下载文档原格式
草鱼肠道不动杆菌的分离鉴定及药敏试验不动杆菌属( Acinetobacter )菌株在自然界广泛存在，主要分布在水体和土壤中，易在潮湿环境中生存，目前确定的不动杆菌属至少有10多个种[1-3] ，包括鲍曼不动杆菌 ( Acinetobacter baumanii )、鲁菲不动杆菌( Acinetobacterlwoffi )、溶血不动杆菌( Acinetobacter haemolytius )、琼氏不动杆菌( Acinetobacter junii )、约翰逊不动杆菌(Acinetobacter johnsonii )、醋酸?｝不动杆菌 (Acinetobacter calcoaceticus )，以及新发现的厦门不动杆菌( Acinetobacter xiamenensis )、不动杆菌( Acinetobacter guillouiae )等。
近年来，一般认为不动杆菌多为条件致病菌，其中鲍曼不动杆菌引起医院内感染频发，耐药菌株不断增多，因此该属细菌被广泛关注[4] 。
最近，国内学者从异育银鲫、锦鲤等鱼类体内分离到致病性鲍曼不动杆菌、琼氏不动杆菌等[5-6] 。
但是，目前尚未见鱼源厦门不动杆菌分离鉴定相关研究。
本研究以草鱼为研究对象，从其肠道中分离获得 1 株不动杆菌，并进行细菌形态学、生理生化以及16S rDNA测序等分析鉴定为厦门不动杆菌，这为草鱼不动杆菌的分离鉴定以及肠道微生态研究积累了科学资料。
1 材料与方法1.1 材料草鱼购自徐州市某市场。
LB 培养基、细菌生化微量鉴定和药敏试纸均购自杭州微生物制剂XX公司。
细菌基因组DNA提取试剂盒、DNA交回收试剂盒、pMD18-T Master Mix均购自TaKaRa 公司。
1.2 方法1.2.1 细菌分离、鉴定、理化性质及药敏试验参照沈晓静等的方法[7] 进行细菌分离纯化、革兰氏染色及生化鉴定，将纯化培养后的细菌分别接种于21种生化管中，28 C培养24〜28 h,观察分离细菌的生理生化反应。
鲍曼不动杆菌分子流行病学研究进展陈威震;陈良安【摘要】介绍了鲍曼不动杆菌的分子流行病学特征，并比较了鲍曼不动杆菌几种分子分型方法的优缺点。
【期刊名称】《海峡科学》【年(卷),期】2011(000)010【总页数】4页(P72-75)【关键词】鲍曼不动杆菌;分子流行病学;分子分型【作者】陈威震;陈良安【作者单位】解放军总医院呼吸科;解放军总医院呼吸科【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5流行病学的研究对象是某种疾病在特定人群中发生、传播、预防、控制的影响因素，暴发性感染及其病原微生物的研究是流行病学研究的重要内容。
分子流行病学是流行病学的重要领域，它的主要工作是通过追溯病原体来源，为判断暴发性感染的范围、扑灭疫情、制订预防策略提供重要依据。
上世纪80年代以来，DNA分子分型作为分子流行病学的重要技术迅猛发展，并为流行性感染的预防和控制提供了重要信息。
1 不动杆菌的分子流行病学不动杆菌属（Acinetobacter）是需氧、不发酵糖类的革兰氏阴性杆菌，可分为6种：醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）、鲁菲不动杆菌（A. lwoffi）、鲍曼不动杆菌（A. baumanii）、溶血不动杆菌（A. haemolytius）、琼氏不动杆菌（A. junii）和约翰逊不动杆菌（A. johnsonii）。
不动杆菌是机会致病菌，鲍曼不动杆菌、不动杆菌属 3型和13TU型是主要病原菌，常引起重症监护病房患者的呼吸机相关性肺炎、皮肤和软组织感染、创面感染、泌尿系统感染、继发性脑膜炎和败血症[1]。
鲍曼不动杆菌、不动杆菌属3型和13TU型等临床相关菌株与环境菌株醋酸钙不动杆菌具有高度相似的生化和遗传表型，在临床诊断实验室常难以区分，因而被统称为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体（A.calcoaceticus–A. baumannii complex，Acb complex）[2]。
不动杆菌属3型、13TU型在临床上相对少见，但这可能与VITEK等临床常用菌种鉴定系统不能将其与鲍曼不动杆菌进行鉴别有关。
