四溴双酚A对斑马鱼胚胎发育毒性和神经毒性研究_白承连

《典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经毒性效应研究》篇一一、引言随着现代工业的快速发展，环境污染问题日益严重，特别是化学物质对水生生物的毒性影响成为了科学研究的热点。

其中，酚类化合物作为一类典型的有机污染物，在环境中广泛存在，其生态毒理效应受到广泛关注。

典型酚类抗氧化剂因其具有优良的抗氧化性能而被广泛应用于各种工业领域，然而，这类物质对水生生物的潜在神经毒性却鲜有报道。

本研究以斑马鱼为研究对象，探讨典型酚类抗氧化剂对其神经毒性效应的影响。

二、材料与方法1. 材料本研究所用斑马鱼为成年野生型斑马鱼，购自某水产养殖基地。

实验所用的典型酚类抗氧化剂为某市售产品，其化学结构明确。

2. 方法（1）实验设计：将斑马鱼分为对照组和实验组，实验组分别暴露于不同浓度的典型酚类抗氧化剂中。

（2）暴露处理：将斑马鱼置于不同浓度的酚类抗氧化剂溶液中，持续暴露一定时间。

（3）行为学观察：观察并记录斑马鱼的行为变化，包括游动、觅食等。

（4）神经毒性检测：采用电生理学方法检测斑马鱼神经系统的功能变化。

（5）数据统计与分析：运用统计软件对实验数据进行处理和分析。

三、实验结果1. 行为学观察结果在实验过程中，我们发现随着酚类抗氧化剂浓度的增加，斑马鱼的行为发生了明显变化。

高浓度暴露组斑马鱼的游动速度明显减慢，觅食能力下降。

在浓度较低时，斑马鱼虽然能够继续正常生活，但其行为已表现出一定程度的不稳定。

这些结果表明典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经行为具有潜在的毒性影响。

2. 神经毒性检测结果电生理学检测结果显示，随着酚类抗氧化剂浓度的增加，斑马鱼神经系统的功能出现了明显异常。

主要表现为神经传导速度减慢、神经元兴奋性降低等。

这表明典型酚类抗氧化剂对斑马鱼神经系统具有显著的神经毒性效应。

四、讨论本研究表明，典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经行为和神经系统功能具有潜在的毒性影响。

