摘要............................................................................. .. (4) 【实验过程】 (5) PartⅠ. NDV 抗血清制备 (5) 一、实验原理 (5) 二、实验仪器、材料和试剂 (7) 1. 仪器 (7) 2. 材料 (7) 3. 试剂 (7) 三、方法和步骤 (7) （一）NDV 兔抗血清制备 (7) 1. 家兔捉拿方法 (7) 2. 家兔固定方法 (8) 3. 初次免疫 (9) 4. 二次免疫 (10) 5. 终末免疫 (10) 6. 试血 (10) 7. 颈动脉放血 (10) 8. 血清分离 (12)
9. 抗血清保存 (12) （二）NDV 鼠抗血清制备 (12) 1. 小白鼠的捉拿和固定 (12) 2. 初次免疫 (13) 3. 二次免疫 (15) 4. 终末免疫 (15) 5. 试血 (16) 6．放血 (18) 7．血清分离 (19) 8．抗血清保存 (19) Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价 (19) 一、基本原理 (19) 二、实验仪器、材料和试剂 (20) 1. 仪器 (20) 2. 材料 (20) 3. 试剂 (20) 三、方法和步骤 (20) 1. 灭活鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株抗原提取 . 20 2. 1%琼脂糖配制 (20) 3. 倒平板 (21) 4. 打孔 (21) 5. 稀释抗血清 (22)
6. 加样 (22) 7. 孵育 (23) 8. 结果观察 (23) Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定 NDV 抗血清效价 (23) 一、基本原理 (23) 二、实验仪器、材料和试剂 (24) 1. 仪器 (24) 2. 材料 (24) 3. 试剂 (24) 三、方法和步骤 (25) 1. 鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株灭活抗原提取 . 25 2、抗原包被 (25) 3. 封闭 (25) 4. 洗板 (25) 5. 稀释抗血清 (25) 6. 加抗血清 (26) 7. 洗板 (26) 8. 加酶标二抗 (26) 9. 洗板 (27) 10. 显色 (27) 11. 终止 (27) 12. 读数 (27)
风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项检查 目前调查孕妇中的感染主要通过病毒抗体水平的检测，如何看懂检测报告单呢？抗体IgG阴性的临床意义：没有感染过这类病毒。或感染过，但没有产生抗体。 风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项 检查内容：包括风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项。 检查目的：60％～70％的女性都会感染上风疹病毒，一旦感染，特别是妊娠头三个月，会引起流产和胎儿畸形。 检查方法：静脉抽血 检查时间：孕前三个月 检查价格：全套240元左右，医院一般每星期做一次检测。（因各地物价差异，此价格仅供参考） 检查对象：所有育龄女性 检查内容分析： 不同病原体导致的宫内感染对胎儿造成的不良后果也不尽相同。 巨细胞病毒感染对胎儿的危害：可造成多脏器损害 单纯疱疹病毒感染对胎儿的危害：可造成多脏器损害。 风疹病毒感染对胎儿的危害：可导致先天性风疹综合症，主要表现为耳聋、白内障和先先性心脏病。 弓形虫感染对胎儿的危害：多侵害神经系统。 诊断方法 目前调查孕妇中的感染主要通过病毒抗体水平的检测，如何看懂检测报告单呢？抗体IgG阴性的临床意义：没有感染过这类病毒。或感染过，但没有产生抗体。 抗体IgM阴性的临床意义：没有活动性感染，但不排除潜在感染。
抗体IgG阳性的临床意义：表明孕妇既往有过这种病毒感染。或接种过疫苗。 抗体IgM阳性的临床意义：表明孕妇近期有这种病毒的活动性感染。 一般认为孕妇的活动性感染与胎儿宫内感染有关，约40%的活动性感染容易引起胎儿的宫内感染，所以，孕期检查主要检查孕妇血中的IgM抗体。我国妇女中巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、风疹病毒、人乳头瘤的感染率很高，既往感染率高达90%。据调查，孕妇中各种病原体的活动性感染约在3%~8%，但也有一些IgM 抗体不高的孕妇可能有潜在感染，也可能造成胎儿的宫内感染。 经过以上的分析，您可能清楚了，在化验单上，不是一看到有加号（+），就认为会造成胎儿的宫内感染。IgG抗体阳性，仅仅说明既往感染过这种病毒，或许对这种病毒有了免疫力了。IgG抗体阴性，说明孕妇也许没有感染过这种病原体，对其缺乏免疫力，应该接种疫苗，待产生免疫抗体后再怀孕。接种过一些病毒疫苗的妇女，会出现IgG抗体阳性。如接种过风疹疫苗的妇女会出现风疹病毒IgG抗体阳性。接种过乙肝疫苗的妇女会出现乙肝抗体阳性。所以，要分清哪个是保护性抗体，哪个是非保护性抗体。 相关链接：孕前检查，你清楚了吗？一般体检代孕前检查？莫儿戏！孕前检查，男人查什么？
