水质粪大肠菌群的测定32页PPT

10ml水量的 阳性管数 0 1 100ml水量中的阳性管数 0 <3 3 1 4 8 2 11 18 10ml水量的 阳性管数 6 7 100ml水量中的阳性瓶数 0 22 27 1 36 43 2 92 120
2
3 4 5
7
11 14 18
13
18 24 30
27
38 52 70
8
9 10
31
36 40
1） 取水样300ml分别加入12个发酵瓶：2个含有50ml三倍乳糖发酵 烧瓶各加100 ml水样；10个含有5 ml三倍乳糖发酵管各加10 ml水样， 混匀。2） 在37℃培养24h至48 h，查看发酵结果。
接种水样各100ml
接种水样各10ml 48h不产 酸产气 水样 三倍乳糖50ml/管 三倍乳糖5ml/管 24h产酸 产气
51
60 69
161
230 >230
注：水样总量300ml（2份100ml，10份10ml），此表用于测定生活饮用水。
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3. 2 地表水中大肠菌群的多管发酵法测定
向装有5mL乳糖培养液的5个发酵管分别加入10mL水样；向装 有10mL乳糖培养液的5个发酵管分别加入1mL水样；向装有 10mL乳糖培养液的5个发酵管分别加0.1mL水样，混匀。（共 计15管总水样55.5mL）
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放在液体培 养基上培养
放在NPS上 培养
放在琼脂培 养基上培养
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2. 检测方法
① M-FC 培养基的制备、消毒。

7 适用范围
• 本标准适用于地表水，地下水及 废水中粪大肠菌群的测定。
8 原理
• 多管发酵法是以最可能数〔most probable number〕，简称MPN 来表示试验结果的。实际上 它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度 和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑，并且 进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实 际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目 增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值 ，大局部取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释 度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数 目，要根据所要求数据的准确度而定。
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三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液： 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。
除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。〔 即按上述配方比例三倍〔除蒸馏水外〕， 配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液〕
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EC培养液： 成分： 胰胨 20克， 乳糖 5克， 胆盐三号
1.5克，磷酸氢二钾〔K2HPO4〕4克，磷酸 二氢钾〔KH2PO4〕1.5克，氯化钠5克，蒸 馏水1000毫升。 制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含 有 玻璃倒管的试管中。置高压蒸气灭菌器 中，115℃高压灭菌器中灭菌20min，灭菌 后pH应为6.9。
28 填空题
1. 细菌采样玻璃瓶洗涤枯燥后，要在 0C干热灭菌 或高压蒸汽 0C灭菌 min。
2. 对受污染严重的水体，可选择 定其总大肠菌群数。
方法测
3. 总大肠菌群测定过程的复发酵试验中，接 种完菌落后，应将发酵管置于 0C温度 下培养 h。
4. 复发酵试验使用
培养基。
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• 计算题：
• 某水样接种10mL 的5 管中有4管为 阳性；接种1mL 的5 管中有3 管为 阳性；接种1：10 的水样1mL 的5 管中有1管为阳性。求1L 水样中的 总大肠菌群数为多少？

大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研 讨阐明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的 场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大 肠菌群在自然界存在的主要缘由。粪便中多以典型大肠杆菌为主， 而外界环境中那么以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染目的菌提出来的，主要是以该菌群 的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，阐 明了粪便污染的程度，也反映了对人体安康危害性的大小。粪便 是人类肠道排泄物，其中有安康人粪便，也有肠道患者或带菌者 的粪便，所以粪便内除普通正常细菌外，同时也会有一些肠道致 病菌存在〔如沙门氏菌、志贺氏菌等〕，因此食品中有粪便污染， 那么可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的能够性，埋伏着 食物中毒和流行病的要挟，必需看作对人体安康具有潜在的危险 性。
1．MPN检索表 2．初发酵和证明实验 பைடு நூலகம்．产气量与倒管 4．挑选菌落 5．抑菌剂
1．MPN检索表： MPN 为最大能够数(Most
Probable Number)的简称。这 种方法，对样品进展延续系列进
展稀释，参与培育基进展培育， 从 M释P度N规，检那定索么表的表只内给反数了响字三应个呈相稀应阳释降度性低，或管如添改数加用1不的0倍同出。的留稀现 率 意国，家规用范概和行率业论规范来中所推附算MP样N表品所用中稀菌释度数 最 是不近同的似，的而且数结值果报。告单位也不一样。
可以看到在发酵倒管内极微少的气 泡〔有时比小米粒还小〕，有时可 以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有 渐渐上浮的小气泡。实验阐明，大 肠菌群的产气量，多者可以使发酵 倒管全部充溢气体，少者可以产生 比小米粒还小的气泡。假设对产酸
4．挑选菌落： 国家规范中，需求对初发酵阳性培