不动杆菌属acinetobacter不动杆菌属（Acinetobacter）分为7种，即醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）、鲁菲不动杆菌（A. lwoffi）、鲍曼不动杆菌（A. baumanii）、溶血不动杆菌（A. haemolytius）、琼氏不动杆菌（A. junii）、约翰逊不动杆菌（A. johnsonii）和抗辐射不动杆菌。
不动杆菌属(Acinetobacter)非发酵菌是条件致病菌，当机体抵抗力降低时易引起机体感染，是引起医院内感染的重要机会致病菌之一。
本菌可引起呼吸道感染、败血症、脑膜炎、心内膜炎、伤口及皮肤感染、泌尿生殖道感染等。
重症者可导致死亡。
多见于犬科动物，和老年人以及婴幼儿。
编号Strain Number IFFI 10213拉丁学名Latin Name Acinetobacter sp.中文菌名不动杆菌拉丁别名Other Strain Name菌株来源History ←IFO 13644 ←ATCC 31105分离基物Habitat参考文献reference用途Usage The strain used for produces L(+) tartaric acid with medium GYA培养温度Temperature 30 ℃培养基Media Number 197备注一群不发酵糖类，氧化酶阴性，不能运动的革兰阴性杆菌。
本属细菌为革兰阴性杆菌,大小为(0.9~1.6)μm×(1.5~2.5)μm，革兰染色有时不易脱色,多为球杆状、常呈双排列,可单个存在，有时形成丝状和链状，黏液型菌株有荚膜，无芽孢，无鞭毛。
本属细菌专性需氧，最适生长温度为35℃;营养要求不高,在普通培养基上生长良好;在麦康凯培养基上生长良好，无色或粉红色菌落，部分菌株呈黏液状;在血平板上形成圆形、光滑、湿润、边缘整齐的灰白色菌落(溶血不动杆菌可产生β溶血)。
氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性，为该菌的典型“三阴”。
约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii)的分离及其聚磷特性的研究连丽丽;姜华;朱昌雄【摘要】采用定性、定量相结合的方法,从城市污水中筛选到一株高效聚磷菌(CH-1),经生理生化特征及16 rDNA序列分析,鉴定该菌株为不动杆菌属的约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii).进行了该菌株的生长曲线、含磷培养液的pH、磷酸盐浓度变化及去磷效果等测定.结果表明:该菌在培养6～8 h时繁殖量达到最大(0.54 mg/L),培养液pH值达到最高(8.88),而磷酸盐浓度降至最低(1.08 mg/L).好氧条件下,含磷培养液培养72h后,培养液中磷浓度由10 mg/L降至3.476 mg/L,去磷率高达65.24%.CH-1菌处理模拟废水的除磷率高达68.88%,具有较强的聚磷能力.【期刊名称】《辽宁农业科学》【年(卷),期】2009(000)002【总页数】4页(P18-21)【关键词】聚磷菌;筛选;聚磷特性【作者】连丽丽;姜华;朱昌雄【作者单位】辽宁师范大学生命科学学院,辽宁,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,辽宁,大连,116029;中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所,北京,100081【正文语种】中文【中图分类】农业科学辽宁农业科学 2009(2)：18~21 LiaoningAgriculturalSciences文章编号：1002-1728( 2009) 02-0018-04约氏不动杆菌（ Acinetobacterjohnsonii ）的分离及其聚磷特性的研究连丽丽1 ，姜（1 ．辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连 116029 ；京 100081 ）华 1 ，朱昌雄2 2．中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所，北摘要：采用定性、定量相结合的方法，从城市污水中筛选到一株高效聚磷菌 (CH-1) ，经生理生化特征及16rDNA 序列分析，鉴定该菌株为不动杆菌属的约氏不动杆菌（ Acinetobacterjohn,sonii ）。
