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抗体的分离纯化原理和测定优秀课件

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抗体的检测和纯化课件

抗体的检测和纯化课件

文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
• Protein A
• A 蛋白是金黄色葡萄球菌的表面蛋白,分 子量为42 KD ,有6 个不同的IgG结合位点。其 中有5 个位点对IgG的Fc 片段显示很强的特异 性亲和力,不同的位点独立地与抗体结合。但 IgA , IgM , IgE 也可能结合在配体上,当达到饱 和时,一个A 蛋白分子至少可以结合两个IgG分 子。A 蛋白对IgG有高亲和力和特异性,这一特 点使之非常适合用于纯化腹水或细胞培养上 清中的单克隆抗体
•
Protein A--Sepharose CL24B 亲和层析法
的原理是,A 蛋白可与IgG上的Fc 段特异性地
结合,与小鼠IgG的各亚类表现为不同的结合
力,结合的强弱程度依次是: IgG2a > IgG2b >
IgG3 > IgG1 。A 蛋白的这种结合也是具有p
H 依赖性的,即可利用改变p H 及离子强度,纯
化与其结合较弱的IgG1。
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方法
1 腹水的处理 取腹水,在4 ℃,12 000g 条件下 离心15min ,以除去较大的凝块。
2 装柱 将1. 5g Protein A-Sep harose CL-4B 干 粉用6～7ml 三蒸水溶解,再用0. 02M ,p H 7. 4 的磷酸盐缓冲液(上样缓冲液) 浸泡15min ,然 后装入层析柱中。
一 饱和硫酸铵沉淀法
•
饱和硫酸氨沉淀是从溶液中分离蛋
白质的常用方法。这是一种比较原始，非
特异性分离技术。
•
饱和硫酸氨沉淀法难以得到高纯度

抗体的提取与纯化

抗体的提取与纯化

(关键词：抗体；抗体的提取与纯化；盐析法；冷酒精沉淀法；DEAE-SephadexA-50柱层析纯化免疫球蛋白；SPA-SepharoseCL-4B 亲合层析纯化IgG；离子交换层析)精制免疫球蛋白的方法很多。

一般采用综合技术，避免蛋白变性。

如分离IgG时，多结合使用盐析法与离子交换法，以求纯化。

提取IgM的方法也很多，如应用凝胶过滤与制备电泳法，或离子交换与凝胶过滤等。

一、盐析法取x ml血清加x ml生理盐水，于搅拌下逐滴加入2xml饱和硫酸铵，硫酸铵的终饱和度为50%。

↓4℃，3h以上，使其充分沉淀离心（3000rpm）,20min,充上清，以xml生理盐水溶解沉淀，再逐滴加饱和硫酸铵x/2ml。

↓置4℃3h以上，[此时，（NH4）2SO4的饱和度为33%]重复上述第二步过程1～2次。

末次离心后所得沉淀物为γ-球蛋白，以0.02%mol/L pH7.4PBS溶解至xml装入透析袋。

↓对PBS充分透析、换液3次，至萘氏试剂测透析外液无黄色，即无NH4+为止。

取透析袋内样品少许作适当倍数稀释后，以751型紫外分光光度计测定蛋白含量。

影响盐析的因素很多，如蛋白质的浓度，盐的浓度，饱和度和pH，温度等都可影响盐析的结果，操作时要充分注意（参阅本章第二节）。

二、冷酒精沉淀法分离过程如下。

血清加3倍体积的蒸馏水，调节pH至7.7(±)冷却到0℃。

在激烈搅拌的条件下，加预冷的酒精（-20℃）到最终浓度为20%，保持在-5℃。

产生的沉淀（A），含有大多数种类的免疫球蛋白。

沉淀A悬浮于25倍体积的0.15～20mol/L NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/L醋酸调节pH到5.1，产生的沉淀（B），包括大部分的IgA 和IgM，IgG留在上清液内。