这可能与酚类抗氧化剂的结构、浓度、暴露时间等因素有关。

在环境中广泛存在的酚类化合物可能通过食物链进入水生生物体内，对其神经系统产生潜在的危害。

中国环境科学 2008,28(3)：260~263 China Environmental Science 双酚A对斑马鱼胚胎发育阶段的毒性及生物蓄积端正花,张斌田,朱琳*(南开大学环境科学与工程学院,天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室,天津 300071)摘要：为研究胚胎在不同发育阶段对外源化合物的毒性敏感差异,以0hpf、8hpf和8h终止3种暴露方式进行染毒,探讨斑马鱼胚胎在不同暴露时段对双酚A(BPA)毒性和生物蓄积特征.结果表明,0hpf暴露时,斑马鱼胚胎内BPA含量与暴露浓度(0,5.00,10.00,15.00mg/L)及暴露时间(0,8,24,32,48,72h)呈明显正相关关系;在相同BPA浓度(15.00mg/L)作用下,斑马鱼胚胎在0hpf暴露下BPA富集量比8hpf的大,表现为致死与亚致死毒性都大,证明斑马鱼胚胎在发育早期(受精后到原肠胚期)对BPA污染更为敏感;8h终止试验进一步证明原肠胚期前的斑马鱼胚胎对BPA的这种敏感特征.关键词：斑马鱼胚胎；双酚A；毒性；富集；暴露阶段中图分类号：X503.225 文献标识码：A 文章编号：1000-6923(2008)03-0260-04The toxicity and bioaccumulation of bisphenol A on developmental stages of zebrafish embryo. DUAN Zheng-hua, ZHANG Bin-tian, ZHU Lin* (Tianjin Key Laboratory of Environmental Remediation and Pollution Control, College of Environmental Science and Engineering, Nankai University, Tianjin 300071, China). China Environmental Science, 2008,28(3)：260~263Abstract：Xenobiotics can influence the early developmental stage of aquatic organisms. Therefore, a experimentent with three exposure types (early cleavage exposure, 0hpf; gastrula exposure, 8hpf and 0hpf exposure but stop after 8 hours, 8h stop) were designed to investigate the toxicity and bioaccumulation of bisphenol A (BPA) in zebrafish (Danio rerio) embryo in different stages. The concentrations of BPA in zebrafish embryo at 0 hpf exposure appeared a linear relationship with the exposure concentrations (0,5.00,10.00,15.00mg/L) and exposure time (0,8,24,32,48,72h). Compared with 8 hpf exposure, zebrafish embryo exposed at 0 hpf exposure exhibited higher levels on bioaccumulation and toxicity of BPA. The embryo of 8h after fertilization (before gastrulae stage) was more sensitive on BPA. This result could be further provided by 8h stop exposures test.Key words：zebrafish embryo；bisphenol A；toxicity；bioaccumulation；exposure stage斑马鱼早期胚胎试验(ELS)已广泛应用于化合物的致毒和致畸效应研究[1].但是,暴露时段的不同可能会造成化合物对生物体的毒性差异,这方面的研究报道尚少.胚胎发育的阶段不同,对于能量的利用、抗损伤能力和代谢能力也不同,从而造成对化学物质的敏感效应也不同[2].一般认为,器官形成早期(原肠胚期前,受精后0~8h)胚胎对致畸原最为敏感,如果这个阶段胚胎被暴露在化合物中,可能会导致遗传物质的改变,从而对胚胎的发育造成影响.即使后期降低化合物的浓度,这种损伤也不可能被完全修复.因此,考察化合物在胚胎不同发育阶段的富集和毒性差异,对化合.双酚A(C15H16O2,简称BPA)作为一种重要的有机化工原料,广泛存在于工业废水、污水中[3-5].研究发现,BPA主要转化成对醌双酚A,BPA通过这种中间体与dGMP加合的方式实现自身与DNA的加合[6].胚胎发育异常可能是由于BPA作用于动物胚层卵黄囊(VYS)造成的[7].另外, Yasushi等[8]发现10~1000nmol/L的BPA能对各种细胞产生雌激素作用.作者前期试验发现,发育8h后开始染毒(8hpf)与受精后染毒(0hpf)相比, BPA对斑马鱼胚收稿日期：2007-06-14基金项目：国家自然科学基金资助项目(30470319)* 责任作者, 教授,zhulin@3期端正花等：双酚A对斑马鱼胚胎发育阶段的毒性及生物蓄积 261胎的毒性有显著差异[9].因此,本试验以3种暴露方式:0hpf、8hpf和8h终止(0hpf染毒8h后将胚胎换到重组水中继续培养观察)进行染毒,研究斑马鱼胚胎体内BPA的富集规律,讨论斑马鱼胚胎对BPA的敏感时段,为环境污染物的风险评价提供依据.1材料与方法1.1试验生物实验室自养成年斑马鱼(雌雄比1:2)饲养在水族箱中,(26±1)℃、光/暗周期为14/10,控制培养1个月开始收集鱼卵.饲养用水经生物过滤器过滤并充分曝气,pH值保持8.0左右,每日喂2次冷冻摇蚊幼虫(购自非污染水域,经检测,受试化合物低于检出限).1.2试剂BPA,2,2-双(4羟基苯基)丙烷,纯度>99.0%,天津市福晨化学试剂厂产品.称取一定量的BPA粉末,加入少量无水乙醇助溶(实际染毒溶液中乙醇的浓度不超过0.01%),再溶于重组水中[9],稀释到需要的浓度.BPA的浓度为0~25mg/L.正己烷、甲醇、乙腈和乙醚均为色谱纯,其余为分析纯.1.3染毒与测定试验分为2部分:探讨相同暴露方式下BPA在斑马鱼胚胎内的富集规律.将胚胎仅以0hpf方式暴露,测定0.00,5.00,10.00,15.00mg/L BPA染毒下,暴露0,24,32,48,72h后胚胎体内BPA含量,该部分有20个样品;将胚胎以0hpf、8hpf和8h终止3种方式暴露,测定15.00mg/L BPA染毒下,暴露0,24, 32,48,72h后胚胎体内BPA含量,该部分有15个样品.每个样品设3个平行.将500颗刚受精的正常鱼卵加入200mL玻璃烧杯中染毒(0hpf),达到暴露时间后吸取其中发育正常的300颗鱼卵,作为1个试验样品[干重为(19.20±1.65)mg].将该样品移入到5mL玻璃匀浆器中,加入甲醇和0.001mol/L NaAC(pH 4.5) (体积比为2:8)混合液充分匀浆.将匀浆液转入10mL玻璃离心管中,用2mL上述溶剂洗涤匀浆管,洗液并入离心管中.加4mL正己烷-乙醚(体积20min,心10min,取上清液.重复提取3次,合并上清液,分别编号,置入４℃冰箱备用.