分光光度法测定维吾尔药昆仑雪菊中总皂苷的含量

昆仑雪菊中总黄酮的提取及其对肿瘤细胞活性研究作者：刘苑星来源：《科技经济市场》2016年第05期摘要：采用乙醇回流提取法提取昆仑雪菊中的总黄酮物质，选取大孔树脂分离纯化昆仑雪菊中的总黄酮，用芦丁标准品制标准曲线检测总黄酮含量，回归方程为A=15.508C-0.0044，R2=0.9995。

乙醇回流提取液中总黄酮含量为9.04%。

通过MTT法测定黄酮对肿瘤细胞增殖的影响，记录统计实验数据，抑制率=1-（实验组A值一空白组A值）/（对照NA值一空白组A 值）。

抑制率≥30%判定药物敏感试验为阳性，抑制率≤30%判定药物敏感试验为阴性。

关键词：昆仑雪菊；总黄酮；肿瘤细胞；抑制率前言昆仑雪菊为新疆特有植物，学名双色金鸡菊，属菊科金鸡菊一年生草本植物，是具有降血压、降血脂等独特功效的稀有高寒植物，具有极高的药用价值。

昆仑雪菊中的总黄酮含量高达12%，远超其他菊类。

其富含的总黄酮具有多方面功效。

其中，黄酮作为一种较强的抗氧化剂，其抗氧化能力是维生素E的10倍以上，可有效增强生物对病原体的抵抗能力，清除体内的氧自由基，从而起到阻止细胞衰老、癌变的作用。

因此昆仑雪菊中富含的总黄酮具有免疫调节的功能，是调节血糖、降低血压血脂、抗衰老及癌变等有关药物中重要的物质。

目前，对于昆仑雪菊的植物分类学生物生态学特性等方面，国内外的研究开发报道较多，除此之外对其研究甚少，尤其是药理学方面，仅见其降血压、降血脂、抗氧化、微循环及抗凝血作用的研究。

有关昆仑雪菊对肿瘤细胞影响的研究，目前鲜见报道。

为进一步探讨昆仑雪菊中黄酮物质的抗肿瘤活性研究，首先从昆仑雪菊中提取总黄酮，进一步研究昆仑雪菊中总黄酮对肿瘤细胞增殖抑制作用，不仅为开发和综合利用昆仑雪菊资源提供一定的理论依据，更为中药治疗肿瘤疾病的新药奠定理论与实践基础。

1药物与仪器昆仑雪菊（2015年10月采自新疆和田地区昆仑山区），紫外可见分光光度计，电子天平，电热恒温水浴锅，水循环真空泵，旋转蒸发器，芦丁标准品，亚硝酸钠，硝酸铝，乙醇，氢氧化钠等均为AR级。

昆仑雪菊的营养价值与药用功效！养生秘密！昆仑雪菊的营养价值与药用功效！养生秘密！/s/blog_640af56b0102e3th.html月亮注解养生秘密：肉里没有维生素C，只在植物里！肉生痰，鱼生火，吃肉的人体质是酸性不健康爱生病，多吃蔬菜水果的人体质是碱性，非常健康长寿！多吃蔬菜水果，维生素C和E果胶皂苷、氨基酸、多！抗氧化延缓衰老！类黄酮多，抗癌！平衡胆固醇！多吃蔬菜水果！健康美丽长寿的秘密！雪菊，原产美国中西部地区，我国西部地区广为栽培的一种植物，学名蛇目菊。

由于生长环境较少污染、富含多种对人体有益成分，故现今已经逐渐作为一种茶饮普及开来。

简介雪菊不是一个独立的物种，其实是生长在新疆的蛇目菊的商品名称，其学名是：蛇目菊、双色金鸡菊。

在新疆人们称之为：雪菊、昆仑雪菊、昆仑血菊、天山雪菊、高寒雪菊、高寒香菊等。

原产美国中西部地区，我国部分地区广为栽培。

五大特点(1)生长环境特殊：正宗的野生昆仑雪菊生长在昆仑山脉北麓海拔3000米雪线的部分地区，花期短暂，每年八月，雪菊只绽放一次。

(2)采摘艰难产量小：昆仑雪菊生长在高海拔无人生活的地方，有些甚至生长在峭壁上，采摘非常艰难，雪菊花期极短，产量很小，必须在太阳刚刚升起的清晨人工采摘，沾露带霜，方能保持菊瓣完整无损。

