沙门菌 金黄色葡萄球菌和志贺氏菌DNA提取方法的比较

三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果比较【目的】比较三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果。

【方法】分别使用Baird-Parker培养基（BP）、兔血浆纤维蛋白原培养基（RPF）和科玛嘉葡萄球菌显色培养基（CHROMagarTMStaph aureus）对标准菌株、食品分离株以及食品样品进行对比检测。

【结果】三种选择性培养基对金黄色葡萄球菌的回收率均达到95%以上；RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基的检测效率明显高于BP培养基；且两种培养基敏感性、特异性均优于传统的BP培养基。

【结论】应用RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基检测食品中金黄色葡萄球菌，较传统的BP培养基具有更好的检测效果，建议将RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基作为可靠的分离检测培养基应用于食品中金黄色葡萄球菌的分离检测。

标签：金黄色葡萄球菌；Baird-Parker培养基；兔血浆纤维蛋白原培养基（RPF）；科玛嘉葡萄球菌显色培养基；检测效果引用格式：顾其芳，张红芝，朱颖莹，等.三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果比较[J].上海预防医学，2018，30（1）：69-73.Detection effects compared between three types of selective media for Staphylococcus aureus GU Qi-fang，ZHANG Hong-zhi，ZHU Ying-ying，LU Jun-yan，YU Ying，LIU Cheng，LIU Yue，CHEN Min（Shanghai Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shanghai 200336，China）Abstract：[Objective] To compare the detection effects between three kinds of selective media for Staphylococcus aureus. [Methods] Baird-Parker （BP）agar，Rabbit Plasma Fibrinogen （RPF）agar and CHROMagarTMStaph aureus were selected to test the standard strains，food-isolated strains as well as food samples. [Results] More than 95% recovery efficiency could be reached by utilization of all the three types of media. However，the detection effects of RPF and CHROMagarTMStaph aureus were significantly higher than that of BP agar.Moreover，their sensitivity and specificity were also superior to that of conditional BP agar. [Conclusion] Better detection effect is obtained from RPF and CHROMagarTMStaph aureus when compared to that from BP agar，suggesting that RPF and CHROMagarTMStaph aureus agar are more reliable for the detection of Staphylococcus aureus in food.Keywords：Staphylococcus aureus；Baird-Parker agar；Rabbit Plasma Fibrinogen agar（RPF）；CHROMagarTMStaph aureus；detection effect金黃色葡萄球菌是引起人类食源性疾病的重要病原菌之一，对其的微生物检测方法目前仍以常规分离培养为主。

用于 PCR 检测的乳品中金黄色葡萄球菌 D N A 提取方法比较研究洋1 伟1 袁耀武1 何俊萍1 马晓燕1 鑫1 王呸玉2杨 张 丁 1 (河北农业大学食品科技学院 , 保定 , 071001)2 (廊坊食品工程学院 , 廊坊 , 065000)摘 要 比较了乳品中金黄色葡萄球菌 DNA 的 6 种提取方法的效果 ,确定了一种可有效从乳品中提取金黄色葡萄球菌 DNA 的方法 。

该方法无需对样品进行增菌 ,可直接从乳品中提取金黄色葡萄球菌 DNA ,作为模板进 行 PCR 检测 ,检测效果良好 ,对 U H T 全脂乳 、脱脂乳和奶酪的最低检出限分别为 10 、10 CFU/ mL 和 55 CFU/ g 。

关键词 乳品 , 金黄色葡萄球菌 , DNA 提取 , PCRPCR 技术已成为调查食品源疾病暴发及鉴定相应病原菌的有用工具 。

该方法具有灵敏度高 、检测时 间短等优点 。

但是 , PCR 反应容易受到食品基质 、培 养基成分的干扰 ,残留食物成分会抑制 PCR 反应的 成像系统为 U V Ip ro 凝胶成像系统 。

112 方 法11211 乳制品人工污染金黄色葡萄球菌U H T 全脂乳 、脱脂乳和干酪在人工污染金黄色葡萄球菌前 ,均按国标法检测证实不含有金黄色葡萄 球菌 。

将金黄色葡萄球菌人工污染到全脂乳和脱脂 乳中 ,使 样 品 中 金 黄 色 葡 萄 球 菌 的 浓 度 依 次 为 100CFU / mL →108 CFU / mL ,从中提取金黄色葡萄球菌 的 DNA 。