参照文献[10-11],用HPLC对斑马鱼胚胎中的BPA进行测定.HPLC色谱仪(Waters 1525)和荧光检测器(Waters 2475)的激发和吸收波长分别为227nm和213nm;色谱柱为C18柱(3.9× 150mm,5μm,Waters);流动相为乙腈和0.01 mol/L NaAC(pH 4.5)(体积比为75:25),流速1mL/min;进样量20μL.BPA标准液浓度为0.05,0.10,1.00,5.00, 10.00mg/L.利用未染毒胚胎进行加标回收分析,加标量为1.00mg/L,回收率为(80.06±2.6)%.1.4毒性试验参照文献[9],研究0hpf、8hpf和8h终止作用下BPA对斑马鱼胚胎24h致死和72h孵化影响的差异.1.5统计分析采用Origin7.5软件进行分析.由线性拟合法(Linear Fit)计算半致死浓度和半效应浓度;组内进行student-t检验,用标准误差(SD)表示;组间用one way-A VONA检验,P<0.05表示有显著差异.2结果与讨论2.1化学分析2.1.1富集规律探讨HPLC测定表明,斑马鱼,摇蚊幼虫以及空白溶液中BPA本底含量均未检出.由图1可见,在相同暴露方式(0hpf)不同浓度BPA(5.00, 10.00, 15.00mg/L)作用下,斑马鱼胚胎内BPA含量与暴露时间呈明显正相关关系(P<0.05).5.00,10.00mg/L BPA暴露下,斑马鱼胚胎内BPA浓度呈线性增加趋势(R25mg/L= 0.959; R210mg/L=0.9986).而在15.00mg/L BPA作用下,斑马鱼胚胎内BPA浓度虽然也呈持续增加趋势(R215mg/L=0.8864),但是增加的速率在24h后有所降低,这是因为15.00mg/L已接近BPA对斑马鱼胚胎24h LC50值(16.64 mg/L)[9],暴露72h后胚胎全部死亡.同时,在相同暴露浓度下,随着暴露浓度的增加,BPA胚胎内含量也增大.5.00,10.00, 15.00mg/L染毒下胚胎体内BPA含量的最大值分别为(373.44±68.32)μg/g(72h), (684.38±70.55)μg/gμg/g(48h).图1 0hpf 暴露不同染毒浓度下BPA 在斑马鱼胚胎内的富集Fig.1 The bioaccumulation of BPA in zebrafish embryo under the exposure of 0hpf and seriesof BPA concentrations芳香族化合物在成鱼体内的蓄积过程通常是暴露后短时间内快速吸收,暴露2~3d 后达到最大值,然后快速下降到一个稳定的低含量状态[12].但是胚胎对BPA 的吸收与成鱼不同,随着暴露浓度的增大和时间的延长,胚胎体内BPA 含量不断增大,直至死亡.可能由于胚胎和成鱼生命活动不一样造成的.成鱼具有代谢外来化合物的功能.而胚胎不能自主呼吸,没有代谢作用,因此,能够不断吸收BPA,直到浓度太高导致死亡.Philips 等[13]也发现非洲爪蛙(Xenopus laevis )在发育早期对TCDD 排出得很慢.2.1.2 不同暴露方式富集对比 试验发现在每个时间段,3种暴露方式下斑马鱼胚胎体内BPA浓度均有显著差异(图2,P <0.01).0hpf 和8hpf 暴露下,斑马鱼胚胎体内BPA 浓度在整个暴露时间段内都持续增加.但是,0hpf 暴露比8hpf 的富集量更大,在每个时间段,斑马鱼胚胎体内BPA 浓度在0hpf 暴露时都比8hpf 的高(P <0.01),这证明斑马鱼胚胎在发育早期更容易吸收BPA.而8h 终止暴露试验,换到重组水中后,前8h 斑马鱼胚胎内积累的BPA 持续降低.2.2 不暴露方式毒性对比0hpf 、8hpf 和8h 终止这3种暴露方式下,斑马鱼胚胎都对BPA 作用表现出相同的致死和亚图2 不同暴露方式下BPA 在斑马鱼胚胎内的富集 Fig.2 The bioaccumulation of BPA in zebrafish embryounder different treatments图3 不同暴露方式下斑马鱼胚胎对BPA 的毒性效应和在15mg/L BPA 染毒中相应的体内含量Fig.3 The toxicities of BPA in zebrafish embryo underdifferent treatments and related concentrations in embryo while exposed to 15mg/L BPA 胚胎内BPA 含量LC 50 或72h EC 50 由图3可见,0hpf 、8hpf 和8h 终止暴露的24h LC 50值分别为(16.64±0.45),(22.32±0.85),(20.00± 0.56)mg/L BPA,而72h 抑制孵化的EC 50值分别为3期端正花等：双酚A对斑马鱼胚胎发育阶段的毒性及生物蓄积 2638hpf染毒的毒性与0hpf染毒相比均有明显下降(P<0.05)同时,胚胎在8h终止暴露中仅染毒了前8h,与0hpf暴露相比胚胎内BPA含量下降很多,但24h死亡和72h抑制孵化指标表现出来的毒性下降不明显(图3B).在24h死亡指标上,8h 终止比8hpf暴露表现出更高的毒性.证明胚胎发育早期对毒性暴露更为敏感,这与其他研究一致.章龙珍等[14]发现草鱼胚胎在原肠胚期前对低温和DMSO暴露更为敏感.李勇等[15]也发现大鼠体外培养细胞对甲基汞的最敏感时期约在发育1~12h这一期间.斑马鱼早期胚胎处于DNA、RNA、染色体和纺锤体蛋白质等的合成时期,与这些物质合成有关的酶的变化[14]的任一环节受到毒物的阻碍,细胞分裂就会停止.因此,原肠胚期前斑马鱼胚胎虽然在8h终止暴露后期体内BPA浓度大幅度降低,仍有很高的毒性表现.3结论3.1在相同暴露方式(0hpf)作用下,斑马鱼胚胎内BPA含量在72h内与暴露浓度和时间呈明显正相关关系.3.2斑马鱼胚胎在0hpf暴露下对BPA的富集量比8hpf暴露条件下更大,同时表现出来的致死和亚致死毒性都高,证明斑马鱼胚胎在发育早期阶段对BPA污染更为敏感.3.38h终止试验进一步证明原肠胚期前的斑马鱼胚胎对BPA的毒性更为敏感.参考文献：[1] Nagel R. 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２０１７年㊀第１２卷第３期ꎬ１６２￣１６９生态毒理学报Asian Journal of EcotoxicologyV ol.12,2017No.3,162￣169㊀㊀基金项目:中国科学院战略性先导科技专项(XDB140401)ꎻ中国科学院水生生物研究所特色研究所服务项目(Y55Z05)㊀㊀作者简介:杨丽华(1984￣)ꎬ女ꎬ博士ꎬ副研究员ꎬ研究方向为环境毒理学ꎬE ￣mail:lhyang@ ㊀㊀*通讯作者(Corresponding author )ꎬE ￣mail:bszhou@DOI:10.7524/AJE.1673￣5897.20170122001杨丽华,史奇朋,周炳升.双酚A 对斑马鱼幼鱼神经递质和神经行为的影响[J].生态毒理学报ꎬ2017,12(3):162￣169Yang L H,Shi Q P,Zhou B S.The effects of BPA on neurobehavior and neurotransmitters of larval zebrafish (Danio rerio )[J].Asian Journal of Ecotoxi ￣cology,2017,12(3):162￣169(in Chinese)双酚Ａ对斑马鱼幼鱼神经递质和神经行为的影响杨丽华1ꎬ史奇朋1,2ꎬ周炳升1,*1.中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室ꎬ武汉4300722.