高效聚磷菌不动杆菌属的磷转化途径及基因组分析高效聚磷菌不动杆菌属的磷转化途径及基因组分析摘要：磷是生物体中不可缺少的元素之一，在生物界中，许多细菌都能利用磷转化为无机磷盐，以满足其生长和代谢的需要。
高效聚磷菌不动杆菌属（Polyphosphate Accumulating Organisms，简称PAOs）属于一类能够高效地将有机磷转化为聚磷酸盐的细菌。
本文通过对该属细菌的基因组进行分析，揭示了其磷转化途径以及其中一些关键基因的功能。
结果表明，PAOs的磷转化过程与一般细菌有所不同，存在着一些特殊的途径和调控机制。
1. 引言磷是细胞中不可或缺的元素之一，不仅参与DNA、RNA、ATP等重要分子的合成过程，还是细胞膜中磷脂的组成成分。
然而，自然界中可利用的无机磷源有限，且在水体中富集的磷会导致富营养化等环境问题。
因此，细菌通过转化无机磷盐为有机磷，或是将有机磷聚合为聚磷酸盐来适应不同环境条件，成为了一种常见的磷代谢途径。
2. 高效聚磷菌不动杆菌属的磷转化途径高效聚磷菌不动杆菌属是一类多能氧杆菌，能够通过特殊的磷转化途径积累大量的聚磷酸盐。
该途径主要包括无机磷盐的摄取、有机磷的降解与转化、聚磷酸盐的合成和分解等几个重要步骤。
2.1 无机磷盐的摄取PAOs通过细胞膜上的磷转运蛋白将周围环境中的无机磷盐转运进细胞内。
这些磷转运蛋白由多个基因编码，其中有专门负责摄取无机磷盐的磷酸盐转运 ABC 运输体、无机磷盐离子通道等。
2.2 有机磷的降解与转化PAOs能够通过外源磷酸酯酶、核苷酸酸性磷酸酯酶等酶类来降解有机磷化合物，将其转化为无机磷盐以供细胞内代谢使用。
此外，一些PAOs还表达有机磷转化酶，能够直接将有机磷转化为聚磷酸盐。
2.3 聚磷酸盐的合成和分解PAOs合成聚磷酸盐的过程主要是通过一系列的多磷酸化酶参与的反应来进行的。
这些酶由多个基因编码，其中最为重要的是多磷酸激酶（PPK）和聚磷合成酶（PPTS）。
1株高效聚磷节杆菌的分离鉴定及其聚磷特性研究陈燕;杨小龙;曹郁生【摘要】[ Objective ] The aim was to reduce the content of phosphorus in water so as to control the water eutrophication, and select phosphorus accumulating bacteria for biological phosphorus removal. [ Method ] With the phosphorus accumulating capacity as the main index, the bacteria were isolated and selected, their culture conditions were optimized so as to improve their phosphorus accumulating capacity. Then the isolated high-efficient phosphorus accumulating bacteria were identified based on the biochemical characteristics and molecular biological analysis. [ Result ] Among the nine effective phosphorus accumulating bacteria isolated from sludge and sewage, J-12 showed the highest phosphorus accumulating capacity. 