(3)独特的药用功效：昆仑雪菊含有对人体有益的18种氨基酸及15种微量元素，对高血压、高血脂、高血糖、冠心病等具有特殊疗效，并有杀菌、消炎、减肥、预防感冒和慢性肠炎的功效，对于失眠也有相当好的调理作用。

(4)神奇的色香味：既有其他野生菊花的香气，又有陈年普洱的色泽和醇厚，还有一种非常特殊的绵长的甘甜。

(5)适应性广的高雅礼物：雪菊适应人群广泛且产品包装规格灵活多样。

雪菊等级雪菊按照工艺的方式来分为(1)普通烘制(2)水疗极品(3)水蒸气极品(4)限量特供极品(5)炒青极品按照不同等级来定价的，比较好的是克里阳的高寒雪菊，年产量比较少，属于特级雪菊【各家论述】：《新华本草纲要》：全草：味甘，性平。

雪菊是具有新疆地方区域特色的菊花品种之一，学名为两色金鸡菊（Coreopsis tinctoria Nutt ），为菊科金鸡菊属一年生草本植物。

维吾尔语称之为“古丽恰尔（Gulqai）。

其花朵经沸水冲泡后，为绛红色，近似血液色，故又名“血菊”。

目前在新疆和田地区种植较为广泛，是维吾尔族世代传承下来的一种养生、保健的天然植物。

新疆维吾尔民间以野生雪菊代茶饮，具有降血压、降血脂，降糖的功效，维吾尔医院作为一种维药材应用。

在中医上，用全草入药煎煮来治疗腹泻，早在元代时已作为杞菊地黄丸组成部分用于糖尿病控制[1]。

张彦丽等[2-5]对黄酮，挥发油等化学成分进行了定性及含量测定研究。

现代药理实验也证明雪菊对冠心病、高血脂、糖尿病有显著药理活性[6-9]。

野生雪菊生长在新疆和田等地，属于高寒植物，产量稀少。

新疆各地人工栽培种植的雪菊逐渐增多。

目前市场上有野生与人工栽培雪菊，但不同产地雪菊生长环境差异较大：新疆区域南北维度跨度大。

也即存在“道地药材”问题。

天然植物来源和产地环境的不同，其质量，药理作用可能存在差异。

道地药材系统研究表明：不同产地药材质量与其所含药效物质基础有密切关系。

植物生态条件变化，植物的变异和遗传使许多药用植物已部分或完全不同于野生药材[10]。

不同产地雪菊鉴别，目前市场上主要依据雪菊颜色、菊花的大小来判断是否野生，是否具有较好的药理作用，没有定量指标，缺乏科学性，很难控制药材的质量。

维吾尔药在我国传统药物体系中占有重要地位，在其独特的医疗理念的指导下，用药独特，许多药物为其所特有，明显区别于中药与其他民族药物。

作为中国传统药物重要组成部分之一，理应采取积极措施，开展对维药的研究。

为适应维药现代化要求的维药质量控制和评价要求，有必要对人工种植雪菊化学成分同野生雪菊进行差异分析，来解决雪菊药材真伪及其质量稳定性问题。

对推动维药雪菊规范化种植，扩大雪菊药材来源，促进对雪菊有序合理开发利用，保护野生资源，促进民族地区经济发展具有一定现实意义。

总皂苷的测定方法（分光光度法）本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。

本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。

一、方法提要样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。

二、仪器1.722分光光度计。

2.PT—大孔吸附树脂柱（河北省津杨滤材厂）。

3.超声波振荡器。

三、试剂1.甲醇（分析纯）。

2.乙醇（分析纯）。

3.人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品检定所）。

4.5％香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL。

5.高氯酸（分析纯）。

6.冰乙酸（分析纯）。

7.人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。

8.重蒸水。

四、测定步骤1.样品处理：（1）固体样品称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。

（2）液体样品含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）直接进行柱分离。

2.柱层析以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。

3显色在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入l0mL比色管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。

