电化学发光免疫分析法

分析电化学发光免疫法和放射免疫法检测血清FT3、FT4、TSH的方法【电化学发光免疫法【摘要目的探索电化学发光免疫法检测替换放射免疫法检测的可靠性及在方法学上前者是否更具上风。

方法利用2种方法法分别检测血清FT3、FT4、TSH，并进行精密度、正确度、患者结果可报告范围、分析灵敏度、分析特异性、回收率等几方面的比较。

结果 2种方法法检测结果差异有明显性（P ＜0.05），并且电化学发光免疫法在患者结果可报告范围、精密度、分析灵敏度、抗干扰能力、正确度试验方面均优于放射免疫法。

结论电化学发光免疫法完全能够替换放射免疫法，并且还具有报告范围宽，精密度、分析灵敏度高，抗干扰能力强的优点。

【电化学发光免疫法；检测低限；抗干扰试验由于放射免疫法（RIA）检测血清FT3、FT4、TSH本钱较低，目前还有部分实验室仍在采用，但因该法报告时间长，结果不稳定，且存在同位素污染新题目，在国外已趋于淘汰。

近年来国内推出的电化学发光免疫法（ECLIA）检测具有快速、正确、重复性好并平安无毒等优点，受到临床和实验室的关注。

本文分别采用2种方法对血清FT3、FT4、TSH检测做了患者结果可报告范围、精密度、分析灵敏度、抗干扰试验、正确度试验，结果报告如下。

1 材料和方法1.1 仪器和试剂美国罗氏公司生产的2010型电化学发光免疫分析仪，美国生产的Cap-Ria-16型全自动γ计数仪。

电化学发光免疫分析试剂购于罗氏公司，放射免疫分析试剂购于天津九鼎公司。

1.2 方法和结果1.2.1 精密度分别取FT3、FT4、TSH 3种不同浓度的混合血清，见表1。

其中一半重复测定20次，另外一半分成10份，装进塑料离心管置于-20℃冰箱，天天1次共测定10次，测定结果，见表2。

表1 FT3、FT4、TSH 3项不同浓度的混合血清（略）表2 电化学发光免疫法和放射免疫法检测的精密度情况（略）1.2.2 分析灵敏度用2种方法分别对空缺零标准做批内20次检测，分别记录放射强度和发光强度并做统计，再计算检测低限（LLD）［1］。

评价电化学发光免疫分析法 (ECLIA)在梅毒检测中的应用效果【摘要】目的探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)在梅毒检测中的应用效果。

方法梅毒患者血清标本51例和非梅毒患者血清样本91例，运用电化学发光免疫分析法和毒螺旋体抗体(ELISA)进行检测，对比敏感度、特异性和准确性。

结果电化学发光免疫与毒螺旋体抗体的敏感度为100％、98.04%，而特异性98.90%、100％，对比两方法差异无统计学意义(P>0.05)。

ECLIA方法在敏感性方面高于ELISA方法。

结论 ECLIA用于梅毒检测中，有着很高的敏感度，有着较高的特异性，且准确性也很高，在进行梅毒检测的时候，操作上比较的简便，能够进行快速的检测，结果较为客观，有着较好的重复性等。

【关键词】电化学发光免疫分析法；梅毒检测；诊断梅毒是一种慢性全身性性传播疾病，该疾病的引发主要由苍白密螺旋体苍白亚种感染造成的，梅毒的传染性非常强，能够对全身各器官进行侵犯，对多器官造成损害，对人们的身心健康造成严重的影响。

近年来我国梅毒的发病率呈现攀升的趋势[1]。

但部分梅毒感染者由于有着较长的潜伏期而没有明显的症状，难以及早地发现，若是没有得到有效的治疗，容易引发严重的并发症。

在对梅毒进行诊断的时候，梅毒血清检测是重要的指标。

选择敏感性高、特异性高、准确性高的检测方法，能够使筛查和诊断更加的快速、准确，从而符合检测机构的要求，这显得十分的重要。

本文对梅毒检测中使用的电化学发光免疫分析法进行了研究，现报告如下。

1资料和方法1.1一般资料将2019年5月-2020年8月收治的经过病史询问、临床症状分析、血清学试验诊断，确诊51例梅毒患者血清标本，91例非梅毒患者血清标本，样本年龄介于22至78岁之间，平均（40.11±3.57）岁。