16S rDNA sequence analysis indicated that the homology of J-12 and Arthrobacter sp. reached 99％, taking into account its growth characteristics and physiological and chemical properties, it was preliminarily determined that J-12 belonged to one species of Arthrobacter sp. , the Arthrobacter sp. with high-efficient phosphorus accumulating capacity hasnt been reported. The study showed that, after 10 h of culture under 32 ℃, 7.0 of pH and 4 ml addition of trace element solution, J-12 could reduce the total phosphorus content in the synthetic water from 20. 0 mg/L to 0. 1 mg/L, its phosphorus accumulating rate could reach above 95％. [ Conclusion] The selected arthrobacter with high-efficient phosphorus accumulating capacity had potential applicationprospect in sewage treatment and aquaculture.%[目的]为降低水中磷含量以控制水体富营养化,从自然界筛选高活性的聚磷菌,用于生物除磷.[方法]以聚磷效果为主要指标,通过富集分离筛选细菌,并对其培养条件优化,提高其聚磷能力.根据生理生化反应特点以及分子生物学分析,对分离到的高效聚磷菌进行鉴定.[结果]从污水和污泥中分离到9株有效聚磷菌,其中菌株J-12的聚磷能力最强.16S rDNA序列分析显示,J-12与节杆菌属的同源性达99%,结合生长特性、生理生化特性,初步确定该菌株属于节杆菌属的一个种(Arthrobacter sp.),尚未见到具有高效聚磷作用的节杆菌的报道.研究表明,J-12在生长温度32 ℃,pH值7.0,微量元素液添加量为4 ml的条件下,培养10 h,可使合成废水中总磷由20.0 mg/L降至0.1 mg/L,聚磷率达95%以上.[结论]筛选到1株具有高效聚磷菌能力的节杆菌,在污水治理和水产养殖业中有着潜在的应用前景.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)001【总页数】4页(P447-450)【关键词】节杆菌;聚磷特性;同源分析;鉴定【作者】陈燕;杨小龙;曹郁生【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,南昌大学中德联合研究院,江西南昌,330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,南昌大学中德联合研究院,江西南昌,330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,南昌大学中德联合研究院,江西南昌,330047【正文语种】中文【中图分类】Q939水是人类生存不可或缺的物质。
2019年第3期（总第358期）畜禽业疫病防治一株猪源约翰氏不动杆菌的分离鉴定吴立志（李炉乡畜牧兽医站，吉林梅河口135001）摘要：于病死猪肺脏中分离得到一株约翰氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）革兰氏染色结果呈阴性棒状杆菌。
通过PCＲ检测方法检测分离株16S rDNA基因序列，经BLAST比对后确定该菌为约翰氏不动杆菌。
该菌对昆明鼠具有致病性，半数致死量为3．0ˑ108CFU/mL。
最小抑菌浓度（MIC）试验结果中该分离株对氨苄西林、庆大霉素、四环素、氟苯尼考呈耐药。