中国科学院大学ꎬ北京100049收稿日期:2017￣1￣22㊀㊀录用日期:2017￣3￣8摘要:环境浓度水平下双酚A(BPA)暴露对生物体的毒性效应受到广泛关注ꎮ以早期发育阶段斑马鱼为模型ꎬ评价了环境浓度下BPA 暴露对斑马鱼幼鱼运动行为的影响ꎬ并探讨了可能的作用机制ꎮ将斑马鱼胚胎暴露于不同浓度BPA(0㊁1㊁3㊁10和30m g L ￣1)后ꎬ斑马鱼幼鱼的整体平均运动速率显著降低ꎮ低浓度组幼鱼在持续光照条件下的运动行为显著降低ꎬ同时5￣羟色胺受体(htr1a )的转录水平增加十分显著ꎬ表明BPA 可能通过5￣羟色胺受体对斑马鱼的运动行为产生影响ꎮ而高浓度组幼鱼在第2个黑暗刺激周期的活动过度受到抑制ꎬ同时多巴胺受体(d1r )的转录水平显著降低ꎬ表明BPA 可能通过多巴胺受体影响斑马鱼对外界刺激的响应ꎮHPLC 分析结果表明ꎬ5￣羟色胺和多巴胺神经递质含量在所有浓度组均显著升高ꎮ进一步分析与早期神经发育(wnt1,shha )㊁单胺类递质神经元分化(lmx1a,nr4a2和syn2a )以及递质合成(tph1b,th )相关的基因和蛋白水平ꎬ发现神经递质含量的升高可能是由于BPA 促进了斑马鱼胚胎早期神经发育和单胺类递质神经元的分化ꎮ综上ꎬ环境浓度下BPA暴露即可对斑马鱼的运行行为产生影响ꎬ提示BPA 污染很可能对生态环境及人体健康产生潜在的危害ꎮ关键词:双酚A ꎻ斑马鱼ꎻ神经行为ꎻ神经递质文章编号:1673￣5897(2017)3￣162￣08㊀㊀中图分类号:X171.5㊀㊀文献标识码:AＴｈｅＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢＰＡｏｎＮｅｕｒｏｂｅｈａｖｉｏｒａｎｄＮｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｏｆＬａｒｖａｌＺｅｂｒａｆｉｓｈ(Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ)Yang Lihua 1,Shi Qipeng 1,2,Zhou Bingsheng 1,*1.State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology,Institute of Hydrobiology,Chinese Academy of Sciences,Wuhan 430072,China2.University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,ChinaＲｅｃｅｉｖｅｄ22January 2017㊀㊀ａｃｃｅｐｔｅｄ8March 2017Ａｂｓｔｒａｃｔ:Toxic effects of bisphenol A (BPA)on organisms after exposure to environmentally relevant concentra ￣tions have received great concerns.In this study,embryos of zebrafish were exposed to series of concentrations (0,1,3,10and 30m g L ￣1)of BPA,and changes in behavior and the underlying mechanisms were studied.Our results indicated that embryonic exposure to BPA caused a significant decrease in average swimming speed of larval ze ￣brafish.Specifically,larval activity was significantly decreased in a continuous light period in groups of lower con ￣centrations and in the next dark stimulating period in groups of higher concentrations after exposure to BPA.Tran ￣. All Rights Reserved.第3期杨丽华等:双酚A对斑马鱼幼鱼神经递质和神经行为的影响１６３㊀scriptional changes of htr1a and d1r indicated these receptors might be responsible for the effects observed above. HPLC analysis showed exposure to BPA increased the contents of dopamine and5￣HT at all treatments examined. Further results of expression of genes and proteins related to neurodevelopment of monoamine neurons(wnt1, shha,lmx1a,nr4a2,syn2a)and rate limiting enzymes for synthesis of dopamine and5￣HT(th,tph1b)provided evi￣dences for our hypothesis that BPA could accelerate neurogenesis and neural differentiation thus resulting in in￣creased number of monoamine neurons.Generally,exposure to environmental relevant levels of BPA could affect neurodevelopment and result in behavioral changes in zebrafish larvae,indicating potential risks for wild animals and human due to BPA pollution.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:bisphenol A;zebrafish;neurobehavior;neurotransmitter㊀㊀双酚A(Bisphenol A,BPA)由刚性平面芳环和可塑的非线性脂肪侧链组成ꎬ具有无色透明㊁轻巧耐用㊁防冲击性强等优点ꎬ因此作为一种重要的工业原料被广泛应用到日常生活的各个方面ꎬ比如电子设备㊁体育器材㊁医疗器械㊁餐具㊁以及食品包装等[1]ꎮ这些产品的大量使用造成了BPA在环境介质中的广泛分布ꎮ在自然水体中ꎬBPA的含量通常为ng L￣1级别ꎮ我国珠江三角洲水体中的BPA浓度范围为4~377ng L￣1[2]ꎮ生活污水及工业废水中的BPA 含量非常高ꎮ如在美国污水处理厂及曾检测到BPA含量为3.642μg L￣1[3]ꎬ加拿大某工厂排出的废水中BPA含量高达230~149ng L￣1或200ng L￣1[4]ꎮBPA在沉积物中的含量通常为ng g￣1级别ꎬ如北京温榆河底沉积物检测到BPA为0.6~59.6ng g￣1[5]ꎮ此外ꎬ在各种生物及人类体内都检测到了BPA的存在[2]ꎮ近来的研究表明ꎬBPA在非常低的剂量下(远低于FDA推荐的安全剂量)即可对哺乳动物产生影响[6￣7]ꎬ因此环境浓度水平下BPA暴露对生物体的毒性效应研究对于BPA的生态风险评价和管理至关重要ꎮBPA已被证实具有内分泌干扰效应ꎬ它可以通过干扰甲状腺激素㊁雌激素和雄激素受体等对生物体产生有害效应[8￣11]ꎮ内源性激素对于生物体内神经发育特别是胚胎发育早期阶段具有十分关键的作用ꎬ并且BPA可以通过血脑屏障[12]ꎬ因此双酚A很可能对生物体早期神经发育及相关功能产生影响ꎮ啮齿动物研究表明ꎬBPA可以诱导神经行为的改变ꎬ并且这种改变很有可能和动物体内神经递质有关ꎮ如Ishido等[13]研究表明BPA可以通过多个环节增加中脑多巴胺活性ꎬ导致运动行为异常㊁注意力降低等不良后果ꎮ但生物体的神经行为调控机制十分复杂ꎬ其与神经递质的关系也尚不明确ꎮ因此ꎬ本研究的主要目的为以早期阶段斑马鱼为模型ꎬ以运动行为为终点评价低剂量下BPA的神经毒性效应ꎬ并从分子水平上揭示BPA对斑马鱼早期神经发育和神经递质的影响ꎬ探讨BPA导致神经毒性的可能作用机制ꎮ１㊀材料与方法(Ｍａｔｅｒｉａｌｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓ)１.