调节上清液的pH到7.4，加冷酒精（-20℃～-30℃）到最终浓度为25%，维持在-5℃。

所得到的沉淀（C）含有90%～98%IgG。

不同动物，IgG分离的条件和产量略有不同。

生化课件--抗原抗体的纯化

生化课件--抗原抗体的纯化

（二)亲水性离子交换剂 亲水性离子交换剂中的基质为一类天然的或 人工合成的化合物，与水亲和性较大，常用的 有纤维素、交联葡聚糖及交联琼脂糖等。 ① 纤维素离子交换剂 或称离子交换纤维素， 是以微晶纤维素为基质，再引入电荷基团构成 的。根据引入电荷基团的性质，也可分强酸性、 弱酸性、强碱性及弱碱性离子交换剂。纤维素 离子交换剂中，最为广泛使用的是二乙胺基乙 基(DEAE-)纤维素（弱碱性阴离子）和羧甲基 (CM-)纤维素（弱酸性阳离子）。（表3-6）
（一）原理
1、有机溶剂的介电常数比水小，加入有机溶剂后，整 个溶液的介电常数降低，带电的溶质分子之间引力 增强，使溶质分子相互吸引而聚集。 2、亲水性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓 度，使溶质分子周围的水化层变薄，导致脱水而相 互聚集析出，也就是降低了溶质的溶解度。 （二）有机溶剂的选择 原则：水溶性好，沉淀效率高，毒性小，惰性，便宜 常用：乙醇、丙酮、甲醇等
离子交 换剂的 类型 强酸性 交换基 团 磺酸剂 -SO3H
阳离子交换剂 中强酸 性 磷酸基 -PO3H2 亚磷酸 基-PO2H2 弱酸性 羧基 -COOH 酚基 苯环-OH 强碱性
阴离子交换剂 中强碱 性 叔胺 -N(CH3)2 弱碱性 仲胺 -NHCH3 伯胺 -NH2
季氨基 N(CH3)3
优点：交换容量大，机械强度高，膨胀率小， 便宜； 缺点：结构紧密，大分子不易进出，疏水，大 分子易变性 适用于小分子的分离
(三)影响有机溶剂沉析的因素
1、pH 有机溶剂沉析时适宜的pH，要选择在样品稳定的 pH范围内，而且尽可能选择样品溶解度最低的pH，通 常是选在等电点附近，以提高该沉析的分辨能力。 2、温度 常温下物质结构松散，有机溶剂易渗入分子内部， 引起变性；降低温度可降低溶解度；且有机溶剂与水 混合时产生放热反应，因此有机溶剂必须预先冷至较 低温度，一般在0℃以下，操作时要在冰盐浴中进行， 加入有机溶剂必须缓慢，并不断搅拌以免局部浓度过 浓。

应用生物化学-抗体技术PPT课件

应用生物化学-抗体技术PPT课件

抗体技术的挑战
抗体生产成本高
01
由于抗体的大规模生产需要大量的细胞培养和纯化过程，因此
生产成本较高，限制了抗体的广泛应用。
抗体特异性问题
02
抗体的特异性是影响其应用的关键因素之一，如何提高抗体的
特异性是当前面临的重要挑战。
抗体稳定性不足
03
一些抗体在存储和运输过程中容易失去活性，影响其应用效果。
抗体技术的发展前景
生物制药
药物研发
抗体作为药物载体，可以用于药 物的定向输送，提高药物的疗效
和降低副作用。
免疫检测试剂
抗体可以用于制备免疫检测试剂， 如酶联免疫吸附试验（ELISA）、 免疫荧光等，用于检测生物体内
的物质。
单克隆抗体药物
利用杂交瘤技术制备的单克隆抗 体药物，具有高度特异性、低毒 性和长效性等特点，已广泛应用 于肿瘤、自身免疫性疾病等领域。
应用生物化学-抗体技术PPT 课件
• 引言 • 抗体的产生与种类 • 抗体技术的原理与流程 • 抗体技术的应用实例 • 抗体技术的挑战与前景 • 结论
01
引言
抗体的定义与特性
抗体
指免疫系统产生的一种蛋白质， 能够特异识别并结合抗原，发挥 免疫效应。
特性
高度特异性、结合力强、种类多 样。
抗体技术的历史与发展
历史
自19世纪末发现抗体以来，抗体技 术不断发展，经历了免疫学、单克隆 抗体技术、基因工程抗体等阶段。
发展
目前抗体技术已广泛应用于生物医药 、诊断、治疗等领域，为人类健康和 疾病治疗做出了巨大贡献。
抗体技术的应用领域
01
02
03
生物医药
用于药物研发、疾病诊断 和治疗，如肿瘤免疫治疗、 自身免疫性疾病治疗等。