关键词：约翰不动杆菌；分离鉴定；半数致死量；最小抑菌浓度DOI：10．19567/j．cnki．1008－0414．2019．03．0380引言约翰氏不动杆菌为革兰氏阴性短杆菌，无鞭毛，不形成芽孢。
不动杆菌引起人类、动物发病日渐增多，约翰氏不动杆菌可在污水或土壤中分离。
基于16S rDNA基因序列建立系统进化树发现约翰氏不动杆菌、醋酸钙不动杆菌与溶血性不动杆菌亲缘性较近［1］。
引发疾病的不动杆菌多为条件致病菌，常引发皮肤感染、呼吸道感染与菌血症等［2］。
本研究于死猪肺脏中分离得到一株约翰氏不动杆菌，经动物回归试验发现该菌具有致病力1材料与方法1．1病料来源与实验动物吉林省某养殖户家中出现多头病死猪，病死猪临床表现为犬坐喘咳，高热，四肢末端皮肤有散在溃烂但无水泡。
对送检病死猪进行剖检，病变主要出现在呼吸道，具有典型的肺炎症状，气管处呈环状出血；脾脏肿大，膀胱壁有大量出血点。
健康昆明小鼠30只，质量均约25g，购自于吉林大学实验动物中心。
1．2主要试剂TSA培养基、TSB液体培养基、细菌生化微量鉴定管购自杭州微生物试剂有限公司。
10ˑBuffer，dNTP，EˑTap酶，pMD18－T vector载体，大肠杆菌DH5ɑ感受态细胞，切胶回收试剂盒均购自宝生物工程技术服务公司产品。
1．3细菌分离培养与染色镜检无菌注射器采集死猪胸腔积液，以涂布棒均匀涂于TSA平板内，置于37ħ温箱需氧培养24h后进行纯化培养，挑单菌落于TSB液体培养基中培养备用。
一株聚磷菌的分离、鉴定及其除磷特性分析摘要：本研究从污水处理厂的污泥中分离出一株聚磷菌，并经过形态学、生理生化及基因分析鉴定其为菌种Pseudomonas aeruginosa。
利用此菌株研究了其在不同pH、温度条件下的生长情况，并探究了其除磷特性，结果表明该菌株能够在pH 6.5-7.5、温度30-35℃的条件下表现出较好的生长状态，并能够有效地利用污水中存在的磷酸盐类物质进行除磷作用，具有较好的应用前景。
关键词：聚磷菌；除磷；Pseudomonas aeruginosa；生理生化分析；基因分析正文：一、引言污染是当今社会面临的一大挑战，其中水污染是一个日趋严重的问题，而高浓度的磷酸盐的污染更是影响了我国的水资源状况和生态环境。
因此寻找一种高效、低成本的磷酸盐除去技术具有极其重要的现实意义。
其中聚磷菌具有很好的应用前景，因其可以通过生物吸收的方式将磷酸盐从水中除去。
因此本研究分离鉴定一株聚磷菌，并探究了其除磷特性，以期为其在水处理中的应用提供理论和实践支持。
二、材料与方法1.材料本研究采用来自于某市污水处理厂的污泥样品，并使用5%的凝胶过筛进行样品初步处理。
2.分离鉴定根据经过处理的污泥样品，采用接种平板、坡菌培养、肉汤稀释等方法进行菌种分离，最终筛选出一株聚磷菌菌株，对其进行了形态学和生理生化特性判定。
形态学特点：本研究所得的菌株为荧光绿色的杆菌，常见于自然水体中。
在营养琼脂平板上生成绿色润滑状菌落。
生理生化特性：本研究所得的菌株在28℃的条件下可以达到最佳生长状态，ph 范围为6.5-7.5，对葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖酸和黄嘌呤的利用情况也进行了研究。
基因分析：采用PCR 等方法对其16s rRNA 基因进行扩增和序列分析，利用HOMD 数据库对其进行了物种定位，并最终鉴定菌株为Pseudomonas aeruginosa。
3.除磷特性研究本研究选取了典型的对数期菌群阶段的聚磷菌培养液作为实验对象，利用紫磷钼酸钠法测定Pseudomonas aeruginosa 在不同浓度的HPO4-2 和PO4-3 下的生长情况，并采用虫草菌磷酸酶法分析其对废水中磷酸盐的除磷能力。
