菌种的传代、保藏

菌种保藏方法
菌种保藏方法，如下：
1、传代保藏，传代保藏菌种是微生物保存中最常用的方法之一。

很多微生物在低温或者干燥处理时，会很快死亡，为了保存菌种的活性，就要定期不断的进行菌种转接、培养后再保存。

2、斜面低温保藏，将待保藏的菌种接种在合适的斜面培养基上，在相应的条件下培养至得到充足的菌体或者孢子，随后密封试管置于4℃左右保存，具体保存温度按照保存菌种设定。

保藏时间依微生物的种类从1个月到4个月不等。

3、冷冻干燥保藏，冷冻干燥保藏法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，这种方法适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年。

我国大多数生物制品菌种都是采用该法保藏。

4、半固体穿刺保藏，配制半固体培养基，高压湿热灭菌后倒于无菌试管中至约1/3，待培养基凝固，用接种环从平面培养基上挑取单菌落，穿入培养基若干次。

在合适的条件下进行培养至菌体旺盛生长，之后密封试管，根据菌种特点在4 ℃左右或者凉爽干燥处保存。

保存时间至少可以达到
1 年，对于有些菌种甚至能达到20 年之久。

5、液氮超低温保藏，液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。

液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内，将该安瓶瓶放人液氮（-196℃）中保藏。

菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程传代用菌种采用甘油冷冻管保存法。

将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合甘油并分装至冷冻管中，冷冻管标注菌种名称、代数、保存日期等信息，然后放置于-80℃冰箱中保存。

每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。

5.3.2.2液体石蜡保存法对于一些难以保存的菌种，采用液体石蜡保存法。

将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合液体石蜡并分装至玻璃瓶中，瓶口用铝箔密封，标注菌种名称、代数、保存日期等信息，保存温度为-70℃。

每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。

5.4菌种的传代传代用菌种每年进行一次复苏和传代。

复苏后，将菌种接种至适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，按照规定的传代代数制备传代用菌种，并及时更新菌种库存记录。

5.5菌种的使用使用菌种前，应先确认菌种的品质和纯度，并按照规定的传代代数制备工作用菌种。

使用后，应及时更新菌种库存记录，并进行相应的消毒处理。

5.6菌种的销毁菌种在使用过程中，如出现变异或污染等情况，应及时进行应灭活处理，并填写《菌种销毁记录表》，经主管部门审核同意后，进行销毁处理。

菌种库存中长期未使用的菌种，应定期进行清理和销毁处理。

菌复苏、复壮；Sabouraud葡萄糖琼脂培养基：用于白色念珠菌复苏、复壮；青霉素-链霉素琼脂培养基：用于铜绿假单胞菌复苏、复壮。

5.4.1.1.3复苏步骤：1.取出保存好的菌种管，用接种针在酒精灯上消毒；2.将接种针在75%酒精中消毒，再用酒精棉球擦拭消毒；3.用接种针在相应的培养基上进行接种；4.置于适宜温度下孵育，待菌落出现后进行传代或进行实验。

5.4.1.2标准菌株的确认通过形态学、生理生化特性、分子生物学等方法进行鉴定，确认菌株的纯度和种属。

5.4.1.3标准菌株的传代将菌株从原始保存方式中转移到新的保存方式中，确保菌株的保存和传承。

传代次数不宜过多，一般不超过10代。

菌种传代与保藏作业指导书菌种传代与保藏作业指导书1.标准菌的来源标准菌株必须购买具备资质的菌种保藏中心提供的冷冻干燥菌种（0代）（提供菌种证书）。

2.标准菌的验收从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。

接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。

在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。

在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括：菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期至。

新购入的0代原始菌种储存于－20℃，有效期为三年。

购买的已接种好的菌种斜面（3代）应检查菌种管是否完好。

储存于2～ 8 ℃，有效期为3个月。

3. 标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备3.1物品及试剂：接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球3.2培养基改良马丁琼脂培养基:用于霉菌复苏、复壮.营养肉汤培养基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮。

3.3操作步骤：a.打开洁净工作台。

b.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并让其自然风干。

c.用一小砂轮在安瓿的上部划一条线，用手轻轻将安瓿掰开（开启安瓿时必须小心，因为安瓿遇热时可能会破裂）。

d.以无菌方法用一无菌吸管从已准备好的上述液体培养基中移取0.5～0.8 ml到安瓿中。

e.轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解。

f.用无菌吸管将安瓿内菌液全部转接到相应的液体培养基。

g.根据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培养于相应的温度（细菌培养温度30～35℃，培养18～24小时；真菌培养温度23～28℃，培养3～5天。