大肠菌群测定
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关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
关于和产品标准对应的问题。
从这个意义上讲，稀释度的选择是根据产品 要求进行的，理论上：
如果要求得到每克产品菌群含量，加样量应该 是0.333克比较合适。
如果要求得到每10克产品菌群含量，加样量 应该是3.33克比较合适。
如果要求得到每100克产品菌群含量，加样量 应该是33.3克比较合适。
GB4789.3-2010 大肠菌群测定
大肠菌群测定
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GB4789.3-2010 大肠菌群测定
定义：大肠菌群：一群在36℃培养48h可发 酵乳糖、产酸产气的需氧和
兼性厌氧革兰氏染色阴性
无芽孢杆菌。该菌主要来
源自人畜粪便，作为粪便
污染指标评价食品的卫生
状况，推断
食品中肠道致
病菌污染的可能。
大肠菌群测定
大肠菌群测定
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关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
关于和产品标准对应的问题。
这样的话，就需要增加加样量，变成加样量 为3.33克，如果全部是阴性0-0-0，得到结果为 <0.3/克，或者是<3/10克，或者是 <30/100克。这样的结果才能符合要求。
如果更精确的操作，应该是加样量为33.3克。 这样如果全部是阴性0-0-0，得到<3/100克， 结果为2-1-0，得到MPN 15/100克，也是合 格产品。
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关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
改变加样量的问题。 在实际操作中，因为一些原因需要改变加样
量，一般是10倍增加或者降低，同样使用本表， 得到的数值需要做10倍调整。
比如： 加样量为3.33克（这样的情况一般 是十倍稀释液用3管，每管10毫升，需要用双料 管。十倍百倍稀释液，各用三管，每管1毫升）。

采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
◆包扎
1．培养皿：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。 2．吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉 花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会 下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与 报纸约呈60º角，并将右端多余的报纸打一小结。 3．三角玻扒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在报纸条的近左端， 与报纸约呈45º角，并将右端多余的报纸打一小结。 4. 玻璃器皿、金属器械包扎完毕后置干燥箱160－170℃灭菌2 h.
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
◆灭菌
1.灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。
2.接通电源，进行加热。
3. 排
除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭
平板划线分离操作法示意图
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
5 复发酵试验 上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另
一部分接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒置管），每 管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落1～3个，然后置于37℃恒温箱中 培养24h，有产酸、产气者，即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群 存在的阳性管（瓶）数查附表1“大肠菌群检数表”，报告每升水样中的大肠 菌群数。

反应原理
催化
Fe2+
2[H]Βιβλιοθήκη H2O2色原氧化 变色
2H2O
2、干化学试带法
原理同化学法,方便,但缺乏特异性与准确
性。
影响因素: 外源性动物性食品-假阳性 某些生食蔬菜-假阳性 某些药物-假阳性 血液在胃肠道停留过久-假阴性 维生素C-假阴性
3、免疫学方法
方法:胶体金标记单克隆抗体+层析 原理:抗人Hb抗体
脂肪小滴
脂肪泻 镜检脂肪小滴大于6/HP,为脂肪排泄 增多,若大量出现称为脂肪泻,见于胰 腺功能减退、胆汁分泌失调与腹泻患 者。
肌纤维—肠蠕动亢进、腹泻或蛋白 质消化不良。
结缔组织—胃蛋白酶缺乏 植物纤维及植物细胞—肠蠕动亢进、 腹泻患者
植物纤维
肌纤维
粪便化学及免疫学检查
一、隐血试验 概念:隐血就是指上消化道有少量出血
时(每日出血量少于5ml),而且红细胞因被 消化分解,肉眼不见粪便改变颜色,并且粪 便涂片显微检查未能检出红细胞。而需用 其她间接方法才能证实得出血。
1、化学法隐血试验(OBT) ➢试验原理:血红蛋白中含铁血红素具有过 氧化物酶得活性,能分解过氧化物,催化色原 物质而呈色,呈色得深浅反映了血红蛋白得 含量,即出血量得多少。 ➢常用方法:主要有邻联甲苯胺法,联苯胺法。
6、稀糊状或稀汁样便 见于各种感染性或非感染性得腹泻,尤 其就是急性胃肠炎。 小儿肠炎时,胆绿素来不及转变为粪胆 素而呈绿色稀糊样便。若遇大量黄绿色 稀汁样便并含有膜状物时应考虑到假膜 性肠炎。
7、米泔样便 多见于霍乱、副霍乱 呈乳白色淘米水样
8、白陶土样便 由于胆道阻塞,进入肠道得胆汁减少, 粪胆素生成减少,使粪便呈灰白色。 主要见于阻塞性黄疸

水中大肠菌群的测定
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一、目的要求
1、掌握测定水中大肠菌群数量的多管发酵法的原理、 操作步骤及方法；
2、掌握划线分离法； 3、了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的
重要性。
2
二、基本原理
总大肠菌群（coliform group，total coliforms） 总大肠菌群指数高，表示水源被粪便污染，则有可
2）池水、河水或湖水 应取距水面10~15cm的深层水 样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻 转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖 好，再从水中取出。最好立即检查，否则需放入冰箱充分 冷却。
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1、初发酵试验：（自来水检查为例）
在2个含有50mL 3倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中， 各加入100mL水样。在10支含有5mL3倍浓缩的乳糖蛋白 胨发酵管中，各加入10mL水样。混匀后，37℃培养24h， 24h未产气的继续培养至48h；
基，3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管）培养 基，伊红美蓝琼脂平板。 3、溶液和试剂：革兰氏染液、无菌水等。 4、仪器和其他用品：显微镜、载玻片、无菌培养皿、灭 菌吸管、灭菌试管、镊子、烧杯、温箱等。
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四、操作步骤
水样的采取
1）自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开 放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以 待分析。
2、平板分离：
将24h培养后产酸产气和48h培养后产酸产气的发酵管， 分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18～ 24h，将符合下列特征菌落：深紫黑色，有金属光泽；紫黑 色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心颜色较深，挑取 其中的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检；

6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
水质粪大肠菌群的测定
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
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