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医学免疫学检验-细胞因子测定及应用优质课件PPT

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《细胞因子的检测》课件

《细胞因子的检测》课件
干细胞治疗
干细胞分泌的细胞因子具有促进组织再生和修复的作用，可用于治 疗多种疾病。
基因治疗
通过将具有治疗作用的基因导入细胞，调控细胞因子的表达，达到治 疗遗传性疾病和罕见病的目的。
04
细胞因子检测的挑战与展望
检测灵敏度与特异性
检测灵敏度
提高检测方法的灵敏度，降低检测限，以便更早地发现细胞 因子的存在。
挑战
面临的挑战包括如何提高检测方法的 实用性和可靠性，以及如何降低检测 成本，使其更易于在临床推广应用。
05
案例分析
案例一：肿瘤细胞因子检测
总结词
肿瘤细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对肿瘤进行早期诊断、病情监测和疗效评估的方 法。
详细描述
肿瘤细胞因子检测通过检测肿瘤细胞分泌的细胞因子，如肿瘤坏死因子、白介素等，来判断肿瘤的存 在、发展阶段和预后情况。该方法具有无创、灵敏度高、特异性强等优点，有助于提高肿瘤的诊断准 确性和治疗效果。
案例三：感染性疾病细胞因子检测
总结词
感染性疾病细胞因子检测是利用细胞因子作 为生物标志物，对感染性疾病进行诊断和病 情监测的方法。
详细描述
感染性疾病细胞因子检测通过检测患者体内 异常升高的细胞因子，如白介素-1、白介素 -6等，来判断感染性疾病的类型和严重程度 。该方法有助于早期发现感染源，为患者提 供及时有效的治疗，同时有助于评估治疗效 果和预后情况。
药物研发
药物筛选
通过检测细胞因子水平的变化，可以筛选出具有潜在治疗作用的 候选药物。
药物疗效评估
在药物研发过程中，检测细胞因子水平的变化可以评估药物的疗 效和作用机制。
个体化治疗
根据患者细胞因子表达水平的差异，可以制定个体化的治疗方案 ，提高治疗效果。

细胞因子检测技术ppt课件

细胞因子检测技术ppt课件

本法常用于IFN等的测定，IFN可诱导细胞产生抑制 病毒RNA和DNA合成的酶，保护细胞不受病毒感染，产 生细胞病变效应（CPE）。
4、趋化活性测定法
趋化因子诱导细胞移动的方式
趋化性(c趋化因子高浓度处作 定向移动的特性,可采用琼脂糖和微孔小室趋化试验。
2、细胞毒活性测定
• 对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细 胞共育将会导致细胞死亡。因此，待测细胞因 子作一系列稀释后加至指示细胞培养体系，以 检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细 胞数量与细胞因子的活性呈正比。应用系列稀 释的细胞因子标准品，制作其活性与剂量关系 的标准曲线，以此作为待测品活性的定量测定 的基础。
结果客观易于自动化； 适用于大标本量的测定
方法的特异性受依赖细 胞株影响；放射性污染
(2) MTT 比色法
特点：不使用放射性核素， 以细胞代谢变化为增殖指征 指示细胞的增殖情况与线粒体代谢活性相关
与同位素掺入法相比
测定步骤类似
掺入物：MTT而非3H-TdR； 反应条件：选用的细胞及其浓度、 培养时间不同
一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞，斑 点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子 量相关
（二）免疫学检测
细胞因子(或受体)与相应的特异性抗体( 单 克隆抗体或多克隆抗体)结合，通过同位素、 荧光或酶等标记技术加以放大和显示， 从 而定性或定量显示细胞因子(或受体)的水平。 1、ELISA法 2、酶联免疫斑点实验 3、流式细胞分析法
1、ELISA方法
ELISA法是应用最为广泛的非均相酶标免疫分析技术，一 步或多步的抗原抗体反应和一步酶促反应构成ELISA的基 本步骤，可作定性或定量分析。ELISA法不仅可以用于细 胞因子检测，也可用于可溶性细胞因子受体或可溶性粘 附因子的测定