1.2 方法使用E601电化学发光免疫分析仪，还有与之相配的梅毒检测试剂，通过化学发光免疫来对苍白密螺旋抗体机械能检测苍。

电化学发光免疫分析是一种在电极表面由电化学引发的异性化学发光反应，是电化学和化学
发光两个过程的完美结合。

电化学发光免疫测定是电化学发光和免疫测定相结合的产物，是
目前非常先进的标记免疫测定技术。

电化学发光技术主要技术：
1. 三联吡啶钌标记技术；
（1）循环使用，不会被消耗，电极表面的氧化还原反应循环进行，测定信号无限循环放大，检测灵敏度大大提高
（2）其盐是很稳定的水溶性化合物，试剂的稳定性好，效期长
（3）N 羟基琥珀酰胺（ NHS ）酯能与蛋白质赖氨酸的ε-氨基或核酸上的氨基形成稳定的酰
胺键，应用广泛，宽广的检测菜单
（4）惰性元素，非放射性元素，稳定
（5） [Ru(bpy)32+]和TPA ，无电压的情况非常稳定，确保反应结果的准确性
2. 链霉亲和素—生物素技术；
（1）特异性强且结合紧密，灵敏度高
（2）一分子SA可与四分子B相结合，增大了抗体结合量，灵敏度高
3. 磁性微粒子技术；
（1）反应面积大，结合量增大
（2）反应在近乎液相中进行，信号均匀精确
（3）分离方便迅速，无背景干扰
4. 电启动的化学发光反应。

（1）实现了结合相和游离相的完全自动化分离
（2）彻底清洗，反应易于控制
电化学发光技术特点：试剂稳定、测量范围宽，灵敏度高、特异性优异、检测菜单丰富、准
确性好，精密度高、操作便捷；。

电化学发光免疫分析的原理电化学发光免疫分析（ELISA）是一种流行的抗体检测技术，可以检测和测定抗体或抗原。

ELISA最初由发明者迪卡贝尔（Dica Bell）于1970年发明，以前称为发光免疫分析法或发光免疫比色法。

它可以快速准确地检测抗原或抗体在生物样品中的浓度。

ELISA技术的基本原理是：首先将特定的抗原和发光探针分别固定到水凝胶的微孔平板上，然后将待测样品加入微孔平板，抗原识别抗体或抗原与它结合，抗体和发光探针之间形成免疫复合物。