实验 亲和层析纯化IgG PPT课件

实验 亲和层析纯化IgG PPT课件
2）上样：血清让胶床表面几乎不留液层，然后小心注入床面 中央~2ml稀释血清，待样液几乎全部进入胶床表面后，关止 水夹，室温下样品与填料结合15min。
实验步骤
1. Protein A纯化：
3）冲洗：加2倍柱体积冲洗缓冲液，打开止水夹，控制流出 速度为2ml/min，并用试管收集流出液(记为W)，在床表面仅 有1毫米左右液层时，关止水夹，再加入2倍柱体积平衡缓冲 液冲洗填料，床表面仅有1毫米左右液层时，关止水夹， 。 4）洗脱收集：取刻度试管2支编号，柱床上面加3倍柱体积 洗脱缓冲液，控制止水夹流出1倍柱体积洗脱液后，关止水 夹，室温下柱料与洗脱液孵育15min，打开止水夹控制流出 速度为1ml/min收集2倍柱体积（记为E1），待床表面仅有1 毫米左右液层时再加入3倍柱体积洗脱缓冲液， 收集2倍柱体 积记为E2。 5）收集结束后，加入清洗液（6M NaOH）洗涤2cv，平衡 液5cv。
下面开始实验！
2.5ml
2.5ml
2.5 ml
4 ml
2.5ml
3.3 ml
10% SDS 100 μl
100 μl
100 μl
TEMED 10% AP
10 μl 10 μl 10 μl
100 μl 100 μl 100 μl
四、实验步骤
2.SDS-PAGE 纯度测定
3、按比例配好分离胶，用移液管快速加入，大约5 cm左右， 之后加少许蒸馏水，静置30分钟。凝胶配制过程要迅速， 催化剂TEMED要在注胶前再加入，否则凝结无法注胶。注 胶过程最好一次性完成，避免产生气泡。水封的目的是为 了使分离胶上延平直，并排除气泡。凝胶聚合好的标志是 胶与水层之间形成清晰的界面。
特异性
许多IgGs 的Fc 片断 许多IgGs 的Fc 片断 特异的抗体 特异免疫球蛋白

第8章 抗体的制备及应用ppt课件

第8章 抗体的制备及应用ppt课件
1 4
Ag
2 3
1 4
Ag 2
3
B1
B2
B3
B4
多克隆抗体
B3 B3 B3 B3
单克隆抗体
单克隆抗体的特点
特异性强，具有抗原结合位点的专一 性。（不是抗原的专一性！）
因结合位点的单一性，有时不易捕捉 抗原，一株单克隆抗体与抗原不易产 生凝集反应或沉淀反应。
▪ 抗体的性质相同，容易纯化、标记。
1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。 2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为
该抗体的效价。 3.可进行任意稀释。
3) 如何免疫兔子
2000g(雌雄均可),健康,无病原（小鼠20g，大鼠200g） 基础免疫 • 0.5ml抗原(含0.25~0.5mg蛋白或108颗粒抗原) • 0.5ml佛式完全佐剂(CFA)（小鼠0.2ml） • 制备抗原-佐剂乳化液 • 背部、颈部皮下多点注射或腿部肌肉注射（注意
1、ELISA法；用ELISA法筛选对半抗原有亲和力的单 克隆抗体，然后大量培养,分析单克隆抗体的酶学活性。
2、酶学活性检测法：直接用反应底物检测细胞培养液 中抗体的酶活性。 3、短过渡态类似物法：以过渡态类似物中含有的必需 基团的基本结构单元做为筛选单克隆抗体的标准。对该 化合物亲和力越强的化合物,其催化效率越高
• 适合于IgM类抗体的纯化 (五聚体,分子量约800KD)
主要步骤
• 将腹水或血清处理后上柱，样品要浓； (可用G-200，柱子要长，80-100cm)
• 待样品入柱后,用缓冲液过柱； • 等量收集洗脱液,测定洗脱液的A280值。 • 收集第一峰。
特点 • 成本高，步骤较简单。
• 抗体回收率较高，分离条件缓和，抗 体活性不受影响。

抗体的检测和纯化(4)