血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第 10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。 2．离心后试管内上清液出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，具有重要临床意义。 血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。
正文】 弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书 一、制品名称 通用名：弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法） 英文名：Diagnostic Kit for IgG Antibody to Toxoplasma(ELISA) 汉语拼音：Gongxingchong IgG Kangti Jiance Shijihe（Meilian Mianyifa） 二、原理与用途 体外诊断用试剂，本品系由纯化弓形虫抗原包被的微孔板和酶标记抗人IgG抗体及其他试剂配套组成，应用间接法原理检测人血清或血浆样品中的弓形虫IgG抗体。本品对样本原液的最低检出量为100IU/ml。 三、试剂盒的组成 1、包被弓形虫抗原的微孔板96孔 2、酶标记抗人IgG抗体6.5ml 3、阳性对照血清0.8ml 4、临界阳性对照血清0.8ml 5、阴性对照血清0.8ml 6、显色液A 6.5ml 7、显色液B 6.5ml 8、终止液6.5ml 9、浓缩洗涤液(10倍) 50ml 10、样品稀释液52ml×2 四、样本要求 本试验用血清或血浆进行检测，用量为10μl。勿使用染菌、脂血、溶血或黄疸样品。按照标准方法收集血清，室温保存样品不要超过8小时，若实验在8小时以后进行，需将样品保存在2～10℃，如保存超过1周则保存在－20℃。 五、操作程序 1、试剂盒在室温平衡20～30分钟。浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水10倍稀释。 2、样品1:100稀释：将样品稀释液1ml加入一洁净小管内，加10ml待检样品，充分混匀。 3、将板条固定于板架上，剩余的板条用不干胶密封并放入密封袋中保存。每孔加入稀释后样品100ml，每个样品至少做2孔。阳性对照、阴性对照各加2孔，临界对照血清加3孔，100ml/孔。另留一孔不加任何液体为空白对照。置37℃30分钟。 4、甩净孔中液体，洗板3次，每次停留1分钟后甩净拍干，除空白对照外每孔加酶标记物50ml（1滴），置37℃30分钟。 5、甩净孔中液体，同上洗板3次，拍干后各孔滴加显色液A、B各50ml（1滴），置37℃避光10分钟，每孔立即加入终止液50ml（1滴），混匀后用酶标仪450nm读数判定结果。 六、质量控制 以空白孔调零，450nm波长测定A值。阳性对照A值平均值≥0.50，阴性对照A值平均值≤0.10，临界对照A值平均值介于0.12～0.35，证明实验成立。 七、结果判定 样品A值≥临界对照A值平均值判为阳性，样品A值＜临界对照A值平均值则判为阴性。 八、注意事项 1、不同试剂组分不得混用； 2、试剂盒应按含有传染性材料对待； 3、凡是染菌、严重溶血、黄疸或高血脂的待检样品可能引起错误结果，应重新采样复试或
快灵生物弓形虫抗体快速检测试纸卡(TOXO Ab) 产品用途： 快灵生物犬猫弓形虫抗体快速检测试纸卡可以帮助兽医及宠物主人在10分钟内准确地鉴别诊断犬、猫是否产生弓形虫抗体。 检测样品：血清 包装规格：10条/盒，独立包装 适用情况：宠物医院，宠物饲养场，动物卫生监督部门，养宠家庭 精密性：同批次产品在相同样品浓度下测定，反应结果一致，显色均一 保存条件：阴凉干燥处保存，不可冷冻，避免阳光直晒，2-30℃可保存18个月。常见问题： 1）根据临床经验判断为阳性，但是检测卡检测为阴性？ A、现在的动物疫病感染方式越来越复杂，而且呈现多种疫病混合感染，疫病的感染症状也不典型，所以单靠临床经验判断没有太大的说服力。 B 、感染初期或潜伏期，病毒含量较少，所以测不出来，建议过几天再测 2）快灵试纸和其他家试纸检测出的结果不符合？ A、病毒上面有不同的抗原决定簇，在试纸研发过程中，选用的特异性抗体都是对应不同的抗原决定簇，所以不能保证所有试纸厂家都是选用同一特异性抗体，也就有可能出现多个厂家的试纸结果不符合，好的试纸一定是选择了最具有代表性的特异性抗体。 B、病毒在流行过程中，其抗原决定簇可能也会发生变异，不同地区流行的毒株可能存在病毒抗原漂移。因此同一品牌试纸未必能将某类病毒的各个变异型全部检出。、 C、各种试纸的灵敏度不一样，也会导致在病毒浓度较低时检测结果出现偏差。 D、患病宠物处于患病初期时，体液内病毒浓度偏低，取样方式或时间的差异，均会导致试纸卡反应结果的差异。 3）抗原检测阳性的实际意义是什么？ 抗原检测阳性能直接确诊动物病原的存在。临床治疗中也可对抗原进行间歇检测来观察使用药物对病原的影响。当然，刚注射疫苗不久的动物用试纸进行检测，结果也可能是阳性，但做为疫苗的抗原与具有攻击力的野毒在动物体内的浓度一般有较大差距，因此在T线反应颜色强度上也存在差异。如果是灭活疫苗，则在动物体内很快就被中和了，试纸也就检测不出了。 4）T线出现慢