分光光度法测定维吾尔药昆仑雪菊中总皂苷的含量张彦丽;韩艳春;阿依吐伦·斯马义【摘要】目的研究维吾尔药昆仑雪菊总皂苷的含量测定方法.方法用乙醇提取,水饱和正丁醇萃取提取纯化昆仑雪菊中的总皂苷;高氯酸显色,紫外分光光度法测定总皂苷的含量.结果以人参皂苷Rb1作标准曲线,A=0.066 6C-0.004 8,r=0.999 7,样品质量浓度在4.5～10.5 μg·mL-1范围内与吸光度线性关系良好,回收率为103.82%,昆仑雪菊总皂苷的含量为8.36%.结论该方法简便、快速、灵敏、准确,可作为维吾尔药昆仑雪菊中总皂苷的含量测定方法.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2011(026)002【总页数】2页(P87-88)【关键词】昆仑雪菊;总皂苷;分光光度法【作者】张彦丽;韩艳春;阿依吐伦·斯马义【作者单位】新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R927.2昆仑雪菊又名“血菊”，维吾尔语“古丽恰尔”，生长在海拔3 000 m的新疆昆仑山北麓，是目前新疆唯一与雪莲齐名的稀有高寒野生植物，具有降血压、降血脂等独特功效具有极高的药用价值。

目前，对昆仑雪菊的研究已引起了新疆各级政府的重视。

研究发现，昆仑雪菊确有降血压和降血脂的功效。

但除此之外，对昆仑雪菊的研究甚少，尤其是化学成分方面。

我们主要对昆仑雪菊中的皂苷类化合物及其含量测定做了初步研究，为维吾尔药昆仑雪菊中总皂苷的含量测定方法的确立提供参考依据。

1.1 仪器 UV-2550紫外光谱仪(岛津公司)；EYELA SB-1000型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)；AB104-N型多功能电子天平(Toledo Instr. Shanghai Ltd.)；SK2510HP超声清洗仪(上海科导超声清洗仪器有限公司)；DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。

分光光度法测定新疆昆仑雪菊中总黄酮的含量*王 艳1**,张彦丽2,阿依吐伦 斯马义1***(新疆医科大学药学院,新疆 乌鲁木齐 830011)摘要:目的 建立一种简单、快速的方法,测定昆仑雪菊中总黄酮的含量,以期为昆仑雪菊质量控制和开发利用提供科学依据。

方法 以芦丁为标准品,采用分光光度法测定新疆昆仑雪菊中总黄酮的含量。

结果 芦丁浓度与吸光度的线性关系方程为:A =0.01109C+0.01012(r =0.9997),表明芦丁在21.340~59.752 g/ml 范围内线性关系良好,测得雪菊中总黄酮的含量为12.28%。

结论 分光光度法简便、可靠、准确。

可作为新疆昆仑雪菊中总黄酮的含量测定方法。

关键词:昆仑雪菊;黄酮;含量测定中图分类号:R9 文献标识码:A 文章编号:1009-5551(2011)08-0817-03Determination on total flavonoids content in Kunlun Chrysanthemumby visible spectrophotometry methodWANG Yan,ZHANG Yan -li,Aytulun Simayil(College of Phar macy ,X inj iang M edical Univer sity ,Ur umqi 830011,China)Abstract:Objective T o establish a simple and quick metho d to determine total flavo noids content in Kun -lun Chry santhemum and to pr ovide scientific evidence for the quality control and development o f Kunlun Chry santhemum.Methods With rutin as the standard substance,total flav ono ids in Kunlun Chry santhe -m um w ere determined by U ltravio let spectrophoto metry.Results The linear relationship of Kunlun Chry santhemum concentration w as A =0.01109C+0.01012(r =0.9997),w hich indicate linear correla -tion r utin w as w ell at the range of 21.340~59.752 g/m l,the recover rate w as 102.58%,RSD w as 2.49%(n =6).The contents of total flav onoids in Kunlun Chrysanthemum w as 12.28%.C onclusion The assay method w as proved to be simple,convenient,accurate w ith goo d repr oducibility and can be used fo r the deter mination of Kunlun Chrysanthem um.Key words:Kunlun Chrysanthem um;total flavonoids;content determination817新疆医科大学学报 JO U RN A L OF X IN JIA N G M EDI CA L U N IV ER SI T Y 2011A ug.,34(8)******基金项目:新疆医科大学2010年研究生创新基金(M C2010-29)作者简介:王 艳(1980-),女,讲师,硕士,研究方向:新疆地方药用植物的研究。