• Protein A/G亲和层析 • 亲和层析是一种快速有效的生物活 性物质的纯化方法,它通过偶联蛋白对 目的蛋白选择性的吸收和分离,可取得 较高的纯化效果,且操作简便,广泛地应 用于实验室抗体纯化。由于产品价格昂 贵,使用成本较高,限制了它的运用
• Protein A • A 蛋白是金黄色葡萄球菌的表面蛋白,分 子量为42 KD ,有6 个不同的IgG结合位点。其 中有5 个位点对IgG的Fc 片段显示很强的特异 性亲和力,不同的位点独立地与抗体结合。但 IgA , IgM , IgE 也可能结合在配体上,当达到饱 和时,一个A 蛋白分子至少可以结合两个IgG分 子。A 蛋白对IgG有高亲和力和特异性,这一特 点使之非常适合用于纯化腹水或细胞培养上 清中的单克隆抗体
精度纯化
• 目的：保证最终抗体产品纯度，能有效对 潜在的污染物，如宿主细胞蛋白 (HCP)、免 疫球蛋白、宿主DNA； • 对用于腹水生产抗体的刺激物、内毒素、 其它热原物质、培养液成分、层析凝胶析 出成分 (脱落的蛋白A配基) 进行去除；并能 有效的去除/灭活病毒。
建议的工艺
• 首先采用0.2-0.45 m的中空纤维膜技术进行 澄清 (Cell removal)； • 然后用protein-A或protein-B捕获，酸性条件 洗脱后直接pH 4.0病毒灭活； • 澄清过滤后再穿透方式上Capto Adhere； • 这一步离子交换之前或之后会有一步20nm 纳滤去病毒；最后50K膜超滤浓缩和洗滤进 行缓冲液置换。 • 有些抗体如果通过优化结果不甚满意，通 过增加一步Capto Q也基本上可以达到要求
目的：去除特定的杂质，如HCP、DNA、聚集 体和变体等。 常用的层析技术：CaptoAdhere、离子交换、 疏水层析等。

详细介绍抗体的分离纯化


12/12/2016
离子交换剂为人工合成的惰性高分子聚合物，其上带有许多可电离基团
，根据这些基团所带电荷的不同，可分为阴离子交换剂和阳离子交换剂
。它可分三部分：高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子。
22
阳离子交换反应：R-A- H+ + Y+ —R-A- Y+ + H+
阴离子交换反应：R-B+ OH- + X- —R-B+ X- + OH-
10
12/9/2016
影响离心法的因素
离心机的种类、离心方法、离心介质以及密度梯度 （一）离心速度 低速离心一般用离心速度，即转子每分钟的转数表示，如5000r/min等。 高速离心和超速离心时，往往以相对离心力（RCF）表示，如60000×g等。 相对离心力是指颗粒所受到的离心力与地心引力之比值。即：
一、盐析法
在物质的水溶液中添加一定浓度的中性盐，使物质的溶解度减小而沉淀析出，这一过 程称为“盐析”。
增加盐浓度能够增强蛋白间的疏水相互作用,疏水性的不同导致了一个选择性沉淀。
优点：①成本低，不需要昂贵的设备；
②操作简便，安全；
③对许多生物活性物质具有稳定作用；
④对pH、温度要求不严格。
缺点：分离效果有限
14
12/9/2016
常用的沉淀剂
沉淀剂 硫酸铵 右旋硫糖苷
使用的典型条件
样品类型
备注
下文有叔
大于1mg/ml蛋白, 特别使免疫球蛋 白
用于稳定的蛋白,不会变 性,上清可以直接 上到 HIC（疏水层析柱）,减少了脂蛋白 含量
加入0.04 ml of 10% 右旋硫糖苷和1 ml of 1 M 可用于高脂蛋白的样品,例如腹水