附件2 弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂 技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白（Immunoglobulin G,IgG）抗体亲合力检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及IgG抗体亲合力检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、范围 弓形虫( Toxoplasma, TOXO ) 、风疹病毒( Rubella virus , RV) 、巨细胞病毒(Cytomegalovirus , CMV) 及单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV) 四种病原体，以缩写形式ToRCH命名。上述四种病原体已引起围
产医学家和优生优育学家的关注，如何应用应基于大量的研究及相关学科的诊疗指南。 依免疫球蛋白重链抗原特异性不同，免疫球蛋白可分为G型免疫球蛋白（IgG）、M型免疫球蛋白（IgM）、A型免疫球蛋白（IgA）、E型免疫球蛋白（IgE）和D型免疫球蛋白（IgD）五种类型。ToRCH抗体检测试剂，主要检测的免疫球蛋白为ToRCH特异性IgG和IgM。在病原体感染的初次体液免疫应答中(原发性感染)，特异性IgM抗体首先出现，但存在时间较短，通常为数周到数月。病原体特异性IgM抗体阳性常提示早期感染，可用于感染急性期的辅助判断。特异性IgG抗体，在免疫接种后、原发性感染及再次感染时都可检出，且较长时间存在。 在感染过程中特异性抗体对抗原亲合力随感染时间的延长而不断升高，检测IgG抗体亲合力，能够较准确地判断感染时间，可作为ToRCH 抗体检测的一种补充，高IgG抗体亲合力可辅助排除近期原发性感染。 不同类型的ToRCH特异性抗体检测结果，在ToRCH病原体感染的辅助诊断及免疫状态的评估中，起着重要的指导作用，因此ToRCH特异性抗体检测的准确性至关重要。相关的生产企业必须充分意识到该类产品的潜在风险，根据本指导原则的要求对该类试剂的安全性和有效性进行科学合理的验证。 ToRCH抗体检测试剂是指一类利用免疫学方法，如酶免疫技术和化学发光免疫分析技术等，对人体血清或血浆样本中的ToRCH特异性抗体进行体外定性和/或半定量和/或定量检测的试剂。结合临床表现和其他实验室指标，可用于ToRCH感染辅助诊断及免疫状态的评估。IgG抗体亲合力检测试剂是一类对ToRCH特异性IgG抗体阳性的人血清和/或血浆样本中ToRCH特异性IgG亲合力进行体外定性检测的试剂，用于辅助判断感染时间，排除近期原发性感染。本类试剂尚不用作产前筛查。本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。
抗体效价测定操作规程 操作步骤： 一.IgG 类 I.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200］加等体积2—Me溶液混合，封口，置37C水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清 600L 生理盐水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；） 3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1 液3d,混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点, 终点血清稀释度的倒数为效价（Titer ）,或称滴度。 二.IgM 1?血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐
水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2. 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L,混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）三．此类为IgM 类盐水抗体可立即离心后观察。 四． 五．（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）
弓形虫抗体igm阳性怎么办 这个情况之前已经有过感染那体内已经有了抗体，怀孕之前还是要去做一个检查确保健康才能有孩子，期间不要再接触宠物了现在这种情况是很常见的因为很多人养宠物，就算自己家里没有养难免接触到别人家的，所以一定要确保自己的身体是健康的菜能要宝宝，弓形虫的危害很大会对宝宝的大脑造成损伤。 1.种病对于成人来说,无需治疗,随着人体产生抗体,弓形虫自然会被杀死.当然医治最好了.但对于三个月以下的胎儿有着 致命的影响对而言,已经感染了,则产生抗体了,今后再发生暴露,因为已经感染过有抗体,也完全可以抵抗了.即使在怀孕期再次 感染,对胎儿也不会有任何影响了.可以完全不去管弓形虫这件 事了. 2.前如果感染过弓形虫,但现在已经形成抗体,那么IGG是 阳性,如果是新近感染的,IGM是阳性.这种情况是不能怀孕的,得需要经过治疗之后等IGM转阴,IGG阳性之后才能怀孕. 3.弓形虫病目前是没有特效药的,所以很难一次治愈.弓形 虫感染有多种简便有效的药物治疗,如磺胺类加乙胺嘧啶,和螺 旋霉素等,治疗须按医嘱进行,孕妇感染及时治疗大约可使胎儿