昆仑雪菊菊花营养成分的含量研究杨旭超;西力扎提·阿不来提;木合布力·阿布力孜;任丙昭【摘要】[目的]分析测定维吾尔昆仑雪菊菊花营养成分的含量.[方法]利用国际标准法对昆仑雪菊花中的蛋白质、氨基酸、微量和常量元素、脂肪、纤维素和碳水化合物等多种营养成分含量进行测定.[结果]昆仑雪菊菊花常量营养成分含量较高,其蛋白质的含量为13.60％,脂肪的含量为3.50％,碳水化合物的含量为48.14％;并且昆仑雪菊菊花还含有人体所需要的微量元素17种,其中8种为人体的必需氨基酸,氨基酸的总量为10.80％,必需氨基酸的总量为4.33％.昆仑雪菊中微量元素钙含量为1 642.00 mg/kg,钾含量为1111.00 mg/kg,值得关注的是含有0.02％的微量元素硒.[结论]昆仑雪菊菊花营养成分丰富,可为其成为药材的质量控制、化学成分分析、药理试验研究及产品开发奠定重要基石.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)031【总页数】3页(P204-205,375)【关键词】营养成分;新疆昆仑雪菊菊花;含量分析【作者】杨旭超;西力扎提·阿不来提;木合布力·阿布力孜;任丙昭【作者单位】新疆医科大学药学院药物化学有机教研室,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院药物化学有机教研室,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院药物化学有机教研室,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院药物化学有机教研室,新疆乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】S609.9新疆昆仑雪菊菊花(Coreopsis tinctoria Nutt．)为菊科金鸡菊属，为1年生草本植物，又叫天山雪菊，是世界上唯一一种在天山上生长的野生纯饮菊花，主要生长在新疆部分山区，地域性极强，天然生长在昆仑山附近、海拔3 000 m以上的寒冷地带。

由于其生产地域的特殊，新疆昆仑雪菊菊花年总产量达不到5 000 kg，新疆昆仑雪菊菊花作为一种纯天然耐高并且无污染菊花，它具有降血压血脂［1－2］、抗衰老［3－4］、抗癌［5－6］、抗炎［7］、抗病毒［8］、抗糖尿病［9］、促微循环及抗凝血作用［10］等多种功能作用。

【简介】皂苷广泛存在于中药及其他植物中，而且化学结构大同小异的皂苷往往同时存在。

为了测定这些 皂苷的总含量，便建立了总皂苷的检测方法。

总皂苷的检测多使用分光光度法，并以某种标准品绘制 工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。

【检测方法与实验流程图】【文献】 Jian Lin, Xican Li, Lu Han, Fei Li, Wenbiao Lu, Ye Bai, Dongfeng Chen Folium Sennae Protects against Hydroxyl Radical-induced DNA Damage via Antioxidant Mechanism: An in vitro Study. Botanical studies. 2014; 55:16.【溶液配制】1. 香草醛-冰醋酸溶液（测试液）配制：精密称取25mg 香草醛，加冰醋酸定容至5mL 。

即制成5mg/mL 香草醛-冰醋酸测试液。

2. 样品液配制：将待检测的样品用甲醇溶解， 配成约5mg/mL 的样品液。

具体浓度视样品的溶解度而定， 但是必须有精确的数据。

3.齐墩果酸标准品溶液配制： 精密称取齐墩果酸1mg ，加甲醇定容至5mL ，配成0.2mg/mL 齐墩果酸标 准品溶液。

（也可以使用其他的皂苷物质，如人参皂苷 Rg3。

但必须是纯的化合物）4. 高氯酸：分析纯试剂。

5. 冰醋酸：即纯的无水乙酸（分析纯）【标准曲线绘制】（齐墩果酸）取上述齐墩果酸溶液 x g L （x=0，40，80，120，160，200），依“实验流程图”，在70C 水浴15mim 后呈桃红色。

以第一份溶液（x=0）作为空白对照，测 A 540nm 值。

以“产物混合物”时的齐墩果酸的质量， 为横坐标，A 540nm 值为纵坐标，绘制标准曲线。

以此标准曲线计算，得线性回归方程。

【样品液的测定】将上述“实验流程图”中的“齐墩果酸标准品溶液”换成样品液，进行实验，并测定其此 A 540nm 代入线性回归方程，即可计算出其总皂苷的含量（以齐墩果酸计） 分光光度法测定总皂苷含量：实验流程图2017.10 A 540nm 值。