RP_HPLC法测定人血清中华法林浓度的方法学研究
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RP-HPLC法测定人血浆中紫杉醇浓度的方法学研究孟祥云;高雷;何争民;陈进【期刊名称】《中医药临床杂志》【年(卷),期】2010()4【摘要】目的:建立高效液相色谱法测定人血浆中紫杉醇含量的方法,为人血浆中紫杉醇浓度的测定及药代动力学、生物利用度研究提供新的定量方法。
方法:采用Hypersil0DS25p.m(4.6mm×250mm)色谱柱,甲醇-乙腈-水(40:30:30)为流动相,流速为1.0ml·min^-1,检测波长为227nm,血浆样品经叔丁基甲醚萃取。
以内标法定量。
结果:紫杉醇保留时间为10.7min,标准曲线的线性范围为0.113—11.30mg·ml^-1,r=0.9993,紫杉醇日内变异系数小于5%,日间变异系数小于10%,回收率〉90%。
结论:本方法操作简单,数据准确,重现性好,适用于人血浆中紫杉醇浓度的测定及药动学研究。
【总页数】2页(P344-345)【关键词】紫杉醇;高效液相色谱法;血药浓度;RP—HPLC法【作者】孟祥云;高雷;何争民;陈进【作者单位】安徽省合肥市第二人民医院药学部【正文语种】中文【中图分类】R979.1【相关文献】1.RP-HPLC法测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的方法 [J], 范开;马雪丰;谢敏;胡春兰;谭克海2.RP-HPLC法测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的方法 [J], 范开;马雪丰;谢敏;胡春兰;谭克海3.RP-HPLC法测定高原地区人血浆中利多卡因的血药浓度 [J], 陈俊萍4.RP-HPLC法测定司巴沙星在人血浆中的浓度 [J], 管勤5.RP-HPLC法测定肿瘤患者血浆中紫杉醇浓度 [J], 边原;刘一;叶云因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
RP-HPLC法测定人血清中阿莫西林浓度及应用朱正飞;尚启平;李见春【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2008(8)10【摘要】目的:建立测定人血清中阿莫西林浓度的RP-HPLC法.方法:采用甲醇沉淀蛋白,高效液相色谱检测法.以别嘌醇为内标,色谱柱为Phenomenex Synergi 4μPOLAR-80A,250 mm×4.6 mm.流动相为甲醇-0.2%甲酸水溶液(含10 mmol·L-1乙酸铵)/4:96,流速1.2 mL·min-1,检测波长:236 nm.结果:血清中内源性物质不干扰阿莫西林的检测,阿莫西林的线性范围为0.327~20.95 μg·mL-1,批内、批间精密度均小于15%,低、中、高浓度的(0.655、2.619和10.475 μg·mL-1)平均提取回收率分别为102.9%、99.8%、97.6%.结论:该法操作快速、简单、准确,符合生物样品检测要求,可用于临床药代动力学研究中大批量血样的处理.【总页数】3页(P753-755)【作者】朱正飞;尚启平;李见春【作者单位】马鞍山市妇幼保健院药剂科,马鞍山市,243011;安徽省当涂县医院药剂科,合肥市,243100;蚌埠医学院药学系药剂教研室,蚌埠市,233030【正文语种】中文【中图分类】R978.1【相关文献】1.RP-HPLC法测定人血清中万古霉素的浓度 [J], 陈宜锋;李碧峰;黄小红;冯惠平2.RP-HPLC法测定人血清中地高辛浓度 [J], 阳波;李湘斌3.RP-HPLC法测定人血清中茶碱浓度的改进 [J], 陈东;付成效4.RP-HPLC法测定人血清中茶碱浓度的改进 [J], 陈东;付成效5.RP-HPLC法测定人血清中地高辛浓度 [J], 阳波;李湘斌因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
•实验研究•超高效液相色谱法测定血浆华法林浓度及临床应用唐江涛1 陈瑶2 白杨娟1 苗强1 邹远高1【摘要】 目的 建立超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)测定血浆华法林浓度,探讨心脏换瓣术后患者华法林血药浓度与国际标准化比率(international normalizedratio,INR)测值的关系,以寻求更安全可靠的监测指标,指导临床抗凝治疗的合理用药。
方法 利用6-甲氧基萘乙酸作为内标,建立一种超高效液相色谱法,测定血浆中的华法林浓度。
同时对79例样本的INR、华法林剂量和血浆华法林浓度进行相关性分析。
结果 华法林和内标的保留时间分别是2.2和1.1 min,血浆中华法林的平均提取回收率为96.0%,华法林浓度在15.6~4000 ng/ml具有良好的线性(R2=0.9996),方法回收率为98.5%~99.9%,最低检测限为5.0 ng/ml。
