下，以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。

SDS是阴离子去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白分子的二、三级结构。

作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。

而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。

在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。

SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。

分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。

电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。

2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。

当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。

电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。

蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。

电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。

过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。

在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE 电泳8%分离胶5ml 7.5ml 10mlH2O 2300（微升，下面都一样）3450 460030%Acrylamide 1300 2025 27001.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 250010%SDS 50 75 10010%过硫酸铵50 75 100TEMED 3 4.5 612%分离胶5ml 7.5ml 10mlH2O 1600 2475 330030%Acrylamide 2000 3000 40001.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 250010%SDS 50 75 10010%过硫酸铵50 75 100TEMED 2 3 4浓缩胶5ml 7.5mlH2O 1700 340030%Acrylamide 415 8301.5M Tris-HCl (Ph8.8) 315 63010%SDS 25 5010%过硫酸铵25 50TEMED 2.5 51.将以上溶液混合均匀，用1ml枪吹打几下2.现配分离胶，将配制好的胶慢慢打入，胶里不能有气泡。

3.分离胶加入到2/3处，再加入去离子水，压胶，保持分离胶水平4.待分离胶凝固后，将水倒出来，用滤纸吸干，差不多就可以~5.配制浓缩胶，插梳子（用蒸馏水洗干净）6加入电泳缓冲液，倒个一半左右？7点样的时候慢慢点，因为点样速度快了，容易冒出来8跑胶的时候，先用80V跑，等样品跑完浓缩胶，就换电压，换到120V得跑个2h左右吧~ （不用那么仔细，你配的胶你估摸着差不多就行）,跑完浓缩胶，蛋白和marker都是呈一条细线这时候你就可以换电压了~9跑完的胶，拿出来用蒸馏水冲几次，放入平皿，加染色液，能覆盖胶就行，摇7,8h，摇完了把染色液倒出来（可以回收，但是效果不怎么好），用蒸馏水冲几次，加入脱色液，再摇摇到你能看见条带，目的蛋白就可以~要是你闲时间太长，加染色液放微波炉，打个两三分钟，脱色的时候加脱色液放微波炉，打2,3分钟，据说这个方法也可以，但是效果不好，而且我没有试过，要不你试试？建议你买个SDS-PAGE的试剂盒吧，要不然配试剂得配个一天。

SDS-PAGE电泳试剂1)30%贮备胶溶液：丙烯酰胺（ Acr）29.0g，亚甲基双丙烯酰（ Bis）1.0g，混匀后加 ddH2O，37OC溶解 ,定容至 100 mL,棕色瓶存于 4OC；2)1.5M Tris-HCl(pH：Tris 18.17g加 ddH2O 溶解 ,浓盐酸调 pH 至,定容至 100mL；3)1M Tris-HCl(pH：Tris 12.11g加ddH2O 溶解 ,浓盐酸调 pH 至,定容至 100 mL；4)4 分别胶缓冲液：溶于 1.5M Tris-HCl(pH，定容至 100mL；5)4浓缩胶缓冲液：溶于1M Tris-HCl(pH，定容至 100mL；6)10电泳缓冲液(pH：Tris 3.029g，甘氨酸14.415g，SDS 1g加ddH2O 溶解 ,定容至 100mL；7)10%过硫酸铵（ Aps,现配）： 1g AP加 ddH2O 至 10mL；8)2 SDS电泳上样缓冲液： 1M Tris-HCl(pH， -巯基乙醇， SDS 0.6g，甘油mL，%溴酚兰 mL，ddH2O；9)考 xxxx染色液：考 xxxxR2501.25g，甲醇 225 mL，冰醋酸 50 mL，ddH2O225mL；10)脱色液 :甲醇、冰醋酸、 ddH2O 以 2∶1∶7 配制而成；11)分别胶 %):ddH2O 4mL，30%贮备胶 5 mL，4 分别胶缓冲液 3mL, 10% Aps 现(配 )，TEMED(N,N,N’ -,N四’甲基乙二胺 )10 μL；12)浓缩胶（ 5％）： ddH2O，30%贮备胶， 4 浓缩胶缓冲液， 10%Aps 50μL，TEMED5μL。

Tricine（三羟甲基氨基甘氨酸） - SDS - PAGE蛋白质电泳1 Tricine - SDS - PAGE蛋白质电泳溶液准备1）正极缓冲液 (10 ×)：14g Tris溶于 400mL重蒸水 ,用 1. 0M HCl调至 pH8.9 , 定容至 500mL。

SDS-PAGE试剂配方30%凝胶贮液（150ml， 4℃保存）29.2% Acr：43.8g 0.8% Bis：1.2g将Acr完全溶解于120ml水中，再加入Bis使其完全溶解，加ddH2O定容至150ml，用滤纸过滤溶液，棕色玻璃瓶中4℃保存。

分离胶Buffer （1.5M Tris-HCl 250ml）Tris：45.4725g SDS：1g将Tris溶于200ml水中，在磁力搅拌器上不断搅动溶液使其完全溶解，用HCl调节pH 至8.8，此过程中加入HCl时浓度需逐渐降低，越接近目标pH越要小心防止pH调节过头。