细胞免疫检测I细胞因子的检测.ppt

细胞免疫检测I细胞因子的检测.ppt
实验三 细胞免疫检测I： 细胞因子的检测
实验任务
市场上有一广告产品，据说有免疫增强作用， 请设计一个方案证实之（从细胞因子的角 度考虑
方案归纳
人体免疫包括细胞免疫和体液免疫。本次 实验从T细胞分泌的细胞因子着手检测细胞 免疫功能。
确定研究对象，给药途径，剂量，样本量。 给药后检测血清中细胞因子的含量。
竞争法 双抗体夹心法 改良双抗体夹心法 抑制性测定法 抗体夹心法
抑制性测定法
间接法测抗体
本次实验操作步骤
每孔加用pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释的IL-2 抗体，4℃过夜。
封闭：用10%小牛血清封闭，37℃孵育20 分钟，洗涤3次。
于每孔内分别加不同稀释度（如1:5，1:10， 1:20…1:80）的待测血清，PBS空白对照， 阴性对照血清，阳性对照血清各0.1毫升。 37℃孵育30分钟，洗涤3次
金免疫技术
金免疫技术的特点是以胶体金作为示踪标 记物 ，应用于抗原抗体反应的一种新型免 疫标记技术。
酶联免疫分析法
酶联免疫分析法是当前应用最广泛的免疫检测方法。 本法将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化 作用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变 化判断试验结果，可经酶标测定仪作定量分析，敏 感度可达ng水平。
免疫荧光技术免疫荧光技术放射免疫分析法放射免疫分析法酶联免疫分析法酶联免疫分析法化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法金标记技术金标记技术免疫荧光技术是用化学方法使荧光素标记免疫荧光技术是用化学方法使荧光素标记的抗体或抗原与组织或细胞中的相应的抗体或抗原与组织或细胞中的相应抗原或抗体结合进行定性定位检查抗原或抗体结合进行定性定位检查抗原或抗体的方法
常用于标记的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。
目前常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附 法。前者测定细胞表面抗原或组织内的抗原；后者 主要测定可溶性抗原或抗体。

细胞因子的检测和应用(共42张PPT)

细胞因子的检测和应用(共42张PPT)
的基因，如严格控制杂交及洗膜条件，可发现单个碱基的
突变；还可应用PCR结合序列特异引物及上述两种方法检
测某些细胞因子的多态性。
实时荧光PCR技术
• 特点：实时（real time)测定 ，靶核酸扩
增和产物检测同时完成，扩增管在整个测 定过程中完全处于闭管状态，不容易出现 扩增产物对实验室的“污染”，对实验技 术人员的测定操作及实验室设置的要求都 相 对要低一些。
cytokines in cell Detection
by flow cytometry
• 分离待测细胞
• 活化细胞（莫能菌素（monensin)和布雷
菲尔德菌素）
• 封闭细胞表面Fc受体（脱脂奶）
• 细胞表面抗原染色 • 固定和通透细胞膜（多聚甲醛）
• 细胞内细胞因子染色
• 流式细胞分析
SOUTHERN BLOT
(4)细胞因子诱导的产物分析法
• 某些细胞因子可刺激特定细胞产生生物活
性物质，如IL-2诱导骨髓细胞合成组胺、 IL-6诱导肝细胞合成a1-抗胰蛋白酶等。通 过测定所诱生的相应产物，可反映细胞因 子的活性
(5)细胞病变抑制法
• 病毒可造成靶细胞的损伤，干扰素等则可
抑制病毒所导致的细胞病变，因此可利用 细胞病变抑制法检测这类因子。
流式细胞技术
flow cytometry
• 可以测定单个细胞因子产生特性。 • 原理：荧光素标记的细胞因子特异的单克
隆抗体，在一定条件下，与活化的靶细胞 内的特异细胞因子结合，然后用流式细胞 仪分析荧光标记的阳性细胞百分率和平均 荧光强度，其与细胞内细胞因子的含量成 正比。
流式细胞术检测细胞内细胞因子
分子生物学检测法 (DNA )
１．提取细胞基因组的DNA，将其用限制性核 酸内切酶切，