日内和日间精密度分别低于1.34%和2.69%。
79例患者INR和华法林剂量相关性为r2=0.006(P=0.481),INR和血浆华法林浓度为r2=0.006(P=0.497),华法林剂量和血浆浓度相关性为r2=0.298(P=0.001)。
结论 该方法是一种简便、快速、准确、灵敏的定量测定人体血浆中华法林浓度的UPLC方法,华法林血药浓度测定对于心脏瓣膜置换手术后患者的抗凝治疗具有指导意义。
【关键词】 华法林; 国际标准化比率; 超高效液相色谱法Determination of plasma warfarin concentration by ultra-high performance liquid chromatography andclinical application Tang Jiangtao1, Chen Yao2, Bai Yangjuan1, Miao Qiang1, Zou Yuangao1. 1Departmentof Laboratory Medicine, West China Hospital of Sichuan University, Chengdu 610041, China; 2Departmentof Clinical Laboratory, Women′s and Children′s Hospital of Sichuan Province, Chengdu 610000, ChinaCorresponding author: Zou Yuangao, Email: zouyg69@【Abstract】 Objective To establish a method to determine warfarin concentration in plasmaby ultra performance liquid chromatography (UPLC), and to explore the relationship between warfarinplasma concentration and international normalized ratio (INR) in patients after cardiac valve replacement,so as to seek more safe and reliable monitoring indicators and guide rational use of anticoagulant therapy.Methods An ultra performance liquid chromatography method has been developed for measuring warfarinconcentration in plasma by using 6-methoxy naphthaleneacetic acid (6-MNA) as internal standard (IS). Atthe some time, the correlation of INR, warfarin dosage and plasma warfarin concentration in 79 samples wasanalyzed. Results The retention time of warfarin and the IS were 2.2 and 1.1 min, respectively. The averageextraction recovery of plasma warfarin was 96.0%, The concentration of warfarin was 15.6~4000 ng/ml withgood linearity (R2=0.9996). The overall accuracy of the method was 98.5%~99.9% and the lowest detectionlimit was 5.0 ng/ml. The intra-and inter-day variations were less than 1.34% and 2.69%, respectively. Thecorrelation between INR and warfarin dose was r2=0.006 (P=0.481), INR and plasma warfarin concentrationwas r2=0.006 (P=0.497), and the correlation between warfarin dose and plasma concentration was r2=0.298(P=0.001) in 79 cases of samples. Conclusions A simple, rapid, accurate and sensitive UPLC methodfor quantifying warfarin levels in human plasma was validated. The determination of warfarin bloodconcentration has guiding significance for anticoagulant therapy of patients after heart valve replacement.