详细介绍抗体的生产制备ppt课件

半抗原－载体连接方法：常用物理法和化学法。
物理吸附的载体有羟甲基纤维素等，其借助电荷和微孔吸附半抗原；
化学法则是利用某些功能基团把半抗原连接到载体上。
16
四）免疫佐剂
某些物质与抗原一起或先于抗原注入机体，可增强机体对该抗原的特 异性免疫应答或改变免疫应答类型，此类物质称为免疫佐剂 (immunoadjuvant)，简称佐剂。
抗血清的效价：就是指血清中所含抗体的浓度或含量。效价测定的方法常 用的是放射免疫法，此法对所有的抗体均适用。某些由大分子（如蛋白类） 抗原所产生的抗体，可用双向扩散等方法测定。前者测定的效价极为精确。 而后者则粗糙得多。
24
放射免疫法： 以不同稀释度的抗血清与优质标记抗原（放射 性核素标记）混合，孵育24h后，测定其结合率（用液体闪烁 计数仪测定Ag*－Ab或游离Ag*）。通常以结合率为50%的血清 稀度为效价。如某抗血清的结合率为50%时的稀释度为1： 15000，则该血清的效价就是1：15000。抗血清的效价，除由 抗血清本身的性质决定外，还受标记抗原的质量、孵育时间， 所用稀释液的成分及其pH等因素的影响，在工作中必须引起 注意。
22
（二）免疫方法
选定动物后，在免疫过程中应考虑免疫剂量、免疫途径、免疫次数、免疫间 隔等因素。
1、免疫原的剂量：免疫原的接种剂量按免疫原性的强弱、动物的个体状态 和免疫时间来确定。首次免疫时，剂量不宜过大，以免产生免疫麻痹。 2、免疫途径与免疫间隔时间
免疫途径通常有皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结等，视不同的免 疫方案而异。对于不易获取的宝贵抗原可采用淋巴结免疫法。
17
1、佐剂的种类
佐剂一般包括以下几类：
①无机佐剂：如氢氧化铝、明钒等
②生物性佐剂：如结核分枝杆菌、卡介苗、小棒状杆菌、百日咳杆菌、革兰 阴性杆菌内毒素、霍乱毒素的B亚单位、胞壁酰二肽和细胞因子等；
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•
硫酸铵浓溶液的pH常在4.5—5.5之间，市售
的硫酸铵还常含有少量游离硫酸，pH往往在4.5
以下，需用氨水调节其pH至7.0左右。
(三)盐析时需注意的问题
• 1. 盐的饱和度
• 盐的饱和度是影响蛋白质盐析的主要因素， 不同蛋白质的盐析要求盐的饱和度不同。分离 几个混合组分的蛋白质时，盐的饱和度常由低 到高逐渐增加，每出现一种蛋白质沉淀进行离 心分离后，再继续增加盐的饱和度，使第二种 蛋白质沉淀。如用硫酸铵盐析分离血浆蛋白， 当饱和度达20％时，纤维蛋白原首先析出；饱 和度增至28％—33％时，优球蛋白析出；饱和 度达33％—50％时，球蛋白析出；饱和度大于 50％以上时，清蛋白析出。免疫球蛋白常在饱 和皮为33％开始析出。
• 可依据抗体的特性进行分离纯化： 据蛋白质疏水性的差异，以盐析的方法
将抗体与其他蛋白分开；据抗体带有电荷 的不同，用离子交换，电泳等技术分离….. 按分离方法： 沉淀、盐析、膜技术、电泳、色谱等。其 中只有电泳和色谱法可以将抗体精细分离 即纯化。
一、盐析法
• （一）原理
•
蛋白质的溶解度在一定范围内随盐的浓度变
抗体的分离纯化原 理和测定
第一节 抗体的分离纯化
• 无论是将抗体用于研究还是用于检测 或临床治疗，均需对抗体进行分离与纯化。
• 分离：将抗体从其存在的体液或培养液 中分离出来并加以初步纯化。
• 纯化： 提高分离出来的抗体的纯度，并 将其中的杂质控制在所需的低水平。对治 疗性抗体尤为重要。
分离纯化的方法
• 2．截留分子量
•
超滤膜的另一基本性能是标称截留分子量。
它的定义是指溶液中被截留的溶质中最小的分子
量。对于“截留分子量”这个指标，不应做机械
式的理解。例如，使用截留分子量5万的膜时， 分子量68万的牛血清白蛋白也可通透过去。这是
因为，一方面，膜上的孔的大小是不均匀的，一
般情况下，有一个孔径分布。另一方面，由于分
• ②蛋白质分子呈球形者其截留特性优于呈 线性者。因此，应注意厂家给出的截留分 子量是何种物质为样品所测定。一般情况 下，裁留率顺序为 ：球蛋白>支链高聚物> 直链(线型)高聚物。