干酪人工污染金黄色葡萄球菌的方法为 : 取 20 g 干酪在研钵中磨碎 ,加入 40 ℃, 2 %的柠檬酸 钠 90 mL ,混匀制成均质液 ,然后对干酪均质液人工 污染不同浓度的金黄色葡萄球菌 ,其中金黄色葡萄球 菌的浓度依次为 100 CFU / mL →108 CFU / mL ,从中提 取金黄色葡萄球菌的 DNA 。

食品中金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的检测分析发表时间：2018-01-22T15:02:36.540Z 来源：《中国蒙医药》2017年第16期作者：肖慧[导读] 通过PCR检测方法对速冻食品中的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌进行检测，能够有效检测出起始菌落数量相对较低的菌落。

湖南省怀化市辰溪县疾病预防控制中心 419500【摘要】目的：对食品中的金黄色葡萄球菌和沙门氏菌进行检测，分析其检测效果。

方法：对速冻食品通过PCR检测的方式进行检测，分析检测结果。

结果：PCR检测方法能够有效检测出速冻食品中的金黄色葡萄球菌和沙门氏菌，效果显著。

结论：通过PCR检测方法对速冻食品中的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌进行检测，能够有效检测出起始菌落数量相对较低的菌落，该方法值得在食品检测中推广使用。

【关键词】金黄色葡萄球菌；沙门菌；食品；检测；PCR检测伴随着我国经济的发展进步，生活水平也在逐步提升，饮食习惯也在发生改变。

目前速冻食品由于其营养丰富和方便快捷的特点受到了众多消费者的广泛欢迎，在我国食品工业中逐渐占据了重要的地位[1-2]。

但是，在速冻食品的食品检测中，能够发现一些食源性致病菌，最具有代表性的就是沙门氏菌和金黄色葡萄，这类细菌会影响速冻食品的安全，引发众多的人类疾病，必须对其投入足够的重视[3-4]。

为了有效保证速冻食品的安全，减少由于食品导致的人类疾病，必须及时采取确实有效的致病菌检测方法对食品安全进行检测，PCR 检测技术就是其中具有代表性的一种检测方法[5-6]。

1.一般资料与方法1.1一般资料材料和试剂：金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、粪肠球菌、弗氏柠檬酸杆菌、大肠杆菌、坂崎肠杆菌、微球菌等供试菌群。

专用的细菌培养基。

细菌DNA提取试剂盒、引物合成、多重PCR试剂盒。

仪器和设备：高速离心机、漩涡混合器、电泳仪、凝胶图像分析仪、紫外分光光度计、梯度PCR扩增仪。

1.2方法通过查阅相关的文献研究成果，为多重PCR检测提供靶基因，包括金黄色葡萄球菌的nuc基因以及沙门氏菌的invA基因，二者引物设计如下表1所示。

两种实验方法检测食品中金黄色葡萄球菌的对比研究发表时间：2020-11-05T06:01:04.930Z 来源：《健康世界》2020年11期作者：朱红玲[导读] 目的：比较Baird-Parker平板计数法和MPN计数法检测食品中金黄色葡萄球菌的结果，比较两种实验方法的优劣。

鹤岗市绥滨县疾病预防控制中心 156200摘要：目的：比较Baird-Parker平板计数法和MPN计数法检测食品中金黄色葡萄球菌的结果，比较两种实验方法的优劣。

方法：随机采集90份食品作为实验样品，分为实验组（食品25g+生理盐水225ml+1ml金黄色葡萄球菌菌液）、阳性对照组（250ml生理盐水+1ml金黄色葡萄球菌菌液）和样品对照组（食品25g+1ml金黄色葡萄球菌菌液）各30份，应用Baird-Parker平板计数法和MPN计数法进行定量计数，统计金黄色葡萄球菌的阳性检出结果。