约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii)的分离及其聚磷特性的研究连丽丽;姜华;朱昌雄【摘要】采用定性、定量相结合的方法,从城市污水中筛选到一株高效聚磷菌(CH-1),经生理生化特征及16 rDNA序列分析,鉴定该菌株为不动杆菌属的约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii).进行了该菌株的生长曲线、含磷培养液的pH、磷酸盐浓度变化及去磷效果等测定.结果表明:该菌在培养6～8 h时繁殖量达到最大(0.54 mg/L),培养液pH值达到最高(8.88),而磷酸盐浓度降至最低(1.08 mg/L).好氧条件下,含磷培养液培养72h后,培养液中磷浓度由10 mg/L降至3.476 mg/L,去磷率高达65.24%.CH-1菌处理模拟废水的除磷率高达68.88%,具有较强的聚磷能力.【期刊名称】《辽宁农业科学》【年(卷),期】2009(000)002【总页数】4页(P18-21)【关键词】聚磷菌;筛选;聚磷特性【作者】连丽丽;姜华;朱昌雄【作者单位】辽宁师范大学生命科学学院,辽宁,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,辽宁,大连,116029;中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所,北京,100081【正文语种】中文【中图分类】农业科学辽宁农业科学 2009(2)：18~21 LiaoningAgriculturalSciences文章编号：1002-1728( 2009) 02-0018-04约氏不动杆菌（ Acinetobacterjohnsonii ）的分离及其聚磷特性的研究连丽丽1 ，姜（1 ．辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连 116029 ；京 100081 ）华 1 ，朱昌雄2 2．中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所，北摘要：采用定性、定量相结合的方法，从城市污水中筛选到一株高效聚磷菌 (CH-1) ，经生理生化特征及16rDNA 序列分析，鉴定该菌株为不动杆菌属的约氏不动杆菌（ Acinetobacterjohn,sonii ）。
进行了该菌株的生长曲线、含磷培养液的 pH 、磷酸盐浓度变化及去磷效果等测定。
结果表明：该菌在培养 6 —8h时繁殖量达到最大(0.54mg/L) ，培养液 pH 值达到最高(8.88) ，而磷酸盐浓度降至最低 (1.08mg/L) 。
好氧条件下，含磷培养液培养 72h 后，培养液中磷浓度由 10mg/L 降至 3.476mg/L ，去磷率高达 65.24% 。
CH-I 菌处理模拟废水的除磷率高达 68.88% ，具有较强的聚磷能力。
关键词：聚磷菌；筛选；聚磷特性中图分类号：X172文献标识码：B近年来，随着工农业生产的发展、人口的急剧膨胀，大量含氮、磷丰富的污水未经处理或处理不达标便被排入水体中，引起藻类大量繁殖，导致绝大多数地表水体出现富营养化现象。
研究证明，磷是水体富营养化的最主要的限制性因素… ，采用生物修复技术，处理污废水中的磷，无二次污染、效果好，已成为人们的共识，所以，生物除磷是当前环保领域的研究热点。
国内外学者研究发明了多种生物除磷工艺‘ 舶，但是，目前对生物除磷机理的研究尚不完善，筛选出来的高效聚磷菌也比较少。
鉴于此，本文以筛选高效聚磷菌为出发点，从山东省微山县筛选出了一株具有高效聚磷能力的细菌（ CH-1 ），并研究了该菌株的聚磷特性以期为污水的生物修复、除磷菌的应用提供理论依据及优良菌种。
1材料与方法1.1 水样采集水样采自山东省微山县城内污水。
1.2 培养基使用的培养基及配方有 (l)YG 培养基-31 ； (2) MOPS培养基(10 × )‘ 引；(3) 聚磷培养液‘5] ；(4)牛肉膏固体培养基‘ 引；(6) 模拟废水‘ 叫。
1.3聚磷菌的筛选 (1)菌种的分离、纯化：采用常规的微生物学方法‘ 引；(2) 蓝白斑筛选：将筛选出的菌种接种到 MOPS 限磷、过磷平板中，28 ℃ 条件下培养2d观察蓝白斑生长情况；(3) 菌体多聚磷酸盐 ( poly-P)的染色：染色方法采用甲苯胺蓝染色法‘ 引。
1.4 好氧试验和培养液中PO 。
3 一P 变化特点的测定培养液中的 P04.3 ．P 含量的测定采用钼酸铵分光光度法【 9 。
1.5菌种鉴定形态观察及生理生化鉴定：根据《常见细菌系统鉴定手册》！… 1 和《伯杰氏细菌鉴定手册》Lj 。
16SrDNA序列测定及同源性分析：DNA 提取使用北京全式金公司的 easypuregenomicDNA 提取试剂盒；PCR 反应引物‘ ” 3 为：PA:5 ’-AGAGTTT-。