观察是否浑浊，浑浊说明菌种复苏生长；若不浑浊，细菌应延长培养时间至7天，真菌应延长培养时间至14天，若仍未浑浊，灭菌处理。

h.取经复苏后的上述细菌菌液8-10ml至液体培养基中按g项操作对菌种进行复壮。

菌种传代与保藏作业指导书1.标准菌的来源标准菌株必须购买具备资质的菌种保藏中心提供的冷冻干燥菌种（0代）（提供菌种证书）。

2.标准菌的验收从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。

接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。

在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。

在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括：菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期至。

新购入的0代原始菌种储存于－20℃，有效期为三年。

购买的已接种好的菌种斜面（3代）应检查菌种管是否完好。

储存于2〜8℃,有效期为3个月。

3.标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备3.1物品及试剂：接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球3.2培养基改良马丁琼脂培养基:用于霉菌复苏、复壮.营养肉汤培养基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮。

3.3操作步骤：a.打开洁净工作台。

氏在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并让其自然风干。

c.用一小砂轮在安瓿的上部划一条线，用手轻轻将安瓿掰开（开启安瓿时必须小心，因为安瓿遇热时可能会破裂）。

d.以无菌方法用一无菌吸管从已准备好的上述液体培养基中移取0.5〜0.8ml到安瓿中。

e.轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解。

f.用无菌吸管将安瓿内菌液全部转接到相应的液体培养基。

g.根据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培养于相应的温度（细菌培养温度30〜35℃,培养18〜24小时；真菌培养温度23〜28℃,培养3〜5天。

观察是否浑浊，浑浊说明菌种复苏生长；若不浑浊，细菌应延长培养时间至7天，真菌应延长培养时间至14天，若仍未浑浊，灭菌处理。

h.取经复苏后的上述细菌菌液8-10ml至液体培养基中按g项操作对菌种进行复壮。

以无菌技术向复壮后的菌种中加入100ml20%的无菌甘油混匀，1-2ml/管分装于冻存管。

菌种的保藏管理制度一、前言随着微生物研究领域的不断发展，菌种的保藏和管理变得日益重要。

菌种在科学研究、工业生产、医药卫生等领域起着重要作用。

菌种的保藏管理制度不仅是对菌种进行有效保护和管理的重要手段，也是对科研机构和生产企业负责任的表现。

本文将从菌种的保藏目的、原则、保藏管理程序、管理机构和管理人员的职责等方面进行详细阐述，以便各单位建立完善的菌种保藏管理制度。

二、菌种的保藏目的1. 保证菌种的纯度、活力和保存性能；2. 保证菌种在长时间内可以被有效使用；3. 促进菌种资源的共享和交流；4. 保证菌种在科研、生产和应用中的安全性和可追溯性。

三、菌种的保藏原则1. 选择适宜的保藏方法，确保菌种的长期保存和传代；2. 严格按照操作规程操作，保证菌种的纯度和活力；3. 建立完善的菌种信息档案，保证菌种的可追溯性；4. 定期检测保藏菌株的纯度和活力，确保菌种的质量；5. 加强对菌种的安全管理，防止菌种的交叉污染和泄露。

四、菌种的保藏管理程序1. 菌种的采集、分离和鉴定（1）菌种的采集应按照规范程序进行，同时将采集信息记录在案，包括采集地点、采集时间、样品编号等；（2）菌种的分离和鉴定应由具有相关资质和经验的专业人员进行，并建立菌种信息档案。