然后，抗体免疫复合物结合到抗原，使抗体免疫复合物和发光探针之间形成发光免疫复合物。

最后，将产生的发光免疫复合物可以在发光分析仪上读取，从而实现抗原检测目的。

ELISA技术的预处理过程是：首先将特异性抗原固定到微孔平板上，然后将抗原固定物体洗涤干净，洗涤后，将含有实验样品的溶液加入。

抗原和实验抗体在抗原上结合，产生免疫复合物。

接下来，将发光探针加入该免疫复合物，使免疫复合物和发光探针形成发光免疫复合物，以发光的方式检测体外抗原的浓度。

ELISA技术的优点是快速、准确、可重复，可以用来检测各种抗原的抗体，如霍乱抗原、疱疹病毒抗原、轮状病毒、肝炎抗原等。

ELISA 技术也可以用来研究抗体的特异性、可稳定性和稳定性，从而为研究抗原提供重要的理论基础。

ELISA技术也有一些缺点，如测定样品抗体或抗原的反应强度不够准确。

此外，ELISA技术的准确性受到实验参数的影响，如反应温度、反应时间，以及抗原和抗体的浓度和稀释比例等。

ELISA技术具有快速、可靠和可重复性等特性，是当今最常用的免疫学检测方法。

它不仅能用于抗原抗体检测，还经常被用于临床检测，用于诊断疾病，如癌症、HIV等。

ELISA技术对对医学和科学领域都具有重要的意义，它可以准确、快速地检测抗原或抗体，为疾病的早期诊断和治疗提供有效的支持。

总之，电化学发光免疫分析（ELISA）技术是一种常见的抗体检测技术，也是当今最常用的免疫学检测方法，可以根据其特定的技术原理来进行抗原检测。

电化学发光免疫分析方法及其在医学中的应用研究目的：分析电化学发光免疫分析的方法和医学中的应用情况。

方法：对AFP 含量进行电化学发光免疫分析与放射免疫分析，做出线性评价、精密度评价与回收实验，并进行对比，运用两种方法对60例患者血清标本的AFP含量进行平行检测，然后进行相关性分析。

结果：电化学发光免疫分析法的重复率明显优于放射免疫分析。

电化学发光免疫分析法的回收率明显优于放射免疫分析。

数据差异具有统计学意义（P＜0.05）。

结论：电化学发光免疫检测血清甲胎蛋白的精确度与准确性都要优于放射免疫分析法，值得临床推广与运用。

标签：电化学发光免疫；临床运用；放射免疫；检验电化学发光免疫分析出现于自20世纪90年代，是一类化学发光免疫分析技术，集纳米微粒子技术、电子发光技术、抗原-抗体免疫反应、生物素-亲和素系统以及电磁场分离整合设计的自动化标记免疫分析系统，结合了电化学发光与免疫测定，具有化学发光与电化学两个过程，磁珠微球当做固相载体，发光物质为三氯联吡啶钌[Ru（bpy）3]2+，电极进行激发，三丙胺参与循环反应，稳定快速的发光，检测的结果可靠、稳定，具有的准确度与精密度要高于酶联免疫法[1]。

发光检测灵敏度高，不具有人为操作误差的影响。

1材料与方法1.1材料选取60例患者血清标本，18份标本血清甲胎蛋白浓度正常，42份标本血清甲胎蛋白的浓度超出正常的范围。

通过Roche Elecsys2010全自动化学发光免疫分析仪器与SN-697型自动双探头放射免疫γ计数器进行检验。

1.2方法放射免疫分析法运用甲胎蛋白宽范围放射免疫分析测定盒，电化学发光免疫分析运用的检测试剂为Elecsys2010配套AFP定量检测试剂盒，按照试剂说明书进行检测操作。

2结果2.1 通过NCCLS精密度评价方案，运用电化学发光免疫分析与放射免疫分析法对高浓度、中浓度、低浓度的血清甲胎蛋白质控血清作重复性实验。

实验结果显示，电化学发光免疫分析与放射免疫分析法都具有较好的重复性，而电化学发光免疫分析的CV值对比放射免疫分析法相对较小。

化学发光免疫分析化学发光免疫分析，也称为化学发光法或发光免疫测定法，是一种高灵敏度和高特异性的生物分析技术。

它结合了免疫学、生物学和化学的原理，利用特异性抗体与其抗原（或其他生物分子）相互作用，通过化学反应使其辐射出光信号，从而定量地检测目标物质的存在和含量。

一、化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析原理基于化学发光原理和免疫学原理。

化学发光原理就是将化学反应的能量通过光子的辐射转换为光的能量。

免疫学原理是利用特异性免疫反应来识别和区分不同的抗原或抗体。

化学发光免疫分析技术的基本步骤如下：1.选择特异性的抗体与目标物质的结合；2.引入辐射源激活化学发光前体（例如，过氧化物或二氧化硫酞）；3.目标物质与抗体发生结合后，释放了辐射源激活前体，使其进一步分解并产生化学发光；4.测定样品中的荧光强度，用于定量分析目标物质的存在和含量。