结果：相比之下，MPN计数法对于金黄色葡萄球菌的阳性检出率（35.56%>12.22%）相对更高（P<0.05）。

结论：在食品中金黄色葡萄球菌的实验检测中，MPN计数法显然是更好的选择，可以获得更加准确的检测结果，可作为食品质量安全评价的重要参考。

关键词：食品；金黄色葡萄球菌；检测；实验方法Abstract：Objective：To compare the detection results of Staphylococcus aureus in food by Baird Parker plate counting method and MPN counting method，and compare the advantages and disadvantages of the two experimental methods.Methods：90 food samples were randomly collected and divided into experimental group（food 25g + normal saline 225ml + 1ml Staphylococcus aureus liquid），positive control group （250ml normal saline + 1ml Staphylococcus aureus bacterial liquid）and sample control group（food 25g + 1ml Staphylococcus aureus bacterial liquid）.Baird Parker plate counting method and MPN counting method were used for quantitative counting，The positive results of Staphylococcus aureus were counted.Results：in comparison，the positive rate of MPN counting method for Staphylococcus aureus（35.56% > 12.22%）was relatively higher（P < 0.05）.Conclusion：MPN counting method is obviously a better choice in the experimental detection of Staphylococcus aureus in food，which can obtain more accurate detection results and can be used as an important reference for food quality and safety evaluation.Keywords：food；Staphylococcus aureus；detection；experimental methods饮食是人们日常生活中的重要活动，是摄入营养和能量的主要途径，维持人体健康活动。

沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的基因芯片检测技术研究沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的基因芯片检测技术研究饶宝;唐桂芬;刘玲玲;程亚楼;马平;李文刚【期刊名称】《郑州牧业工程高等专科学校学报》【年(卷),期】2012(032)003【摘要】This research develop microarray technology for detection of pathogenic bacteria. Design universal primer and specific probe through 16 S rDNA sequences. Modify the reverse primer with a fluorescent marker. Through the PCR amplification, gene chip hybridization and signal scanning, simultaneously realize detection and distinction salmonella, staphylococcus aureus and Escherichia coli at the same condition.%本研究建立了检测致病菌的基因芯片检测方法，通过16SrRNA基因序列设计了通用引物和特异性探针，并对下游引物进行荧光标记，通过PCR扩增、基因芯片杂交和信号扫读，实现在相同条件下能够同时检测并区分沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的目的。

【总页数】4页(3-5,23)【关键词】大肠杆菌;金黄色葡萄球菌;沙门氏菌;基因芯片;检测【作者】饶宝;唐桂芬;刘玲玲;程亚楼;马平;李文刚【作者单位】牧原食品股份有限公司,河南南阳474360;郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州450011;河南农业大学,河南郑州450011;河南农业大学,河南郑州450011;牧原食品股份有限公司,河南南阳474360;郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州450011。

１４６８中国卫生检验杂志２００８年８月第１８卷第８期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅａｌｔｈＬａｂｏｒａｔｏｒｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ａｕｇ２００８；Ｖｏｌ１８Ｎｏ８１．３培养方法将金黄色葡萄球菌株、单核细胞增生李斯特菌分别在平板上划线分离，挑取单菌落，接种于５ｍｌＬＢ液体培养基中，３７℃摇振（１８０ｒ／ｍ）过夜培养（１６ｈ）。

１．４基因组ＤＮＡ提取应用４种方法进行对比研究，每种方法所用菌量都相等（应用上述培养方法离心后收集菌体，加入ＴＥ（１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ．Ｃ１，１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）悬浮菌体，制成菌悬液备用）。

方法１【ｌ…：取３００肛ｌ菌悬液，加入３０出１０％ＳＤＳ和３Ｉｘｌ１０ｍｇ／ｍｌ蛋白酶Ｋ，５５℃水浴１ｈ；加入等体积的酚／氯仿／异戊醇（２５：２４：１）混匀，离心取上清；加入等体积的氯仿／异戊醇（２４：１）混匀，离心取上清；加入０．１倍体积的３ｍｏｌ／ＬＮａＡｃ和２倍体积的冰的无水乙醇混匀，一２０。

Ｃ静置３０ｍｉｎ，离心去上清，沉淀用７５％的乙醇洗涤，干燥，沉淀溶于５０斗ｌ双蒸水中，于一２０℃保存。

方法２¨…：取３００斗ｌ菌悬液，离心，沉淀加入含１０％蔗糖的ＴＥ缓冲液４００一，然后加２０ｍｇ／ｍｌ的溶菌酶２０一，３７。

Ｃ，作用４５ｍｉｎ，再加入３０ｔｘｌ，１０％ＳＤＳ和３山，１０ｍｇ／ｍｌ蛋白酶Ｋ，５５。

Ｃ水浴１ｈ；加入等体积的酚／氯仿／异戊醇（２５：２４：１）混匀，离心取上清；加入等体积的氯仿／异戊醇（２４：１）混匀，离心取上清；加入０．１倍体积的３ｍｏＶＬＮａＡｃ和２倍体积的冰的无水乙醇混匀，一２０℃静置３０ｍｉｎ，离心去上清，沉淀用７５％的乙醇洗涤，干燥，沉淀溶于５０止双蒸水中，于一２０℃保存。