细胞因子医学免疫学课件课件

细胞因子医学免疫学课件课件

02
细胞因子在免疫治疗 中的应用
通过调节细胞因子的分泌，可以治疗 自身免疫性疾病、肿瘤等免疫相关疾 病。
03
细胞因子在疫苗研制 中的应用
疫苗中的某些细胞因子可以刺激机体 免疫应答，增强疫苗效果。
细胞因子在疫苗研制中的应用
细胞因子作为疫苗佐 剂
某些细胞因子可以作为疫苗的佐 剂，增强机体的免疫应答。
细胞因子在疫苗保存 中的作用
细胞因子的产生和作用
细胞因子的产生
细胞因子可由多种免疫细胞如T细胞、B细胞、单核/巨噬细胞等产生，在机 体受到感染或免疫应答等刺激时，这些细胞会产生并释放细胞因子。
细胞因子的作用
细胞因子通过与靶细胞表面的特异性受体结合，发挥调节细胞生长、分化、 增殖和免疫应答等生物学作用，在机体抗感染、抗肿瘤和免疫调节中发挥重 要作用。
其他疾病
细胞因子在衰老过程中的作用
细胞因子网络的变化与衰老相关，调节细胞因子平衡可能有助于延缓衰老进程。
细胞因子在神经退行性疾病中的作用
研究证实细胞因子在帕金森病、阿尔茨海默病等疾病中发挥重要作用，针对这些 细胞因子的治疗可能对神经退行性疾病的防治有益。
05
细胞因子的应用
细胞因子作为药物
细胞因子药物的种类
2023
细胞因子医学免疫学课件
contents
目录
• 引言 • 细胞因子概述 • 主要细胞因子及其功能 • 细胞因子与疾病 • 细胞因子的应用 • 景
细胞因子是免疫系 统中重要调节分子
细胞因子在肿瘤、 感染和自身免疫性 疾病等多种疾病中 具有重要地位
细胞因子在免疫应 答和炎症反应中发 挥关键作用
研究细胞因子在疫苗中的作用 ，设计和开发新型的疫苗，以 提高疫苗的免疫效果和预防范 围。

细胞因子医学免疫学课件课件

细胞因子医学免疫学课件课件

应的平衡。
诱导或抑制炎症反应
02
细胞因子可以诱导或抑制炎症反应，参与感染和组织损伤的防
御。
调节代谢
03
细胞因子可以调节代谢，包括糖、脂肪和蛋白质的合成和分解
。
细胞因子的产生与调控
01
02
03
产生部位
细胞因子主要由免疫细胞 、上皮细胞、内皮细胞等 产生。
产生条件
细胞因子的产生通常在抗 原刺激、炎症反应、细胞 因子自身诱导等条件下诱 导产生。
细胞因子在肿瘤免疫中的作用
总结词
细胞因子在肿瘤免疫中具有双重作用，一方面可以促进肿瘤细胞的生长和扩散，另一方面也可以激活免疫细胞 以清除肿瘤。
详细描述
某些细胞因子，如IL-6和TGF-β，可以促进肿瘤细胞的生长和扩散，而另一些细胞因子，如IFN-γ和TNF-α， 则可以激活免疫细胞以清除肿瘤。因此，针对细胞因子的治疗策略需要仔细平衡其促肿瘤和抗肿瘤的作用。
3
白细胞介素-3（IL-3）
主要由活化的T细胞和肥大细胞产生，主要功能 是刺激多能造血干细胞的定向分化与增殖，产 生各种类型的血细胞。
肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factors）
肿瘤坏死因子-α（TNFα）
主要由活化的单核/巨噬细胞产生，功能是 杀伤靶细胞和促进细胞凋亡，还具有介导炎 症的作用。
细胞因子在炎症反应中的作用
总结词
细胞因子在炎症反应中发挥关键作用，可以促进炎症细胞的聚集和活化，以及炎症介质的释放和修复 。
详细描述
在炎症反应中，细胞因子可以促进炎症细胞的聚集和活化，以及炎症介质的释放和修复。例如，IL-1 、IL-6和TNF-α等细胞因子可以促进炎症反应的加剧，而IL-4、IL-10和TGF-β等细胞因子则可以抑制 炎症反应，促进修复。