【Key words】 Warfarin; International normalized ratio; Ultra performance liquid chromatographyDOI:10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2019.03.002作者单位:610041 成都,四川大学华西医院实验医学科临床免疫室1;610000 成都,四川省妇女儿童医院检验科2通信作者:邹远高,Email:zouyg69@华法林(warfarin ,WFR)作为维生素K 的抑制剂,通过抑制肝脏内凝血酶原和凝血因子的合成起到抗凝作用,主要应用于心脏瓣膜置换术的病人的抗凝治疗[1-3]。
ΡΠ-ΗΠΛΧ测定人血清中黄连素浓度张宏文 邵志高 孙一勤Ξ江苏省人民医院药研室 南京提 要 运用反相高效液相色谱法测定了人血清中黄连素浓度∀以改性甲醇为流动相 检测波长为 外标法定量 线性范围为 ∗ Ù ρ 平均回收率为 最低检测限 日内 日间误差均小于 ∀方法灵敏 准确 快速 可用于药代动力学和药效学的研究∀关键词 高效液相色谱法 黄连素 血药浓度分类号 Ù前言近来研究表明 黄连素是一种安全 有效的抗心律失常药 但其量效关系尚不清楚 且盐酸黄连素不宜肌注和静滴给药 否则可能引起阿斯综合症 过敏性休克等 ∀有关黄连素血药浓度的测定 国外研究甚少 国内也不多∀为此 有必要建立黄连素的模型 研究黄连素在体内的药物动力学参数 定量分析阐明黄连素的剂量与效应间的规律 给临床合理用药提供客观依据∀因此 我们首次建立了人血清黄连素的测定方法∀此法具有快速 灵敏 准确 经济等优点∀实验部分仪器与试药仪器 瑞典 型高效液相色谱仪紫外检测器 进样阀 型液体快速混合器 江西医疗器械厂型离心沉淀器 上海手术器械厂 ∀试剂 甲醇 乙腈 二氯甲烷 三乙胺均为 级试剂 水为二次重蒸水∀药品 盐酸黄连素 成都军区制药厂 ∀方法与结果黄连素标准贮备液 Ù 精确称取相当于黄连素 的盐酸黄连素置于 容量瓶中 用甲醇溶解并稀释至刻度 置于冰箱内保存∀临用时用甲醇稀释至所需浓度∀色谱条件 色谱柱 ≅流动相为甲醇 三乙胺 Ú ςÙς 流速Ù 纸速 Ù 检测波长 灵敏度 室温 ∗ ε∀测定方法 取含药血清 置于 具塞试管中∀加乙腈 二氯甲烷 密塞∀在快速混匀器上振荡 离心 Ù ∀精确吸取有机层 置于尖底刻度试管中 在水浴中 ε氮气流下挥干 残渣用 Λ 甲醇溶解 进样 Λ ∀色谱分离结果 图 是本实验条件下空白血清 含药血清的典型色谱图∀黄连素保留时间为能与血清杂质峰很好的分离∀图 小檗碱分离色谱图Φιγ Χηρο ατογρα οφβερβερινε空白血清 血清样品∀线性范围与最低检测限 取空白血清 加黄连素标准液配成Ù 血清∀按测定方法项操作 以峰高对浓度回归 得回归方程Η Χ ν ρΠ ∀黄连素最低检测限为 信噪比大于 ∀回收率与精密度 分别取空白血清 精确加入第 卷第 期色 谱年 月Ξ江苏省职工医科大学药学专业实习生本文收稿日期 修回日期黄连素标准液 配成 Ù 个浓度∀按测定方法项操作 以空白血清中加入标准液后经提取测得的样品峰高与标准溶液直接进样测得的峰高比计算回收率 结果见表 和表 ∀表 人血清中黄连素回收率 νΤαβλε Ρεχοϖερψρατεοφβερβερινινσερυ ν浓度 Ù回收率平均回收率 Σ∆表 人血清中黄连素精密度Ταβλε Τηε ρχεισιονοφδετερ ινατιονοφβερβερινινσερυ浓 度Ù 日内误差 ΞΣ∆ν ΡΣ∆ 日间误差 Ξ^Σ∆ν ΡΣ∆讨论色谱条件的选择 流动相中三乙胺浓度的变化对黄连素的保留时间和理论塔板数的影响较大∀随着三乙胺浓度的增加 保留时间下降 理论塔板数增大∀为了保证既有较高的柱效 又有适宜的保留时间 本文选用三乙胺浓度为 ∀我们选择干扰小 灵敏度足够大的 为检测波长∀曾用乙醚 乙酸乙酯 氯仿Ú异丙醇 Ú 二氯甲烷等不同溶剂提取 以二氯甲烷回收率为最高表 ∀本文测定一个样品仅需 具有快速灵敏 操作简便 杂质干扰少等特点 可用于药代动力学和药效学研究∀表 不同溶剂下黄连素回收率Ταβλε Τηερεχοϖερψρατεοφβερβερινινδιφφερεντσολϖεντ提取溶剂 回收率乙 醚 乙酸乙酯 氯仿 异丙醇Ú 二氯甲烷参考文献蒋永培 朱新民 中国医院药学杂志 戴自英 刘裕昆 汪 复 临床抗菌药物学 北京 人民卫生出版社沈克温 王绪明 韩永平 实用药物分离鉴定手册 北京 人民军医出版社∆ετερ ινατιονοφΒερβερινεινΗυ ανΣερυ βψΡεϖερσεδ-ΠηασεΗιγηΠερφορ ανχεΛιθυιδΧηρο ατογρα ηψϑιανγσυΠροϖινχεΗοσ ιταλ ΝανϕινγΑβστραχτ ≅ Ù ρΚεψωορδσ期 张宏文等 测定人血清中黄连素浓度。