方法３¨“：取３００¨１菌悬液，离心，沉淀加５００Ｉｘｌ丙酮，混匀，冰浴５ｍｉｎ，离心，弃上清，沉淀加入ＴＥ缓冲液２１０出，２０ｍ＃ｍｌ溶菌酶４０斗ｌ，３７℃作用２ｈ，再加入１０％ＳＤＳ２０山，放置５ｍｉｎ，煮沸５ｍｉｎ，再加入ＴＥ１５０山、饱和酚２００一、氯仿：异戊醇（２４：１）２００“ｌ，充分振荡混匀，离心，吸取上清，加人等体积的氯仿／异戊醇（２４：１）混匀，离心取上清；加入０．１倍体积３ｍｏＬ／ＬＮａＡｃ和２倍体积的冰无水乙醇，置一２０。

改良碱裂解法和煮沸法提取金黄色葡萄球菌DNA效果的比较邹治情;许化溪;王俊玲;陈思;谢雨;Dinsh Kumar K;吴亮;姜旭淦;阴晴;陈盛霞【摘要】目的:建立一种简便经济的金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法.方法:选取10株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,预先以终浓度2 mg/mL溶菌酶处理6 h,再以改良碱裂解法提取细菌基因组DNA.同时以常规煮沸法制备上述细菌基因组DNA.采用PCR法扩增两种模板中金黄色葡萄球菌spa基因、mecA基因和femB 基因,比较两种方法提取DNA的效果.结果:以改良碱裂解法制备DNA为模板,所有10株标本均可扩增出spa基因和mecA基因,4个标本扩增出femB基因;以直接煮沸法制备DNA为模板,仅1个标本扩增出spa基因,2个标本扩增出mecA基因,所有标本未扩增出femB基因.结论:改良碱裂解法提取基因组DNA效果优于直接煮沸法,所提取基因组DNA可以满足PCR扩增的要求.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2018(028)003【总页数】4页(P267-270)【关键词】金黄色葡萄球菌;PCR检测;标本处理;DNA提取【作者】邹治情;许化溪;王俊玲;陈思;谢雨;Dinsh Kumar K;吴亮;姜旭淦;阴晴;陈盛霞【作者单位】江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学附属医院检验科,江苏镇江212001;江苏大学医学院,江苏镇江212013【正文语种】中文【中图分类】R378.11金黄色葡萄球菌是临床常见的革兰阳性菌，可产生多种毒力因子，引起感染者食物中毒、假膜性肠炎、烫伤样皮肤综合征、毒素休克综合征、化脓性炎症和败血症等，给患者造成极大损害[1]。

Hans Journal of Biomedicine 生物医学, 2019, 9(4), 154-161Published Online October 2019 in Hans. /journal/hjbmhttps:///10.12677/hjbm.2019.94023Comparison of Four Methods for Extracting the Genomic DNA of Staphylococcus aureusZhiqing Zou1, Min Zhang1, Xiaoyue Dai1, Wen Xia1, Yaling Zhou2, Lei He2,Jiayu Bai1, Ye Su1, Dinesh Kumar Kesavan1, Liang Wu1*, Qing Yin2, Huaxi Xu11School of Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang Jiangsu2Affiliated Hospital of Jiangsu University, Zhenjiang JiangsuReceived: Aug. 9th, 2019; accepted: Aug. 23rd, 2019; published: Aug. 30th, 2019AbstractObjective: To compare the effects of four methods, including boiling method, improved alkali cracking method, magnetic bead method and adsorption column method, for extracting the ge-nomic DNA of S. aureus, selecting methods with better extraction quality and more suitable for automation, to provide technical support for rapid detection of clinical S. aureus infection. Me-thods: 20 clinical strains of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) were isolated and their DNA was extracted by boiling method, improved alkali cracking method, magnetic bead method and ad-sorption column method. The extraction effects of spa gene, mecA gene and femB gene in S. aureus were detected by polymerase chain reaction (PCR). Results: In the DNA gene template extracted by magnetic bead method, all samples detected spa genes, mecA genes and femB genes; in the DNA gene template extracted by adsorption column method, all samples detected spa genes and mecA genes, while 19 samples detected femB genes; in the DNA gene template extracted by improved alkali cracking method, all samples detected spa genes, and 19 samples detected mecA genes and femB genes; in the DNA gene template extracted by boiling method, only 7 samples and 8 samples detected spa genes, mecA genes and none of the samples detected femB genes. Conclusion: The DNA gene template extracted by improved alkali cracking method, magnetic bead method and adsorption column method can be used for PCR assay, but the direct boiling method is not suitable for clinical S. aureus genomic DNA extraction. Magnetic bead method uses the shortest time, which is more suitable for a large number of rapid automatic extraction.KeywordsStaphylococcus aureus, DNA Extraction, PCR Detection4种方法提取金黄色葡萄球菌基因DNA效果的比较*通讯作者。