细胞因子检测方法ppt课件

细胞因子检测方法ppt课件
用途：检测单个细胞内多个细胞因子；并可区 分表达特定细胞因子的细胞亚群。
细胞内细胞因子的流式细胞仪检测
方法：用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志 组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用 特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞 的最小荧光背景。
特点： 快速
简便：无需组织培养，可以全血分析，无需分离PBMCs； 灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统； 高效：在同一细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，也 可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的细胞亚群； 接近生物体的分析条件：全血检测保留细胞及生化微环境 更准确反映了体内状况。
小结
生物学检测法比较敏感，又可直接测定生物学功能， 是最可靠的方法，适用于各种实验目的，是科研部门 最常用的技术，但需要长期培养依赖性细胞株，检测 耗时长，步骤繁杂，影响因素多，不容易熟练掌握。
免疫学检测法比较简单，迅速，重复性好，但所测定 的只代表相应细胞因子的量而不代表活性，同时敏感 度也低于生物活性检测法（约低10～100倍）。
免反复冻融 微孔板：将未使用的板条用箔纸包好，加上干
燥剂沿四周封口。2-8℃可以1个月左右
检测方法的进展
高通量细胞因子检测
CBA(Cytometric Bead Array)是一种微珠多 用途检测分析技术，它由一系列的微珠组合来 捕获并结合流式细胞仪技术检测细胞培养液、 EDTA血浆、血清样本中被检测物质的量。其 采用夹心法分析策略，与传统的ELISA分析技 术相比，此方法可以同时检测多项指标。用已 知的标准品和对照标准曲线就可以得出被测样 本的浓度。此分析方法不受样本量的限制，而 且可以得到一个样本的多个数据。
夹心ELISA
缺点：不能显示出单个细胞产生细胞因子的同 一性和频率性的直接信息

《细胞因子检测概述》课件

《细胞因子检测概述》课件

化学发光法
化学发光法是一种利用化学发光反应来检测细胞因子的方 法。这种方法具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点， 适用于痕量细胞因子的检测。
化学发光法主要包括酶促化学发光和直接化学发光等方法 。这些方法在临床诊断、药物研发和环境监测等领域有广 泛应用。
荧光定量PCR法
荧光定量PCR法是一种基于PCR技术 的细胞因子检测方法。通过荧光染料 或探针标记的特异性引物，实现对细 胞因子基因的定量检测。这种方法具 有高灵敏度、高特异性和可定量等优 点。
THANKS
感谢观看
细胞因子在免疫应答、炎症反应、造 血等生理和病理过程中发挥重要作用 。
细胞因子种类
白细胞介素（IL）
如IL-1、IL-2、IL-6等，具有调节免疫和炎 症反应的功能。
干扰素（IFN）
如IFN-α、IFN-β、IFN-γ等，具有抗病毒、 抗肿瘤和免疫调节作用。
肿瘤坏死因子（TNF）
如TNF-α、TNF-β等，具有抗肿瘤和免疫调 节作用。
案例二：自身免疫性疾病细胞因子检测
总结词
自身免疫性疾病细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对自身免疫性疾病进行诊断和病情监测的方法。
详细描述
自身免疫性疾病细胞因子检测通过检测患者体内异常升高的细胞因子，如IL-17、IL-23等，来判断自身免疫性疾 病的存在、发展阶段和治疗效果。这种检测方法有助于提高自身免疫性疾病的诊断准确性和治疗效果，为患者提 供更好的治疗选择。
05
细胞因子检测案例分析
案例一：肿瘤细胞因子检测
总结词
肿瘤细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对肿瘤进行早期诊断、病情监测和疗效评估的方 法。
详细描述
肿瘤细胞因子检测通过检测肿瘤细胞分泌的细胞因子，如IL-6、TNF-α等，来判断肿瘤的存在、发展 阶段和治疗效果。这种检测方法具有无创、灵敏度高、特异性强的优点，有助于提高肿瘤的诊断准确 性和治疗效果。