１㊀材料与试剂BPA(纯度>97%,CAS85￣05￣7)购自美国Acros Organics(Thermo Fisher Scientific,New Jersey,US)ꎬ助溶剂二甲基亚砜(DMSO)(色谱纯)购自美国Sigma Chemical公司(St.Louis,MO,USA)ꎮTrizol试剂购自Invitrogen公司(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)ꎮ荧光定量试剂盒购于日本的Toyobo(Osaka,Japan)公司ꎮ其他常规试剂为分析纯ꎮ１.２㊀斑马鱼饲养及胚胎暴露野生型AB系斑马鱼在(28ʃ0.5)ħ的活性炭过滤的密闭循环水系统中培养ꎬ光周期(14h光照ʒ10 h黑暗)ꎬ每天喂丰年虫2次ꎮ收集鱼卵的前一天晚上将雄鱼和雌鱼以2ʒ1的比例置于同一缸中ꎬ次日灯光刺激产卵收集ꎮ用活性炭过滤自来水清洗鱼卵ꎬ剔除异物ꎮ在解剖镜下取发育正常的囊胚期斑马鱼胚胎(2hour post fertilization,hpf)ꎬ随机分配于含有500mL暴露工作液的玻璃培养皿中(200颗/皿)ꎬBPA暴露浓度依次为0,1,3,10和30μg L￣1ꎬ其中DMSO浓度均为0.005%(V/V)ꎬ并且设置0.005%DMSO(V/V)为对照组ꎮ每个浓度设置5个平行并且每天更换暴露液ꎬ并记录孵化数量和死亡数量ꎬ及时清除死亡个体ꎮ暴露至120hpf后ꎬ每个浓度组随机选取幼鱼进行运动行为分析ꎬ其余幼鱼用清洗3~5次后ꎬ迅速液氮冷冻后保存于￣80ħꎮ１.３㊀常规发育指标根据记录数据计算120hpf的孵化率㊁存活率和畸形率ꎬ计算方法如下:孵化率=成功孵化数量/胚胎总数存活率=存活的幼鱼数量/成功孵化数量. All Rights Reserved.１６４㊀生态毒理学报第12卷畸形率=成功孵化后的畸形数量/存活数量１.４㊀幼鱼运动行为分析每个浓度组随机选取30条健康幼鱼(6条/平行)进行运动行为分析ꎮ斑马鱼幼鱼的运动行为量化分析采用ZebraLab行为分析系统(ViewPoint Life Sciences,Montreal,Canada)ꎮ斑马鱼幼鱼(120hpf)置于24孔板中ꎬ每孔放置一条鱼ꎬ保持温度为28ħꎮ实验前适应10min然后开始监测运动行为ꎮ首先在20min的持续光照下记录幼鱼的运动轨迹ꎬ而后使用20min的光暗周期刺激记录幼鱼运动轨迹(5 min光￣5min暗￣5min光￣5min暗)ꎮ每30秒采集一次行为学数据(运动的频率㊁距离和总时间)ꎮ记录的数值用在线Open 2.4软件分析数据()ꎮ１.５㊀神经递质含量测定神经递质含量通过高效液相色谱￣电化学联用仪(HPLC￣ECD,ESA,Chelmsford,MA,USA)测定ꎮ50条幼鱼为一个平行样(每个浓度组2个平行样)ꎬ在500μL0.1mol L￣1的高氯酸中进行超声破碎ꎬ4ħ㊁10000ˑg离心10minꎬ取上清液经0.22μm 的聚乙烯膜过滤ꎬ而后进行上机检测(每个平行样做3个重复)ꎮ检测条件如下:色谱柱为C18(250mmˑ3mm,5μm)ꎬ流动相为甲醇ʒ乙腈ʒ磷酸盐缓冲液(60nmol L￣1NaH2PO4ꎬ50mmol L￣1乙二胺四乙酸和2mmol L￣1正十八烷基磺酸钠盐ꎬpH=3.8)=4ʒ7ʒ89ꎬ流速为0.8mL min￣1ꎮ１.６㊀蛋白质表达水平分析每个浓度组随机选取400条幼鱼(100条/皿ꎬ合并为2个平行样)进行western blot分析ꎮ蛋白质提取使用南京凯基公司的全蛋白提取试剂盒ꎬ按照说明书操作进行ꎬ蛋白质含量检测使用碧云天生物技术的BCA蛋白检测试剂盒ꎮ蛋白质样品(每个平行样做2个重复ꎬ每个重复取50μL样品)以6%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS￣PAGE)分离ꎬ电转至PVDF 膜(Sigma￣Aldrich,St.Louis,MO,USA)ꎮ然后将PVDF膜于37ħ封闭1hꎬ加入一抗(MBP,AnaSpec, Fremont,CA,USA,1:800ꎻSYN2a,Synaptic Systems, Göttingen,Germany,1:1000ꎻ或glyceraldehyde3￣phosphate dehydrogenase,1:1000)于4ħ过夜ꎮ将膜取出ꎬ加入辣根过氧化物酶标记二抗(羊抗兔ꎬPro￣teintech,Wuhan,China,1:5000)ꎬ室温孵育2hꎮ目标带的分子量和净光密度值使用Western blot图象处理系统(FluorChem Q;Alpha Innotech,San Leandro,CA,USA)进行分析ꎮ１.７㊀基因转录水平分析总RNA提取使用Trizol法(Invitrogen,Carlsbad, CA,USA)ꎮNanoDrop￣2000spectrophotometer(Nan￣odrop Technologies Inc.,Wil￣mington DE,USA)测定总RNA的浓度及质量ꎮcDNA的合成采用Prime￣Script®reagent Kit(TaKaRa Bio,Shiga,Japan)试剂盒按照其说明书进行ꎮ在定量检测之前使用在线工具/referencegene.php评估了较为常用的5个内参基因(rpl8,18s,β￣actin,gapdh, ef1α)在BPA暴露下的转录稳定性ꎬ最后选取rpl8作为内参基因ꎮ荧光定量PCR采用日本Toyobo公司(Osaka,Japan)的SYBR Green试剂盒ꎬ于ABI7300 (Applied Biosystems,Foster City,CA)进行检测ꎮ扩增程序为:95ħˑ10min变性ꎬ95ħˑ30sꎬ60ħˑ15 sꎬ72ħˑ45sꎬ35个循环ꎮ反应结束后绘制溶解曲线用于检验是否有非特异性产物ꎮ对照组和每个暴露浓度组中均设置3个平行样(30条/平行样)ꎬ每个样品2个重复ꎮ实验中所用的基因引物序列采用在线引物设计软件Primer3program(http://frodo.wi. /)设计ꎬ引物序列见表1ꎮ目的基因转录水平的相对变化使用2–әәCT法进行计算处理ꎮ１.８㊀数据处理与分析所有的数据分析均使用SPSS13.0(SPSS,Chi￣cago,IL,USA)软件ꎮ实验数据的正态性用Kolmog￣orov￣Smirnov test检测ꎬ方差齐性检验采用Levene's test方法ꎻ如有需要用对数转换使之符合方差齐性ꎮ实验组与对照组间差异显著性分析用one￣way ANOV A方法ꎬ显著性水平为P<0.05ꎬ结果表示以算术平均值ʃ标准误差(meanʃSEM)ꎮ作图使用Ori￣gin8.0软件完成ꎮ２㊀结果(Ｒｅｓｕｌｔｓ)２.１㊀常规发育指标统计结果显示暴露于BPA没有显著影响斑马鱼胚胎/幼鱼的孵化率㊁存活率㊁畸形率等指标(表2)ꎮ所有浓度组斑马鱼胚胎孵化率均大于85%ꎬ存活率大于95%ꎮ２.２㊀幼鱼运动行为BPA暴露斑马鱼5d后ꎬ行为分析显示:在整个实验周期内ꎬ暴露于3㊁10和30m g L￣1BPA的幼鱼平均运动速率显著下降(P<0.05)(图1A)ꎮ在连续光照下ꎬ在3m g L￣1BPA暴露组ꎬ运动速率显著下降. All Rights Reserved.第3期杨丽华等:双酚A 对斑马鱼幼鱼神经递质和神经行为的影响１６５㊀图１㊀ＢＰＡ暴露对斑马鱼幼鱼运动行为的影响注:A ꎬ整个试验周期内平均运动速率ꎻB ꎬ光暗周期内平均运动速率ꎮ*P <0.05ꎬ**P <0.01ꎮFig.1㊀Effect of BPA on locomotor behavior of larval zebrafish (Danio rerio )Note:A,average swimming speed during the test;B,average swimming speed during light ￣dark stimulating photo period.