RP-HPLC法测定人血浆中氯氮平浓度于海燕;何粤红;胡冬竹;胥小叶【期刊名称】《中国民康医学》【年(卷),期】2013(025)005【摘要】目的:建立测定人血浆中氯氮平浓度的反相高效液相色谱法.方法:以Agilent Herpesil ODS C18柱(250 mm×4mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇:水(70∶30),每250 ml水中加入0.55 ml三乙胺;流速:1.2 ml·min-1;柱温:40℃;检测波长:254 nm.以乙酸乙酯为提取剂.结果:氯氮平在20~1 000 ng·ml-1浓度范围内,峰面积与其浓度呈良好线性关系;氯氮平的高、中、低浓度相对平均回收率分别为101.55%、98.25%、103.57%;日内、日间RSD均<9%(n=5).分析方法的检测限10 ng·ml-1;氯氮平的标准曲线回归方程为Y=0.32132509X+1.2727281,r =0.99725 (n =8).结论:该方法灵敏、准确、简单、快捷,可用于临床氯氮平的血浆药物浓度监测和药物动力学研究.【总页数】3页(P58-60)【作者】于海燕;何粤红;胡冬竹;胥小叶【作者单位】云南省精神病医院药剂科,云南昆明650224【正文语种】中文【中图分类】R971.4【相关文献】1.RP-HPLC法测定人血浆中卡马西平浓度 [J], 王丽霞;陈清霞;杨红梅;梁小丽;刘伟忠2.RP-HPLC法测定人血浆中拉米夫定的浓度 [J], 朱旭;孙亚欣;邱枫;何晓静;赵明明;肇丽梅3.RP-HPLC法测定人血浆中替考拉宁的浓度 [J], 江泓颖;曹薇;陈永刚;吴金虎;王雄4.异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度 [J], 杨智;阳利龙;祝文兵;曹靖;何周康5.用RP-HPLC法测定人血浆中丙泊酚浓度 [J], 张延柳;宫玉蕾;张奇;曲福军;李恩有;金汉因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
RP-HPLC法同时测定人血清和脑脊液中苯巴比妥、苯妥英钠和卡马西平浓度许贤瑞;董通;张庆;杨小英;党宏万【摘要】目的建立RP-HPLC法同时测定人血清和脑脊液中苯巴比妥(PB)、苯妥英钠(PHT)和卡马西平(CBZ)浓度的方法.方法色谱柱:AgilentZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-水(27.5:27.5:45);流速:1.0mL·min-1;检测波长:210nm;柱温:40℃;进样量:10μm.结果血清中PB、PHT、CBZ的线性范围依次为:2.64~52.75μg·mL-1、1.45~29.00μg·mL-1、1.04~20.80μg·mL-1;脑脊液中PB、PHT、CBZ的线性范围依次为:1.32~42.20μg·mL-1、0.73~23.20μg·mL-1、0.52~16.μg·mL-1;血清中PB、PHT、CBZ的平均提取回收率分别为:93.17%、96.17%、94.67%,脑脊液中PB、PHT、CBZ提取回收率接近100%;日间、日内RSD均小于4%.结论本方法简单、快速、准确,适用于临床血及脑脊液浓度的检测.%Objective To establish RP - HPLC method for simultaneous determination of phenobarbital (PB), phenytoin(PHT) and carbamazepine (CBZ) in human serum and cerebrospinal fluid(CSF).Methods Aglient ZORBAX SB -C18 (250mm ×4.6mm, 5μm) was used.The mobile phase was water- methanol- acetonitrile(27.5:27.5:45).The flow rate was 1.0 mL · min- 1 and the detection wavelength was 210nm.The column temperature was 40℃ and sample size was 101μL.Results The linear relation of PB,PT and CBZ were 2.64 ~ 52.75 μg· mL - 1, 1.45 ~29.00μg · mL- 1, 1.04 ~20.801μg · mL - 1 respectivelyin human serum and 1.32 ~42.20μg · mL-1 ,0.73 ~23.20μ g · mL-1 ,0.52 ~16.64μg · mL -1 in cerebrospinal fluid respectively.The