第五章 免疫学应用

1. T细胞功能测定：
(1) 细胞增殖(转化)试验： 可分为非特异性丝裂原和特异性抗原两类。 * 丝裂原主要有PHA、Con A和PWM； * 抗原刺激物有破伤风类毒素、 PPD和白色 念珠菌等；
淋 巴 细 胞 增 殖 实 验
(2) T细胞介导的细胞毒试验：CTL
2. B细胞功能判定
(1) B细胞增殖(转化)试验 (2) 溶血空斑形成试验
体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性， 具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优
点。
1．酶免疫技术(enzyme
immunoassay, EIA)
此法将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用 的高效性相结合，借助酶作用于底物的显色反应 判定结果。应用酶标测定仪测定光密度（ OD ）值
可反映抗原含量，灵敏度达 ng/ml 甚至 pg/ml 水平。
缺点：稳定性差，不易保存，存在回复突变的危险
如卡介苗，牛痘，麻疹等
死疫苗与活疫苗的区别
区别要点 制剂 接种剂量及次数 死疫苗 死病原体、强毒株 量大，2-3次 活疫苗 活病原体、弱毒株 或无毒株 量小，多为1次
安全性
免疫效果 稳定性 常用疫苗
好
较差，6月-2年 稳定、易保存，有效 期约1年
差，毒力回复危险
2．双向免疫扩散
3．对流免疫电泳
单向免疫扩散(single immunodiffusion)
双向免疫扩散(double immunodiffusion)
单扩与双 扩原理
（三）免疫标记技术
用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标
记抗体或抗原，进行抗原 -抗体反应的检测，是目
前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗
能具有双向调节功能。对过低的免疫应答起促进作用
；对过高的免疫应答起抑制作用。 1、左旋咪唑 2、卡介苗 3、多糖类物质
免疫抑制剂:
是一类抑制机体免疫功能的生物或非生物制剂。
1、肾上腺皮质激素
2、环磷酰胺 3、环孢霉素A 4、FK-506（他克莫司胶囊） 5、抗人T细胞抗体
6、抗细胞因子抗体
第三节 免疫学诊断
常见的标记物为：辣根过氧化物酶（HRP）和碱性
磷酸酶（AP）
常用的方法如下：
（1）酶联免疫吸附试验 (enzyme linked
immunosorbent assay，ELISA)
（2）免疫细胞或组织化学（immunocytochemistry
or immunohistochemistry,ICC or IHC)
4、湿疹及其他严重皮肤病
我国推荐的儿童免疫程序 年 龄 出生时 1 个月 2 个月 3 个月 4 个月 5 个月 6 个月 8 个月 1. 5~ 2 岁 4 岁 7 岁 12岁 疫 苗 卡介苗, 乙肝疫苗 1 乙肝疫苗 2 三价脊髓灰质炎疫苗 1 三价脊髓灰质炎疫苗 2 ，百白破 1 三价脊髓灰质炎疫苗 3 ，百白破 2 百白破 3 乙肝疫苗 3 麻疹疫苗 百白破 4 三价脊髓灰质炎疫苗 4 卡介苗，麻疹疫苗， 白喉破伤风二联疫苗 卡介苗（农村）
称免疫学预防。
免疫学预防在传染病的控制方面贡献巨 大，尤其是病毒性疾病的有效控制应归 功于疫苗的广泛接种。
生物制品
指免疫学预防、治疗和诊断用的生物制剂，由 微生物及其代谢产物、人和动物的免疫血清/细胞 制备而成。 根据输入的物质不同，人工免疫分为： 人工主动免疫 人工被动免疫
人工主动免疫与人工被动免疫的比较
人工主动免疫的接种物
疫苗（Vaccine）：细菌，病毒，螺旋体，立
克次体和类毒素等抗原性生物制品统称为疫
苗。 理想疫苗的标准：安全；有效；实用
分 类：
1、死疫苗（death vaccine）:选用免疫原性强的微 生物标准株经大量培养后，用物理或化学方法将其
杀死或灭活而制成的预防制剂。如霍乱、伤寒、百
利用免疫学检验方法辅助诊断疾病或对机体免疫 状态进行评估。
一、抗原抗体基本检测方法
根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反应的 成分等因素分类：
（一）凝集反应
（二）沉淀反应
（三）免疫标记技术
（一）凝集反应
颗粒性抗原（细菌或细胞等）与相应抗体结合，
在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物现象，称
为凝集反应。 1．直接凝集反应：细菌或红细胞与相应抗体直接 反应，可出现细菌或红细胞凝集现象。 2．间接凝集反应：检测针对可溶性Ag的Ab 3．间接凝集抑制试验
用于检测特异性抗体。用已知抗原包被固相，加入
待检血清标本，再加酶标记的二抗，加底物观察显 色反应。
间接法图示
2．荧光免疫技术(immunofluorescence,IF)
此法乃用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再
与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察， 抗原-抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性 或定位。