• ③厂家给出的截留分子量是以单一蛋白质 (或水溶性大分子)为样品所测定的。但是， 实际样品往往极为复杂，如体系中有多种 蛋白质存在时，膜的特性会因为浓差极化 现象、‘‘凝胶层的形成”以及样品间形 成复合物等现象而有所改变。
二、膜分离技术
• 可以形象地将膜分离技术比喻成以多 孔膜进行过滤或过筛子的过程。在实际操 作时，由于膜上的孔很小，需使用一定的 压力，才能将含有待分离物质的液体驱动 通过分离膜，使具有不同分子量的物质或 通过膜、或截留于膜上而得到分离。有多 种膜技术可用于抗体的分离与纯化。
• 但最基本的是使用超滤膜。超滤膜的孔径 在1—100nm之间，其截止到分子量的范围 为几百至一百万，所需的驱动压力在0.1— 1.0MPa左右。
子的形状不同且分子链具有柔性，分子量相同的
线型分子和球型分子的透过率是不同的，线型分
子更容易透过。通常，厂家给出的截留分于量指
ห้องสมุดไป่ตู้
的是截留率90％时，相对应的蛋白质(或其它水
溶性高聚物)的分子量。在实际使用时应注意以 下几个问题：
• ①一般超滤膜的截留分子量曲线多呈S形 (如图8-1)。S形透过率曲线的线性部分越陡， 则截留性能亦越佳。
质分子相互聚集而沉淀。盐析法就是根据不同蛋
白质在一定浓度的盐溶液中溶解度不同面达到彼
此分离的方法。
（二）盐的选择
• 蛋白质盐折常用中性盐，主要有硫酸铵、硫 酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最 广的是硫酸铵，其优点是温度系数小，溶解度大 (25℃时饱和溶解度为4.1mol/L，即767g/L)。在不 同饱和度的硫酸铵溶液内，不同蛋白质依次析出， 而且硫酸铵价廉易得，分段效果好，不容易引起 蛋白质变性。
化而变化。在低盐浓度下溶解度随着盐浓度升高
而增加，当盐浓度达到一定水平时，其溶解度又
以不同程度下降并先后析出。其原理是由于蛋白
质分子的极性基团有着静电引力，当水中加入少
量盐类时，盐类离子与水分子对蛋白质分子上的
极性基团的影响，使蛋白质在水个溶解度增大。
但盐浓度增加到一定程度时，水的活度降低，蛋
白质表面的电荷被中和，水化膜破坏，致使蛋白
(一)超滤膜的基本性能
• 作为膜分离材料，超滤膜的基本性能可 以用透水率和截留分子量加以表征。
• 1．透水速率 在一定的驱动压力下，单 位面积的膜在单位时间里所能透过的水的 量称为该膜的进水率(Jf)。
• 式中Jf为进水率，ρ为渗透系数，ΔP为压力 差， Δπ是料液的渗透压差，ι是透过水流通 道的长度，它正比于膜的厚度。通常情况 下，由于Δπ很小，所以可以忽略不计、此 时，透水率可简化表达为
• 即透水率与操作压力成正比，与膜厚呈反 比。由于膜在使用过程中会发生污染和孔
结构的改变，因而在使用过程中，其透水
率会逐渐发生变化。所以定义其初始运水 量Qz和稳定透水量Qs之比为稳定系数Sm， 即
• 一般情况下，Sm=0.6-0.8, 不同规格和品种 的膜的透水率相差很大。同时，不同的操 作条件与参数，也会对实际透水量产生影 响，这些参数包括操作压力、料液流速、 温度以及料液的性质等。一般情况下，在 膜使用的开始和结束时，可以实际测定一 下透水率。当透水率已经降低时，应考虑 将其清洗并再生，以恢复其透水率。
• 4．温度
• 出于高浓度的盐溶液对蛋白质有一定保 护作用，盐析操作一般可在室温下进行， 但在使用某些中性盐进行盐析时，温度对 盐溶解度的影响比较明显。
• 5. 脱盐
• 蛋白质用盐析沉淀分离后，常需脱盐 才能获得纯品。最常用的脱盐方法是透析。 通过透析袋内外的离子交换，最后使透析 袋内溶液的盐浓度与外界相一致。当然， 也可以使用凝胶过滤或超滤的方法除盐。
• 2. pH 在等电点时，蛋白质溶解度最 小．容易沉淀析出。因此，盐析时除个别 特殊情况外，pH常选择在被分离的蛋白质 等电点附近。
• 3. 蛋白质浓度 在相同盐析条件下，蛋白 质浓度越高越易沉淀，高浓度虽对沉淀有 利，但浓度过高，也容易引起其它蛋白质 的共沉淀，因此，必须选择适当浓度，尽 可能避免共沉淀作用的干扰。