化学发光免疫分析发出的荧光信号对于抗原-抗体的结合非常敏感和特异。

比较常见的荧光标记物包括酶（如辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、荧光染料（如荧光素和荧光素衍生物）、金纳米粒子等。

二、化学发光免疫分析的应用化学发光免疫分析的应用涉及生物分子、环境污染、中药等领域。

下面将从这些不同应用领域来介绍化学发光免疫分析技术的具体应用。

1.生物分子分析生物分子分析是化学发光免疫分析技术的主要应用领域之一。

常见的生物分子包括蛋白质、核酸、糖等。

如免疫荧光分析技术可以快速、准确地分析细胞表面分子、内部生物分子和变态反应特异性IgE。

同时，化学发光免疫分析技术可以用于患者体液中的特定免疫球蛋白或蛋白质的定量检测。

2.环境污染分析环境污染分析是化学发光免疫分析技术的另一个主要应用领域。

通过测量土壤、水、空气等样品中的污染物含量，可以快速精准地确定其存在和含量。

化学发光免疫分析技术可用于检测重金属、有机污染物、致癌物等。

该技术不仅检测灵敏，而且简便易行。

3.中药分析中药分析中常用的技术包括高效液相色谱法、气相色谱法、电化学法等。

一、概念发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassayECLI)。

ECLI 是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术。

电化学发光法源于电化学法和化学发光法，而ECLI 是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括了电化学和化学发光二个过程。

ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于／RNA探针检测。

二、反应底物ECL 反应底物有两种：1.三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3] 2+络合物：钌(Ruthenium Ru)，原子序数44，原子量101.07。

元素名来自拉丁文，原意是“俄罗斯”。

1827年俄国化学家奥赞在铂矿中发现钌；1844年俄国化学家克劳斯肯定它是一种新元素。

钌在地壳中的含量约为十亿分之一，是铂系元素中含量最少的一个。

钌常与其它铂系元素一起分散于冲积矿床和砂积矿床中。

钌有7种天然稳定：钌96、98、99、100、101、102、104。

钌为银白色金属，熔点2310℃，沸点3900℃，密度12.37×103/m3 。

钌的化学性质不活泼，在空气和潮湿环境中稳定；不溶于酸和王水，溶于熔融的强碱、碳酸盐、氰化物等；到900℃，时能与氧反应；加热时能与氟、氯、溴反应；钌有形成配位的强烈倾向，还有良好的催化性能。

钌是铂和钯的有效硬化剂；金属钛中加入0.1%的钌就可大大提高耐腐蚀性；钌钼合金是一种超导体；含钌的催化剂多用于石油化工。

2.三丙胺(Tripropylamine，TPA)三、电化学发光反应原理电化学反应过程：在工作电极上(阳极)加一定的电压能量作用下，二价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+ 释放电子发生氧化反应而成为三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+，同时，电极表面的TPA也释放电子发生氧化反应而成为阳离子自由基 TPA+ ，并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基 TPA·，这样，在反应体系中就存在具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA·。

eclia法
ECLIA（Electrochemiluminescence Immunoassay，电化学发光免疫分析）是一种常用的免疫分析技术，用于检测生物体内特定分子（例如蛋白质、抗体、激素等）的浓度或存在量。

ECLIA基于免疫反应原理，通过测量电化学发光信号来定量分析目标分子的浓度。

其基本步骤包括：
1. 抗原抗体反应：样品中的目标分子（抗原）与标记有特定抗体的发光物质（标记物）反应，形成抗原-抗体复合物。

2. 清洗步骤：通过洗涤去除未结合的物质，减少非特异性信号的干扰。

3. 发光步骤：将清洗后的试剂加入样品中，触发发光反应。

标记物释放出一种化学物质，激发发光物质发出光信号。

4. 光信号检测：使用光学检测系统测量发光信号的强度，该信号与目标分子的浓度成正比。

ECLIA具有高灵敏度、高特异性和宽动态范围等优势，被广泛应用于临床诊断、药物研发和科学研究等领域。

常见的应用包括检测疾病标志物、药物浓度监测、免疫学研究等。

化学发光免疫分析技术原理简介20 世纪60 年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿症患者尿液检查。