免疫学基础与病原生物学-细胞因子的检测精品PPT教学课件

免疫学基础与病原生物学-细胞因子的检测精品PPT教学课件

干扰因素 IL-2、IL-4 IL-4
IL-4
GN-CSF、IL-5
IL-6、EPO
IL-2
IL-4
24
各类细胞因子检测的常用靶细胞
细胞因子 IL-6
IL-7 IL-8 GM-CSF
TNF/ IFN
2020年10月2日
实验系统
干扰因素
B9（M）增殖法
IL-4、IL-11
BM60（H）增殖法
Clone-IXN/2b（M）增殖法
2020年10月2日
23
各类细胞因子检测的常用靶细胞
细胞因子 IL-1
IL-2 IL-3
实验系统 D10（M）增殖法 EL-4（M）增殖法 A352（H）增殖抑制法 CTLL（M）增殖法 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法
IL-4 IL2-0520年10月2日
CTLL（M）增殖法 BCL-1（M）增殖法
35
第四节 细胞因子受体的检测
一、细胞因子受体的类型 二、细胞因子受体的检测
2020年10月2日
36
细胞因子受体的类型
膜型细胞因子受体 分泌型细胞因子受体
2020年10月2日
37
细胞因子受体的检测方法
膜型细胞因子受体的检测 配体检测法 抗体检测法
分泌型细胞因子受体的检测 标记抗体检测法
2020年10月2日
2020年10月2日
20
细胞
趋化因子
滤膜：计数受趋化细胞
趋化试验原理示意
2020年10月2日
21
检测中的操作注意要点
靶细胞的选择与培养
检测标本的制备
显示检测结果
2020年10月2日
22
靶细胞的选择与培养
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殖法
中性粒细胞（M、H）趋化法
TF-1（H）增殖法
IL-3、IL-5
IL-6、IL-5
L929 （M、H）细胞毒法
wish（H）病变保护法
IFN- 、 IFN-
L929（M）病变保护法
IFN- 、 IFN2-5
检测标本的准备
1、分离特定的产生细胞 2、对产生细胞进行诱导、激活 3、选择适当的收集时间
的酶标抗体为一抗或二抗，分别作直接或间接法。
干扰因素 IL-2、IL-4 IL-4
IL-4
GN-CSF、IL-5
IL-6、EPO
IL-2
IL-4
24
第一课件网网站
各类细胞因子检测的常用靶细胞
细胞因子 IL-6
IL-7 IL-8 GM-CSF
TNF/ IFN
2021/02/01
实验系统
干扰因素
B9（M）增殖法
IL-4、IL-11
BM60（H）增殖法
难以标准化和自动化 ➢细胞代谢活性测定方法
3H-TdR、125I-UdR掺入法或MTT等比 色法 ➢细胞代谢产物测定法
代谢产物荧光强度测定法和指示细胞表 面标记或可溶性分子测定法
2021/02/01
28
(1) 放射性核素掺入法
通过检测细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方 法。在细胞的增殖过程中，DNA合成的增加使得指示细胞对 核苷或碱基的需求增多，若将核苷标记上可以示踪的同位素（ 3H/125I ），通过检测细胞内的同位素含量，则可反映细胞增 殖的程度。
2021/02/01
4
以生物学作用进行划分的分类
白细胞介素（Interleukin）—— IL-1、IL-2、…… IL-18 干扰素（Interferon）—— IFN-、IFN-、IFN- 肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor）—— TNF- 、 TNF- 集落刺激因子（Colony-stimulating factor）—— M-CSF、G-CSF 转化生长因子（Transforming growth factor）—— TGF- 趋化因子（Chemokine）—— IL-8、GROs、MCP-1 生长因子（Growth factor）—— EGF、FGF、IGF、PDGF
2021/02/01