收稿日期： 2009- 02-23 基金项目：“1 ‘ 一五” 国家水体污染控制与治理科技重大专项 ( 2008ZX07425) ；辽宁省教育厅项目(2008S135)作者简介：连丽丽（ 1982- ），女，山东省威海人，辽宁师范大学生命科学学院，硕士研究生。
研究方向为污染环境的生物修复。
辽宁农业科学2009(2) LiaoningAgriculturalSciences文章编号：1002-1728( 2009) 02-0018-04约氏不动杆菌（ Acinetobacterjohnsonii ）的分离1姜（．宁师范大学生命科学学院，辽宁大连 116029 ；京100081）华朱昌雄2摘要：采用定性、定量相结合的方法，从城市污水中筛选到一株高效聚磷菌(CH-1) ，经生理生化特征及 16rDNA 序列分析，鉴定该菌株为不动杆菌属的约氏不动杆菌（ Acinetobacterjohn,sonii ）。
进行了该菌株的生长曲线、含磷培养液的 pH 、磷酸盐浓度变化及去磷效果等测定。
结果表明：该菌在培养 6 — 8h时繁殖量达到最大(0.54mg/L) ，培养液 pH 值达到最高(8.88) ，而磷酸盐浓度降至最低 (1.08mg/L) 。
好氧条件下，含磷培养液培养 72h 后，培养液中磷浓度由 10mg/L 降至 3.476mg/L ，去磷率高达 65.24% 。
CH-I 菌处理模拟废水的除磷率高达 68.88% ，具有较强的聚磷能力。
近年来，随着工农业生产的发展、人口的急剧膨胀，大量含氮、磷丰富的污水未经处理或处理不达标便被排入水体中，引起藻类大量繁殖，导致绝大多数地表水体出现富营养化现象。
研究证明，磷是水体富营养化的最主要的限制性因素…染、效果好，已成为人们的共识，所以，生物除磷是‘舶但是，目前对生物除磷机理的研究尚不完善，筛选出来的高效聚磷菌也比较少。
鉴于此，本文以筛选高效聚磷菌为出发点从山东省微山县筛选出了一株具有高效聚磷能力的细菌（ CH-1 ），并研究了该菌株的聚磷特性材料与方法 1.1水样采集水样采自山东省微山县城内污水。
1.2培养基使用的培养基及配方有 (l)YG 培养基-31；引；(3)聚磷培养液5] (4)牛肉膏固体培养基；(6) 模拟废水叫 1.3方法；(2)蓝白斑筛选：将筛选出的菌种接种到MOPS限磷过平板中，28℃条件下培养2d法1.4好氧试验和培养液中PO 。
3一P变化特点的测【9 1.5！…和《伯杰氏细菌鉴定手册》Lj 16SrDNA使用北京全式金公司的 easypuregenomicDNA 提”为：PA:5’-AGAGTTT-收稿日期： 2009- 02-23基金项目：“一五国家水体污染控制与治理科技重大专项( 2008ZX07425) ；辽宁省教育厅项目(2008S135)作者简介：连丽丽（ 1982-），女，山东省威海人，辽宁师范大学生命科学学院，硕士研究生。
研究方向为污染环境的生物修复。
第 2 期连丽丽等：约氏不动杆菌（ Acinetobacierjohnsonii ）的分离及其聚磷特性的研究 GATCCTGGCTCAG-3’ :PBl:5 ’-TACGGCTACCTT- GTTACGACTT -3'; PCR扩增条件参考文献‘ ” 3 ；PCR扩增产物测序由北京三博远志公司完成；测序结果在GenBank中进行比对和同源性分析。
1.6菌体生长曲线和培养液 pH 值变化特点的测定采用常规的微生物学方法‘ 6] 。
1.7菌体含磷量测定总磷的测定采用国标方法‘” 1 。
1.8模拟废水中磷的去除效果制备种子液，取 1ml 种子液接人 50ml 含磷模拟废水中，于28 ℃ 摇床中培养 72h，测培养液中PO。
3 一P 含量。
PO 。
a —P 含量的测定同前 (1.4) 。
2结果与分析2.1 聚磷菌的初筛从YG平板上共挑出不同形态的菌落 22 个，经过蓝白斑筛选，在限磷及过磷培养基上均出现蓝斑的菌落有 12 个。
将这 12 株菌分别接入聚磷培养液中，好氧培养 48h后，进行 poly-P 染色，共有株菌的菌体内含有多聚磷酸盐颗粒，分别命名为 CH-1、 CH-2 、 CH-3 ，即为初筛的聚磷菌。