感染机会减少这种情况可能需要先进行治疗的，否则对生育有一定的影响，首先家里面不要养宠物了。临床上治疗通常是乙胺嘧啶与磺胺制剂联合应用。 首先不要养宠物了，暂时放到朋友家，宠物的存在很难免保证不会在发生感染，所以一定要注意啦，这种情况很可能会发生二次感染所以一定要先经过检查医生说没问题了就要孩子，要是检查不过关还需要多治疗，家里宠物要养肯定是要每年都去做次检查，每个月都要去杀一次虫，其实养宠物的人需要勇气，要慢慢锻炼宠物的习性。
第14卷 第1期医学研究生学报V o l.14 N o.1 2001年2月Jou rnal of M edical Po stgraduate Feb.2001 人体弓形虫病 林 军综述, 武建国审校 (南京军区南京总医院解放军医学检验中心,江苏南京210002) 摘要: 弓形虫病是全球广泛分布、对人类造成严重危害的人兽共患病。近年来,由于与宠物接触增多,我国弓形虫病发病率有增高趋势。鉴于本病临床表现缺乏特异性,一旦确诊,治疗效果显著。本文从发病机制、病理改变、临床表现、实验室诊断、治疗等几个方面对本病进行了简要的评述,以期引起广大临床医务人员的重视。 关键词: 弓形虫,病原; 临床,实验诊断 中图分类号: R382.5 文献标识码: A 文章编号: 100828199(2001)0120057203α Toxoplas mosis i n human bei n g L I N G Jun rev ie w ing, W U J ian2guo check ing (Cen ter of M ed ica l L abora tory S cience,J in ling H osp ita l,N anj ing210002,J iang su,Ch ina) Abstracts: Toxop las m o sis is an infecti ou s disease w h ich affects bo th hum an and an i m als.It dis2 tribu tes all over the w o rld and m akes great harm to hum an beings.In recen t years,the m o rb idity of toxop las m o sis in ou r coun try increased becau se of con tacting w ith p ets.Toxop las m o sis has no sp ecific clin ical m an ifestati on s and responds w ell to co rrect treatm en t.In o rder to raise clin ician s’no tice to toxop las m o sis,th is article w ill review the disease from the asp ects of eti o logy,ep idem i o l2 ogy,clin ical m an ifestati on and exp eri m en tal diagno sis. Key words: Toxop las m o sis; Toxop las m a gondii; C lin ic; Exp eri m en t; D iagno sis 0 引 言 弓形虫病(toxop las m o sis)是由刚地弓形虫(tox op las m a g ond ii)引起的一种人兽共患传染病。早在1908年,法国学者N ico lle和M anceaux从北非刚地梳趾鼠的单核细胞中发现的形态与利什曼原虫非常类似的一种寄生虫,后发现该寄生虫不同于利什曼原虫,遂命名为刚地弓形虫。人类弓形虫病公认是Janku于1923年首先报告的。我国是1955年由于恩庶等首次从家兔和猫体中分离出弓形虫虫体,1964年谢天华报告首例弓形虫病(眼型)患者1。本病广泛分布于世界各地,各个国家和地区的感染率不同,有的国家高达80%,我国血清抗体的阳性率为5%～20%。人群及动物普遍易感。弓形虫对组织无选择性,除红细胞外任何有核细胞均可被侵犯。由于感染的部位不同,临床表现复杂,于是造成诊断困难。 1 发病机制及病理 1.1 发病机制 弓形虫病一般分为先天性和获得性两大类。先天性弓形虫病是指母亲在妊娠期间感染弓形虫而发生虫血症,弓形虫经胎盘引起胎儿宫内感染。获得性弓形虫病一般是指弓形虫经口腔进入消化道而传染,但也可以通过皮肤和粘膜感染。 弓形虫进入人体后经回肠或通过淋巴液至淋巴结,经血行播散至全身,并迅速进入单核2巨噬细胞使其胀破,散出的弓形虫再次侵入新的细胞。如此反复,发展为局部组织的坏死病灶,同时伴有以单核细 ? 7 5 ? α收稿日期: 1999210222 作者简介: 林 军(1962-),女,吉林长春人,主管技师,医学本科,从事临床检验专业。