日咳、狂犬病、钩端螺旋体疫苗。
优点：诱导特异性抗体产生，易制备，安全，易保存 缺点：不能繁殖，需多次注射，免疫效果差，注射局部 和全身反应明显
2、减毒活疫苗（live-attenuated Vaccine）：经过长
期人工传代使病原微生物发生毒力变异而得到的减
毒株或无毒株。
优点：一次接种即可获得长久免疫力，类似自然状态 下的轻型或隐性感染。诱导体液免疫和细胞免疫。
1） ELISA
是酶免疫测定中应用最广的技术，用于测定可溶 性抗原或抗体。
优点：灵敏度高、操作简便、稳定性强，可自动 化检测，从而被广泛用于检测多种病原体抗原或 抗体、血液及其他体液中微量蛋白成分、细胞因 子等。
ELISA分类
双抗体夹心法：
用于检测特异性抗原。该试验所用的包被抗体与酶 标抗体应分别针对不同抗原决定基，或其中之一用 多克隆抗体，且相互间应无交叉反应。 间接法：
人工主动免疫 输入的物质 免疫力产生快慢 免疫力维持时间 抗原（疫苗、类毒 素等） 较慢，约1~4周 较长，约半年~数年 人工被动免疫 抗体、活化的淋巴 细胞、细胞因子等 快，立即发挥作用 较短，2~3周 传染性疾病的治疗 或紧急预防
主要用途
预防传染性疾病
人工主动免疫(artificial active immunization)：
百白破：百日咳杆菌死疫苗+白喉类毒素+破伤风类毒素
4、新型疫苗
亚单位疫苗（Subunit Vaccine）：纯化/提纯
合成疫苗：诱导机体产生保护性免疫，抗原肽→载体、佐剂
基因工程疫苗：DNA重组技术
人工被动免疫的接种物
1、抗毒素（antitoxin）
是用细菌外毒素或类毒素免疫大型动物制备的免疫血清，具 有中和外毒素毒性的作用。主要用于某些外毒素所致疾病的
各种凝集反应示意图
（二）沉淀反应
可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、细菌滤液等）与
相应抗体结合，在一定条件下，形成出现肉眼可见
的沉淀物的现象称为沉淀反应。 该反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散 或免疫扩散，即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，
在比例合适处相遇即形成可见的白色沉淀。
（二）沉淀反应
1．单向免疫扩散
荧光免疫技术图示
3．放射免疫测定法(radioimmunoassay,
RIA)
用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检
测。该法兼有放射性核素的高灵敏度和抗原-抗体
反应的特异性，检测灵敏度达 pg 水平。常用于标
记的放射性核素为 125I 和 131I ，分为液相和固相两 种方法。
该法常用于测定微量物质，如胰岛素、生长
激素、甲状腺素、孕酮等激素，吗啡、地高辛、
IgE等。
４．化学发光免疫分析
将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗 原或抗体，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子
）激发下发射光子，通过自动发光分析仪测定光
子产量，可反映待检样品中抗体或抗原含量。 该法灵敏度高，常用于检测血清超微量活性 物质（甲状腺素等激素）。
较好，3-5年 不稳定，难保存， 4℃冰箱保存数周
霍乱、伤寒、百日咳、 卡介苗、腮腺炎、 流脑、狂犬病、甲肝 麻疹、脊髓灰质炎、 及乙肝等疫苗 风疹及水痘等疫苗
3、类毒素（Toxid）：细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处 理，使其毒性减弱而保留其免疫原性。类毒素注入机
体后可诱导产生抗毒素，从而中和外毒素的毒性。
第二节 免疫学治疗
针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地增强或 抑制机体的免疫功能以达到治疗疾病的治疗方法。 １、免疫增强疗法 主要用于治疗感染、肿瘤、 免疫缺陷等免疫功能低下的疾病。 ２、免疫抑制疗法 主要用于治疗超敏反应、自 身免疫性疾病、移植排斥、炎症等。
免疫增强剂：免疫调节剂
指能增强、促进或调节机体免疫功能的生物或非生 物制剂。 特点：对机体正常免疫功能无影响，对异常免疫功
荧光免疫技术分类
（1）直接荧光法：荧光素直接标记抗体，对标本进 行检测。该法优点是特异性高，缺点是检查任一
抗原均须制备相应荧光抗体。
（2）间接荧光法：用一抗与标本中抗原结合，再用
荧光素标记的二抗进行检测。该法优点是敏感度
比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗即可用
于多种抗原的检测,但非特异性反应亦增强。
熟悉死疫苗与活疫苗的特点及应用； 了解抗原抗体反应的原理、常用类型及免
疫学治疗。
前
言
免疫学的临床应用包括两个方面：
（1）应用免疫学理论阐明疾病的发病机制、发展规
律；
（2）应用免疫学的原理预防、治疗、诊断疾病。
本章主要介绍免疫学在疾病的预防、治疗、诊断方
面的应用。
第一节 免疫学预防
机体获得特异性免疫力的方式包括：
治疗和紧急预防。使用时注意超敏反应，用前做皮试。
2、人免疫球蛋白：胎盘球蛋白和血浆丙种球蛋白
分别由健康产妇胎盘血和正常人血浆中提取的丙种球蛋白制