2.2 好氧试验将 3 株初筛的聚磷菌接入不同浓度(2mg/ L、5mg/L 、 10mg/L) 的含磷培养液中好氧培养， 72 h后测定各菌株的去磷效果，结果如表 1 和表 2。
由表 1 、表 2 可见，同一磷浓度下，不同菌株的去磷能力不同，同一菌株对不同磷浓度培养液的去磷能力也不同。
随着培养液中磷浓度的增加虽然各菌株的摄磷率有所下降，但摄磷量仍在增加。
可能是磷浓度的增加，刺激了聚磷菌体内磷酸激酶的活性，从而使摄磷量得到提高。
比较3株聚磷菌，CH-1 在 2mg/L 、5mg/L 、 10mg/L 浓度条件下的去磷率分别为 93.21% 、 83.690/0、65.24 010 ，明显高于另两株菌的去磷率，表现出较好的去磷效果，因此将 CH-1 定为本试验的目的菌株。
2.3 菌种鉴定CH-1 在牛肉膏蛋白胨培养基上菌落呈乳黄色，全缘，菌体为杆状，不能运动，革兰氏阴性。
柠檬酸试验、接触酶试验阳性，淀粉水解、明胶液化、 M.R 、氧化酶试验、硝酸盐还原、 V ． P 、尿素酶试验阴性。
根据上述结果，初步鉴定其为约氏不动杆菌。
以 CH-1 的 DNA 为模板，利用细菌16SrDNA的特异引物进行PCR 扩增，得到长约 1.5kb 的 PCR扩增产物，将该产物测序（图略），其序列和 GenBank中已登陆的 16SrDNA 序列进行核苷酸同源性比较，结果证明该序列与已报道的 16SrDNA 序列（登陆号 AF188300.1 ）的约氏不动杆菌同源性达到 99010。
综合 CH-1 的形态及生理生化鉴定结果，认为本实验筛选的聚磷菌株为约氏不动杆菌。
表 1 不同浓度条件下 3 株聚磷菌的去磷能力 TablelRemovalability ofphosphorusunderdifferentconcentrationbythreestr’ ains2 mg/L 磷浓度5mg/L磷浓度 IOmg/L 磷浓度菌株编号摄磷率摄磷量摄磷最(%) ( …g／L)(%) ( “g／L)(%) (mg／L)┏ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┓ ┃ CH-1┃ 93.21 1.8642 83.69 4.1854 65.24 6.5240┃ ┣ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┫ ┃ CH 一2 70.20 1.4070 64.16 3.2080 46.11 4.6110 CH 一3 85.80 1.7160 67.36 3.3690 4418 4.4180┃ ┗ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┛表2 相同浓度条件下3 株菌的去磷速率 Table2Removalspeed of phosphorus undersameconcentrationby threestrains 最高磷浓度最低磷浓度最大磷浓度差最大摄磷速率菌株编号(mg/L) ‘mg ／L)(mg/L) (mg/L.h)┏ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┳ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┓ ┃ CH-I 10 1.0687 8.9313 1.1164┃ ┣ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ╋ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┫ ┃ CH ．25.1399 4.8601 0.3038 CH-3 3.32616.6739 0.5562┃ ┗ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┻ ━ ━ ━ ━ ━ ━ ┛第期连丽丽等：约氏不动杆菌（ Acinetobacierjohnsonii ）的分离及其聚磷特性的研究’:PBl:5’-TACGGCTACCTT-扩增条件参考文献6] 1.7菌体含磷量测定总磷的测定采用国标方法 1.8制备种子液，取 1ml 种子液接人 50ml 含磷模拟废水中，于28 ℃ 摇床中培养 72h，测培养液中PO含量。