averagerecovery rate of PB, PHT and CBZ were 93.17%、96.17%、94.67%respectively in human serum and nearly 100% in cerebrospinal fluid.The RSD for the inter - day and intra - day of three drugs were less than 4%.Conclusion The method is sample, fast, accurate and suitable for determination PB, PHT and CBZ in human serum and cerebrospinal fluid of drug concentration.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2011(033)004【总页数】4页(P360-363)【关键词】苯巴比妥;苯妥英;卡马西平;脑脊液;血清;高效液相色谱法【作者】许贤瑞;董通;张庆;杨小英;党宏万【作者单位】宁夏医科大学,银川,75004;宁夏医科大学,银川,75004;宁夏医科大学附属医院神经内科,银川,750004;宁夏医科大学附属医院药剂科,银川,750004;宁夏医科大学附属医院药剂科,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R446癫痫是常见的神经系统疾病之一。
RP -HPLC 法测定人血清中氯吡格雷浓度的方法学研究王夏芹1,唐海沁1,陈 纭2,舒彦松2,孙 彤1,黄晓晖2,李 俊2(1.安徽医科大学第一附属医院心内科,安徽合肥 230032;2.安徽医科大学药学院,安徽合肥 230032)摘要:目的 建立一种简易的方法测定成人血清中氯吡格雷的含量,便于临床药物浓度监测。
方法 采用H ypersil OD S C 18色谱柱(150mm @4.6mm,5L m ),流动相为(0.01m ol #L -1)磷酸二氢钾溶液B 甲醇(35B 65,磷酸调p H 至3),流速为1.0m l #m i n -1,检测波长为235n m 。
结果 氯吡格雷保留时间为14.5m in ,标准曲线的线性范围为0.0625~4.0m g #L -1,r =0.9995,氯吡格雷的高、中、低日间、日内变异系数均在10%以下,回收率>90%。
结论 该法简便快速,重现性好,灵敏度高,可用于人血清中氯吡格雷药物含量检测及应用于临床治疗药物监测。
关键词:氯吡格雷;反相高效液相色谱法;血清浓度Deter m i nation of clopidogrel i n hu m an blood seru m by RP -HPLCWANG X ia -qin 1,TANG H ai qin 1,C HEN Yun 2,SHU Y an song 2,SUN Tong 2,HUANG X iao -hu i 2,LI Jun2(1.D epart m ent of Card i o logy,T he F irs tA ff ili ate d H osp it a l of A nhu iM e d ical University,H e f ei 230032;2.College of P har m acy,A nhu iM e d ical University,H efei 230032)Abstrac t :A i m T o estab lish a m ethod for dete r m ina tion of c l opidogre l i n hu m an c s blood seru m.M ethod s RP-H PLC me t hod was used ,w it h C 18co l u m n at the standa rd of 150mm @4.6mm,and 0.01mo l #L -1KH 2PO 4:m ethano l soluti on (35B 65)as mob ile phase .The fl ow rate was 1.0m l #m i n -1.UV detection w as de ter m i ned at 235n m.R esu lts T he reserv e ti m e o f c l opidogre l i n hu m an b l ood se ru mw as 14.5m i n .The li near ity range of standard curve w as be t w een 0.0625and 4.0m g #L -1.The ave rage recovery w as 90%.RSD o f three consi stencies i nc l ud i ng the h i gh ,m iddle and l ow va ried i n less t han 10%.Conc l usion T