食品安全国家标准
食品中甲醛的测定
1.范围
本标准规定了食品中甲醛的测定的第一法分光光度法；第二法液相色谱法。
本标准适用于啤酒、腐竹、鱿鱼丝、竹笋、白菜、牛奶和熟肉样品中甲醛的测定。
第一法分光光度法
2.原理
样品经水蒸气蒸馏，冷凝收集馏出液。
馏出液中甲醛在乙酸铵存在的前提下，与乙酰丙酮反应生成黄色的吡啶化合物，在波长413 nm下测定吸光值，与标准系列比较得出食品中甲醛的含量。
3.试剂和材料
注1：除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1试剂
3.1.1冰乙酸（CH3COOH）：优级纯。
3.1.2乙酰丙酮（2,4-戊二酮，C5H8O2）。
3.1.3无水乙酸铵(CH3COONH4)。
3.1.4磷酸(H3PO4)。
3.2试剂配制
3.2.1乙酰丙酮溶液：称取25.0 g乙酸铵溶于适量水中，移入100 mL容量瓶中，加0.4 mL乙酰丙酮和3.0 mL冰乙酸，加水定容至刻度，混匀，移至棕色试剂瓶中，0℃～4℃保存，有效期1个月。
3.2.210%的磷酸溶液（10+90）：取10 mL磷酸，用水稀释至100 mL，混匀，室温保存。
3.2.3淀粉溶液（0.02 g/mL）：称取1 g淀粉，加少许水，调成糊状，倒入50 mL沸水中调匀，煮沸，
临用现配。
3.2.4碘溶液（0.05 mol/L）：见GB/T 5009.1-2003的第B.13。
3.2.5硫代硫酸钠标准溶液（0.1 mol/L）：见GB/T 5009.1-2003的第B.15。
3.3标准品
甲醛溶液标准物质（CH2O）：1000 mg/L，安瓿瓶封装，冷藏保存，使用前恢复至室温，摇匀，备用。
3.4标准溶液配制
3.4.1甲醛标准储备液（0.01 mg/L）：取甲醛溶液标准物质（3.3）1.0 mL于100 mL容量瓶中，加水定容
至刻度（首次配置可直接使用）。
3.4.2甲醛溶液的标定：取甲醛储备液吸取10.0 mL放入碘量瓶中，加入0.1 mol/L碘溶液50 mL和1 mol/L 氢氧化钠溶液20 mL，摇匀，放置15 min。
再加入1 mol/L硫酸溶液20 mL酸化，用0.1 mol/L硫代硫酸钠标
准溶液滴定至淡黄色，然后加入淀粉指示剂1 mL ，继续滴定至无色。
同时做试剂空白试验。
甲醛标准储备液浓度按公式（1）计算：
1000
10100015)(10⨯⨯⨯⨯-=
C V V X ···················· （1） 式中： X ——甲醛标准储备液的浓度，mg/mL ；
C ——硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度，mol/L ；
V 0——滴定空白溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL ；
V 1——滴定样品溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL ；
15——甲醛（1/2 HCHO ）的摩尔质量，g/mol ；
10——滴定时吸取甲醛标准储备液的体积，mL 。
3.4.3 甲醛标准工作液：准确吸取经标定的甲醛标准储备溶液，用水稀释配制成1μg/mL 的甲醛溶液。
4. 仪器和设备
4.1 分光光度计。
4.2 水浴锅。
4.3 天平：感量为0.1 mg 、1mg 。
4.4 样品粉碎设备：匀浆机、高速粉碎机。
5. 分析步骤
5.1 试样制备
腐竹试样需粉碎机粉碎,过20目筛,于室温下避光密闭保存；肉、鱿鱼丝，果蔬、乳制品等用匀浆机匀浆,密闭冷藏或冷冻保存；液体试样用前混合均匀,密闭冷藏或冷冻保存。
5.2 试样提取
5.2.1 固体试样
称取5 g~ 10 g 试样，置于500 mL 水蒸气蒸馏瓶中，加入10.0 mL 水和10.0 mL 10%的磷酸溶液，接水蒸气蒸馏装置中蒸馏，收集馏出液于入200 mL 容量瓶中（容量瓶中预先装有10 mL 水，收集约200 mL ），加水定容至刻度。
另做试剂空白的蒸馏。
5.2.2 液体试样
吸取25 mL 试样，置于500 mL 水蒸气蒸馏瓶中，加入10.0 mL 水和10.0 mL 10%的磷酸溶液，接水蒸气蒸馏装置中蒸馏，收集馏出液于入200 mL 容量瓶中（容量瓶中预先装有10 mL 水，收集约200 mL ），加水定容至刻度。
另做试剂空白的蒸馏。
注2：对于含有二氧化碳的发酵酒，应先除去二氧化碳。
5.3 显色反应
吸取3.4.3制备的标准工作溶液0.00 mL 、0.50 mL 、1.00 mL 、2.00 mL 、4.00 mL 、8.00 mL 、10.00 mL 分别置于25 mL 带刻度的具塞比色管中，补充蒸馏水至10.0 mL 。
吸取5.2制备的馏出液10 mL 置于25 mL 带刻度的具塞比色管中。
标准系列工作溶液和样品的比色管中，分别加入1.0 mL乙酰丙酮溶液，盖上管塞后，混匀。
将比色管在沸水浴中放置5 min，取出冷却至室温，413 nm处测定吸光度值。
以标准溶液的浓度为横坐标，以其吸光度值为纵坐标，建立标准曲线。
从标准曲线上查出试样的含量。
6.结果计算
试样中甲醛的含量按式（2）计算
A=C×V×1000/m (2)
式中：
A——试样中甲醛的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）；
C——从标准工作曲线中得到的馏出液中对应的甲醛的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
V——馏出液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。
7.精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
8.其他
方法定量限为固体类试样5.0 mg/kg，液体类试样1 mg/ kg。
第二法高效液相法
9.原理
样品中的甲醛与衍生剂2，4-二硝基苯肼（DNPH）在一定温度条件下，反应生成2，4-二硝基苯腙，提取液经高效液相色谱分离，354 nm波长紫外测定，外标法定量。
10.试剂和材料
注3：除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
10.1试剂
10.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。
10.1.2正己烷（C6H14）。
10.1.3硫酸铵（(NH4)2SO4）。
10.1.4乙酸钠（C2H9NaO5）。
10.1.5冰乙酸（CH3COOH）。
10.1.62,4-二硝基苯肼（C6H6N4O4）。
10.1.7甲醇（CH3OH）：色谱纯。
10.2试剂配制
10.2.1乙腈饱和的正己烷溶液：乙腈和正己烷（1+1）的充分震荡混合后，静置分层，取上层液体。
10.2.2缓冲溶液（pH 5）：称取2.64 g乙酸钠，以适量水溶解，加入1.0mL冰乙酸，加水定容至500 mL。