弓形虫抗体快速检测试剂盒 弓形虫概述： 刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）,简称弓形虫，是一种人畜共患的传染病，猫科动物是弓形虫的最终宿主。特别是孕妇感染了弓形虫会对胎儿发育有影响，引起流产和先天性弓形虫病。弓形虫IgM/IgG抗体检测，是优生优育孕前的必检测项目之一。 产品简介： 弓形虫抗体快速检测试剂盒采用了胶体金法定性检测人血清/全血中弓形虫IgM/IgG抗体， 试剂盒主要组成： 1、弓形虫抗体快速板 2、样本稀释液 3、说明书 样本要求： 建议用新鲜血清或全血直接检测，避免使用高脂血的样本、溶血样本可能影响结果的判读，应避免使用。 检测方法： 1、使用前，保证试剂盒处于常温（15℃--30℃）。 2、撕开铝膜袋取出测试板平放，在检测板加样孔中加10 μl血清样本或全血样本，然后加入100 μl样品稀释液。3-5分钟内观察检测卡中部检视窗的结果，20分钟内结果有效。 检测结果判读： 阳性结果：在检测区和对照区均出现一条紫红色线。 阴性结果：仅在对照区出现一条紫红色线。 无效结果：对照区无紫红色线出现，表示测试无效。需重新测试。 检测结果解释： 1、若IgM抗体检测为阳性，说明近期感染弓形虫病。 2、若IgG抗体检测为阳性，说明既往感染过弓形虫病。 3、若IgM抗体检测为阴性、IgG抗体阴性，身体还未受到过感染弓形虫病。 检测的局限性： 1、本试剂盒为初筛产品，确诊应根据患者临床评价和检测结果进行严谨分析。 2、如样本中所检抗体含量极低，可能产生不正确的阴性结果。当怀疑感染时，即使检测为阴性，可以隔一段时间进行重新检测，或用其它确诊试验证明。
3、本产品批间和批内产品的阴性符合率和阳性符合率都≥95%以上。 4、本产品要求待测血清必须新鲜，新鲜血清4℃保存不超过48小时，脂血、溶血、陈旧浓缩的血清均影响检测结果。
NDV抗血清制备及抗体效价测定 【实验目的】 1. 学习抗血清制备的基本原理，掌握兔和小鼠免疫注射方法、兔颈动脉放血、小鼠眼球采 血技术。 2. 学习双向琼脂扩散实验的基本原理，掌握的基本程序和结果判读方法。 3. 学习酶联免疫吸附实验（ELISA）的基本原理，掌握间接ELISA的基本程序和结果判读 方法。 4. 学习免疫印迹实验的基本原理，掌握免疫印迹记实验的的基本程序和结果判读方法。 PartⅠ. NDV抗血清制备 一、实验原理 将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体（Polyclonal antibody，PcAb）。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原(如蛋白质类抗原)要加入佐剂，以增强免疫性。 本实验介绍新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）抗血清的制备过程。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster 2C株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。 二、实验仪器、材料和试剂 1. 仪器
猪弓形虫病详解 核心提示：弓形体病是由弓形虫寄生引起的人畜共患的一种寄生虫病。通过口、眼、鼻、呼吸道、肠道及皮肤等途径侵入猪体。以高热、呼吸及神经症状及繁殖障碍为特征。临床可见急性、亚急性和慢性3种病型，农村散养和规模化养猪场时有发生，死亡率高达60％以上。 1简介 弓形体病又称为弓浆虫病或弓形虫病，是由弓形体感染动物和人而引起人畜共患的原虫病。本病以高热、呼吸及神经系统症状、动物死亡和怀孕动物流产、死胎、胎儿畸形为主要特征。 2 病原 该病病原是弓形虫，在整个发育过程中分5种类型，即滋养体（速殖子）、包囊、裂殖体、配子体和卵囊。弓形虫发育过程需要2个宿主，其中滋养体和包囊是在中间宿主（人、猪、犬、猫等）体内形成的，裂殖体、配子体和卵囊是在终末宿主（猫）体内形成的。 猫既是终末宿主也是中间宿主。虫体在猫的肠上皮细胞内，进行裂殖生殖，重复几次裂殖生殖后，形成大量的裂殖子，末代裂殖子重新进入上皮细胞，经过配子生殖，最后形成卵囊。卵囊随粪便排出体外，在外界适宜的温度、湿度和氧气条件下，经过孢子化发育为感染性卵囊。 从终末宿主排出的卵囊在外界可存活100天至1年半，一般消毒药无作用。速殖子的抵抗力弱，在生理盐水中几小时就丧失感染力，各种消毒药均能将其迅速杀死。 3 治病机理 弓形虫几乎可以感染所有类型的细胞。弓形虫从入侵部位进入血液后散布全身并迅速进入单核-巨噬细胞以及宿主的各脏器或组织细胞内繁殖，直至细胞胀破，逸出的速殖子又可侵入邻近的细胞，如此反复不已，造成局部组织的灶性坏死和周围组织的炎性反应，此为急性期的基本病变。如患者免疫功能正常，可迅速产生特异性免疫而清除弓形虫、形成隐性感染；原虫亦可在体内形成包囊、长期潜伏；一旦机体免疫功能降低，包囊内缓殖子即破囊逸出，引起复发。如患者免疫功能缺损，则的虫大量繁殖，引起全身播散性损害。弓形虫并可作为抗原，引起过敏反应、形成肉牙中要炎症。此外，弓形虫所致的局灶性损害，尚可引起严重继发性病变、如小血栓形成、局部组织梗死，周围有出血和炎症细胞包绕，久而形成空腔或发生钙化。 弓形虫可侵袭各种脏器或组织，病变的好发部位为中枢神经系统、眼、淋巴结、心、肺、肝和肌肉等。 4 流行病学 4.1 传染源