第5期收稿日期：2018－12－13作者简介：吕辉（1989—），女，山东济南人，工程师，硕士，主要从事化学分析和食品检测。

金黄色葡萄球菌定性实验的两种方法比较吕辉，刘霞，龚维，刘新，姚旭霞（中国兵器工业集团第五三研究所，山东济南250031）摘要：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）是一种常见的致病菌，可引起许多感染，在生物、医药和食品卫生检验中是重要的检查项目。

本实验采用GB 4789．10－2010第一法和微生物自动鉴定仪器两种方法对样品A 中的金黄色葡萄球菌进行了定性实验，并就检验过程、时间、准确性等方面进行了对比分析。

结果表明两种方法都能够有效进行金黄色葡萄球菌的定性分析，但使用微生物自动鉴定仪更为便捷有效。

关键词：金黄色葡萄球菌；定性实验；微生物自动鉴定仪中图分类号：Ｒ446．5文献标识码：A 文章编号：1008－021X （2019）05－0099－02Comparison of Two Methods of Qualitative Experiment of Staphylococcus AureusLyu Hui ，Liu Xia ，Gong Wei ，Liu Xin ，Yao Xuxia（CNGC Institute 53，Ji'nan 250031，China ）Abstract ：Staphylococcus aureus is a kind of common pathogenic bacterium that causes many infections and is an important test in biological ，pharmaceutical and food hygiene tests．In this experiment ，we use two method to test the existence of S．aureus in sample A．The first is the method of GB 4789．102010first and the other one by using VITEK 2Compact．The results show thatboth methods can effectively carry out the qualitative analysis of staphylococcus aureus ，but it is more convenient and effective to use microbiological automatic identification instrument．Key words ：Staphylococcus aureus ；qualitative test ；microbiological automatic identification instrument 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）是葡萄球菌属（Staphylococcus ）的典型代表之一，菌体直径约为0．8μm ，小球形，常堆聚成葡萄串状，革兰氏阳性，无芽孢和荚膜［1］，别称“嗜肉菌”，是人类的一种重要的病原菌［2］。

细菌DNA提取方法综述姓名：刘燕学号：1430170088班级:周二班摘要：高效稳定的细菌基因组DNA提取方法对后续分子生物学的研究有着重要的意义。

不同的方法提取的DNA产量和纯度等方面有差异，会对后续步骤产生很大影响。

本文综述了目前广泛使用的DNA 提取方法。

关键词：细菌、基因组DNA、提取方法现代分子生物学技术如DNA 重组技术(又称基因工程)、分子克隆技术、PCR技术等，为进一步认识生命活动的本质，更好地利用其规律为人类服务提供了重要手段(马尧等, 2005)。