*P <0.05,**P <0.01.表１㊀定量ＰＣＲ所用引物信息Table 1㊀Primers for q ￣RT ￣PCR utilized in this study基因Genes引物序列(5ᶄ~3ᶄ)Primer sequences (from 5ᶄto 3ᶄ)GenBank 收录号GenBank No.wnt1正义Forward CTCGGGCAATCTCCTCACTAACT 反义ReverseGCTGGGAAGTCTCATCCAACAAG NM_001201398.1shha 正义Forward GCAAGATAACGCGCAATTCGGAGA 反义Reverse TGCATCTCTGTGTCATGAGCCTGT NC_007118lmx1a 正义Forward ACTCTCTGGATAATGATGTGCCA 反义Reverse ATTGCGGAGAAAGCAGGTGT NM_001025498nr4a2正义Forward GAAGACGGCGAAATCGATGC 反义Reverse CTGGCGGTTCTGACAACTTCC NM_001002406syn2a 正义Forward GTGACCATGCCAGCATTTC 反义Reverse TGGTTCTCCACTTTCACCTT NM_001002597tph1b 正义Forward ATCCATCCTTGCTCTCCAAC 反义Reverse TCTGTGAACTCTACGTGTGG NM_001001843.2htr1a 正义Forward ATGAGGATGAGCGGGATGTAG 反义Reverse CAATCAGCCAGGACCACG NM_001123321th 正义Forward CTCCAGAAGAGAATGCCACATG 反义Reverse ACGTTCACTCTCCAGCTGAGTG NM_001001829.1d1r 正义Forward CTGACCGGTTGCTTTCTTTC 反义Reverse GGCTTGGTGTCTCCATGCTA AL935195rpl8正义Forward TTGTTGGTGTTGTTGCTGGT 反义ReverseGGATGCTCAACAGGGTTCATNM_200713表２㊀ＢＰＡ暴露对斑马鱼胚胎发育的影响Table 2㊀The effects of BPA exposure on zebrafish embryos0μg L ￣11μg L ￣13μg L ￣110μg L ￣130μg L ￣1孵化率/%Hatching/%90.4ʃ0.388.5ʃ0.890.8ʃ0.691.3ʃ0.690.4ʃ0.6畸形率/%Malformation/% 4.1ʃ0.5 5.3ʃ0.7 5.6ʃ0.4 5.1ʃ0.8 6.5ʃ0.6存活率/%Survival/%96.6ʃ0.396.1ʃ0.496.2ʃ0.595.8ʃ0.495.3ʃ0.5. All Rights Reserved.１６６㊀生态毒理学报第12卷图２㊀ＢＰＡ暴露对斑马鱼幼鱼体内多巴胺及５￣ＨＴ含量的影响注:*P <0.05ꎮFig.2㊀Effect of BPA on contents of dopamine and 5￣HT in larval zebrafish (Danio rerio )Note:*P <0.05.(P <0.05)ꎮ在光暗交替刺激下ꎬ第1个5min 黑暗刺激下ꎬ幼鱼运行行为无显著变化ꎻ第1个5min 光照内ꎬ暴露于3㊁10和30m g L ￣1的幼鱼速率均显著下降(P <0.05)ꎻ在第2个5min 黑暗阶段暴露于10和30m g L ￣1的幼鱼速率均显著下降(P <0.05)ꎻ第2个5min 光照下ꎬ所有BPA 暴露组的幼鱼运动速率均显著下降(P <0.05)(图1.B)ꎮ２.３㊀神经递质含量的变化HPLC ￣ECD 分析结果显示ꎬ经BPA 暴露后斑马鱼幼鱼体内多巴胺及5￣羟色胺的含量在所有处理组均显著升高(P <0.01)(图2)ꎮ２.４㊀基因转录水平的变化荧光定量PCR 结果显示(图3)ꎬnr4a2㊁syn2a和图３㊀ＢＰＡ暴露对斑马鱼幼鱼基因转录水平的影响注:*P <0.05ꎬ**P <0.01ꎬ***P <0.001ꎮFig.3㊀Effect of BPA on transcription of genesin larval zebrafish (Danio rerio )Note:*P <0.05,**P <0.01,***P <0.001.htr1a 的转录水平在所有BPA 暴露组幼鱼体内均显著增加(P <0.05)ꎻtph1b 和th 的转录水平在3㊁10和30m g L ￣1BPA 暴露组幼鱼体内显著增加ꎬ而shha 的转录水平在上述浓度组显著降低(P <0.05)ꎻwnt1在10和30m g L ￣1BPA 暴露组显著增加(P <0.05)ꎻlmx1a 的转录水平在1m g L ￣1浓度组显著降低(P <0.05)ꎬ而在10和30m g L ￣1浓度组显著升高(P <0.05)ꎻd1r 在3m g L ￣1浓度组显著升高而在30m g L ￣1浓度组显著降低(P <0.05)ꎮ２.５㊀蛋白表达水平的变化western blot 分析结果表明(图4)ꎬLMX1A 蛋白表达水平在3m g L ￣1BPA 暴露组幼鱼体内显著降低(P <0.05)ꎬ而在30m g L ￣1暴露组幼鱼体内显著增加(P <0.05)ꎻSYN2α蛋白的表达水平在1和3m g L ￣1BPA 暴露组幼鱼体内显著降低(P <0.05)ꎬ而在10和30m g L ￣1浓度组变化不显著ꎮ３㊀讨论(Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ)㊀㊀本研究以早期发育阶段斑马鱼为模型ꎬ评价了环境浓度下BPA 暴露对斑马鱼幼鱼运动行为的影响ꎬ并探讨了可能的作用机制ꎮ结果表明ꎬ胚胎期暴露于3m g L ￣1BPA 即可影响孵化后幼鱼在持续光照和光暗刺激条件下的运行行为ꎬ这种影响可能与神经递质含量及功能的变化有关ꎮ同时我们的结果还表明ꎬ斑马鱼幼鱼体内的神经递质在低浓度和高浓度BPA 暴露下的响应机制不同ꎮ斑马鱼幼鱼的运动行为在第1个持续光照周期内ꎬ仅在较低浓度(3m g L ￣1)出现了显著降低ꎻ而在. All Rights Reserved.第3期杨丽华等:双酚A 对斑马鱼幼鱼神经递质和神经行为的影响１６７㊀图４㊀ＢＰＡ对斑马鱼幼鱼神经发育相关蛋白表达水平的影响注:A ꎬLMX1A 的western blot 分析结果ꎻa ꎬLMX1A 蛋白的相对表达量ꎻB ꎬSYN2α的western blot 分析结果ꎻb ꎬSYN2α蛋白的相对表达量ꎮ*P <0.05ꎮFig.4㊀Effect of BPA on protein related to neurodevelopment in larval zebrafish (Danio rerio )Note:A,western blot analysis of LMX1A;a,relative expression of LMX1A;B,western blot analysis of SYN2α;b,relative expression of SYN2α.*P <0.05.