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程 【原理】 新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合，血型系统最主要的类型为ABO血型系统，本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A（B）IgG抗体效价。 【试剂】 6%牛血清白蛋白；生理盐水；凝胶卡 【标本采集】 孕妇静脉血3毫升，肝素钠抗凝，孕妇爱人静脉血3毫升，肝素钠抗凝。将孕妇标本制作成血清标本，孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本（用生理盐水洗涤后配制）。 【操作步骤】 1．取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育30～60分钟；2．将血清倍比稀释成9管，依次为1：4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管；3．将卡作好标记，在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul； 4．然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本； 5．37度孵育15分钟（专用孵育箱）； 6．专用离心机离心5分钟；900rpm2分钟，1500rpm3分钟； 7．取出判定结果； 【结果判定】 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中； 阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。 【结果报告】 产生1+阳性凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 【注意事项】 1．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。 2．血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。 3．如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所臻溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。 4．本凝胶卡价格不菲，成本较高，请您节约使用。 【临床意义】 有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A（B）≥1：64者249例；ABO-HDN发生率随IgG抗A（B）效价升高而上升；HDN与妊娠史的频率有关，随着年龄上升，孕妇个体IgG抗A（B）抗体效价也随之上升。夫妇间ABO血型不合者应及时检查产前血型抗体水平，用于预防不良妊娠的发生；IgG抗A（B）效价的高低与HDN的发病率成正比；孕妇血清IgG抗A（B）效价≥1：64需定期检测抗体效价水平及时用药降低抗体效价，以预防新生儿溶血病的发生。
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/6d12399792.html, 禽流感免疫抗体效价检测 作者：何生 来源：《湖北畜牧兽医》2013年第07期 摘要：为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解乌鲁木齐市米东区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区不同鸡场进行了禽流感抗体检测。结果表明，40只免疫鸡，免疫抗体 效价合格数33只，总合格率为82.5%。说明近几年对高致病性禽流感采取的强制免疫措施达到了比较显著的效果。 关键词：禽流感；免疫；抗体效价；血凝试验；血凝抑制试验 中图分类号：S855 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）07-0029-02 禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）的烈性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）定为A类传染病。禽流感病毒感染后，呈现出较严重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。禽流感病毒不仅能引起禽类严重的疾病，而且对人类和哺乳类动物也能造成感染。在世界各种家禽和野生禽类中，按照血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）表面抗原来区分，已发现了数千种属于许多不同抗原亚型的病毒。各种品种和不同日龄的禽类均可感染高致病性禽流感。该研究为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解本地区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区鸡场进行了禽流感抗体检测，并对不其检测结果进行了对比分析。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试验动物 40只鸡由米东区铁厂沟镇大草滩村养禽场提供。 1.1.2 试剂禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原，禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验阳性血清，1%鸡红细胞悬液。 