2. 菌种的保存和传代（1）选择适宜的保存方法，如低温、冷冻、干燥等；（2）菌种的传代应按照规范程序进行，记录传代信息并定期对保存菌株进行检测。

3. 菌种的信息管理（1）建立菌种信息档案，包括菌种的采集信息、分离和鉴定信息、保存和传代信息等；（2）对菌种信息进行分类归档，方便查阅和管理。

4. 菌种的质量控制（1）定期对保存菌株进行纯度和活力检测；（2）对检测结果进行记录和分析，并定期进行质量评估。

5. 菌种的安全管理（1）加强菌种管理的安全防护措施，防止菌种的交叉污染和泄露；（2）对涉及菌株管理的人员进行相关培训和教育，提高他们的安全意识。

六、菌种的管理机构和管理人员的职责1. 菌种管理机构（1）设立专门的菌种管理机构，负责菌种的保藏和管理工作；（2）建立菌种管理制度，制定相关管理规定和操作程序。

菌种的传代保藏及菌液课件 (一)菌种的传代保藏及菌液课件一、菌种的传代保藏菌种传代是指将营养基质培养的细胞重复分离，使其保持其稳定性和可再生性的过程。

它是微生物学的一个重要分支之一。

为了保护珍贵、重要的菌种资源，菌种传代保藏就成为一项重要的保护菌种资源的工作。

菌种的传代保藏方法有冷冻、冰箱冷藏、干燥等。

其中，冷冻法是应用最广泛的一个方法，其关键是选用合适的保护剂和稳定培养基。

菌种在冷冻液中冷冻后，可以在超低温下长期保存，保存期间培养基中添加一定含量的保护剂，以维持细胞的完整性和增强生存能力。

而且，菌株的传代保藏还需要经过定期的监测和评价，以确保它们的原始的生物学特性和稳定性。

二、菌液课件菌液课件是一种生物学教学中经常使用的教学实验材料，通过培养菌种，在特定条件下生长，然后研究细菌的生物学特性。

通常会使用平皿、培养瓶、试管等容器来培养菌种，以观察细菌在不同条件下的形态特征、代谢活动、生长规律等。

菌液课件的制作需要注意以下几点：1.选取合适的培养基：合适的培养基可以极大地提高菌株的生长速度和菌液的质量，从而保证教学实验的质量和准确性。

2.掌握合适的生长条件：菌株不同的代谢途径、生长特点决定了其对生长条件的要求不同。

比如，有些菌株可以在常温下生长，而有些则需要较为温暖的环境。

因此，针对不同的菌株，要掌握合适的生长条件。

3.注意健康安全：教学实验过程中要注意健康安全，必须采取合适的防护措施来保护教师和学生的健康。

综上所述，菌种的传代保藏方法和菌液课件制作都是微生物学教学和研究的重要环节，对保护和利用好微生物资源具有重要的意义。

菌种操作规程菌种操作是微生物实验室中非常重要的一项工作，它涉及到菌种的储存、分离、培养和传代等操作。

以下是一份常见的菌种操作规程，以确保实验室操作的安全性和结果的准确性。

一、菌种的储存1. 菌种的储存通常采用液氮冷冻或低温冰箱冷冻的方式。

2. 菌种的储存容器应该选择无菌的冻干管、冻存瓶或冷冻管，并在储存前进行无菌处理。

3. 在冷冻储存前，应制备菌种的冻存物质，如15%甘油溶液，以确保菌种冷冻过程中的生存率。

二、菌种的分离1. 菌种的分离通常采用扩散法、涂布法或稀释法等方法。

2. 在进行菌种分离前，实验室的工作台、培养皿和所需工具应进行彻底的消毒和无菌处理。

3. 分离出的纯菌落应进行单克隆处理，避免混菌的情况。

三、菌种的培养1. 发放和接收菌种时，应注意标签的准确性，并确认菌种的来源和鉴定信息。

2. 菌种的培养应选择适当的培养基和培养条件，以促进菌种的生长和代谢。

3. 在进行菌种培养时，应注意无菌操作，避免菌种的污染。

四、菌种的传代1. 菌种的传代应选择适当的传代方法，如子代分离、液体培养或固体培养等。

2. 传代菌种前，应将培养皿等实验器具进行干燥消毒，并进行无菌处理。

3. 在进行菌种传代时，应注意选择合适的传代时间和传代次数，避免菌种的突变和变异。

五、菌种的保管1. 菌种的保管应采取适当的方法，如冷冻保存、液氮冷冻保存或继代保存等。

2. 在进行菌种保管时，应注意保存容器的密封性和标识的清晰性。

3. 对于保存已久的菌种，应定期进行复苏培养，以维持菌种的活力和纯度。

六、菌种的管理1. 每次使用菌种前，应查验菌种的保藏情况和标签信息，并进行必要的鉴定。

2. 菌种管理应建立清晰的档案记录，包括菌种的来源、分离日期、储存方式和使用情况等。

3. 菌种的使用应按照实验室的安全操作规程进行，避免对环境和人员的污染。

对于菌种操作的规程，实验室应制定具体的操作细则，并根据实验室的实际情况进行调整和完善。

同时，实验室操作人员应接受相关培训，掌握正确的操作技巧和安全意识，以确保菌种操作的准确性和安全性。