1977 年Halman 等将化学发光系统与抗原抗体反应系统相结合，创建了化学发光免疫分析法，保留了化学发光的高度灵敏性，又克服了它特异性不足的缺陷。

近年来对技术与仪器的不断改进，使此技术已成为一种特异，灵敏，准确的自动化的免疫学检测方法。

1996 年推出的电化学发光免疫技术，在反应原理上又具有一些新的特点。

这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规免疫学检验。

一、化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay , CLlA) 是把免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术，既具有发光检测的高度灵敏性，又具有免疫分析法的高度特异性。

在CLIA中，主要有两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。

免疫反应系统与放射免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化合物如鲁米诺( luminol) 、异鲁米诺(isolu-minol) 、金刚烷( AMPPD) 及吖啶酯( AE) 等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物，当其回到基态时就会将剩余能量转变为光子，随后利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。

将发光物质直接标记于抗原(称为化学发光免疫分析)或抗体上(称为免疫化学发光分析) ，经氧化剂或催化剂的激发后，即可快速稳定的发光，其产生的光量子的强度与所测抗原的浓度可成比例。

亦可将氧化剂(如碱性磷酸酶等)或催化剂标记于抗原或抗体上，当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物，再与发光底物反应，其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。

发光免疫分析的灵敏度高于包括RIA 在内的传统检测方法，检测范围宽，测试时间短，仅需30 - 60min 即可。

试剂货架寿命长，稳定性好，具有大规模自动化测试的功能。

这项技术发展很快，已有许多厂商生产各具特色的测定仪器与配套试剂。

常见化学发光免疫分析技术比较1、化学发光免疫分析化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA），英音:［，kemi，lju：mi’nesəns] ［，imju：nəuə’sei]是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。

是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。

是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

1.1、化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。

化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子（hv) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。

免疫反应系统是将发光物质（在反应剂激发下生成激发态中间体）直接标记在抗原（化学发光免疫分析）或抗体（免疫化学发光分析) 上，或酶作用于发光底物.1。

2、化学发光免疫分析类型化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种:（1)化学发光标记免疫分析法；（2）酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法1。

2.1化学发光标记免疫分析化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析（CL IA ）, 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法.常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester (AE) ，是有效的发光标记物,其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2）作用而发光，强烈的直接发光在一秒钟内完成，为快速的闪烁发光。

电化学发光免疫分析的原理
电化学发光免疫分析技术（Electrochemiluminescence Immunoassay，简称ECLIA）是一种新的生物分析技术，它利用生物反应物和特定的抗体来检测分子，从而对检测物有着准确的测定。

ECLIA的基本原理是，将待测物和夹带特异性抗体的过滤管体中的反应液一起放入体外，然后再加入电催化剂以及分子活性物质（如碳酸氢钠），在外部加入电场来促进反应物和抗体之间的免疫反应，即反应物与抗体结合后发出电化学发光。

与其他免疫分析方法相比，ECLIA具有更高的灵敏度和准确度。

ECLIA的优势有：（1）具有极佳的灵敏度（亚拉芬斯），可以检测出极低浓度的免疫物质；（2）反应过程十分快捷，几十秒内即可完成；（3）测量过程简便，不需要复杂的仪器和设备；（4）结果可以实时观察和记录，减少了人工把柄；（5）可以实现多重反应，可以同时检测多种免疫物质；（6）可以宽泛应用于血液、尿液、细胞液等多种样本中的病毒抗体的检测，对于应用研究和检验检测有重要的作用。

以上就是ECLIA技术的原理和优势，它在生物学研究、病毒检测以及其他方面都非常有用，受到了广泛应用。

随着实验技术的发展，ECLIA技术被不断改进和完善，也会被用于更多的生物医学检测工作中。