但是，DNA 分离是成功利用这些技术的第一步，也是非常重要的一步，可以说DNA 质量的好坏直接决定了后续实验的成败。

[1]基因组DNA提取方法不同，对细菌DNA降解程度的影响也不同，因此，从细菌中提取基因组DNA的潜在困难较大。

目前国内外很多学者都在积极探索并研究各种高效的细菌基因组DNA提取方法，本文就近10年来国内外有关细菌基因组DNA的提取方法进行综述。

[2]1 DNA细菌提取方法综合国内外文献，大致将细菌基因组DNA取提方法分为3大类：机械法、化学法和酶法。

机械法包括冻融法、超声波法和玻璃珠法等; 化学法包括加入SDS 和苯酚等; 酶法包括加入裂解酶、蛋白酶K和溶解酶等。

[3]1.1机械法液氮冷冻研磨破碎细胞壁的方法通常用于植物总基因组DNA的提取破碎细胞的物理方法。

对于不同的样品，需要根据具体的实际情况对超声条件进行优化。

超声波法常与其他方法结合使用，如与复合螯合剂( 脱氧胆酸钠+PEG +Chelex 100) 等结合使用。

微珠振荡法也是常被研究者们采用的一种DNA 提取方法。

赵文怡等[10]比较不同方法破除金黄色葡萄球菌细胞壁时，发现玻璃微珠法可以有效破坏金黄色葡萄球菌的细胞壁，所提取的基因组DNA可以作为模板用于PCR 试验。

[3]1.2 化学法化学法主要是指通过添加化学试剂使细胞裂解从而释放出DNA，所用化学药品主要有SDS和苯酚等。

不同方法对金黄色葡萄球菌基因组DNA提取效果的比较冯飞;梁景龙;苏丽婷;曾慕衡
【期刊名称】《广东农业科学》
【年(卷),期】2010(037)010
【摘要】分别采用酶解法,CTAB法、SDS法,CTAB/NaCl法等4种方法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,并进行比较改良.结果表明,SDS法提取的DNA含量最高;当金黄色葡萄球菌的DNA质量稀释至1.975×10-4pg时,SDS法提取的DNA仍能用于PCR扩增;此外,该方法稳定性好,经济性高,是理想的金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法.
【总页数】3页(P153-155)
【作者】冯飞;梁景龙;苏丽婷;曾慕衡
【作者单位】仲恺农业工程学院生命科学学院,广东,广州,510225;仲恺农业工程学院生命科学学院,广东,广州,510225;仲恺农业工程学院生命科学学院,广东,广
州,510225;仲恺农业工程学院生命科学学院,广东,广州,510225
【正文语种】中文
【中图分类】R318.11
【相关文献】
1.金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法的比较 [J], 苏丽婷;梁景龙;郭小建;冯飞
2.三种不同方法检测审核样本中金黄色葡萄球菌的比较研究 [J], 林杰
3.人非抗凝血块中基因组DNA提取不同方法的比较 [J], 邱亚;青玉凤;党万太;周京
国
4.不同方法保存的蜜蜂基因组DNA提取的比较 [J], 闫华超;贾少波;王雪梅
5.金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法的比较研究 [J], 唐俊妮;龙飞;史贤明;周锐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

1、硫氰酸胍二氧化硅改良法具体步骤如下:( 1) 取菌液悬浮于无菌蒸馏水中加入质量终浓度为20 g/ L 的溶菌酶处理菌体,加入裂解液于1. 5 mL 的离心管中, 将其放在水浴锅中65℃温浴10 min, 振荡混匀。

( 2) 加入吸附液, 振荡混匀, 置37℃, 5 min, 振荡5 s, 10 000 r/ min 离心1 min除去上清。

( 3) 在沉淀中加入洗涤液, 充分悬浮沉淀物, 10 000 r/ min 离心1 min; 去上清液, 重复漂洗1 次。

( 4) 55℃烘干箱3 min, 烤干沉淀, 再加入50μLTE ( pH 值8. 0) 或去离子水重悬沉淀, 45 ℃温浴2 min, 10 000 r/ min 离心10 s, 收集上清即为DNA 模板。

2、煮沸法提取DNA，离心管内加入菌液和100μL去离子水, 混合均匀, 煮沸5 min, 12 000 r/min 离心5 min 取上清保存于- 20℃作为模板备用。

热裂解法提取热裂解法并作改进: 取500μL 菌液，10 000 r /min 离心5 min; 沉淀用500 μL ddH2O 重悬，11 000 r /min离心2 min，重复2 次。

沉淀用150 μL ddH2O 溶解，沸水浴15 min，再以11 000 r /min 离心1 min。

取上清100 μL 做模板，然后置－20 ℃保存备用。

3、SDS 法提取参考传统法并作改进:取0. 5 mL 菌液，10 000 r /min 离心5 min．弃上清，加入150 μL ddH2O 重悬，加入质量分数10% 的SDS 15 μL 摇匀，再加入5 mol /L NaCl50 μL，65 ℃温育10 min．加入等体积的V( 酚) ∶ V( 氯仿) ∶ V ( 异戊醇) = 25 ∶ 24 ∶ 1 混合液混匀，10 000 r /min离心5 min．加入与上清等体积的V( 氯仿) ∶ V( 异戊醇) =24∶ 1 混合液混匀，10 000 r /min离心5 min．将上清再移至新管中，加入0. 6 倍体积的异丙醇轻轻混合，静置10 min，10 000 r /min离心5 min; 弃上清，加入体积分数70% 的乙醇洗涤，12 000 r /min 离心2 min，弃上清液．重复洗涤后取100 μL 的ddH2O 重悬DNA，－20 ℃保存备用。