1.1.3 仪器 96孔V型微量反应板、台式离心机，单道、多道微量可调移液器，吸嘴，微量振荡器，加样槽。 1.2 方法 1.2.1 血凝（HA）试验在微量反应板的1～12孔均加入0.025 mL的PBS，换滴头，吸取0.025 mL病毒悬液加入第1孔混匀，从第1孔吸取0.025 mL病毒液加入第2孔，混匀后吸取0.025 mL加入第3孔，依次倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025 mL弃之，换滴头，每孔再加入0.025 mL PBS。每孔均加入0.025 mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液，充分混匀后加入。在微量振荡器上振荡2 min，在25 ℃恒温箱内静置40 min后观察结果。
刚地弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ）是寄生于人类和许多动物组织细胞内的原虫，可侵犯脊椎动物的多种细胞，并在细胞内繁殖，最后破坏宿主细胞，释放出虫体导致一系列的病理变化［１］。弓形虫病是重要的人畜共患疾病，已呈全球性流行，对人类健康和畜牧业生产构成严重威胁，引起医学界和兽医界的普遍重视［２］。有一些病例感染是无症状的。在一些健康人群和动物中弓形体血清抗体阳性率相当高，平均为２５％～５０％。急性弓形体病例则主要见于免疫缺陷的病人，据报道，５０％爱滋病（ＡＩＤＳ）病人都患有本病［３］。本文主要对弓形虫病的流行病学的最新研究和发展进行综述。 １流行因素 １．１地区分布 本病是一种世界性流行的人畜共患病，没有严格的地区分布，但在一些卫生条件差的农村，本病的感染率比城市显著较高。Ｋａｗａｒａｂａｙａｓｈｉ（８１－１３６０）在巴西卫生条件差的农村调查，阳性率４８．０８％，城市２６．１４％；Ｆｒｅｎｋｅｌ（８２－７０４）发现哥斯达黎加城市阳性率比农村高，因城市养猫数量比农村高１０～２５０倍，猫的感染率亦高。一些作者报告气候潮湿地区比干旱地区人的感染率高，认为可能与卵囊在湿润土壤存活时间长，利于传播有关［４］。 １．２传播途径 弓形虫病按其传播途径可分为先天性弓形虫病和获得性弓形虫病。所谓先天性弓形虫病是指孕妇在妊娠期弓形体隐性感染或隐性感染时弓形体通过胎盘屏障或羊水进入胎儿胃肠道而感染的，胎儿的发育可受到不同程度的损害，甚至死亡。获得性弓形体病多通过消化道感染或经损伤的皮肤、粘膜感染，输血或器官移植也可传播［５］。 １．２．１人—人。主要是垂直传播，受弓形体感染的孕妇经胎盘传给胎儿。由于胎膜能保护胚胎，弓形体直接侵入胚胎不易，可通过母体血液循环而感染，感染时间在母体急性感染的原虫血症期。其他感染途径有通过隐性感染母体子宫内膜中包囊传播，阴道分泌物中的虫体在分娩时感染新生儿，弓形虫随羊水进入胎儿胃肠道引起感染等。引起先天性弓形虫感染的先决条件是孕妇先有原发感染［５］。 １．２．２动物—动物。被认为是终宿主猫传播给中间宿主猪、绵羊、山羊等的过程。主要有三种途径：①动物食物和饮水中污染了猫粪便中孢子化卵囊；②动物食用受弓形虫组织包囊污染的肌肉和脏器；③先天性感染，动物在交配妊娠分娩过程中的水平和垂直传播。１．２．３动物—人。饲养宠物的人与猫接触的机会较多，尤其是孕妇与猫的直接接触，猫粪便中弓形虫卵囊对人类的饮水、肉食品、蔬菜及土壤等的污染，人食用含有弓形体组织包囊的未经煮熟的肉食品和动物内脏，用未经处理的山羊奶喂婴儿也是弓形虫传播人类的重要途径，儿童在动物园中与动物的接触提供了弓形虫的传播机会［４］。 １．３贮存宿主 弓形虫的中间宿主非常广泛。人、畜、禽以及许多野生动物对弓形虫都有易感性。一般认为，猫科动物是终宿主，人类及其他哺乳类动物均易感［６］。实验动物中以小白鼠、地鼠最敏感。一般认为猫是弓形虫的最终宿主。根据一篇关于弓形虫病动物宿主的调查显示，在调查的１０种动物中均发现感染（表１）［２］。Ｆｒｅｎｋｅｌ认为鸡的感染率最高［２］，感染年龄小，与吞吃土壤中卵囊有关，蚯蚓则利于卵囊在土壤中散播。 １．４季节分布 一般来说弓形虫的流行没有严格的季节性，但秋冬季和早春发病率最高，可能与动物机体的抵抗力因寒冷、运输、妊娠而降低有关［４］。 １．５人群分布 一般无差异性，各种年龄阶段的人均可感染。研究表明，免疫缺陷患者或免疫功能低下者弓形虫感染率明显高于正常人，目前美国约有３％～２０％的爱滋病患者死于弓形虫病［１］。 １．５．１性别。一般无差异，Ａｒｅｎｅ（８７－４２５）调查尼日尔河三角洲居民，抗体阳性率女性６４．８％，男性５３．０％；Ｋｈａｄｒｅ（８８－国家、地区试验方法 感染率∥％报告者 （年份－序号） 猫其他动物 约旦ＩＨＡ１８０Ｍｏｒｓｙ（８１－１７０）哥斯达黎加－３７～４７．５小鼠３．５Ｆｒｅｍｋｅｌ（８２－７０４） 大鼠１２．５ 麻雀１６．０ 小鸡５４．０ 蚯蚓２５．０ 尼日利亚ＩＨＡ牛３．０Ａｇａｎｇａ（８２－１０３５） 羊４．５～９．０ 猪６．７９～９．０２ 沙特阿拉伯ＩＨＡ１５．０狗３．０Ｈｏｓｓａｉｎ（８６－３３０９）黎巴嫩ＩＦＡ７８．１－Ｄｅｅｂ（８６－２６３９）毛里塔尼亚ＩＦＡ－羊２４．０Ｍｏｎｊｏｕ（８４－１０７５）尼日尔河三角洲ＤＴ９４．２鼠１００．０Ａｒｅｎｅ（８６－１６５） （８６－２６４０）表１各地动物弓形体血清学调查结果 弓形虫病的流行病学研究概况 许青华 （安徽省滁州市畜牧兽医站，安徽滁州２３９０００） 摘要弓形虫病是主要的人畜共患疾病，对人类健康和畜牧业生产构成了严重威胁，已受到全球医学界和兽医界的高度重视。从流行因素和防治措施两个方面综述了弓形虫病的流行病学的最新研究和发展。 关键词弓形虫；流行病学；防治 《现代农业科技》２００６年９月动物科学 １４７