第2个黑暗刺激周期内ꎬ高浓度组幼鱼的活动过度受到抑制ꎮ同时ꎬ在整个试验周期内ꎬ斑马鱼幼鱼的平均运动速率显著降低ꎮGioiosa 等[14]也观察到类似的结果ꎬ他们将发育期小鼠暴露于甲氧滴滴涕和BPA ꎬ结果发现小鼠成年后的运动能力降低ꎮFarabollini 等[15]的研究表明ꎬ围产期BPA 暴露可以减轻雄性后代的焦虑样行为ꎬ降低雌性和雄性子代的探究能力ꎮ但是还有一些研究表明ꎬBPA 暴露可以导致实验动物活动过度ꎮ如Ishido 等[16]发现脑池内注射BPA 4周后可以增加自发性运动ꎬMizuo 等[17]的研究表明胚胎期和哺乳期BPA 暴露也可以导致运动活力增加ꎮBPA 暴露还可以改变对外界刺激的响应ꎬ如胚胎期和哺乳期BPA 暴露也可以导致幼鼠对吗啡反应的改变[17]ꎬ成年大鼠暴露于BPA 后ꎬ其在疼痛或恐惧刺激条件下的运动行为加剧[18]ꎮ上述结果表明ꎬ胚胎阶段暴露于BPA 可以降低孵化后幼鱼在持续光照条件下的自发性行为以及光暗交替刺激条件下的应激性运动行为ꎮ虽然生物体神经行为的调控机制尚不清楚ꎬ但是神经递质多巴胺和5￣羟色胺及其受体在其中的关键作用已经得到证实ꎮHidaka 等[19]的研究表明ꎬ多巴胺受体拮抗剂可以使实验动物在刺激条件下表现出的运动过度消失ꎬ而5￣羟色胺受体可能参与自发性活动的调节ꎮ本研究中ꎬhtr1a 的转录水平在低浓度组增加十分显著ꎬ这可能与观察到的第1个持续光照条件下运行行为降低有关ꎮ而在高浓度组ꎬ多巴胺受体(d1r )的转录水平受到显著抑制ꎬ这可能与第2个黑暗刺激阶段斑马鱼幼鱼的运动行为变化有关ꎮ因此我们推测ꎬ在不同浓度BPA 暴露条件下ꎬ斑马鱼幼鱼体内神经递质系统的响应机制存在差异ꎮ然而当我们进一步检测这2种神经递质的含量时发现ꎬ各BPA 暴露组斑马鱼幼鱼体内神经递质的含量均出现非常显著的升高ꎮ类似地ꎬNakamura 等[20]研究发现胚胎期及哺乳期暴露于BPA 可导致小鼠体内多巴胺含量显著升高ꎻMatsuda 等[21]也发现暴露于的BPA 雄性小鼠海马体及杏仁核部位的多巴胺含量升高ꎮ我们的基因定量结果表明ꎬ与5￣羟色胺合成相关的基因tph1b 和与多巴胺合成相关的基因th 也都显著升高ꎬ这可能是导致这2种神经递质含量水平显著升高的直接原因ꎮNakamura 等[22]的研究表明ꎬBPA 可能通过促进胚胎期小鼠神经元分化和迁移影响其新脑皮层的发育ꎬ我们猜测这可能是导致本研究中神经递质含量升高的主要原因ꎬ因此进一步检测了与神经系统早. All Rights Reserved.１６８㊀生态毒理学报第12卷期发育相关的关键基因和蛋白的表达水平ꎮWnt1在中脑和后脑的神经特化过程中具有关键作用ꎬ它可以通过抑制b￣catenin的降解调控shh基因表达ꎬ从而抑制神经发生[23]ꎮ我们的研究结果中ꎬwnt1的基因转录水平显著增加ꎬ而shha基因的转录水平显著受到抑制ꎬ表明早期神经发育受到促进ꎬ与Naka￣mura等[22]的研究结果一致ꎮWnt1还可以通过lmx1a调控nr4a2ꎬ进而影响单胺类神经递质神经元前体细胞的分化㊁成熟以及存活[24]ꎮSYN2a是突触形成的标志物ꎬ在突触发生以及神经递质释放过程中均起到关键作用[25]ꎮ本研究中nr4a2和syn2a基因的转录水平也出现显著性的升高ꎬ表明BPA可以通过促进早期神经发育而加速单胺类递质神经元的分化ꎮ值得注意的是ꎬ与单胺类递质神经元发育相关的lmx1a基因的转录水平仅在高浓度下显著增加ꎬ而在低浓度组显著降低ꎮ我们进一步检测了LMX1A蛋白质含量ꎬ结果与基因表达水平相一致ꎮ同时SYN2a蛋白质含量仅在低浓度组显著降低ꎬ在高浓度组没有显著变化ꎮ我们推测ꎬ在低浓度BPA 暴露组幼鱼体内触发了某种保护机制ꎬ可以在某种程度上修复BPA引起的神经系统的影响ꎬ这也可以解释在低浓度组幼鱼行为变化不明显的现象ꎮ图５㊀ＢＰＡ暴露导致斑马鱼运动行为变化的作用机制示意图Fig.5㊀A diagram presenting possible mechanism of BPA￣induced behavioral changes of larval zebrafish(Danio rerio)㊀㊀综上ꎬ本研究中BPA暴露可以促进斑马鱼胚胎早期神经发育及单胺类递质神经元的分化ꎬ导致神经递质含量的显著性升高ꎻ在低浓度和高浓度BPA 暴露条件下ꎬ可能分别通过5￣羟色胺受体和多巴胺受体影响幼鱼的运动行为ꎬ其作用机制总结如图5ꎮ环境浓度下BPA暴露即可对斑马鱼的运行行为产生影响ꎬ提示BPA污染很可能对生态环境及人体健康产生潜在的危害ꎮ神经递质对运动行为的调控机制以及在外源性污染物诱导神经毒性过程中的作用还需要进一步的深入研究ꎮ通讯作者简介:周炳升(1965￣)ꎬ男ꎬ博士研究生导师ꎬ责任研究员ꎬ主要研究方向为环境毒理学ꎬ特别是有机污染物对水生生物作用的毒性效应㊁风险评价㊁健康危害及生态毒理学效应ꎮ参考文献(Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ):[1]㊀Staples C A,Dorn P B,Klecka G M,et al.A review ofthe environmental fate,effects,and exposures of bisphe￣nol A[J].Chemosphere,1998,36(10):2149￣2173[2]㊀Yang J,Li H,Ran Y,et al.Distribution and bioconcentra￣tion of endocrine disrupting chemicals in surface waterand fish bile of the Pearl River Delta,South China[J].Chemosphere,2014,107:439￣446[3]㊀Drewes J E,Hemming J,Ladenburger S J,et al.An as￣sessment of endocrine disrupting activity changes during. 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胚胎期双酚A暴露对斑马鱼发育及神经行为的影响潘睿;胡晶莹;户宜;姚谦;李卫华;田英;高宇【摘要】目的·运用斑马鱼模型初步探讨胚胎期双酚A (bisphenol A,BPA)暴露对斑马鱼发育和神经行为的影响.方法·对受精后小时数(hours post-fertilization,hpf)为4的正常斑马鱼受精卵以不同浓度BPA(0、2.5、25、250、2 500μg/L)作染毒处理;观察并记录斑马鱼存活率、畸形率和孵化率,以及斑马鱼胚胎24 hpf自主运动和48 hpf心率,并对发育至144 hpf的斑马鱼幼鱼进行神经行为学检测.结果·各浓度BPA均未影响斑马鱼的存活率、畸形率和孵化率.暴露于2 500 μg/L浓度BPA的斑马鱼胚胎24 hpf自主运动和48 hpf心率低于对照组(P=0.000),发育至144 hpf的幼鱼运动总距离和平均速度降低(P=0.000).暴露于250 μg/L和2 500 μg/L浓度BPA的斑马鱼幼鱼在强光刺激惊恐反射检测中运动行为改变,主要表现为在强光刺激下运动总距离减少(P＜0.05).结论·胚胎期BPA暴露对斑马鱼具有一定的发育毒性和神经毒性.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2019(039)005【总页数】5页(P458-462)【关键词】双酚A;斑马鱼;胚胎期;发育;神经行为【作者】潘睿;胡晶莹;户宜;姚谦;李卫华;田英;高宇【作者单位】上海交通大学公共卫生学院,上海200025;复旦大学生殖与发育研究院,上海市计划生育科学研究所,国家卫生健康委员会计划生育药具重点实验室,上海200032;上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院生物医学信息研究中心,上海200040;上海交通大学公共卫生学院,上海200025;复旦大学生殖与发育研究院,上海市计划生育科学研究所,国家卫生健康委员会计划生育药具重点实验室,上海200032;上海交通大学公共卫生学院,上海200025;上海交通大学医学院附属新华医院环境与儿童健康重点实验室,上海200092;上海交通大学公共卫生学院,上海200025【正文语种】中文【中图分类】R114双酚A（bisphenol A，BPA）的化学结构与性激素具有同源性，是一种环境内分泌干扰物（endocrine disrupting chemicals，EDCs）。