he me t hod is si m ple ,fast and accurate for the analysis o f clopi dogrel i n hu m an b l ood seru m.K ey word s :c l op i dog re ;l RP-H PLC;seru m concentrati on 基金项目:安徽省自学科学基金项目(编号:070413117)安徽省教育厅自然科学研究项目(编号:2006k j 309B)作者简介:王夏芹,女,硕士研究生;通讯作者:黄晓晖,男,博士,硕士生导师,研究方向:定量药理学和临床药代动力学,E-m ai:l m at hd rug @si na .co m氯吡格雷(c l opidogre l)是一种新型的噻吩并吡啶类抗血小板药物,在体外没有活性,其活性代谢产物能选择性阻断血小板ADP 受体,抑制纤维蛋白原与血小板受体糖蛋白GP Òb /Óa 结合而抑制血小板聚集。
RP-HPLC用于人血浆中头孢呋辛浓度的测定及其药代动力学的研究王萍;胡晓;李文【期刊名称】《南昌大学学报(医学版)》【年(卷),期】2009(049)007【摘要】目的建立一种RP-HPLC头孢呋辛人血浆药物浓度测定方法,并用于头孢呋辛酯片人体药代动力学的研究.方法采用RP-HPLC法测定头孢呋辛血药浓度,样品经过乙腈沉淀,氮气挥干,残渣用流动相再溶解.流动相:乙腈∶0.05 mol/L醋酸钠=10∶90;pH=3.9;流速:1 mL/min.检测波长273 nm.结果头孢呋辛血浆浓度的标准曲线范围为0.11~10.56 mg/L(R2=0.9999),最低定量下限为0.11 mg/L;相对回收率在100%~104%之间,日内和日间RSD<5%.结论该检测方法有很好的灵敏性、准确性和简易性.适用于头孢呋辛的血药浓度监测和人体药代动力学的研究.【总页数】4页(P25-27,44)【作者】王萍;胡晓;李文【作者单位】南昌大学医学院临床药理研究所,南昌,330006;南昌大学医学院临床药理研究所,南昌,330006;南昌大学医学院临床药理研究所,南昌,330006【正文语种】中文【中图分类】R969.1;R927.2【相关文献】1.RP-HPLC法测定人血浆依那普利拉浓度及其药代动力学研究 [J], 王宏良;费金钰;刘新义2.HPLC-UV法用于人血浆中罗红霉素的浓度测定及药代动力学和生物等效性研究[J], 张娟;张红;隋双明;刘建明;王萍;熊玉卿3.RP-HPLC法测定人血浆奥氮平浓度及其在健康志愿者的药代动力学研究 [J], 朱军;杨鸿;刘伟忠4.RP-HPLC法测定人血浆依那普利拉浓度及其药代动力学研究 [J], 王宏良; 费金钰; 刘新义5.RP-HPLC法测定人血浆中奥美拉唑浓度及其在健康男性志愿者药代动力学研究[J], 胡玉荣;张楠;单丽红;田鑫;乔海灵因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定人血浆中华法林浓度
李毅
【期刊名称】《中国中医药咨讯》
【年(卷),期】2010(002)001
【摘要】目的建立利用高效液相色谱法测定人血浆中华法林浓度的方法.方法采用二氯甲烷-正己烷(1∶1)对血浆样品进行萃取,高效液相色谱外标法进行含量测定.色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(65∶35∶1),流速1ml/min,紫外检测器检测波长308nm,柱温30℃.结果华法林的保留时间为8.2min,定量线性范围0.05-5.0μg/ml.血浆中华法林萃取回收率为85.3%89.8%(n=5),方法回收率101.3%103.6%(n=5),日内及日间RSD均小于8%(n=5).结论本方法快速准确,可用于华法林血药浓度监测.
【总页数】1页(P122)
【作者】李毅
【作者单位】湖南省安乡县人民医院,湖南,安乡,415600
【正文语种】中文
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定人血浆中奥氮平的浓度 [J], 周本裕; 刘文清; 徐云庆; 蒋春香
2.高效液相色谱法测定人血浆中米卡芬净浓度及其在重症患者中的应用 [J], 赵明明;陈亚南;路童;李国飞;肇丽梅
3.高效液相色谱法测定不同时间人血浆中帕拉米韦的浓度及临床观察 [J], 赵晓娟;赵永红;王淑梅;李浩然;刘秀菊
4.高效液相色谱——串联质谱法测定人血浆中普芦卡必利浓度 [J], 于晓燕
5.试析高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中胺碘酮浓度 [J], 于晓燕
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r药学研究rRP-HPLC法测定人血清中华法林浓度的方法学研究陈纭1,黄晓晖1,唐海沁2,杨维维2,朱燕舞1,金涌1,李俊1(1.安徽医科大学药学院,安徽合肥230032;2.安徽医科大学第一附属医院心内科,安徽合肥230022)摘要:目的建立一种简易的方法测定成人血清中华法林的含量,便于临床药物浓度监测。