加ddH2O定容至250ml，加入SDS（此时容易产生气泡，可用超声或抽气破碎气泡），抽滤或滤纸过滤，4℃保存。

浓缩胶Buffer （0.5M Tris-HCl 100ml）Tris：6.07g SDS：0.4g将Tris溶于80ml水中，后续步骤同分离胶Buffer，调节pH值至6.8（可配置200ml调pH后100ml用于添加SDS作浓缩胶Buffer，剩余100ml为Tris-HCl贮液）SDS裂解液（10ml）：0.5M Tris-HCl pH：6.8 2ml2%甘油2ml4%SDS 0.4g65mM DTT 100mg（使用时临时加入）ddH2O 6ml样品溶解液：（100ml）终浓度为50 mmol/L Tris﹒HClpH=6.8（总体积的20%=20ml），2% SDS=2g，0.1% 溴酚蓝=0.1g，10% 甘油=10ml，补ddH2O到100ml10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL 离心％过硫酸铵：管中冷冻备用TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存（有毒，致癌物质）。

SDSPAGE所有详细试剂配方SDS-（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用于蛋白质分析的实验技术。

该技术通常涉及到几种试剂，如胶溶液、缓冲液、电泳缓冲液、染色溶液等。

下面是SDS-常见的试剂配方及其详细说明。

一、胶溶液配方：1. 30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）溶液- 在称量瓶中称取30g丙烯酰胺，并用蒸馏水调至100ml。

搅拌溶解直至均匀。

-这是制备聚丙烯酰胺凝胶的基础溶液。

2. 响应稀释液（Response diluent）-用于稀释聚丙烯酰胺溶液以获得不同浓度的凝胶。

-可通过将聚丙烯酰胺溶液与水按1:3体积比混合来制备响应稀释液。

二、缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine running buffer）-用于凝胶电泳盒中电解质的运行。

-配方为：3g Tris base （pH 8.8）14.4g glycine将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至8.8三、电泳缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine SDS running buffer）-用于在电泳过程中提供离子追踪剂。

-配方为：30g Tris base144g glycine10gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中。

2. 加速剂（stacking gel buffer）- 用于形成凝胶中的聚集堆积层（stacking layer）。

-配方为：30g Tris base （pH 6.8）144g glycine1gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至6.8四、样品处理缓冲液配方：1. 样品加载缓冲液（sample loading buffer）-用于处理蛋白样品，以便在凝胶上获得良好的分离效果。

-配方为：0.5M Tris-HCl（pH 6.8）20%（v/v）甘油10%（w/v）SDS0.05%（w/v）溴酚蓝（bromophenol blue）旋转混合并加入蛋白样品。

五、凝胶染色溶液配方：1. 吸附性染色剂（Coomassie blue staining solution）-用于染色聚丙烯酰胺凝胶上分离的蛋白质。

SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制SDSPAGE 电泳（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。

在进行 SDSPAGE 电泳实验时，准确配制各种试剂是获得可靠实验结果的关键。

下面，让我们详细了解一下SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。

首先，我们来看看分离胶缓冲液的配制。

分离胶缓冲液一般是 15M TrisHCl（pH 88）。

要配制 100ml 的这种缓冲液，我们需要称取 1817g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调节 pH 值至 88。

这一步需要耐心和细心，因为 pH 值的准确性对电泳结果影响很大。

调节好 pH 后，将溶液定容至 100ml。

接下来是浓缩胶缓冲液，通常是 10M TrisHCl（pH 68）。

同样配制100ml，称取 1211g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调 pH 至68，最后定容至 100ml。

然后是 30%丙烯酰胺溶液。

这是 SDSPAGE 电泳中非常重要的试剂。

配制 100ml 该溶液，需要称取 29g 丙烯酰胺和1g N,N’亚甲双丙烯酰胺，用去离子水溶解后定容至 100ml。

丙烯酰胺是有毒物质，在配制和使用过程中要特别小心，避免接触皮肤和吸入粉末。

SDS 溶液的配制也不容忽视。

一般是 10%（w/v）的 SDS 溶液。

称取 10g SDS，加入适量去离子水搅拌溶解，然后定容至 100ml。

还有 10%过硫酸铵溶液。

称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。

过硫酸铵溶液容易失效，所以每次使用前都要新鲜配制。

TEMED（四甲基乙二胺）在凝胶聚合过程中起到催化作用。

由于它挥发性强，使用时要注意迅速加入。

电泳缓冲液也是必不可少的。

一般使用的是 Tris甘氨酸缓冲液。

配制 1L 缓冲液，需要称取 303g Tris 碱、1877g 甘氨酸和 1g SDS，用去离子水溶解后定容至 1L。

SDS-PAGE电泳试剂配制SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术，可以将蛋白质按照其分子量大小分离出来。

在这个过程中，需要使用一系列试剂来形成凝胶、还原并变性蛋白质样品、以及进行电泳。

下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。

聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制1. 蒸馏水将蒸馏水取2L，通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质，备用。