《典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经毒性效应研究》篇一一、引言抗氧化剂在现代工业及食品中广泛应用，对于预防食品变质和保持生物活性分子稳定起着关键作用。

然而，许多人工合成的抗氧化剂，尤其是酚类抗氧化剂，可能会对生物体产生不同程度的毒性影响。

本文旨在探讨典型酚类抗氧化剂对斑马鱼神经系统的毒性效应，以期为环境保护和食品安全提供理论依据。

二、材料与方法1. 实验材料本实验选取了常见的几种典型酚类抗氧化剂，如BHA（丁基羟基茴香醚）、BHT（二丁基羟基甲苯）和TPHP（叔丁基-羟基茴香醚），并使用斑马鱼作为实验动物模型。

2. 实验方法实验将斑马鱼分为对照组和实验组，实验组分别暴露于不同浓度的酚类抗氧化剂中。

通过观察斑马鱼的行为变化、神经元活性、神经递质水平等指标，评估酚类抗氧化剂的神经毒性效应。

三、实验结果1. 行为变化实验发现，随着酚类抗氧化剂浓度的增加，斑马鱼的行为出现明显变化。

低浓度下，斑马鱼活动性增强；高浓度下，斑马鱼活动性降低，出现异常行为，如游动迟缓、失去方向感等。

2. 神经元活性通过电生理技术检测发现，实验组斑马鱼神经元活性明显降低，且随着抗氧化剂浓度的增加，神经元活性逐渐减弱。

3. 神经递质水平实验结果显示，实验组斑马鱼脑部神经递质水平发生显著变化。

部分神经递质水平升高，部分则降低，表明酚类抗氧化剂可能对斑马鱼神经系统的信息传递产生干扰。

四、讨论本研究表明，典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经系统具有一定的毒性效应。

这可能与抗氧化剂干扰神经元功能、影响神经递质传递等有关。

此外，不同浓度的抗氧化剂对斑马鱼的影响也不同，低浓度可能产生一定的刺激作用，而高浓度则可能对神经系统造成损害。

五、结论本研究通过实验发现典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经系统具有一定的毒性效应。

因此，建议在实际应用中严格控制酚类抗氧化剂的用量和浓度，以降低其对生物体的潜在危害。

此外，为更好地保护环境生态和保障食品安全，未来仍需深入研究酚类抗氧化剂在环境中的累积效应及长期影响。

《典型酚类抗氧化剂对斑马鱼的神经毒性效应研究》篇一一、引言近年来，随着环境污染的日益严重，环境污染物对生物体的毒性效应已成为科研领域的热点。

酚类抗氧化剂作为一种常见的环境污染物，广泛存在于工业废水、农药、食品添加剂等中。

由于其具有抗氧化性能，酚类抗氧化剂在保护生物体免受氧化应激损伤方面发挥着重要作用。

然而，过量的酚类抗氧化剂可能对生物体产生不利影响，尤其是对神经系统的毒性效应。

本研究以斑马鱼为研究对象，探讨典型酚类抗氧化剂对其神经毒性效应的影响。

二、材料与方法2.1 实验材料实验所用的斑马鱼购自当地鱼苗供应商，年龄约为3个月。

实验前，将斑马鱼在实验室条件下饲养一周以适应环境。

实验中所用典型酚类抗氧化剂为市售常见产品。

2.2 实验方法（1）将斑马鱼分为对照组和实验组，实验组分别暴露于不同浓度的酚类抗氧化剂中。

（2）观察并记录斑马鱼的行为变化，包括游动、觅食等。

（3）采用神经行为学测试，评估斑马鱼的神经功能。

（4）利用组织学方法，观察斑马鱼脑部神经元的形态变化。

（5）采用分子生物学技术，检测斑马鱼脑部相关基因的表达情况。

三、结果与分析3.1 行为观察实验组斑马鱼在暴露于酚类抗氧化剂后，表现出游动减缓、觅食能力下降等行为变化。

随着浓度的增加，行为变化越发明显。

对照组斑马鱼则无明显变化。

3.2 神经行为学测试实验组斑马鱼在神经行为学测试中表现出神经功能受损，包括反应时间延长、逃避障碍等。

与对照组相比，差异显著。

3.3 组织学观察组织学观察发现，实验组斑马鱼脑部神经元出现明显形态变化，包括神经元萎缩、空泡化等现象。

对照组斑马鱼脑部神经元形态正常。

3.4 分子生物学检测分子生物学技术检测发现，实验组斑马鱼脑部相关基因表达发生改变，可能与神经毒性效应有关。

与对照组相比，差异显著。

四、讨论本研究结果表明，典型酚类抗氧化剂对斑马鱼具有神经毒性效应。

过量的酚类抗氧化剂可能导致斑马鱼行为异常、神经功能受损以及脑部神经元形态变化和基因表达改变。

胚胎期双酚A暴露对斑马鱼眼结构及视觉功能影响的研究杨小依;张舒纯;张昕;李景云;池霞;童梅玲【期刊名称】《东南大学学报:医学版》【年(卷),期】2022(41)6【摘要】目的:探究胚胎期双酚A(BPA)暴露对斑马鱼眼结构及视觉功能的影响,为环境污染物暴露致子代视觉损害提供理论依据。

方法:构建胚胎期BPA暴露斑马鱼模型,体视显微镜观察并测量幼鱼的眼面积、眼长、体长;HE染色检测幼鱼视网膜结构变化;斑马鱼行为学检测系统评估幼鱼视觉行为。

结果:(1)50μmol·L-1BPA暴露后幼鱼眼面积、眼身长比显著减小。

(2)BPA暴露后幼鱼视网膜细胞排列拥挤,分层紊乱,感光细胞层细胞排列不齐。

(3)受精后24 h(24 hpf)BPA暴露组的斑马鱼胚胎摆尾活动减少;96、120 hpf幼鱼动眼频率和幅度降低;120、144 hpf幼鱼自主运动能力显著下降,游泳距离显著缩短。

结论:胚胎期BPA暴露可造成斑马鱼眼结构的改变和异常的视觉行为,说明环境污染物会影响子代视觉的发育,提示儿童眼保健应从孕期保健开始。

【总页数】8页(P757-764)【作者】杨小依;张舒纯;张昕;李景云;池霞;童梅玲【作者单位】南京医科大学儿科学院;南京医科大学附属妇产医院儿童保健科;常州市儿童医院;南京医科大学附属妇产医院医学研究中心【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.双酚AF暴露对胚胎期和幼鱼期斑马鱼的毒性效应2.双酚A暴露对斑马鱼胚胎期代谢作用的影响3.双酚S长期暴露对雌性斑马鱼视觉系统的影响4.胚胎期双酚A 暴露对斑马鱼发育及神经行为的影响5.胚胎期铅暴露对斑马鱼胚胎及幼鱼NMDA 受体mRNA表达的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

双酚A对斑马鱼胚胎发育阶段的毒性及生物蓄积端正花;张斌田;朱琳【期刊名称】《中国环境科学》【年(卷),期】2008(028)003【摘要】为研究胚胎在不同发育阶段对外源化合物的毒性敏感差异,以Ohpf、8hpf和8h终止3种暴露方式进行染毒,探讨斑马鱼胚胎在不同暴露时段对双酚A(BPA)毒性和生物蓄积特征.结果表明,Ohpf暴露时,斑马鱼胚胎内BPA含量与暴露浓度(0,5.00,10.00,15.00mg/L)及暴露时间(0,8,24,32,48,72h)呈明显正相关关系;在相同BPA浓度(15.00mg/L)作用下,斑马鱼胚胎在Ohpf暴露下BPA富集量比8hpf的大,表现为致死与亚致死毒性都大.证明斑马鱼胚胎在发育早期(受精后到原肠胚期)对BPA污染更为敏感;8h终止试验进一步证明原肠胚期前的斑马鱼胚胎对BPA的这种敏感特征.【总页数】4页(P260-263)【作者】端正花;张斌田;朱琳【作者单位】南开大学环境科学与工程学院,天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室,天津,300071;南开大学环境科学与工程学院,天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室,天津,300071;南开大学环境科学与工程学院,天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室,天津,300071【正文语种】中文【中图分类】X503.225【相关文献】1.双酚A及其类似物对斑马鱼胚胎及幼鱼的毒性效应 [J], 任文娟;汪贞;王蕾;杨先海;刘济宁2.五氯酚和双酚A联合作用对斑马鱼胚胎发育的毒性 [J], 端正花;郑敏;朱琳3.五氯酚和双酚A联合作用对斑马鱼胚胎发育的毒性 [J], 端正花;郑敏;朱琳4.菲并咪唑衍生物的体外抗肿瘤活性及其对斑马鱼胚胎发育的毒性效应研究 [J], 陈坚平;余楚钦;郑康帝;杨怡;刘杰;邬凤娟5.双酚A对斑马鱼不同发育阶段的毒性及机理 [J], 端正花;朱琳;王平;张斌田因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。