17
第二节 细胞因子检测的方法与原理
一、细胞因子的细胞生物学检测
二、细胞因子的免疫学检测
三、细胞因子的分子生物学检测
2021/02/01
18
细胞因子的细胞生物学检测
1、检测方法与原理 2、检测中的操作注意要点
2021/02/01
19
检测方法与原理
细胞增殖或增殖抑制试验 细胞病变抑制试验 细胞毒试验 细胞趋化试验
2021/02/01
5
各
类
细
胞
因
子
间
关
CSFs
系
Chemokines
ILs IFNs TNFs TGFs
2021/02/01
6
1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、丰余性（redundancy） 6、协同性 7、拮抗性 8、网络性
结果客观易于自动化； 适用于大标本量的测定
2021/02/01
方法的特异性受依赖细 胞株影响；放射性污染
29
(2) MTT 比色法
特点：不使用放射性核素， 以细胞代谢变化为增殖指征 指示细胞的增殖情况与线粒体代谢活性相关
与同位素掺入法相比
测定步骤类似
2021/02/01
掺入物：MTT而非3H-TdR； 反应条件：选用的细胞及其浓度、 培养时间不同
2021/02/01
26
显示检测结果
1、细胞增殖状态的显示： 放射性核素掺入法、 胞内酶活性显示法 活细胞染色法 细胞荧光测定法
2、细胞毒或细胞病变状态的显示
活细胞染色法
胞内酶活性显示法
DNA断片测定法
2021/02/01
27
细胞增殖检测方法分类
➢直接计数法 简便、直观,但费时、主观因素影响大、
30
生物学活性测定方法学评价
敏感性较高 特异性不高 操作繁琐 易受干扰
2021/02/01
31
细胞因子的免疫学检测
分泌型细胞因子的检测 细胞内细胞因子的检测
2021/02/01
32
ELISA
特异、简便 易于推广和标准化等优点 可同时检测大量标本且试验废弃物便于处 理 细胞因子测定的首选方法
敏感性偏低
2021/02/01
7
细胞因子检测的特点与方法
1、检测的特点 2、检测的方法
2021/02/01
15
细胞因子检测的特点
免疫原性较弱 样品含量低 样品具有时效性 生物效应特异性差
2021/02/01
16
细胞因子检测的方法
免疫学检测方法——抗原性检测
细胞生物学检测方法——生物活性检测
分子生物学检测方法——基因表达检测
第一课件网网站
2021/02/01
1
第一节 细胞因子检测概述
一、细胞因子的类型与作用特点 二、细胞因子检测的特点与方法
2021/02/01
2
细胞因子
由非神经—内分泌细胞产 生的一大类与免疫应答活动 密切相关的低分子蛋白与多 肽。
2021/02/01
3
细胞因子的类型与作用特点
1、细胞因子的分类 2、细胞因子的作用特点
2021/02/01
20
细胞
趋化因子
2021/02/01
滤膜：计数受趋化细胞
趋化试验原理示意
21
检测中的操作注意要点
靶细胞的选择与培养
检测标本的制备
显示检测结果
2021/02/01
22
靶细胞的选择与培养
1、对所测的细胞因子有特异的敏感性
2、易培养、保存、生物学特性稳定
3、有良好的生长状态
4、种属适配
不能判断细胞因子的生物学活性。
2021/02/01
33
ELISPOT
2021/02/01
34
酶联免疫斑点试验(ELISPOT或ElisaSpot)
在包被有待测细胞因子抗体的微孔板上，加 基 入可分泌相应细胞因子的待测细胞，经在有或无 本 刺激物存在的条件下培养，待测细胞分泌细胞因
原 子于其周围，并被板上的特异性抗体捕获。后续 理 的反应如同ELISA，即在洗去细胞后视用于试验
2021/02/01
23
各类细胞因子检测的常用靶细胞
细胞因子 IL-1
IL-2 IL-3
实验系统 D10（M）增殖法 EL-4（M）增殖法 A352（H）增殖抑制法 CTLL（M）增殖法 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法
IL-4 IL2-0521/02/01
CTLL（M）增殖法 BCL-1（M）增殖法