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 生活常识分享弓形虫抗体igm阳性怎么办 导语：这个情况之前已经有过感染那体内已经有了抗体，怀孕之前还是要去做一个检查确保健康才能有孩子，期间不要再接触宠物了现在这种情况是很常见 这个情况之前已经有过感染那体内已经有了抗体，怀孕之前还是要去做一个检查确保健康才能有孩子，期间不要再接触宠物了现在这种情况是很常见的因为很多人养宠物，就算自己家里没有养难免接触到别人家的，所以一定要确保自己的身体是健康的菜能要宝宝，弓形虫的危害很大会对宝宝的大脑造成损伤。 1.种病对于成人来说，无需治疗，随着人体产生抗体，弓形虫自然会被杀死.当然医治最好了.但对于三个月以下的胎儿有着致命的影响对而言，已经感染了，则产生抗体了，今后再发生暴露，因为已经感染过有抗体，也完全可以抵抗了.即使在怀孕期再次感染，对胎儿也不会有任何影响了.可以完全不去管弓形虫这件事了. 2.前如果感染过弓形虫，但现在已经形成抗体，那么IGG是阳性，如果是新近感染的，IGM是阳性.这种情况是不能怀孕的，得需要经过治疗之后等IGM转阴，IGG阳性之后才能怀孕. 3.弓形虫病目前是没有特效药的，所以很难一次治愈.弓形虫感染有多种简便有效的药物治疗，如磺胺类加乙胺嘧啶，和螺旋霉素等，治疗须按医嘱进行，孕妇感染及时治疗大约可使胎儿感染机会减少这种情况可能需要先进行治疗的，否则对生育有一定的影响，首先家里面不要养宠物了。临床上治疗通常是乙胺嘧啶与磺胺制剂联合应用。 首先不要养宠物了，暂时放到朋友家，宠物的存在很难免保证不会在发生感染，所以一定要注意啦，这种情况很可能会发生二次感染所以一定要先经过检查医生说没问题了就要孩子，要是检查不过关还需
弓形虫病血清学诊断技术 一、实验目的及要求 掌握弓形虫病血清学诊断技术，通过对弓形虫的检测和鉴定，为防治和预防弓形虫病提供科学依据。 二、实验器材 弓形虫虫株、小白鼠、恒温箱、离心机、血清、G3砂蕊漏斗、纤维素滤膜、试管、载玻片、盖玻片、显微镜、荧光显微镜、冰冻切片机、吸管、湿盒、微量血凝试验型V反应板、微量加样器、无菌试管、一次性灭菌注射器、冰箱、胶乳试验玻璃板、常规石蜡切片机、染色缸、水浴锅、微量加样仪、ELISA 板、等。 药品：生理盐水、胰酶、美蓝染液、PBS、弓形虫诊断制剂（IHA抗原）、碘酒、70%酒精、无菌生理盐水、5%柠檬酸钠、DAB、Tris盐酸、牛血清白蛋白(BSA)等。 三、实验方法步骤和操作要领。 弓形虫病血清学诊断技术主要有以下几种方法： （一）染色试验（Sabin—Feldman dye tese，DT） 染色试验（Sabin—Feldman dye tese，DT）。是弓形虫特有的血清学诊断法，此法特异性高而且被认为是标准的诊断方法。其原理是活的弓形虫速殖子与正常血清混合，在37℃作用1h或室温数小时后，大部分滋养体由原来的新月形变为圆形或椭圆形，细胞质对碱性美蓝具有较强的亲和力而被深染。但当弓形虫与含特异性抗体和补体(辅助因子accessoryfactor.AF)的血清混合时，虫体受到抗体和补体的协同作用而变性，对碱性美蓝不着色。计算着色与不着色虫体比例即可判断结果。 1.辅助因子。存在于正常人新鲜血清内，不耐热。用作辅助因子的血清需预先筛选，即将候选血清与弓形虫速殖子混合，37℃作用1h后，有90％以上虫体经美蓝染色后，着色者即含有辅助因子（AF）。含辅助因子血清可分装后于一2O℃保存备用。 2.抗原制备。弓形虫速殖子经腹腔感染小鼠，3d后抽取腹腔液，生理盐水洗涤3次 (300Or/min×lOmin)，收集纯净虫体。也可将小鼠腹腔悬液用胰酶消化，经G3砂蕊漏斗或纤维素滤膜过滤纯化，所获虫体用辅助因子血清稀释至每高倍视野50个左右虫体，即为抗原液。 3.美蓝染液。美蓝10g加入95％乙醇溶液1OOml，滤纸过滤，取3ml加pHll的碱性缓冲液（O.53％Na2CO39.73ml，1.91％Na2B4O70.27ml）lOml。碱性缓冲液临用前配制。 4.待检血清。新鲜血清需经56℃30min灭活，或直接用生理盐水倍比稀释后，每管0.lm1,4℃中次日使用。 5.检测。在稀释血清内每管加上述抗原悬液0.lml，37℃孵育1h，滴加美蓝染液0.O2ml/管，继续温育l5min后，自每管取悬液1滴涂片，加盖玻片镜检。 6.结果判定。计算各管不着色虫体的百分比，以50％虫体不着色管的血清稀释度为该份被检血清的最高抗体滴度。一般认为，抗体滴度1:8为隐性感染;1:956为活动性感染;1:1024以上为急性感染。 DT所测抗体是虫体表膜抗原诱导的特异性抗体。本试验易与肉孢子虫抗血清发生交叉反应；操作中需用活虫；辅助因子血清筛选较烦琐。 （二）荧光抗体试验（FA） 荧光抗体试验（FA）该技术将血清学的特异性和敏感性与显微技术的精确性结合起来，解决了生物学上的许多难题。其原理是：用荧光素对抗原或抗体进行标记，然后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析示踪相应的抗原或抗体的方法。 1.直接荧光抗体试验。