方法采用H ype rs ilOD S C18色谱柱(150mm@4.6mm,5L m),流动相为(0.01m o l#L-1)磷酸二氢钾溶液-甲醇-磷酸(38B62B0.009),流速为1.0m l#m in-1,检测波长为205n m。
结果华法林保留时间为8.7m i n,标准曲线的线性范围为0.0625~4.0m g#L-1,r=0.9993,华法林的高、中、低日间、日内变异系数均在10%以下,回收率>90%。
结论该法简便、快速重现性好,灵敏度高,可用于人血清中华法林药物含量检测及应用于临床治疗药物监测。
关键词:华法林;反相高效液相色谱法;血清浓度Deter m inati on of warfari n i n hu man blood seru m by RP-HPLCC H E N Yun,HUANG X iao-hu,i TANG H a-i qin,YANG W e-i w e,i Z HU Yan-w u,JIN Yong,LI Jun(Co llege of Phar m ac y,A nhuiM edical Universit y,H efei230032)Abstrac t:A i m T o establis h an m ethod for de ter m i nati on o fw arfa ri n i n hu m an.s blood se ru m.M ethods RP-H PLC m ethod w as used,w it h C18co l u m n at the standa rd of150mm@4.6mm,0.01m o l#L-1KH2PO4m ethano-l H3PO4so l ution(38B62B0.009)as m ob ilephase.T he fl ow rate was1.0m l#m i n-1.UV detecti on w as de ter m i ned at205n m.R esu lts The reserve ti m e o fW arfa ri n i n hu m an b l ood se ru m was8.7m i n.T he linear ity rang e o f standard curv e was bet ween0.0625and4.0mg#L-1.The av erage recovery w as90%. R SD o f three consi stencies i nc l ud i ng the high,m i ddle and lo w var i ed i n less t han10%.Conc l u sion T he m ethod i s si m p le,fast and ac-curate fo r t he analysis o fw arfar i n i n hu m an b l ood serum.K ey word s:w arfar i n;RP-H PLC;se ru m concentrati on华法林是临床使用最广泛的双香豆素类抗凝药,可用于房颤等疾病的预防和治疗,心脏瓣膜置换的病人更需终身服用华法林。
我国房颤患者愈千万,约70%左右的患者需服用华法林治疗。
华法林的主要并发症是严重出血,全球每年有生命危险的出血率约为百分之二[1]。
华法林的药理作用复杂,年龄、体重、种族、并发症、饮食、合并用药等诸多因素影响其药效,其治疗窗很窄,且每日有效剂量个体差异很大(1~60 m g#d-1),故临床很难为具体病人确定有效的初始及维持剂量,病人需经常进行国际标准化比值(I NR)监测。
对华法林进行临床药物治疗血药浓度监测非常有助于个体化治疗,但目前国内目前尚缺乏测定华法林血药浓度的简单易行方法,给临床合理用药造成一定困难。
因此,本文对针对国外相关文献报道的方法加以改进[2,3],采用高效液相色谱法建立简单有效的华法林血药浓度检测方法,非常有助于该药的临床药物治疗监测及个体化用药[4,5]。
1材料与仪器1.1药品与试剂华法林标准品由温州市华基化工有限公司提供,甲醇为H PLC专用色谱醇,磷酸二氢钾和磷酸为分析纯试剂,水为去离子重蒸馏水(用前过滤),标准空白人血清由中国药品检定所提供。
1.2仪器美国W aters高效液相色谱仪(包括W aters600型HPLC泵,W aters2996PA D型紫外检测仪,W a ters600柱温基金项目:安徽省自学科学基金项目(编号:070413117);安徽省教育厅自然科学研究项目(编号:2006k j307b)通讯作者:黄晓晖(1973-),男,博士,副教授,硕士生导师,E-m ai:lm athdrug@si n 控箱等);Empo w er P ro色谱数据工作站;1000、200、20L l微量注射器;50L l进样器;旋涡混合器;离心沉淀器。