2. 均聚化溶液将40%（w/v）丙烯酰胺10mL，在干燥器中烘干2小时，然后加入蒸馏水固定容积至50mL。

将10%（w/v）N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中，搅拌30分钟至完全溶解。

3. 凝胶制备将均聚化溶液加入10%（w/v）的三甲基丙烯酰氨基甲基纤维素，搅拌5分钟后加入0.1%TEMED等待至少1小时凝胶化。

4. 等电聚焦凝胶制备将均聚化溶液加入3.33%（w/v）等电聚焦剂，根据需要调节pH值，搅拌5分钟后加入氨基甲酸1mL，搅拌2分钟至完全溶解。

加入TEMED及APS，混合倒入制好的除尘洞中，并插入梳子。

至少1小时后移除梳子，使凝胶完全凝固。

蛋白样品处理试剂配制1. SDS缓冲液将10%SDS 1.25mL加入pH6.8的磷酸盐缓冲液（1M），加入蒸馏水固定容积至100mL，搅拌10分钟至SDS完全溶解，备用。

2. β-巯基乙醇将β-巯基乙醇400μL加入1mL磷酸盐缓冲液（1M），备用。

3. 样品缓冲液将10%SDS 100μL，β-巯基乙醇50μL加入磷酸盐缓冲液1mL中，加入蒸馏水固定容积至10mL，轻轻搅拌即可。

4. 热变性载入缓冲液将4倍浓度的样品缓冲液加入β-巯基乙醇，于100℃水浴中加热5分钟。

冷却至室温，即可使用。

电泳相关试剂配制1. 电泳缓冲液将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 10g进行混合后，加入蒸馏水将其固定至2L，备用。

2. Anode buffer将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 5g进行混合后，加入蒸馏水将其固定至2L，备用。

SDS-PAGE30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。

0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。

严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。

使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。

如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

【保存条件】室温保存。

【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。

1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积。

过滤后40C保存。

）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.30％（W/V）丙烯酰胺溶液配制名称用量备注Acrylamide 29gBIS 1g 充分搅拌溶解去离子水80ml 定容至100ml，0.45μm滤膜过滤除杂置于棕色瓶中4℃保存，（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。

配制时应戴手套操作）2.10％（W/V）过硫酸铵名称用量备注过硫酸铵0.1g去离子水1ml 现配现用（注意：10％过硫酸铵溶液在4℃保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）3.5X Tris－Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）名称用量备注Tris15.1gGlycine94.0gSDS 5.0g去离子水800ml 加入去离子水定容至1L后，室温保存4.1M Tris-HCL, pH=6.8 (36%的浓盐酸)名称用量备注Tris 12.1去离子水80ml浓盐酸9ml 预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存5. 1.5M Tris-HCL, pH=8.8 (36%的浓盐酸)名称用量备注Tris 18.17去离子水80ml浓盐酸3ml 预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存6.10%SDS名称用量备注SDS 10g去离子水80g 加入去离子水定容至100ml后，室温保存7.考马斯亮蓝R-250染色液名称用量备注考马斯亮蓝R-250 0.1g异丙醇25ml 搅拌溶解冰醋酸10ml 搅拌均匀去离子水65ml 搅拌均匀，滤纸除去颗粒物，室温保存8.考马斯亮蓝染色脱色液名称用量备注冰醋酸100ml乙醇50ml去离子水850ml 充分混匀后使用9.5×SDS-PAGE Loading Buffer：量取下列试剂，置于10ml塑料离心管中名称用量备注1MTris-HCL, pH=6.8 1.25mlSDS 0.5gBPB（溴酚蓝）25mg甘油 2.5ml去离子水至5ml 分装200ul/管2ME 10ul/100ul 使用前添加，添加后可室温保存一个月。

SDS-PAGE标准方法如下：1.试剂：准备所需的试剂，包括2M Tris-HCl（pH8.8）、1M Tris-HCl（pH6.8）、10%SDS、50%甘油、1%溴酚蓝、10%过硫酸铵和5×电泳缓冲液等。

2.工作液：制备30%（w/v）丙烯酰胺/0.8%（w/v）双丙烯酰胺的工作液，加蒸馏水至100ml，缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解，过0.45μm滤膜。

可在4℃存放数月。

3.凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。

4.pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。

5.pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。

6.TEMED（四乙基乙二胺）原液。

7.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）。

8.考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。

9.操作步骤：制备凝胶贮液、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液等；按照所需比例配制丙烯酰胺和双丙烯酰胺工作液；加蒸馏水至所需体积；将工作液和Tris碱混合并冷却至室温；加入SDS和TEMED；倒入制胶模具中并插入样品梳；放入电泳槽中加入电极缓冲液；连接电源开始电泳；电泳结束后取下凝胶；用考马斯亮蓝染色液染色；脱色并观察结果。

请注意，具体操作方法可能因实验室条件和需求而有所不同。

如有任何疑问或需要进一步了解SDS-PAGE标准方法的具体细节，建议咨询专业技术人员或查阅相关文献资料。