1.3色谱分析条件色谱柱为hype rs il ODS C18色谱柱(大连依利特公司150mm@4.6mm,5L m);流动相为0.01mo l #L-1磷酸二氢钾溶液-甲醇-磷酸(38B62B0.009);流速为1.0 m l#m in-1;检测波长为205n m;柱温为30e。
1.4标准溶液的配制精密称取华法林标准品5.0m g,用甲醇配制含华法林100mg#L-1的对照品贮备液;取适量贮备液,用甲醇精密稀释成10mg#L-1的华法林标准品液,低温避光储存。
1.5样品预处理取血清0.5m l加入一定量样品标准液(10mg#L-1,加甲醇0.3m,l加0.1m o l#L-1盐酸5L l漩涡混匀,40C离心(3000r#m i n-1)10m i n。
取上清液-700C 冻存待测定。
1.6H PLC方法专属性分别取样品血清、空白血清、标准品溶液5L l进样,华法林保留时间为8.7m i n左右,无杂峰干扰测定。
血清中华法林能得到较好的分离,与华法林对照品基本一致,故在此条件下所测的结果能代表原药浓度(图1)。
2结果2.1线性关系与灵敏度取空白试管分别加入不同量的对照品溶液,再加入血清0.5m,l配成4.0,2.0,1.0,0.5,0.25, 0.125,0.0625m g#L-17份标准浓度溶液,按上述/样品预处理方法0进行操作,取30L l进样,以样品浓度(X)与样品峰面积(Y)作线性回归,线性范围为0.0625~4.0m g#L-1,回归方程为Y=0.05X+0.03-2.73e(r=0.9993,P<0.05)(图#1065#安徽医药A nhui M e d ical and Pharmace u tical Journal2007D ec;11(12)2),最低检测浓度为0.0625m g #L -1,取对照品溶液经水稀释后,按信噪比大于5的要求,结果本品最低检测限为0.00313mg #L -1。
2.2 回收率测定 取空白试管加入不同量的对照品溶液,再加入血清0.5m ,l 使血清浓度分别为0.125,0.5和2.0m g #L -1,按/样品预处理方法0进行操作后进样,记录样品峰面积,同时以相同浓度标准对照品直接进样的峰面积进行回收率计算,结果见表1。
表1血清中华法林回收率试验结果(n =5)理论值/m g #L -1测得值(x ?s )平均回收率/%RSD /%0.1250.131?0.007104.86.30.50.47?0.0294.03.521.84?0.0392.02.6由表1可见,低、中、高浓度华法林回收率均在90%以上,提示该法的提取回收率符合生物样品分析要求。
空白血清标准品血清+标准品图1 华法林HPLC 色谱图2.3 精密度试验 取空白试管分别加入不同量的对照品溶液,加入0.5m l 血清,使血清药物浓度分别为2.0,0.5和0.125mg #L -1,按/血清样品提取与分离0操作,计算日内变异和5d 内日间变异(表2)。
由表2结果可见,高、中、低三个浓度日内及日间变异均<8%。
其中,R SD =(S / )@100%, 为平均峰面积,S 为标准偏差。
表2华法林的精密度试验结果(n =5)理论值/L m g #L -1日内实测值(x ?s )RSD /%日间实测值(x ?s )RSD /%0.1250.120?0.005 4.20.120?0.0086.70.50.49?0.02 4.10.48?0.036.322.041?0.073.42.04?0.125.9图2 血清华法林标准曲线3 讨论本实验建立了血清中华法林的高效液相检测方法。
保留时间为8.7m i n 左右,最低检测浓度0.0625m g #L -1,最低检测限为0.00313mg #L -1,线性范围在0.0625~4.0m g #L -1,标准曲线为Y =0.05X +0.03-2.73e (r =0.9993,P <0.05),回收率高于90%,日间、日内变异系数均在10%以下,符合生物样品分析要求,可用于临床药物治疗监测。
本研究比较了不同系统和比例的流动相,如甲醇-(0.01m ol #L -1)磷酸二氢钾溶液,甲醇-(0.01m ol #L -1)磷酸二氢钾溶液-磷酸。
结果表明,以甲醇-(0.01mo l #L -1)磷酸二氢钾溶液-磷酸(38B 62B 0.009)为流动相时色谱峰较好且峰形不受其他杂质峰干扰。
在检测波长的选择方面,紫外扫描显示,华法林在200~400n m 波长处有三个比较大吸收峰,波长分别为205,282和305n m,为了提高分析检测的灵敏度,利用二极管阵列检测器具有同时监测多波长的优点,在本研究的条件下把波长定在205n m 时峰形最好,杂质干扰最少,灵敏度最高。
加样回收率研究中,甲醇提取效果明显优于国外文献[2,3]报道的乙醚,二氯甲烷,二氯甲烷与环己烷,而且大大缩短了提取时间,简少了人力和延长了色谱柱的使用寿命,另外提取过程中加入0.1m o l #L -1盐酸对华法林的色谱行为影响很大,加入适量的盐酸可改善华法林色谱峰的拖尾现象、延长出峰时间,使峰形对称,并且明显提高了加样回收率,但是盐酸量过大和过小都会影响到回收率。
另外,经实验,对照品及样品溶液采用棕色容量瓶低温贮存,测定结果比较稳定。